PRACTICA N1

COLORANTES Y COLORACIONES

V. Resultados

COLORACIN GRAM

El frotis bacteriano se fija con calor y una vez fijada se tie con cristal violeta de hucker,
nuevamente se tio con una solucin de yodo, utilizado como mordiente, el cual facilita la
adhesin del cristal violeta a la pared celular. Las bacterias Gram positivas, debido a la estructura y
composicin bioqumica de su pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun
despus del tratamiento con el decolorante conserva el colorante bsico, por lo que se observan
de color prpura o violeta al microscopio. Las bacterias Gram negativas pierden el colorante bsico
cuando son tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipdico de la
pared celular (lo que aumenta la permeabilidad celular), dando como resultado la prdida del
complejo cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste
SAFRANINA o FUCSINA DE GRAM colorante secundario, que imparte una coloracin de contraste o
contracolor (color rojo o rosado) , razn por la cual estas bacteria se observan de color rojo al
microscopio.

COLORACION DE CAPSULAS (METODO MANEVAL)

Se observo bacilos de klebsiella. La cpsula se observa como un halo incoloro alrededor de los
microorganismos, gracias al contraste proporcionado por la coloracin negra tanto del espacio
intercelular como de las clulas microbianas

COLORACION DE ESPORAS

Con la tincin de Gram las esporas se observan como cuerpos refringentes SIN TEIR, mientras
que con el mtodo de Schaeffer y Fulton las esporas se observan de color VERDE y las formas
vegetativas se ven ROJAS.

VI.DISCUSIN.

Las cpsulas bacterianas no pueden observarse en frotis teidos con las tcnicas usuales
porque son incapaces de retener el colorante y porque los procesos de fijacin al calor y
lavado las disuelven. Por lo tanto El mejor mtodo para observarlas es el de las tinciones
negativas.(LEONOR,2006)
Las cpsulas bacterianas son importantes tanto para la bacteria como para otros
organismos. A las bacterias les proporcionan una cubierta protectora y adems sirven de
reservorio de alimento almacenado. Las cpsulas de ciertas bacterias productoras de
enfermedades aumentan la capacidad infectiva de las bacterias. Si la bacteria pierde
 totalmente su cpsula, puede perder su virulencia y por lo tanto su capacidad de producir
enfermedad. (Jawetz,2002)
Esta bacteria se observa de color violeta ya que en el proceso de tincin donde se le
agrego los diferentes colorantes como cristal violeta y fucsina bsica, quedaron teidas;
aun cuando se les retir el exceso de colorante con agua destilada y alcohol de 95,
tomando este color caracterstico que se le denomina a las bacterias que lo presentan
Gram positivas. Estas bacterias presentan este color ya molculas de cristal violeta, lugol
y cidoteicoico que se forma en la pared celular de las
Gram positivas, es muy difcil de remover, lo que no sucede con las Gram negativas,
porque el cristal violeta y el lugol no reaccionan con el cido teicocio, debido a que las
bacterias Gram negativas en su pared celular no lo tienen. Por
otra parte, la membrana externa que poseen las bacterias Gram negativas es soluble enco
mpuestos orgnicos como a la mezcla de alcohol y acetona, por lo tanto al momento de
agregar el decolorante alcohol 95, el complejo de cristal violeta y lugol se perdi. De igual
forma ,las bacterias Gram negativas tomaron su color rosado, debido a que se le agrego el
colorante de contraste llamado Fuscina para colocarlas en manifiesto(KENIA,2011)

CONCLUSIONES.

Tanto las bacterias Gram positivas como las Bacterias Gram negativas se presentan
morfolgicamente como cocos o bacilos, sin embargo al ejecutar tincin de Gram en estas
para identificar su grupo taxonmico, las Gram positivas se tien de color violeta mientras
que las Gram negativas se tien de color rosado.
Es importante decir que las colonias a las que se les realiz tincin de Gram, eran de una
muestra de suelo, lo cual explica la presencia de estas bacterias, debido a que en el
suelo predominan las bacterias Gram negativas. Sin embargo en el suelo tambin se
encuentran bacterias Gram positivas, pero en menor proporcin que las Gram negativas, l
o cual tambin explica la presencia de estas bacterias en el suelo.
La tcnica de tincin tiene como finalidad crear un contraste entre la clula y el medio que
la rodea, y una de las ms importantes, tanto por su aplicacin clnica para hacer una
identificacin preliminar de la bacteria causal de la infeccin y por su practicidad, es la
tincin de Gram. Es por eso que esta tcnica se vuelve fundamental en el estudio de la
microbiologa,
Finalmente podemos mencionar que a pesar que la bacteria es una estructura muy
pequea, por medio de la tincin con verde de malaquita, el cual requiri del calor para la
penetracin; se pudo observar la estructura interna de la clula bacteriana,
particularmente las endoparas.
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Cedeo, Kenia (2011).fuentes de error en la tincin degram. [En lnea].

Disponible:http://labmicrofarmaciaulat.blogspot.com/p/tincion-de-gram_20.html. Citado:
Lpez Tvez, Leonor (2006). Comportamiento de
las bacterias en la tincin de gram. [En lnea]. Disponible:http://www.biologia.edu.ar/micr
ogeneral/tp6.pdf. Citado:19/10/2013.
http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/pluginfile.php/231237/mod_resource/co
ntent/0/2._PRACTICA_TINCIONES_ESPECIALES_EN_MICROBIOLOGIA.pdf

ANEXOS

COLORACION DE ESPORAS:

MUESTRA: Bacillus subtilis

COLORACION: Coloracion de wirts

AUMENTO: 40x

DESCRIPCION: Esporas con bacilos

esporulados.

COLORACIN DE CAPSULAS:

MUESTRA: klebsiella

COLORACIN: Rojo de Congo

DESCRIPCIN: capsula sin color, cuerpo

bacteriano color rojo

AUMENTO: 100X
COLORACION GRAM:

Fig.1: coloracin Gram (+) Fig.2: coloracin Gram (-)

 CUESTIONARIO

1.-Qu precaucin es fundamental antes de colocar aceite de cedro sobre una lmina
coloreada?

el aceite de cedro es propio de la observacin con el objeto de inmersin de 100x, se

debe utilizar para la observacin de muestras fijadas no para otras muestras.

2.-Cul es la posicin del condensador en una observacin de una muestra coloreada

en inmersin?

En una muestra coloreada de inmersion se debe subir totalmente el condensador para ver
claramente el circulo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habra
que agregar el aceite.

3.-Cul es la posicin correcta del condensador en una observacin en fresco y a

mediano aumento?

El condensador puede utilizarse a diferentes distancias respecto a la fuente luminosa,en

el caso de las preparaciones en fresco el condensador se debe bajar.

4.-Cul es el comportamiento ms usual de los cocos y cul es el de los bacilos en la

coloracin Gram?

Las bacterias pueden diferenciarse con la coloracin gran en dos grupos. Los
microorganismos gran positivos se tien de azul, mientras que aproximadamente un tercio
de los cocus, la mitad de bacilos y todos los organismos espiraladas se tien de rojo y se
dice que son gran negativas.

5.- Podra reemplazarse la safranina o ziehl con el azul de metileno como colorante de
contraste en la coloracin de Gram?

En coloracin simple utilizar un solo colorante.se basan en el hecho que las clulas tienen
una composicin qumica diferente frente a un colorante.

El colorante tie las clulas(azul de metileno,safrina).

La safranina( rojo bsico), es un colorante biolgico, de contraste que se utiliza en la

tincin de Gram para proporcionar un color violeta ms intenso a las bacterias Gram (+) y
tie de rojo a las bacterias Gram (-), en histologa y en citologa.la safranina se usa como
liquido de contraste en protocolos de tincin,coloreando al nucleo celular de rojo,tambien
para detectar cartlago,mucinay granulos de mastocitos.
 PRACTICA N2

PRACTICA DE MEDIOS DE CULTIVO, SIEMBRA Y AISLAMIENTO

RESULTADOS.

Los medios de cultivo pueden ser slidos o lquidos. La composicin de estos medios puede ser
definida (medio sinttico) o no definida (medio complejo). No todos los medios de cultivo son
iguales, ni todos los microorganismos pueden crecer en todos los medios de cultivo.

En esta prctica realizamos la siembra de un microorganismo de agua estancada sobre un agar

nutritivo donde dimos uso de la tcnica de siembra por estrias o sea pasando el inoculo en zigzag
sobre la superficie del medio inclinado cuya finalidad ser conseguir que un germen quede aislado
de otro en la superficie del medio, donde se producir hasta el punto de formar colonias .

DISCUSIN

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento

de los microorganismos. La composicin precisa depender de la especie que se quiera
cultivar, porque las necesidades nutricionales varan considerablemente. Hay
microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio
normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias para
crecer.(Nelson,2002)
La siembra en cajas Petri nos permite cultivar microorganismos gracias a que contiene los
nutrientes necesarios para su desarrollo. El crecimiento de los microorganismos se
manifiesta de formas diferentes dependiendo de la tcnica utilizada para su siembra y del
tipo de medio en el que se realiz dicha siembra, de esta forma es posible obtener
caractersticas morfolgicas distintas cuando se realizan siembras de una misma muestra
en diferentes medios de cultivo o viceversa(Michael,2013)

Conclusin

En este experimento se pudo realizar la siembra de dilucin, en la cual dio como resultado
la formacin de colonias sobre las placas de agar nutritivo. Las colonias se formaron
durante un tiempo de incubacin de 24 a 48 horas.
Despus de un largo periodo de tiempo se pudo observar las diferentes caractersticas de
las diferentes bacterias como su forma y tamao.
El desarrollo de colonias formadas a partir de los mtodos realizados por estras y por
extensin en placa difieren en forma, borde, elevacin, superficie y estructura interna, lo
cual es notablemente influenciado por las concentraciones de carga microbiana del medio
en el cual dichas colonias se desarrollaron as como por el mismo medio de cultivo
Referencias bibliogrficas.

https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
microbiologia/indice/preparacion-de-medios-de-cultivo
http://labmicrofarmaciaulat.blogspot.pe/p/aislamiento-de-2-microorganismos-y.html
https://es.slideshare.net/rebecaoloarte/tecnicas-de-siembra-de-microorganismos

ANEXOS

Fig1: calentando el agar nutritivo Fig.2: calentando el caldo nutritivo

 Fig.3: siembra y aislamiento de
agua estancada

CUESTIONARIO

1.- Considera usted necesario tomar alguna precaucin en caso de tener que adicionar
sangre al medio?

Claro que si, ya que el medio es til tanto para e aislamiento y cultivo de microorganismos
aerbicos y anaerbicos nutricionales exigentes a partir de una gran variabilidad de
muestras como para la observacin de reacciones en hemlisis.

2.-Es posibles aislar grmenes en estado de pureza en medios lquidos a partir de

muestras con flora variada?

Si podemos cultivar medios lquidos para aislar grmenes en estado de pureza, sin
embargo, no es posible conseguir un cultivo puro. Se debe tener cuidado en la
composicin de los caldos nutritivos por que el uso incorrecto de ellos puede hacer que se
cometa errores en la manipulacin de microorganismos.

3.-Qu importancia tiene el aspecto de una colonia?

Es importante debido a que nos ayuda a conocer de manera cualitativa el cultivo

bacteriano, adems su aspecto de coloracin, tamao. Permiten diferenciar de esta
bacteria y facilitar su identificacin. Adems que constituye una de las caractersticas para
el crecimiento de bacterias,

4.-Qu le indicara la presencia de un bacilo y un coco en la coloracin de una

suspensin hecha a partir de una colonia?

Las bacterias que son cocos y bacilos adoptan formas intermedias en los cocos y bacilos
que se denominan cocobacilos.
Este gnero es prototipo de la familia bacillaceae. Si hay presencia de cocos y bacilos se
observ sus crecimientos, pero siempre en ausencia del Mac Conkey.