Doc: MCA128

COLORLINK S.A.S. Laboratorio de Control

Rev. 1 Fecha 04/02/2019

DETERMINACIÓN DE BENZOFENONA 3, OCTOCRILENO,

BUTILDIBENZOILMETANO Y ETIL HEXIL METOXICINAMATO EN
MATRICES DE LABIALES Y BRILLOS POR HPLC

1. Objetivo

Determinar la concentración, de EDTA DISÓDICO en matrices de labiales y brillos y

máscaras por HPLC fase reversa.

2. Alcance

Este método aplica para la determinación de protectores solares en labiales y brillos en el

laboratorio de calidad de Colorlink S.A.S.

3. Responsables

El Analista de fisicoquímico es el responsable de realizar el tratamiento de la muestra,

procesar los datos obtenidos y registrar los valores de los controles en las cartas de control
del método.

El director de Calidad es el responsable de efectuar el seguimiento de las cartas de control

del método y plantear acciones preventivas y/o correctivas en caso de evidenciar un
comportamiento anómalo en las cartas de control

4. Generalidades

Es importante asegurar la concentración de estos protectores solares en el producto

cosmético ya que altas concentraciones pueden causar efectos adversos en la salud.

Por medio de la cromatografía liquida en fase reversa cuantificada por el patrón interno
Diciclohexilo ftalato, podemos cuantificar la cantidad presente de los protectores solares
Benzofenona3, octocrileno, Butil dibenzoilmetano y etilhexil metoxicinamato en labiales y
brillos.

5. Equipos

 HPLC Shimadzu Promoinence i LC 2030 equipado con bomba para solvente y

automuestreador, con detector UV lámpara D2.
 Columna fase revesa C18 50 mm, diámetro interno: 4.6 mm, tamaño de partícula: 3
µm Shimadzu.
 Balanza analítica BECO modelo BAS31plus resolución 0.1 mg.
 Agitador magnético CORNING modelo PC410D

Página 1 de 13
 Doc: MCA128
COLORLINK S.A.S. Laboratorio de Control
Rev. 1 Fecha 04/02/2019

 Placa de calentamiento.
 Cabina de extracción BIOBASE.
 Ultrasonido.
 Equipo de filtración.
 Pipeta automática 1000 – 5000 µL.

6. Materiales

 Viales con pre-ranura para HPLC.

 Jeringa plástica 3 mL.
 Filtro de Nylon adaptable a jeringa con tamaño de poro de 0.22 µm.
 Pipeta volumétrica Clase A 2 mL.
 Balón volumétrico Clase A 250 mL.
 Balón volumétrico Clase A 50 mL.
 Balón volumétrico Clase A 10 mL.
 Probeta 20 mL.
 Pipeta Pasteur 3mL.
 Pera de succión.
 Beackers de 25 mL

7. Reactivos

 Tetrahidrofurano grado HPLC pureza 99.9%

 Ácido Acético grado HPLC pureza 99.8%
 Acetonitrilo grado HPLC pureza 99.9%
 Metanol grado HPLC pureza 99.9%
 Benzofenona 3 (Oxibenzona) pureza 99.8% (RI0092)
 Etil hexil metoxi cinamato (RI0238)
 Agua ultrafiltrada

8. Preparación de soluciones:

8.1 Preparación de la solución mix

8.1.1 Benzofenona 3:
Pesar entre 0.0500 y 0.0750g (±0.0002) de Benzofenona 3 en un balón volumétrico
de 25 mL y aforar con metanol grado HPLC.

Octocrileno: Pesar entre 0.0500 y 0.0750g (±0.0002) de Benzofenona 3 en un balón

volumétrico de 25 mL y aforar con metanol grado HPLC.
8.1.2
8.1.3 Butildibenzoilmetano:

Página 2 de 13
 Doc: MCA128
COLORLINK S.A.S. Laboratorio de Control
Rev. 1 Fecha 04/02/2019

8.1.4 Etilhexilmetoxicinamato:
Pesar entre 0.1000 y 0.1250g (±0.0002) de Etilhexilmetoxicinamato en un balón
volumétrico de 25 mL y aforar con metanol grado HPLC.

8.1.5 Estándar interno:

Pesar 1g de Diciclohexil Ptalato en un balón volumétrico de 100 mL y aforar con
metanol. Sonicar por 5 minutos o utiliza agitador magnético. Almacenar en un
envase de vidrio ámbar bien cerrado y rotular con estándar DCHP.

8.1.6 Preparación del mix:

Adicionar en un balón volumétrico de 50 mL, 5mL Etilhexilmetoxicinamato, 2 mL
de Benzofenona 3 y 5mL de estándar (DCHP). Aforar con metanol.

8.2 Preparación de la fase Móvil:

Fase móvil B: Diluir 20 mL de ácido acético en 480 mL de agua grado HPLC.

8.3 Preparación de los estándares de control

8.3.1 Preparación de la solución estándar de control EHMC 8 %: Pesar 100 mg de

EHMC y llevar a balón volumétrico de 25 mL aforar con Metanol grado HPLC, de
la solución resultante tomar un volumen de 1 mL y llevar a balón volumétrico de
100 mL y aforar con Metanol grado HPLC, en un beaker de 50 mL tomar 2 mL de
la solución resultante, 2mL de DCHP y 16 mL de Metanol
Nota: EL peso de EHMC depende de la pureza del estándar, por lo que se debe
conocer la pureza para calcular su masa, para este caso, la solución fue preparada a
partir del estándar de EHMC al 99.8% de concentración

8.3.2 Preparación de la solución estándar de control Benzofenona 3 (3%): Pesar 37.5

mg de Benzofenona 3, llevar a balón volumétrico de 25 mL y aforar con Metanol
grado HPLC; de la solución resultante tomar un volumen de 1 mL y llevar a balón
volumétrico de 100 mL y aforar con metanol grado HPLC, en un beaker de 50 mL
tomar 2 mL de la solución resultante, 2mL de DCHP y 16 mL de metanol
Nota: EL peso de EHMC depende de la pureza del estándar, por lo que se debe
conocer la pureza para calcular su masa, para este caso, la solución fue preparada a
partir del estándar de EHMC al 99.8% de concentración

9 Condiciones Cromatografías

Condiciones Tamaño de
Tipo Largo Diámetro
de la partícula
Columna C18 50mm 4,6 mm 3 µm

Página 3 de 13
 Doc: MCA128
COLORLINK S.A.S. Laboratorio de Control
Rev. 1 Fecha 04/02/2019

Condiciones del HPLC

Lámpara de
Detector
Deuterio
Flujo 0.8 mL/min
Temperatura 40°C
Columna
Volumen de 1 µL
Inyección
Tiempo de 12 min
Corrida
Longitud de 290 nm
onda
Presión de la 1400 psi
bomba
75% Metanol + 25
Fase Móvil % Agua - Ácido
acético

10 Procesamiento de la muestra

10.1 Preparación de la muestra:

10.1.1 Pesar entre 44-60 mg (±0.1) de muestra en un beaker de 25 mL, adicional 1 mL de

Tetrahidrofurano (THF), llevar a ultrasonido con el fin de disolver la muestra,
adicionar 8 mL de metanol y 1 mL de estándar interno y agitar por 2 minutos.
10.1.2 Tomar la muestra con jeringa plástica de 3 mL y filtrar a través de filtro de jeringa
de Nylon de tamaño de poro 0.22 µ y trasvasarla al vial.
10.1.3 Disponer la muestra en un vial y llevar al HPLC para su análisis.

10.2 Procesamiento de la muestra en el HPLC

10.2.1 Instalación de columna y encendido del equipo Instalar la columna, encender y

operar el equipo de acuerdo con el instructivo de uso del HPLC y columna
cromatográfica ITR095

10.2.2 Verificar el nivel de líquidos en el equipo: Verificar el nivel de los líquidos para
evitar que se introduzca aire al equipo. Garantizar un nivel alto.

Nota: Todos los líquidos deben ser sonicados y filtrados previamente antes de
conectarlos al equipo HPLC

10.2.3 Programación del Batch

Página 4 de 13
 Doc: MCA128
COLORLINK S.A.S. Laboratorio de Control
Rev. 1 Fecha 04/02/2019

10.2.3.1.1 Crear la carpeta con el correspondiente consecutivo de análisis y fecha de

análisis
 En el escritorio, seleccionar This Pc.
 Seleccionar OS (C:)
 Seleccionar la carpeta Lab solutions
 Seleccionar la carpeta Data
 Seleccionar la carpeta del año que corresponde.
 Seleccionar carpeta LABIALES.
 Seccionar la carpeta protectores solares y crear la carpeta con los códigos
de inicio y fin de análisis y la fecha en que se realiza la corrida.
Por ejemplo (PS021- PS035 25-01-2019)

10.2.3.2 Programar el batch

 Buscar en el escritorio LabSolutions.

 USER ID: Admin.
 Seleccionar OK.
 Seleccionar Instruments y abrir 4CYFJH”-Instrument1.
 Seleccionar Quick Batch.
 En Method File seleccionar el método %BENZO3 Y EHMC.
 En Data File Name se nombra el archivo con el consecutivo y la fecha en
que se realiza el análisis.
Por ejemplo (PS021- PS035 25-01-2019)
 Presionar Settings y a continuación seleccionar LABIALES - Protectores
solares y posteriormente seleccionar la carpeta en donde se va a almacenar
el archivo, por ejemplo, PS021- PS035 25-01-2019 y presionar OK.
 En Sample Name y Sample ID se pone el mismo nombre que Data File
Name.
 En Tray name: dejar por defecto.
 En Vial Number seleccionar el vial de inicio y el vial de final.
 En Number of Samples seleccionar la cantidad de muestras a analizar,
teniendo en cuenta los lavados (2), controles y Mix que correspondan.
 En Volumen seleccionar el volumen de inyección.
 Repetitions: Seleccionar la cantidad de repeticiones; para este caso es 1 por
defecto.
 Presionar Add Batch Table y realizar registro de cada muestra.
o Sample Name: Se digita el consecutivo, OP y batch.
o Sample ID: Se digita el código de la muestra y el nombre.
o Sample: Se identifica el tipo de muestra (Estándar (Standard),
Control o desconocida (Unknown)).
o Sample Amt.: Se digita la masa de la muestra con un factor de
dilución Dil. Factor de 1000.

Página 5 de 13
 Doc: MCA128
COLORLINK S.A.S. Laboratorio de Control
Rev. 1 Fecha 04/02/2019

Notas:
- Hay que recordar que se deben poner dos lavados CLC antes de empezar el
análisis de las demás muestras.
- En el #Vial de cada lavado debe ir -1.
- El #Vial debe coincidir con la ubicación que se tuvo en el HPLC.
- Recordar poner la concentración de cada control.
- Para el estándar, Sample Amt y Dil. Factor es 1.
 Presionar Start.
 Guardar el batch en la correspondiente carpeta.
 Inicia la corrida automáticamente.

10.3 Resultados de la corrida cromatográfica:

 Terminada la corrida cromatográfica, presionar Postrun y nuevamente

Postrun.
 Seleccionar Folder, la segunda imagen al frente (Select Project) y seleccionar
el archivo donde se almacenó la corrida, y presionar Close.
 Se pueden observar los resultados de todas las muestras que compusieron el
Batch; al dar click en cada una de ellas, se puede observar el cromatograma, los
datos de identificación de la muestra y los resultados (concentraciones).
 Por medio de los tiempos de elución se identifican los picos buscados ya que la
BENZO3 eluye alrededor de 2 min, el estándar interno eluye a los 5.7 min y
EHMC eluye alrededor de 9.5 min, en la casilla Ret. time se identifica el
tiempo de elución de los compuestos buscados y en la casilla Conc. se lee la
concentración correspondiente.
 Registrar la concentración de las muestras analizadas y de los controles en el
formato MCA128-2.
 Alimentar las cartas de control en el formato MCA128-3.

Nota: La ruta mencionada anteriormente se observa en las imágenes del Anexo 1

Página 6 de 13
 Doc: MCA128
COLORLINK S.A.S. Laboratorio de Control
Rev. 1 Fecha 04/02/2019

ANEXO 1

Ruta de acceso y de reporte de resultados Protectores solares EHMC y BENZO3

Imagen 1 Selección de Quick Batch

Página 7 de 13
 Doc: MCA128
COLORLINK S.A.S. Laboratorio de Control
Rev. 1 Fecha 04/02/2019

Imagen 2 Selección del método

Página 8 de 13
 Doc: MCA128
COLORLINK S.A.S. Laboratorio de Control
Rev. 1 Fecha 04/02/2019

Imagen4 Nombre, identificación y cantidad de muestra

Página 9 de 13
 Doc: MCA128
COLORLINK S.A.S. Laboratorio de Control
Rev. 1 Fecha 04/02/2019

Imagen 5 Almacenamiento e inicio del Batch

Página 10 de 13
 Doc: MCA128
COLORLINK S.A.S. Laboratorio de Control
Rev. 1 Fecha 04/02/2019

Imagen 6 Acceso a los resultados de análisis (Postrun)

Imagen 7 Busqueda de los resultados de análisis

Página 11 de 13
 Doc: MCA128
COLORLINK S.A.S. Laboratorio de Control
Rev. 1 Fecha 04/02/2019

Imagen 8 Resultados del cromatograma

Página 12 de 13
 Doc: MCA128
COLORLINK S.A.S. Laboratorio de Control
Rev. 1 Fecha 04/02/2019

9. BIBLIOGRAFÍA

 APAM 9.975-5 Butyl Methoxydibenzoylmethane, benzophenone-3, Ethylhexyl

methoxycinnamate, Octylsalicylate, Octocrylene and homomethylsalicylate in
cosmetic products (Quantitative HPLC methods).

 UNE 84129 Materias primas cosméticas, determinación general en fase líquida de alta
resolución.

 UNE 84109 Benzofenonas, determinación de la pureza por cromatografía en fase

líquida.

Página 13 de 13