UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Perú, Decana de América

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

INFORME N°4

“CUANTIFICACIÓN POR COMPARACIÓN CON UN

ESTÁNDAR - DETERMINACIÓN DE FRAMICETINA EN UNA
SOLUCIÓN OTO-OFTÁLMICA”
ASIGNATURA
Química analítica instrumental

DOCENTE
Mg. Carlos Casas, Norma Angélica

“SUBGRUPO 1”

Aliaga Sotelo, Dan Abinadab

Cruz Huaroto, Milagros Guadalupe

Chirinos Mejico, Anely Rocío

Espinoza Medina, Maryori Alexandra

Revollar Panaifo, Cristian Enrique

Lima, Perú

2021-II
 I. INTRODUCCIÓN:

Los parámetros de calidad de un método analítico son de vital importancia para

asegurar la idoneidad de un método para solucionar un problema analítico. De entre
ellos, la IUPAC, en sus últimas recomendaciones [IUPAC 2001] ha definido la
selectividad como “la extensión en la que un método puede utilizarse para determinar
analitos particulares en mezclas o matrices sin interferencias de otros componentes
con un comportamiento similar”. Por lo tanto, y para que sea una herramienta útil para
el químico analítico, los valores de selectividad deberían indicar hasta qué punto la
concentración de un analito predicha por el método puede estar afectada por otras
interferencias presentes en la muestra (1).

II. OBJETIVOS:

● Aplicar correctamente el método espectrofotométrico para la determinación

cuantitativa de un principio activo por medio de la formación de complejos
coloreados
● Identificar que la muestra está en los estándares indicados para que pueda ser
aceptada.

III. MARCO TEÓRICO

Espectrofotometría de absorción molecular UV-Visible

Es un instrumento que mide la absorbancia de una solución. Por lo tanto para medir la
concentración de un analito por este método es necesario que el analito tenga la
propiedad de absorber radiación electromagnética en la región del UV-visible (2).

Ecuación de Lambert y Beer

Cuando un haz de luz monocromática atraviesa una solución, la absorbancia es
directamente proporcional a la distancia recorrida por la luz atravesando la solución
absorbente y a la concentración del analito en la solución. La distancia recorrida por
la luz atravesando la solución se denomina camino óptico y se mide generalmente en
cm (2).

Figura 1: Esquema que representa el fenómeno que describe la ley de Lambert y

Beer.

La Ley de Lambert Beer es una ley límite, es decir que solo se cumple en
determinadas condiciones: luz monocromática y soluciones diluidas (2).

Figura 2: Ecuación de Lambert y Beer

A: absorbancia, adimensional.
६: coeficiente de extinción molar ó absortividad molar, se define como la unidad de
absorbancia por unidad de concentración y por unidad de longitud de la trayectoria de
luz; es una constante definida que depende de la solución y la longitud de onda.
b: es el camino óptico, en general se mide en cm.
c: es la concentración del analito expresado en molaridad.
 Dado que la absorbancia y la absortividad molar dependen de la longitud de onda de
la luz incidente, muchas veces se expresa la ecuación de Lambert y Beer como una
función de la longitud de onda (2).
IV. PROCEDIMIENTO

Figura 1. Diagrama de flujo sobre cuantificación por comparación con un estándar

-determinación de framicetina en una solución oto-oftalmica
V. RESULTADOS
1. Detallar cálculos previos. Detallar los cálculos del factor de dilución.
-Concentración de estándar y porcentaje de muestra a ug/mL.
1000 ppm = 1000 ug/mL

1𝑔
1%= 100 𝑚𝐿
= 10000 ug/mL

- Procedemos a relacionar:
1000 x V = 25 X 1000
V = 2,5 mL
Para calcular el factor de dilución se divide el volumen final de la
dilución con el volumen de la muestra, siendo el primer valor 25 mL
tras ser trasvasado los 2,5 mL de la muestra en una fiola. Por lo que:
25 𝑚𝐿
Factor de dilución = 2,5 𝑚𝐿
= 10

2. Hacer los cálculos de la concentración de framicetina en la forma farmacéutica

expresados en mg/mL.
- Para hallar la concentración de framicetina en forma farmacéutica se
multiplica la concentración de la solución [Stn], factor de dilución
(FD) y la absorbancia de la muestra problema (A.MP) sobre la
absorbancia de la solución estándar (A.Stn):
𝐴.𝑀𝑃
C= 𝐴.𝑆𝑡𝑛 𝑥 [𝑆𝑡𝑛] 𝑥 𝐹𝐷
0,612
C= 0,539
𝑥 1000 𝑥 10
C = 11354, 3599 ug /mL
En mg/mL:
1 𝑚𝑔
C = 11354,3599 ug/mL = 1000 𝑢𝑔
= 11,3543 mg/ mL

3. Concluya si la muestra se acepta o se rechaza, ¿Por qué?

- La muestra según el fabricante es de 10 mg/mL. Entonces el porcentaje
que tendríamos comparado a nuestros resultados sería sería 113,54%.
Ahora bien según la USP 37, los valores del sulfato de framicetina en
 solución oftálmica deben contener no menos de 90% y no más de
130%. Es decir, SI se acepta su uso.

VI. DISCUSIÓN

Se realizó una revisión bibliográfica, basada en el método de detección y

cuantificación de un analito en una muestra problema haciendo uso del
espectrofotómetro UV. Amereih S. et al (3) realizaron un trabajo de investigación para
determinar la pureza de 21 muestras de aceite de oliva virgen de las regiones Tulkarm
y Qalqilia, y cuantificar la adulteración de dicho aceite.
Para el procedimiento se preparó una solución de 1% de aceite de oliva en isooctano.
Se midió la absorbancia de 200 nm a 400 nm contra isooctano como blanco para
encontrar la absorbancia máxima para el aceite de oliva y lo mismo se hizo para
soluciones de girasol, maíz y soja (en isooctano).
Se realizaron las lecturas de las muestras para verificar su absorbancia en relación
con el blanco. Algunas de las MP lograron dar un resultado de lectura de 270 nm que
estuvieron dentro del intervalo aceptado por la COI (Consejo Oleícola Internacional).
Como resultados se obtuvieron que el 42% de las muestras eran vírgenes y no había
adulteración en ellas (mezclados con otros aceites de semillas).

VII. APLICACIONES Y CONCLUSIONES

Una de las aplicaciones que se ha podido identificar es la validación del método
espectrofotométrico UV- visible para determinar Ciprofloxacina, considerado como el
principio activo presente en tabletas que contenían 500 mg. Ahora bien, una de las
pruebas a aplicar fue la cromatografía de capa fina, es por ello que para su
identificación el tiempo retenido del pico mayor en cromatograma del ensayo
corresponde al del cromatograma del estándar.
Luego se colocó un número de tabletas equivalentes a 1500 mg de Ciprofloxacina, las
cuales contenían alrededor de 750 ml de agua. Por otro lado, se debe centrifugar una
porción de la suspensión anterior, utilizando el sobrenadante que se obtuvo como
solución de ensayo. Asimismo, se debe disolver una cantidad de clorhidrato de
Ciprofloxacina USP en agua para obtener una solución estándar conteniendo 1,5
mg/L. Por último, se procedió de igual manera con el otro ensayo de identificación
para clorhidrato de Ciprofloxacina.
 Se logró identificar a la framicetina en solución oto-oftálmica a través de la formación
de complejos y además del uso del método de calibración por adición de un estándar,
siendo este la framicetina y tetraciclina utilizando el espectrofotómetro UV-visible
con la finalidad de garantizar si la forma farmacéutica cumple con los parámetro
aceptables (4).

VIII. CUESTIONARIO:

1. Desarrolle la ecuación química del fundamento

Na2 (Fe(CN)5NO) + 3CH3OH + NaOH → Na3Fe(CN)5NOH + C3H6O + 3H2O
2. Cuál es la ventaja de esta forma de cuantificación.
La ventaja principal es la determinación del analito en la cual se analizan y
cuantifican los componentes de la matriz de la muestra también nos ayuda a
identificar que los reactivos usados en la preparación de este no interfieran en el
análisis realizado, esta forma de cuantificación es también empleado cuando la
cantidad de sustancias que interfieren se mantienen constantes lo que nos permite
realizar una oportuna corrección del error que será detectado por la interfase (5).

3. ¿En qué consiste un patrón externo ? ,ejemplos prácticos

El patrón externo es otro metodo de cuantificacion de analisis analitico , que consiste

en preparar varias soluciones en distintas concentraciones conocidas tomando como
solución madre la sustancia patrón o estándar ,además preparar el blanco con el
disolvente utilizado y los reactivos utilizados excepto el analito ,luego se procede
ajustar el cero en la absorbancia con el blanco y proceder a graficar las
correspondientes señales analiticas de cada solucion patrón preparada,para finalizar se
procede a calcular por interpolación la concentración de la muestra problema por la
absorbancia obtenida experimentalmente.
Por ejemplo tenemos una solución del complejo de tiocianato de hierro III
(característico por su color rojo sangre ),por ser un compuesto de coloración,la
longitud de onda mayor u óptima estará en el rango de luz visible,por lo que se
procederá a realizar 5 soluciones patrones de la solución mencionada con
concentraciones conocidas y respectiva prueba en blanco y se procederá a graficar
con sus respectivas las señales(absorbancias) con sus concentraciones ,luego
tendremos una solucion problema ,donde queremos hallar la concentración de
hierro,por lo que se hallara experimentalmente su absorbancia correspondiente y por
interpolación se calcula la concentración de la muestra problemas(tiocianato de
potasio con concentración desconocida (6)
 4. Determine el valor K de los datos obtenidos en la preparación de la curva de
calibración y observe si es constante o no. Interprete. A st/Cst=K

BLANCO ESTÁNDAR M.P.(FRAMIDEX)

ABSORBAN 0 0.539 0.612

CIA

En base a la longitud de onda obtenida 560 nm, hallamos K.

Solución estándar (St): KSt = 0,539/1000 μg/mL = 5,39 x 10-4

KSt = 5,39 x 10-4
Solución problema (MP): KMP =0,612/1135,436 μg/mL= 5,389 x 10-4
KMP = 5,389 x 10-4

5.- ¿Cómo se puede calibrar la influencia de la matriz en el método?

El “efecto de matriz” se debe calibrar con la técnica de “Adición de estándar”, la cual

consisten en la toma de alícuotas de la muestra problema, a la muestra conocida como blanco
se le agrega un estándar de concentración conocida y creciente, luego se procede a enrasar
con agua. Ahora bien, al tener listas todas las muestras preparadas se procede a realizar la
medición y se construye la curva de calibración. Finalmente, con los datos obtenidos de la
regresión lineal de la curva de la calibración se podrá hallar la concentración de la muestra
deseada (7).

Referencias:

1. Boqué R. La selectividad en análisis químico [Internet]. quimica.urv. 2005 [citado 7

noviembre 2021]. Disponible en: http://www.quimica.urv.es/quimio/general/selectividad.pdf

2. ESPECTROFOTOMETRÍA [Internet]. aulavirtual. 2019 [citado 10 octubre 2021].

Disponible en:
https://aulavirtual.agro.unlp.edu.ar/pluginfile.php/43546/mod_resource/content/3/Espectrofot
ometr%C3%ADa%202019%20versi%C3%B3n%20final.pdf

3. Amereih S, Barghouthi Z. Detection and Quantification of Adulteration in Olive Oil using

a UV- Spectrophotometric Method. ‫[ مجلة جامعة فلسطين التقنية لألبحاث‬Internet]. 2014 Feb 9
[Citado 10 de noviembre de 2021];2(1):14–9.Disponible en:
https://scholar.ptuk.edu.ps/bitstream/123456789/110/1/pdfs_Sameer_Amereih_et_al_2014.pd
f

4. García G, Gutiérrez Bianka. Validación de un método espectrofotométrico UV-VIS para la

determinación de Ciprofloxacina en formulaciones sólidas producidas por Laboratorios
Bengoechea de Managua [Internet]. 2008 [Citado del 10 noviembre del 2021]. Disponible
en: https://repositorio.unan.edu.ni/65/1/85359.pdf

https://docs.google.com/document/d/1vTld1t-gF5XYQpYj0B4lnp_voKb9juvwjDZVLsQ_pg
Q/edit

5. Vicente Alonso J F. Técnicas instrumentales de análisis físico-químico en laboratorios

industriales [Internet]. Madrid: Escuela Técnica Superior de Ingenieros Industriales
Universidad Politécnica de Madrid ; 2016 [citado 6 octubre 2021]. Disponible en:
http://oa.upm.es/42341/1/JOSE_VICENTE_ALONSO_FELIPE.pdf

6. El canal de Oviedo León. Métodos de cuantificación Patrón externo [Internet]. 2020

[citado 6 de noviembre de 2021]. Disponible en:
https://www.youtube.com/watch?v=hYgBZe5k0yk

7. Espejo M. Importancia de la calibración en los laboratorios de química analítica [Internet]

España: Universidad de Sevilla; 2016 [10 nov 2021] Disponible en:
https://idus.us.es/bitstream/handle/11441/54518/IMPORTANCIA%20DE%20LA.pdf?sequen
ce=1&isAllowed=y