TRABAJO CINÉTICA ENZIMATICA

JUAN SEBASTIAN OROZCO GOMEZ

Cod:1950046

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
PROCESOS MICROBIOLOGICOS INDUSTRIALES
QUIMICA INDUSTRIAL
2019
Ejercicios Cinética Enzimática

1. Para estudiar la dependencia de la v frente a [S] de una reacción catalizada

enzimáticamente, una cantidad constante de enzima se adiciona a una serie de
medios de reacción de 10 ml de volumen conteniendo diferente [S]. Las
velocidades iniciales de reacción se han determinado midiendo el número de
moles de producto formado por minuto, obteniéndose los siguientes resultados:

Responda las siguientes cuestiones:

{S} Vo 1/{S} 1/Vo    

0,05 0,25 20 4 b 3,989
0,005 0,25 200 4 Vmax 0,2506894
0,0005 0,25 2000 4 m 5,00E-05
0,00005 0,2 20000 5 Km 1,25E-05
0,000005 0,071 200000 14,084507    
104,16666
0,0000005 0,0096 2000000 7    
           
-2
0,000001 2x10
0,1 2x10-3        

a) ¿Cuál es la Vmax para esta [E]?

120

100 f(x) = 5.00926587470435E-05 x + 3.98904426467759

R² = 0.999998250726435
80

60

40

20

0
0 500000 1000000 1500000 2000000 2500000

La Vmax para este [E] es igual a:

1/b que equivale a 3,989 por lo tanto la Vmax=0,2506894
b) ¿Cuál es la Km de esta enzima?

Km= m*Vmax= 5x10-5 x 0,2506894= 1,25x10-5

c) Demostrar si está reacción sigue o no la cinética de Michaelis-Menten.
0.3

0.25

0.2

0.15

0.1

0.05

0
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06

Observando la gráfica, a pesar de que no se cuenta con muchos datos, se puede

deducir que si sigue la cinética de Michaelis-Menten.

d) ¿Cuáles serán las velocidades iniciales a [S]=1x10-6 M y a [S]=1x10-1 M?

Vo=Vmax*[S] / Km+[S]= 0,2506894* 0,000001 / 1,25x10-5+0,000001 = 2x10-2

Vo=Vmax*[S] / Km+[S]= 0,2506894* 0,1 / 1,25x10-5+0,1 =2x10-3

2. La cinética de una enzima viene medida como función de la [S] en ausencia y

presencia del inhibidor a una [I]=10 -4 M. A partir de los siguientes
resultados:

[S] Vo sin I Vo con I 1/[S] 1/Vo sin 1/Vo con

3,00E-04 10,4 2,1 3,33E+03 0,09615385 0,47619048
5,00E-04 14,5 2,9 2,00E+03 0,06896552 0,34482759
1,00E-03 2,25E+01 4,5 1,00E+03 0,04444444 0,22222222
3,00E-03 33,8 6,8 3,33E+02 0,0295858 0,14705882
9,00E-03 40,5 8,1 1,11E+02 0,02469136 0,12345679
a) Representar v0 frente a [S] y 1/V0 frente a 1/[S].

Sin I Con I
45 9
40 8
35 7
30 6
25 5
20 4
15 3
10 2
5 1
0 0
0.00E+002.00E-03 4.00E-03 6.00E-03 8.00E-03 1.00E-02 0.00E+00 2.00E-03 4.00E-03 6.00E-03 8.00E-03 1.00E-02

Inversos:

Sin I Con I
0.12 0.5
f(x) = 0.000110835317542107 x + 0.112507749208526
0.45
0.1 R² = 0.998206559224158
0.4
f(x) = 2.23988316800025E-05 x + 0.0224053322144046
R² = 0.998814996980906 0.35
0.08
0.3
0.06 0.25
0.2
0.04 0.15
0.1
0.02
0.05
0 0
0.00E+00 1.00E+03 2.00E+03 3.00E+03 4.00E+03 0.00E+00 1.00E+03 2.00E+03 3.00E+03 4.00E+03

b) Calcular Vmax. y Km en ausencia y presencia de inhibidor. c) ¿Qué tipo de

inhibición es esta?

Con I   Sin I  
b 0,1125 b 0,0224
m 0,0001 m 2,00E-05
Vmax 8,88888889 Vmax 44,6428571
Km 0,00088889 Km 8,93E-04
Analizando los resultados se puede observar que es un inhibidor no competitivo ya
que la Km aumenta y la Vmax disminuye.

c) Calcular la Ki.

3. La enzima aspartato transcarbamilasa cataliza la primera reacción propia de la

síntesis de pirimidinas. En un estudio de ésta enzima, utilizando aspartato como
sustrato, en presencia de CTP 0,5 M y en ausencia del mismo, se obtuvieron los
siguientes datos:

a) Cual es el valor de Km, Vmax y Kcat si la concentracón de enzima es 0,5 mM

Con CTP   Sin CTP  

m 5,2414 m 2,2584
b 0,2442 b 0,0464
Vmax 4,0950041 Vmax 21,5517241
Km 21,4635545 Km 48,6724138
Kcat 8,19000819 Kcat 43,1034483

b) Cual es la eficiencia catalítica de la enzima.

Km 21,4635545 Km 48,6724138
Kcat 8,19000819 Kcat 43,1034483
Kcat/Km 0,38157744 Kcat/Km 0,88558271
c) Utilizando la ecuación de Michaelis-Menten, calcular V0 para una [S]=3 mM.
¿Existe alguna discrepancia entre éstos datos y los experimentales?.
Justificarlo.

21,5517241∗3
Sin CTP Vo= =1.25
48,6724138+3

4,0950041∗3
Con CTP Vo= =0,502
21,4635545+3

Cuando se compran los datos se puede observar una diferencia entre los
calculados por la ecuación y los obtenidos con la concentración de 3mM, aunque
los valores siguen un comportamiento similar en los casos de presencia y
ausencia de CTP, esto se puede atribuir a los factores externos e internos que
pueden afectar el experimento como lo son la temperatura el pH, la concentración.
Etc. Gracias a esto podemos deducir que la ecuación nos permite
predecir el comportamiento, pero que debido a los factores que afectan la reacción
no logra predecir valores completamente exactos.

d) ¿Qué efecto tiene el CTP sobre la actividad enzimática?

El CTP funciona como un inhibidor de la encima ya que reduce la velocidad a la

que el sustrato reacciona y se convierte en producto, por consiguiente, reduce la
efi9ciencia enzimática.

4. En experimentos de laboratorio, se utilizaron dos Amilasas (A y B) obtenidas de

diferente microorganismo (ver tabla). Decida cual enzima presenta una mayor
eficiencia catalítica , (Kcat/ Km) si la concentración de las enzimas utilizada en
abbos experientos fue 0,2uM.
 enzima A enzima B
Vmax 2,36798484 Vmax 2,31320842
Km 0,00118399 Km 0,02498265
Kcat 1,18E+06 Kcat 1,16E+06
Kcat/Km 1,00E+09 Kcat/Km 4,63E+07

Observando los resultados obtenidos se puede concluir que la enzima A presenta una
mayor eficiencia catalítica, esto observando que la relación Kcat/Km en A esta en el orden
de 109
Mientras que en B es del orden de 107

5. Calcule vi y el porcentaje de inhibición causado por un inhibidor competitivo bajo

las siguientes condiciones:

a). [S]=2x10-3 M y [I] = 2x 10-3 M

b). [S]=4x10-4 M y [I] = 2x 10-3 M

c). [S]=7.5 x10-3 M y [I] = 1x 10-5 M

Asume que KM=2x10-5 M, KI=1.5x10-4 M y Vmax= 270 nM/min.

Fórmulas requeridas:
a)

[S]=2x10-3 M y [I] = 2x 10-3 M

Vo 2,6733E-07

Vi 2,3615E-07

I% 11,6634

b)
[S]=4x10-4 M y [I] = 2x 10-3
M

Vo 2,57143E-07

Vi 1,5728E-07

I% 38,835

c)
[S]=7.5 x10-3 M y [I] = 1x 10-5
M
Vo 2,6928E-07

Vi 2,6923E-07

I% 0,0186