Se denominatcnica histolgicaal conjunto de

operaciones

que

se

somete

una

materia

organizada, a fin de que sea posible su estudio por

medio delmicroscopio, posibilitando la observacin
de estructuras no visibles al ojo humano.

PASOS DE LA TECNICA HISTOLOGICA

1. Obtencin del material histolgico para estudiar

2. Proceso de fijacin
3. Lavados
4. Deshidratacin
5. Aclaramiento
6. Infiltracin
7. Inclusin
8. Microtoma
9. Tincin

FIJADORES
Son sustancias que se utilizan para preservar la estructura
del tejido semejante a la que tenan en vida; ya que los
fijadores detienen la autolisis celular. La fijacin tiene por
objeto matar las clulas y conservarlas

Condiciones que debe tener un fijador:

Alto poder de penetracin, para fijar las capas mas profundas
Actuar con rapidez, matando y fijando las clulas
No provocar estructuras artificiales
No retraer el tejido, ni volverlos quebradizos
No debe dificultar la coloracin y ejecucin de cortes.
Conservar, en lo posible, los detalles estructurales que
presentaban vivos.

Tipos de fijadores:
FIJADORES QUMICOS SIMPLES:
a) Formol al 10%, es el ms usado
b) Alcohol etlico absoluto o de 96%, se usa generalmente en
microqumica.
c) Alcohol metlico, se lo emplea con frecuencia para fijar frotis
desecados (sangre, mdula sea, ganglio, bazo, lquidos de puncin,
etc.).
d) cido smico al 1 2%, es poco penetrante pero enrgico, conserva
muy bien estructuras celulares.

FIJADORES QUMICOS COMPUESTOS:

a) Lquido de Fleming, mezcla cromo-osmio-actica.
b) Lquido de Zenker, mezcla bicromato-sublimado-actica.
c) Lquido de Helly, mezcla Zenker-formol.
d) Lquido de Bouin, mezcla picro-formos-actica.
FIJADORES FISICOS:
a)Desecacin: Se lo utiliza en extendidos de sangre, lquidos de puncin.
b)Calor seco: poco empleado en histologa.
c)Calor hmedo: utilizado en investigaciones microqumicas o para fijar
invertebrados.
d)Fro: detiene los procesos vitales y los cadavricos de necrosis y
autolisis
e)Congelacin desecacin

COLORANTES
Son todas aquellas sustancias que pueden comunicar su color a otros
cuerpos, sea el mismo color que ellas tienen (colorantes
ortocromticos), o bien teir de un color distinto (colorantes
metacromticos).

COLORACIN es el proceso por el cual un cuerpo

toma color bajo la accin de un colorante
Sustancias basfilas: se tien con colorantes bsicos.
Sustancias acidfilas: se tien con colorantes cidos.
Sustancias neutrfilas: se tien con colorantes neutros.
Sustancias azurfilas: se tien con azul de metileno.
Sustancias osmifilas: se tien con tetrxido de osmio.
Sustancias argirfilas: se tien con sales de plata.

CLASIFICACION DE LOS COLORANTES SEGN SU ORIGEN

Colorantes naturales:
Animales ( carmn )
Vegetales ( hematoxilina, orcena, azafrn )
Colorantes artificiales o sintticos
cidos: (eosina o eosinato de sodio). Son colorantes citoplasmticos.
Bsicos: (azul de metileno o clorhidrato de azul de metileno). Son colorantes
nucleares
Neutros: Tien el ncleo de un color y el citoplasma de otro.
Indiferentes: no forman sales. Tien aquellas sustancias que tienen un poder
disolvente superior al del lquido que ha servido para preparar la solucin colorante
(Sudn lll, rojo escarlata).

Colorantes ms utilizados en histologa humana

Hematoxilina
Colorante vegetal, bsico
Tiene afinidad por los componentes cidos de la clula, los tie de color
azul violceo
Tie los componentes nucleares.
Se denomina basfilos

Eosina
Colorante artificial, acido
Tiene afinidad por los componentes bsicos de la clula, los tie de
color rosado
Tie citoplasma y organelos
Se denomina acidfilos.

ALGUNOS METODOS UTILIZADOS EN LAS TECNICAS HISTOLOGICAS

1. METODOS EN VIVO O INMEDIATO:

a) Cultivo de Tejidos
b) Coloracin Vital

Coloracin intravital

Coloracin Supravital

2. METODOS MEDIATOS O POSTMORTEN

a) Para microscopio ptico
b) Para microscopio Electrnico

1. METODOS EN VIVO O INMEDIATO:

a) Cultivo de Tejidos: se le conoce como in vitro, utilizado para
reproducir clones de clulas vivas para cualquier estudio
histolgico.
1. Se realiza el corte
2. Se coloca en un recipiente estril junto a una sustancia similar al
tejido tisular
3. Se le agrega colagenasa o tripsina con el fin de obtener clulas
individuales.
4. Se aaden a un medio de cultivo nutritivo para permitir el
crecimiento de las clulas
5. Se le agrega antibiticos para inhibir las bacterias
6. Se mantiene a 37C

1. METODOS EN VIVO O INMEDIATO:

b) Coloracin Vital
Coloracin Intravital:
Se inyecta colorante diluido a un ser vivo
Por ejemplo : la alizarina se utiliza para estudiar el crecimiento
seo, ya que este se fija a la matriz sea.

Coloracin supravital:
Se extrae un corte de tejido fresco
Se sumerge en una solucin colorante por tiempo
determinado
. Por ejemplo: el carmn de litio se utiliza para el estudio de la
fagocitosis en ciertos tejidos.

2. METODOS MEDIATO O POST-MORTEN

TECNICA PARA MICROSCOPIO OPTICO:

Fijacin: tiene por objeto matar las clulas y conservarlas

Deshidratacin y aclaramiento: se utiliza alcohol para deshidratar una vez
Perfectamente deshidratadas se sumergen en el disolvente, xileno para aclarar y
permitir el siguiente paso
Inclusin: Se sumergen las piezas en parafina
Corte: son lo suficientemente delgados como para permitir el paso de la luz para
examinarlo al microscopio, generalmente son de 5 a 10 m
Montaje y tincin: en un portaobjetos cubiertos con una capa de adhesivo de
Mayer y, con la ayuda de una aguja histolgica, se colocan los cortes sobre el
portaobjetos. se procede a rehidratarlo para permitir su coloracin. Y para la tincin
el mas utilizado es la combinacin de Hematoxilina-Eosina

2. METODOS MEDIATO O POST-MORTEN

TECNICA PARA MICROSCOPIO ELECTRONICO:
Fijacin: se utiliza glutaraldehido o tetrxido de osmio
Deshidratacin
Inclusin: se suele utilizar resinas y distintos materiales plsticos, que adquieren
gran dureza despus del secado
Cortes: se realiza cortes ultrafinos con un ultra micrtomo 0,02 micrones
Montaje: los cortes ultrafinos se montan en un reticulado pequeo llamado grilla,
el haz de electrones atraviesa el corte por los orificios de la grilla.
Coloracin: se utiliza generalmente azul de toluidina, colorante bsico y capaz
de penetrar la resina

Tcnica de congelacin
Es posible estudiar al M/E estructuras celulares superficiales o puestas al
descubierto por medio de la fractura de una muestra congelada a muy bajas
temperaturas
La muestra se congela en nitrgeno lquidos (-196 C
Utilizada principalmente para el estudio de lpidos, los cortes se realiza con un
microtomo de congelacin.

Tcnica de Fraccionamiento Celular

Mediante esta tcnica es posible separar los distintos componentes celulares y
mantener al mismo tiempo sus funciones.