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Para solucionar esto, se diseñaron las técnicas histológicas. La mayoría de estas técnicas van
encaminadas a preparar el tejido para su observación con el microscopio, bien sea este óptico o
electrónico. Entonces tenemos 2 tipos de técnicas para el estudio de las células:
Para solventar estas dificultades, sobretodo las referentes a que son incoloras y traslucidas, se
diseñaron las TECNICAS HISTOLOGICAS.
2) TECNICAS HISTOLOGICAS: las podemos definir como una serie de procedimientos que
permiten disponer de una preparación histológica para ser observada en el microscopio, sea
óptico o electrónico y su objetivo principal es preservar la estructura y organización de las
células y los tejidos, para que su observación nos brinde datos mas cercanos a su
comportamiento vital.
1. TOMA DE LA MUESTRA: Es la obtención del material biológico a ser procesado, para lo cual es
necesaria la manipulación delicada para evitar su deformación. La muestra puede obtenerse
de un individuo vivo (biopsia) o de un cadáver (necropsia).
- Mecanismos de acción: la mayoría de los fijadores precipitan las proteínas, para que el
aspecto celular no se modifique. Todos los tejidos, cuando se extraen del organismo
sufren dos tipos de procesos degradativos: autolisis y descomposición. El
procesamiento histológico posterior del tejido para poner de manifiesto y observar
determinadas estructuras supone una metodología que puede degradar las
estructuras tisulares. Así, los fijadores deben:
o proteger frente a ataques bacterianos
o evitar autolisis
o insolubilizar elementos
La desventaja de éste mecanismo de acción molecular, es que puede extraer sustancias químicas
vitales para los estudios histoquímicos. El fijador comúnmente usado es el formol o formalina, la
cual reacciona con los grupos amino y carboxilo de las proteínas produciendo uniones metiladas
con otras moléculas proteicas. Asi las proteínas precipitan, formando mallas.
- Propiedades de un fijador:
o Poder microbicida alto: para detener los procesos de autolisis y heterolisis.
o Poder de penetración: para fijar segmentos relativamente grandes de tejidos.
o Rapidez de fijación
o Hidrosolubilidad: porque la matriz celular es acuosa
o Tener un pH cercano al fisiológico: para garantizar su ionización y solubilidad.
o Bajo costo y baja toxicidad.
Estas propiedades nos van a garantizar que se preserve la estructura y organización de las células y
los tejidos. Existen dos formas de aplicación del fijador a los tejidos:
- Tipos de fijadores:
o Físicos:
Calor: favorecen la penetración de agentes fijadores (microondas,
flameado de frotis)
Frio: sobretodo para procesar lípidos. Tiene el inconveniente de que la
estructura de los tejidos se deteriora mas. (por acetona fría, preservación
en nitrógeno liquido)
o Químicos:
Coagulativos: producen puentes entre las distintas cadenas laterales de
los aminoácidos de las proteínas del espécimen. Ej: formaldehido,
glutaraldehido, tetroxido de osmio.
Por deshidratación: retiran el agua y provocan la precipitación de las
proteínas. Ej: etanol, acetona.
Por precipitación salina o salting out: deshidratan porque son sales y
compiten por el agua, lo que genera una capa de solvatación alrededor de
los iones de la sal y por tanto retiran el agua de las muestras. Ej: cloruro de
mercurio.
- Errores comunes:
o Mover el tejido mientras se solidifica la parafina
o Colocar en la placa caliente luego del panel frio
o Usar la pinza fría
o Colocar el corte del lado incorrecto
4. CORTE EN MICROTOMO: una vez se tenga incluido el tejido en parafina, este se incluye en un
casette, para poder cortar se necesita que la muestra este enfriada lo cual generalmente se
hace en agua con hielo. El micrótomo va a sacar tiras finas del tejido (3 micras), estos tejidos
se incluyen en un baño de flotación que esta a 40°C de manera que se estiren y por adhesión
se coloca el tejido sobre la lamina y se deja en la placa a 40°C por unos 10-15 minutos. El error
mas común que puede suceder en este punto, es que el corte sea demasiado grueso, ya que
no se ya a realizar una buena coloración del tejido, además de que no se va a ver
correctamente en el microscopio.
Antes de entrar a la parte de la coloración propiamente dicha, se deben realizar una serie
de pasos que van a preparar a este tejido ya disecado para adquirir un color que nos
permita observar sus características en un microscopio.
1- Desparafinacion o aclaramiento: se realiza este paso para retirar la parafina del tejido.
o Luego de dejar secar la lamina, colocar en la incubadora por 5 minutos a 60°C,
para disolver la parafina
o Se sumerge en tolueno I por 5 minutos, esto va a ayuda a disolver completamente
la parafina
o Se sumerge en tolueno II por 5 minutos
6. DESHIDRATACION: Debido a que el medio de montaje no es miscible con el agua, ésta se debe
eliminar mediante inmersiones del portaobjetos con el corte histológico en soluciones de
alcohol que van de menor a mayor concentración.
o Se sumerge en Etanol 70% por 1 minuto
o Se sumerge en etanol 100% por 1 minuto
o Se sumerge en etanol 100% por 2 minutos
Las propiedades tintóreas del citoplasma de estas células dependen del grado de
maduración de las mismas, las eosinófilas que se tiñen de rojo son más maduras que
las basófilas que se tiñen de azul
3- IMPREGNACION ARGENTICA: La plata amoniacal es un complejo molecular, el cual
cuando es reducido por formaldehído a plata metálica forma una solución coloidal
conteniendo partículas cargadas negativamente. De ésta forma, la plata cargada
negativamente es depositada sobre superficies cargadas positivamente y permite la
impregnación selectiva del tejido nervioso, así como del tejido conectivo, por ejemplo:
reticulina. Como resultado de la Impregnación Argéntica las fibras de reticulina
aparecen de color negro. Esta técnica es utilizada para el estudio de tejido nervioso, ya
que permite impregnar las membranas plasmáticas de las neuronas.
4- REACCION DE P.A.S: Las siglas P.A.S., significan Ácido Periódico de Shiff. Este método
permite evidenciar la presencia de la glicoproteína mucina. Ésta glicoproteína es
producida por las células caliciformes, las cuales son glándulas unicelulares que
elaboran mucinógeno, cuya forma hidratada es la mucina, componente de moco, y
una capa protectora que reviste la luz del intestino.
PREGUNTA: ¿Por qué es importante conocer el tamaño y dimensiones de las celulas y sus
estructuras?: La forma característica de las células, sus dimensiones, diámetros y tamaño, entre
otras variables, se constituyen en puntos de referencia al momento de estudiar tejidos que
presentan cambios morfológicos. Si se conoce lo normal, se estará en capacidad de identificar
algún cambio en dicho patrón.
- Limite celular: El límite celular puede ser definido, es decir, claramente delimitado; o
difuso, es decir, mal definido.
- Tamaño: cuanto mide la celula y en que dimension. la mayoría de las células humanas
varían entre 6 y 20 micras y pueden utilizarse como patrones comparativos, células
como los eritrocitos que miden alrededor de 7.2 micras de diámetro.
- Forma de la celula: Las células en medio líquido son esféricas, sin embargo, cuando
están unidas formando tejidos, adquieren otras formas por la presencia de células
vecinas. pueden ser piramidales, cilíndricas, cúbicas y poligonales.
- Numero de nucleos: puede no haber presencia de nucleos asi como una celula puede
tener multiples nucleos
- Forma del nucleo: Las formas de los núcleos son variadas: esféricos, ovoidales,
plurilobulados y aplanados (pignóticos).
- Ubicación del nucleo: el núcleo puede ser céntrico, excéntrico, periférico y basal.
- Afinidad del citoplasma por el colorante: por su naturaleza acida es afin a colorantes
ACIDOS
- Afinidad del nucleo por el colorante: por su naturaleza basica es afin a colorantes
BASICOS