Parte 1:: Cinética de Crecimiento Microbiano

IBMB INSTITUTO DE BIOLOGÍA
MOLECULAR Y BIOTECNOLOGÍA
TRUJILLO - PERU
Parte 1:
CINÉTICA DE
CRECIMIENTO
MICROBIANO
- Principales ecuaciones -
Blgo. Dr. José Guillermo González Cabeza gonzalezbiotec@hotmail.com

Clasificación Según
Fuente Energética y Carbonada
TIPO FUENTE FUENTE DONANTE EJEMPLO
CARBÓN ENERGÍA ELECTRONES
FOTO- CO2 Luz Compuestos Bacterias verdes
LITOTROFO inorgánicos H2S y sulfurosas
HS
FOTO- Compuestos Luz Compuestos Bacterias
ORGANOTROFO Orgánicos orgánicos púrpura
QUIMIO- CO2 Oxidación- Compuestos Bacterias
LITOTROFO reducción inorgánicos H2, hierro,sulfuro y
S,H2S,Fe denitrificantes
QUIMIO- Compuestos Oxidación- Compuestos Mayoría de las
ORGANOTROFO orgánicos reducción orgánicos bacterias
glucosa
Blgo. José González Cabeza
FISIÓN BINARIA
DNA
Replicación
Del DNA
Elongación de
la célula
Formación
Una Generación
del septo
Terminación
del
septo con
formación de
paredes bien
diferenciadas
Separación
celular

FISIÓN BINARIA
(D)Model for treadmilling-coupled cell division. (Top) The Z ring contains multiple FtsAZ filaments that treadmill
around the division plane, pulling associated PG synthases. (Bottom) FtsZ treadmilling both regulates and
distributes the activity of the PG synthases, building sequentially smaller uniform arcs of PG to divide the cell.
Fases del Crecimiento Microbiano

Fases del Crecimiento Microbiano

Periodo Exponencial (log)

Expresión del:
Número de Células vs Expresión Logaritmica

t= 2 h La población
Pendiente 0,05 se duplica en
n= 1
Células / ml.
2 hrs.
t= 6 h g = t/n = 2 h
n= 1
g = t/n = 6 Pendiente
0,15
Células / ml.
La población se
duplica en 6 hrs.
m = (Y2 – Y1) / (X2 – X1)

m = (log. 4 x 107 – log. 2 x 107) / (6 – 0)
m = ( 7.6 – 7.3) / (6)
m = 0.05
m = (Y2 – Y1) / (X2 – X1) Tiempo

14
m = (log. 1 x 108 – log. 5 x 107) / (5 – 3)
m = ( 8 – 7.69) / (2)
m = 0.155
N0 Nt Tiempoa Número de 2n Población log10 Nt
(minutos) Divisiones (N0 2n)
0 0 0 1 0
2 =1
20 1 21 = 2 2 0.301
40 2 22 = 4 4 0.602
60 3 23 = 8 8 0.903
80 4 24 = 16 16 1.204
100 5 25 = 32 32 1.505
120 6 26 = 64 64 1.806

Número de Generaciones
➢ N0 = Número inicial de la población.
➢ Nt = Número final de la población en un tiempo t.
➢ n = Número de generaciones en un tiempo t.
Nt = N0 2 n
log Nt = log N0 + n log 2
n = (log Nt - log N0) / log 2
n = (log Nt - log N0) / 0.301

Número de Generaciones
➢ K → Número de generaciones por unidad de tiempo (generaciones por
hora).
K = n / t = (log Nt - log N0) / 0.301 t
t = tiempo transcurrido entre poblaciones Nt y N0.
➢ Si, n = 1, tiempo medio de generación, o duplicación (tg).
Nt = 2 N0
k = (log 2 N0 – log N0 ) / 0.301 g

k = 1 / tg
tg = 1 / k
Rangos de Tiempos de Generación
de Grupos Microbianos

Tiempo de Generación (tg)
de Algunas Especies de Interés

Ejemplo 1
EJEMPLO: Nt = 128 N0 = 1
1. ¿ Cuál es el número de generaciones ?

n = (log Nt - log N0) / 0.301
n = (log128 – log1) / 0.301
n= (2.107209 – 0) / 0.301
n = 7 generaciones.
2. ¿ Cuántas generaciones se producen por hora ?

k=n /t
1. ¿ Cuál es el número de k = 7 / (3.5 – 0)
k = 2 generaciones por hora.
generaciones ?
2. ¿ Cuántas generaciones se 3. ¿ Cuál es el tiempo de generación ?
producen por hora ?. tg = 1 / k
tg = 1 / 2 generaciones por hora
3. ¿ Cuál es el tiempo de tg = 0.5 horas = 30 minutos.
generación ?.
Crecimiento Diauxico

Crecimiento Diauxico
Crecimiento microbiano en batch en

presencia de dos fuentes de carbono.

VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (μ)
➢ Efectuando una analogía con la pendiente de una recta, tenemos lo
siguiente:
rx = dX / dt → Crecimiento (Biomasa)
rN = dN / dt → Crecimiento (N° de Células)

donde:
➢ rN → Crecimiento del número de células.
➢ rX → Crecimiento de Biomasa (g/L h).
➢ X → Concentración de m.o. en g/l. (X2 – X1)
➢ N → Concentración de m.o. en células/l. (N2 – N1)
➢ t → Tiempo (t2 – t1).

➢ Considerando un cultivo discontinuo (batch) en un reactor infinitamente
mezclado, durante la fase de crecimiento exponencial se tiene:
dX / dt = rx X
dN / dt = m N
donde:
➢ X → Concentración de m.o. en g/L.
➢ N → Concentración de m.o. en células/L. (pero también podría ser
cantidad de proteína, de ácidos nucleícos, etc.)
➢ t → Tiempo.
➢ μ → Es una constante de proporcionalidad que se denomina Velocidad
Específica de Crecimiento, en h-1 (número).
➢ rX → Velocidad de Producción de Biomasa, en g/L h.
➢ Con las ecuaciones anteriores se define la velocidad o tasa de
crecimiento (μ).
➢ La Velocidad de Crecimiento = Tasa Específica de Crecimiento =

Constante de la Fase de Crecimiento = Velocidad Específica de
Multiplicación, se define como el cambio en el número de células o
masa celular, por unidad de tiempo (Madigan y col, 1999).
➢ Un cultivo microbiano creciendo en equilibrio imita una reacción

autocatalítica de primer orden; es decir, la velocidad del aumento de
bacterias en un tiempo dado es proporcional al numero o masa de
bacterias presentes en ese tiempo.
μE
μD
μF
μC
μB
μA

➢ La “Velocidad Específica de Crecimiento” se puede calcular
gráficamente a través de la pendiente de la recta (μ ó μ/2.3039 ó
también usando las ecuaciones:
μ = 2.303 (log X – log Xo)

Δt
μ = (Ln X - Ln Xo)
Δt
➢ La tasa de crecimiento, determinada en fase exponencial donde ningún

elemento nutritivo es limitante, nos da la tasa de crecimiento máxima:
μ = μmax

➢ La tasa de crecimiento depende del microorganismo.
➢ Depende además de las condiciones del cultivo:
✓ Naturaleza y concentración del sustrato.
✓ Las condiciones de aireación (microorganismos aerobios).
✓ Temperatura y pH (en ciertos casos el potencial Redox y la fuerza
iónica).
✓ Las condiciones de mezcla, cuando la transferencia de materia es un
factor limitante.
✓ La presencia de inhibidores.
✓ El tiempo de generación que representa el tiempo necesario para que
la población microbiana se duplique (Ej.: de X a 2X), dado por:
tg = Δt = (Ln 2X - Ln X) = 0.693
μ μ



Velocidad y Crecimiento Celular en Batch
FASE DESCRIPCION TASA DE CRECIMIENTO
ESPECÍFICO
Lag Las células se adaptan a las nuevas m≈0
condiciones físico-químicas del medio
Aceleración Las células empiezan a dividirse. m < mMAX
Exponencial Las células alcanzan su máxima tasa de m ≈ mMAX
crecimiento.
Declinación Las células declinan su crecimiento m < mMAX
consecuencia de un agotamiento de
nutrientes y la presencia de productos
tóxicos.
Estacionaria Cesa el crecimiento celular. m=0
Muerte Prevalecen los procesos de muerte y lisis m<0
celular.
Velocidad de Crecimiento Máxima y Tiempo de
Generación de Algunos Microorganismos
MICROORGANISMO μmax ( h-1) tg (h)
Bacillus subtilis 1,70 0.4

Pseudomonas putida 1.00 0.70
Escherichia coli 2.30 0.30
Nitrosomonas spp. 0.07 10.0
Candida tropicalis 0.70 1.00
Saccharomyces 0.35 2.00
cerevisciae
Aspergillus spp. 0.53 1.30

Problema 1
Calcula la tasa de crecimiento específico y el tiempo de generación de las
bacterias de un cultivo que pasa de tener una DO550 de 0.1 a 0.78 en 120
minutos.
μ = (Ln X - Ln Xo)
Δt
μ = ((-0.248 – (-2.3)) / 120
μ = 2.052 / 2 h
Rpta → μ = 1.06 h-1
tg = Δt = (Ln 2X - Ln X) = 0.693
μ μ
tg = 0.693 / 1.06
Rpta → tg = 0.65 h = 39.22 minutos
Problema 2
Se han medido 34,000 bacterias, luego de cuatro horas de haber inoculado
un medio. Después de 24 horas el número de bacterias aumenta a 5.2 x 106
/ L. Asumiendo que la fase de demora es despreciable, calcular. A) La
velocidad específica de crecimiento. B) El número de bacterias que fue
inoculada.
A) B)
μ = (Ln X - Ln Xo) X = Xo eμ(t – to)

Δt X = (34,000)e(-0.25)(4)
μ = (15.464 – 10.43) / (24 – 4) X = (34,000)(0.3678)
μ = 5.034 / 20
Rpta → μ = 0.25 h-1 Rpta → X = 12,505 células

Problema 3
La cinética de crecimiento de Bacillus megaterium en biorreactor tanque
agitado con caldo de almidón de yuca a 45°C, pH = 7.5, 75 rpm.
Número de Actividad Proteina
Tiempo Células log10 Amilasa Total
¿ Calcular μ, μm, n, K, tg ?
(h) UFC/mL cél/mL (μ/mL) (mg/mL) Construyendo la gráfica
0 5.50E+07 7.74 0 0
4 6.30E+07 7.80 0.00 0
8 8.80E+07 7.94 0.00 0
12 3.20E+08 8.51 0.00 0
16 5.10E+09 9.71 0.00 0
20 6.9E+10 10.84 0.82 0.18
24 9.3E+11 11.97 2.05 0.46
28 4.70E+12 12.67 3.84 0.86
32 9.90E+12 13.00 13.70 3.06
36 1.50E+13 13.18 23.97 5.36
40 1.56E+13 13.19 26.03 5.82
44 1.55E+13 13.19 26.71 5.97
48 1.66E+13 13.22 27.12 6.06
52 1.57E+13 13.20 27.26 6.09
56 1.60E+13 13.20 27.36 6.12
60 1.70E+13 13.23 27.40 6.12

Problema 3
Y observamos que entre las 12 y 24 horas es la fase logaritmica por lo tanto
a partir de estos datos calculamos la μm, entonces:
μ = 2.303 (log X – log Xo)

Δt
μ = 2.303 (11.97 – 8.51) / (24 – 12) = 7.968 / 12 = 0.664 h-1
La tasa de crecimiento, determinada en fase exponencial, donde ningún

elemento nutritivo es limitante, nos da la tasa de crecimiento máxima:
μ = μmax
μ = μmax = 0,664 h-1

Problema 3
Para el Número de Generaciones Tiempo de generación
n = (log Nt - log N0) / 0.301 tg = 1 / k

(11.97 – 8.51) / 0.301 1 / 3.18
0.31 h
Rpta. → n = 38.18 generaciones
h → 60´
0.31 h → X´
k=n /t Rpta. → tg = 18.6 minutos

38.18 / 12
Rpta. → k = 3.18 generaciones

por hora.
Problema 4
En un cultivo batch de Pseudomona sp. se observan los siguientes
resultados experimentales en función del tiempo, estime la µ y la
Biomasa Sustrato μ
productividad: log10 Consumido μ = 2.303 (log X – log Xo) / Δ t
Tiempo Biomasa Sustrato -1.00
(h) (g/L) (g/L) -0.89 0.1 0.262
Transformando biomasa
0 0.1 40 -0.74 0.1 0.325
1 0.13 39.9 en log10, calculando el -0.62 0.1 0.288
2 0.18 39.8 sustrato consumido, y -0.49 0.2 0.288
3 0.24 39.7 -0.37 0.2 0.296
4 0.32 39.5
calculando velocidades en -0.24 0.3 0.299
5 0.43 39.3 Excel, tenemos: -0.11 0.5 0.296
6 0.58 39 0.02 0.5 0.288
7 0.78 38.5 0.15 0.8 0.297
8 1.04 38 0.27 1 0.290
9 1.4 37.2 0.40 1.4 0.290
10 1.87 36.2 0.53 1.9 0.293
11 2.5 34.8 0.65 2.4 0.293
12 3.35 32.9 0.78 3.3 0.290
13 4.49 30.5 0.90 4.4 0.288
14 6 27.2 1.03 5.7 0.291
15 8 22.8 1.15 7.5 0.276
16 10.7 17.1 1.25 8.5 0.239
17 14.1 9.6 Suma
18 17.9 1.1 38.9

Problema 4
Por tanto:
A) Rpta.= μ = 0.29 h-1
Si consideramos
Productividad = gr. de biomasa seca / gr. Sustrato consumido

Productividad = 17.9 / 38.9
B) Rpta. → Productividad = 0.46 g/g

IBMB INSTITUTO DE BIOLOGÍA
MOLECULAR Y BIOTECNOLOGÍA
TRUJILLO - PERU
Parte 2:
CINÉTICA DE
CRECIMIENTO
MICROBIANO – Ec.
de Monod
Blgo. Dr. José Guillermo González Cabeza gonzalezbiotec@hotmail.com

Balance
Ej.: Crecimiento aerobio del Saccharomyces cerevisiae:

Composición Elemental de
Algunos Microorganismos
➢ Ejemplo.: Determinación de los coeficientes estequiometricos para el
crecimiento aerobio del Saccharomyces cerevisiae sobre glucosa:

Composición Elemental de
Algunos Microorganismos

ECUACIÓN DE MICHAELIS - MENTEN
+
Leonor Michaelis Maud Menten


Estimación gráfica de los

parámetros cinéticos

Representación de Lineweaver-Burk
Representación
doble recíproca (1/v
vs. 1/[S])
Representación de
Lineweaver-Burk
Cálculo de KM y Vmax (método alternativo)
La estimación de los parámetros cinéticos
se hace a partir de una línea recta y
permite calcular KM y Vmax con mayor
exactitud
V vs [S] 1/V vs 1/[S]

1 = Km 1 + 1
V Vmax [S] Vmax
y = m.x + b
Ejemplo: y = 0.228x + 0.366
Leyenda:
y = 1/V = y
m = Km/Vmax = 0.228
x = 1/[S] = x
b = 1/Vmax = 0.366

Ejemplo de Lineweaver-Burk
Determine los valores de Km y Vmax para la enzimas A a partir del recuadro inferior.
[S] (nM) s-1
Vo (μM. ) Inverso Inverso
1 2.5 1 0.4
2 4 0.5 0.25
Estimación:
5 6.3 0.2 0.15873016
10 7.6 0.1 0.13157895
20 9 0.05 0.11111111
0.45 y = 0.3017x + 0.0987
y = 0.3017x + 0.0987
0.4
R² = 0.9997 y = Km/Vmax 1/Vmax
0.35
0.3
Km/Vmax = 0.3017
0.25
1/Vmax = 0.0987
0.2
0.15
1/0.0987 = Vmax
0.1
Vmax = 10.13
0.05
0 Km/10.13 = 0.3017
-0.6 -0.4 -0.2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
-0.05 Km = 3.05
-0.1

ECUACIÓN DE MONOD
➢ Por analogía a la ecuación de MICHAELIS y MENTEN, se estableció la
ecuación de MONOD en 1,949.
➢ Suponiendo que todos los elementos nutritivos son adicionados al medio
en exceso, salvo el sustrato (S) considerando factor limitante se tiene:
μ = μmax S
Ks + S
μ = Tasa o Velocidad Específica de Crecimiento (h-1).
μmax = Tasa de crecimiento máxima (h-1).
S = Concentración de sustrato limitante.
Ks = Constante de saturación (g/L). Concentración de sustrato
necesario para obtener ½ de la tasa de crecimiento máximo.
Ks Poca afinidad por el sustrato; Ks Alta afinidad por el sustrato.
ECUACIÓN DE MONOD (El valor Ks)
➢Los valores de Ks son pequeños para los compuestos normalmente usados
en medios de cultivos. Estos valores son del orden de 10-5, 10-6 M en el caso
de azucares (como glucosa) e inferiores a 10-6 M para los aminoácidos y
vitaminas.
➢De manera general los valores Ks explican porque los microorganismos

son capaces de purificar rápidamente los medios en un determinado
compuesto, por ej. Alcanzando concentraciones tan bajas, del orden de 10-5
M la velocidad de crecimiento (y por tanto, la velocidad de consumo de éste)
disminuyen a la mitad con respecto a las condiciones de sustrato no
limitantes (generalmente del orden de 0.05 m en sustrato). Las aplicaciones
en el campo de la contaminación se basan en esta propiedad de asimilación
de los microorganismos


ECUACIÓN DE MONOD (El valor mm)

ECUACIÓN DE MONOD (El valor mm)
VELOCIDAD DE CRECIMIENTO ESPECIFICO DE E. coli

MICROORGANISMO SUSTRATO Ks (M)
LIMITANTE
Escherichia coli Glucosa 2,2 x 10-5
Aspergillus spp. Glucosa 2.8 x 10-5
Candida spp. Glicerol 4.9 x 10-5
Saccharomyces Glucosa 14 x 10-5
cerevisciae
Pseudomonas spp. Metanol 2 x 10-5
Aspergillus spp Arginina 2.9 x 10-6

…muchas gracias.
Blgo. Dr. José González Cabeza
gonzalezbiotec@hotmail.com
www.gonzalezcabeza.com
CINÉTICA DE CRECIMIENTO CELULAR


LINEALIZACIONES DE LA ECUACIÓN DE MONOD



Ejemplo de cinética de crecimiento con diferentes concentraciones de
sustrato (glucosa) de Aspergillus niger
Larralde-Corona et al., (1997)
Biomass dry weight, X (mg/cm 2)

-1
20 120 gL
-1
16 70 gL
-1
12 300 gL
-1
8 40 gL
4 -1
10 gL
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Time (h)
CINÉTICA DE MONOD EN SISTEMAS PARTICULARES
➢ Inhibición del crecimiento por el sustrato.
➢ Inhibición del crecimiento por productos del

metabolismo.
➢ Transferencia de masa limitante.
75
76
Antibiótico Fuente Aplicación terapéutica
Penicilina Penicillium Cocos gram (+) y (-)
Cycloserina Streptomyces Myc. tuberculosis
Bacitracina Bacillus Cocos gram (+) y (-)
Vancomycina Streptomyces Staphylococcus
Antibiotico Fuente Aplicación terapéutica
Polymixina Bacillus Infeccciones Género
Pseudomonas
Nystatina Streptomyces Infecciones Candida
Amphotericina Streptomyces Histoplasmosis,
Crytococcosis
Antibiótico Fuente Aplicación terapéutica

Actinomycina Streptomyces Bacterias gram (+) y (-)
Estreptomycina Semisintético Tuberculosis
Tetracyclina Streptomyces Tuberculosis, meningitis
Cloranphenicol Streptomyces Fiebre Tifoidea
Eritromycina Streptomyces Bacterias gram (+)
Lincomycina Streptomyces Bacterias gram (+) 77
Rendimientos termodinámicos máximos de biomasa

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Blgo. Dr. José Guillermo González Cabeza gonzalezbiotec@hotmail.com

Blgo. José González Cabeza

Blgo. José González Cabeza

Blgo. José González Cabeza

Blgo. José González Cabeza

Blgo. José González Cabeza

m = (Y2 – Y1) / (X2 – X1)

m = (Y2 – Y1) / (X2 – X1) Tiempo

Blgo. José González Cabeza

log Nt = log N0 + n log 2

n = (log Nt - log N0) / log 2

n = (log Nt - log N0) / 0.301

Blgo. José González Cabeza

➢ Si, n = 1, tiempo medio de generación, o duplicación (tg).

k = (log 2 N0 – log N0 ) / 0.301 g

Blgo. José González Cabeza

Blgo. José González Cabeza

1. ¿ Cuál es el número de generaciones ?

2. ¿ Cuántas generaciones se producen por hora ?

Blgo. José González Cabeza

Crecimiento microbiano en batch en

Blgo. José González Cabeza

rN = dN / dt → Crecimiento (N° de Células)

Blgo. José González Cabeza

➢ La Velocidad de Crecimiento = Tasa Específica de Crecimiento =

➢ Un cultivo microbiano creciendo en equilibrio imita una reacción

Blgo. José González Cabeza

μ = 2.303 (log X – log Xo)

➢ La tasa de crecimiento, determinada en fase exponencial donde ningún

Blgo. José González Cabeza

Blgo. José González Cabeza

Blgo. José González Cabeza

Blgo. José González Cabeza

Bacillus subtilis 1,70 0.4

Blgo. José González Cabeza

μ = (Ln X - Ln Xo) X = Xo eμ(t – to)

Rpta → μ = 0.25 h-1 Rpta → X = 12,505 células

Blgo. José González Cabeza

Blgo. José González Cabeza

μ = 2.303 (log X – log Xo)

μ = 2.303 (11.97 – 8.51) / (24 – 12) = 7.968 / 12 = 0.664 h-1

La tasa de crecimiento, determinada en fase exponencial, donde ningún

μ = μmax = 0,664 h-1

Blgo. José González Cabeza

n = (log Nt - log N0) / 0.301 tg = 1 / k

k=n /t Rpta. → tg = 18.6 minutos

Rpta. → k = 3.18 generaciones

Blgo. José González Cabeza

A) Rpta.= μ = 0.29 h-1

Productividad = gr. de biomasa seca / gr. Sustrato consumido

B) Rpta. → Productividad = 0.46 g/g

Blgo. José González Cabeza

Blgo. Dr. José Guillermo González Cabeza gonzalezbiotec@hotmail.com

Ej.: Crecimiento aerobio del Saccharomyces cerevisiae:

Blgo. José González Cabeza

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Blgo. José González Cabeza

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Estimación gráfica de los

Blgo. José González Cabeza

V vs [S] 1/V vs 1/[S]