Inhibidores enzimáticos

Descubrimiento de Drogas

Compuesto Líder:
Prototipo a mejorar.
Tienen características indeseadas: Toxicidad, insolubilidad, inestabilidad, pobre
absorción oral, etc.

Cómo se llega a ese Compuesto Líder?

“in vitro” ej: inhibición de una enzima

Ensayos
“in vivo” ej: ensayo directo en ratones
 Descubrimiento de Drogas

Descubrimiento de Compuesto Líder

1.- Screening al azar (Random screening)

Productos naturales
Screening
al azar
compuestos síntéticos

Ej: muestras tomadas del suelo llevaron al descubrimiento de

antibióticos como streptomicina y tetraciclinas.
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Descubrimiento de Compuesto Líder

2.- Screening racional

Menos indiscriminado. Ej: compuestos de estructura parecida a otro

compuesto muy débilmente activo, compuestos con diferentes grupos
funcionales, evitando grupos que produzcan toxicidad.

3.- Estudio del metabolismo de las drogas conocidas

Metabolitos de drogas son los productos de degradación de las drogas

“in vivo”.
Se estudia si éstos o la droga en sí misma es la causante de la
actividad
 Descubrimiento de Drogas
Descubrimiento de Compuesto Líder

4.- Observaciones clínicas

Drogas para una enfermedad pueden ser finalmente útiles para otra a
partir de los efectos secundarios.

Ej:

Primero antibacteriano, ahora antidiabético

Primero antihistamínico, ahora se utiliza para
prevenir mareos
 Descubrimiento de Drogas
Descubrimiento de Compuesto Líder

5.- Diseño racional

Primero se deben conocer las causas bioquímicas de la enfermedad

• Desbalance de un determinado compuestos químico

(corregido por un inhibidor o antagonista)

• Invasión organismo externo (inhibidores o

interferencia en la biosíntesis)

• Crecimiento desproporcionado de células

(objetivo: ADN)

Reconocido el sistema bioquímico interviniente, el diseño racional tomará el

sustrato natural de la enzima o el agonista del receptor como primer compuesto
líder.
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Descubrimiento de Compuesto Líder

5.- Diseño racional

Ej:

norgestrel

progesterona 17b-estradiol

17a-etinilestradiol

La hormonas esteroidales progesterona y 17b-estradiol fueron

compuestos líderes hacia el descubrimiento de los contraconceptivos
norgestrel y 17a-etinilestradiol
 Descubrimiento de Drogas
6.- Diseño de fármacos asistido por computadora
Screening virtual basado en el ligando
 Descubrimiento de Drogas
6.- Diseño de fármacos asistido por computadora
“Docking”
 Descubrimiento de Drogas
7.- Química Combinatoria
 Descubrimiento de Drogas

Antes de entrar de lleno a tratar el tema de los inhibidores enzimáticos

debemos detenernos a analizar dos puntos de importancia en cuanto al
diseño y acción de fármacos son:

Resistencia a los fármacos Sinergismo de fármacos

Mecanismos de resistencia:

1.- Evitar la llegada de la droga al sitio de acción

Ej: cambio en la carga de la membrana plasmática

 Descubrimiento de Drogas
Mecanismos de resistencia:

2.- Sobreproducción de la enzima

Ej: dihidrofolato reductasa

La droga induce copias extras del gen que codifica la enzima

3.- Alteración de la enzima o sitio de acción

Ej: antibacteriano trimetoprima

Efecto: unión más debil enzima-inhibidor

Resistencia causada por alteración de la

dihidrofolato reductasa (el sustrato se sigue
uniendo…) trimetoprima
 Descubrimiento de Drogas
Mecanismos de resistencia:

4.- Producción de una enzima destructora de la droga

Ej: b-lactamasas

Las b-lactamasas destruyen los compuestos b-lactámicos y evitan su acción

 Descubrimiento de Drogas
Mecanismos de resistencia:

5.- Supresión de la enzima que activa la prodroga

Especialmente en el caso deProdroga:

antitumorales….
Compuesto farmacológicamente inactivo
que se activa por transformación
metabólica en el organismo

Resistencia a la 6-mercaptopurina, droga contra la leucemia, por supresión de

la enzima que lo activa (hipoxantina fosforibosil transferasa)
 Descubrimiento de Drogas
Mecanismos de resistencia:
6.- Superproducción del sustrato de la enzima
Es una forma común de resistencia a las sulfas.
Las bacterias aumentan la producción del ácido p-aminobenzoico, que es el
sustrato de la dihidropterato sintetasa.

Inhibidor reversible, por lo tanto varía el equilibrio enzima-inhibidor

7.- Nuevo camino para la obtención del producto que cataliza la enzima
objetivo
El organismo sintetiza el metabolito por un camino alternativo…..
 Descubrimiento de Drogas
Sinergismo:
Dos o más drogas suministradas en combinación producen un efecto mayor
que la suma de cada una usada individualmente

El sinergismo es una herramienta frente a los problemas de resistencia…

Ejemplos de sinergismo

1.- Inhibición de la enzima que destruye la droga:

Ej: Acido clavulánico y amoxicilina

 Descubrimiento de Drogas
Sinergismo:
2.- Bloqueo secuencial

Inhibición de más de un paso del camino metabólico.

Se usa con inhibidores reversibles. Se evita el uso de gran exceso de droga que
podría ser tóxico (disminuye las posibilidades de resistencia)

3.- Inhibición de enzimas de diferentes caminos metabólicos

Cuando hay más de una ruta metabólica para un mismo metabolito

4.- Varias drogas para el mismo objetivo

Para células tumorales o bacterias mutantes.

En promedio 1 de cada 107 bacterias resisten una droga,
1 de cada 1014 resisten dos drogas y
1 de cada 1021 resisten tres drogas…

Minimiza la posibilidad que bacterias mutantes resistentes proliferen…..

 Descubrimiento de Drogas
Sinergismo:
4.- Varias drogas para el mismo objetivo

Para células tumorales o bacterias mutantes.

En promedio 1 de cada 107 bacterias resisten una droga,
1 de cada 1014 resisten dos drogas y
1 de cada 1021 resisten tres drogas…

Minimiza la posibilidad que bacterias mutantes resistentes proliferen…..

Antituberculoso
 Inhibición Enzimática
Porqué inhibir una enzima?
Los inhibidores enzimáticos son los más prometedores en cuanto al
diseño racional de drogas se refiere:

• Enzimas fáciles de purificar (más fáciles que los receptores)

• Generalmente la estructura del inhibidor similar al sustrato
• Conocimiento del mecanismo de acción de enzimas puede
usarse para diseñar distintos tipos de inhibidores

Inhibidor ideal: es aquel que sólo inhibe la enzima requerida.

En la realidad no existe el inhibidor ideal, se buscan inhibidores de alta selectividad

Alta selectividad → enfermedades infecciosas (diferentes metabolismos del

organismo extraño y el hospedador). Ej: penicilinas

Baja selectividad → células tumorales (diferenciación difícil)

 Inhibición Enzimática
Clasificación de inhibidores

Existen varias clasificaciones según qué se toma en cuenta.

Generalmente los límites entre las diferentes clases de inhibidores no son muy
claros

1.- Reversibilidad

Reversibles (generalmente no covalentes)

Reversibilidad

Irreversibles (generalmente covalentes)

 Inhibición Enzimática
Clasificación de inhibidores

2.- De acuerdo a la competitividad (reversibles)

Competitivos: compiten con el sustrato por el sitio activo

No competitivos: Cuando el inhibidor induce cambios

conformacionales en la enzima que hacen que ésta no
se pueda unir correctamente al sustrato

No se puede diseñar un inhibidor no competitivo….

 Inhibición Enzimática
Clasificación de inhibidores

3.- Fuerza y velocidad de la interacción (reversibles)

1.-Clásicos (unión rápida)

2.- Unión fuerte
3.- Unión lenta
4.- Unión lenta y fuerte

4.- Por analogías (reversibles)

Análogos del estado de transición

Análogos del multisustrato
 Inhibición Enzimática
Clasificación de inhibidores

5.- Clasificación de inhibidores irreversibles

Marcadores de afinidad (compuestos de afinidad marcada)

Basados en el mecanismo
 Inhibición Enzimática
Inhibidores reversibles competitivos
Los más comunes. Compiten con el sustrato por el sitio activo

El equilibrio depende de la [E], [S] y [I], como [E] es constante y baja, depende
de [S] y [I].
[I] alta: equilibrio hacia
[I] baja: equilibrio hacia
Efecto farmacológico: [I] alta (saturación del sitio activo).
Requiere administración repetida
 Inhibición Enzimática
Inhibidores reversibles competitivos

El diseño de un inhibidor es típicamente de un inhibidor reversible competitivo,

tomando como compuesto líder al sustrato natural de la enzima.

Si se conoce la estructura tridimensional de la enzima (cristalografía de rayos

X), la propia enzima se puede tomar como el “líder”, utilizando el diseño de
fármacos asistido por computadora
 Inhibición Enzimática
Inhibidores reversibles competitivos. Ejemplos

Colesterol Aterosclerosis colesterol

Drogas antihipercolesterolémicas:
● Inhibidores de la absorción de colesterol adquirido en la dieta.

● Inhibidores de la biosíntesis de colesterol

(Compactina y Mevinolina)
 Inhibición Enzimática
● Inhibidores de la biosíntesis de colesterol
(Compactina y Mevinolina)
colesterol

El paso determinante de la biosíntesis del colesterol es la conversión de la 3-hidroxi-3-

metilglutaril coenzima A (HMG-CoA, 5.68) en ácido mevalónico (5.69). Esta reacción es
catalizada por la HMG-CoA reductasa
 Inhibición Enzimática
● Inhibidores de la biosíntesis de colesterol
(Compactina y Mevinolina)

En 1976 en Japón se descubrieron, luego de analizar compuestos obtenidos de 8000

cepas de microorganismos (screening al azar), dos inhibidores de la HMG-CoA
reductasa: la Compactina (5.18) y luego otro más activo mevinolina (o lovastatina)
(5.19)

Mecanismo de acción:
Potentes inhibidores reversibles competitivos: Afinidad 7000 a 16000 veces
Ki (Compactina) = 1.4 x 10-9 M mayor que el sustrato
Ki (Mevinolina) = 6.4 x 10-10 M
Km (sustrato) = 10-5 M Km= cte. disociación del
complejo enzima-sustrato
 Inhibición Enzimática
● Inhibidores de la biosíntesis de colesterol (Compactina y Mevinolina)

El inhibidor real es 5.20 (producto de la

hidrólisis de 5.18 o 5.19)

Esta gran afinidad tiene que ver con la similitud entre

etapas del proceso biosíntético y el inhibidor 5.20
(comparar con 5.70)
 Inhibición Enzimática
● Inhibidores de la biosíntesis de colesterol (Compactina y Mevinolina)

La forma activa 5.20 se asemeja al

intermediario 5.70 por lo que algunos
autores clasifican a estos inhibidores como
análogos del estado de transición

La forma activa de la compactina tiene

DOS sitios de unión:
●Parte superior: se une al dominio HMG
(hidroximetil glutaril)
●Parte inferior (decalina): se une a un
bolsillo hidrofóbico de la enzima.
Scheme 5.4
 Inhibición Enzimática
● Inhibidores de la biosíntesis de colesterol (Compactina y Mevinolina)

MODIFICACIONES ESTRUCTURALES (SAR)

 Debe abrirse la lactona, formarse el carboxilato y el OH
debe tener configuración eritro
 Puente lactona-decalina no mayor de dos carbonos
 Modificación de decalina baja la potencia (salvo bifenilos
análogos)
 SH o NH2 dan menor potencia que OH
 Agregado de metilo alfa al éster aumenta la potencia
(compuesto comercial)
 Epímero en C-5 es inactivo
 C-5 ceto es activo (reducción a compactina por la
enzima)
 Inhibición Enzimática
● Inhibidores reversibles competitivos. ANTIHIPERTENSIVOS
Captopril, Enalapril, Lisinopril (inhibidores de la enzima ACE)

Sistema Renina-Angiotensina

B. Houssay
 Inhibición Enzimática
● Inhibidores reversibles competitivos. ANTIHIPERTENSIVOS
Captopril, Enalapril, Lisinopril

Inhibidores de la ACE son

objetivos terapéuticas de mucha
importancia

La angiotensina II es responsable del incremento de la presión arterial por diversos

mecanismos:
• Actúa como hormona, siendo un potente vasocontrictor
• Estimula la liberación de Aldosterona (retención de líquidos)
Además. la enzima ACE metaboliza un vasodilatador, la bradiquinina
 Inhibición Enzimática
Captopril, Enalapril, Lisinopril

Descubrimiento del Líder:

Nueve péptidos aislados del veneno de víboras yarará (Brasil)

Miguel A. Ondetti
Estructura determinada por (M.A. Ondetti – Squibb) (1930-2004)

Primer inhibidor de ACE comercial: nonapéptido llamado TEPRÓTIDO (problema:

mala absorción oral).
Pyr-Trp-Pro-Arg-Pro-Gln-Ile-Pro-Pro

Estudio (modificaciones y mecanismo)

•Tripéptidos N-acilados son sustratos de la enzima
•Aminoácidos preferidos: Prolina en posición C-terminal, Alanina en la penúltima posición,
aminoácido aromático en la antepenúltima
•Metaloenzima (cofactor Zn++)
 Inhibición Enzimática
Captopril, Enalapril, Lisinopril

Sitio activo hipotético de la carboxipeptidasa A

Hipótesis del inhibidor que contienen todos
los productos

Se decidió tomar el acido (R)-2-bencilsuccínico como modelo y la

prolina como aminoácido C-terminal
 Inhibición Enzimática
Captopril, Enalapril, Lisinopril

Se decidió tomar el acido (R)-2-bencilsuccínico como modelo y la

prolina como aminoácido C-terminal
En función de esto surgió los compuestos tipo
5.22 que demostraron ser inhibidores de la
enzima ACE, aunque débiles
Cambiando el carboxilato por un SH se
mejora grandemente la actividad (mejor coordinación con el Zn++)
 Inhibición Enzimática
Captopril, Enalapril, Lisinopril

De esta manera surge el CAPTOPRIL como el compuesto más activo de la serie, el

primer inhibidor de la ACE de administración oral
(suministrado con un diurético)

Efectos secundarios del captopril: pérdida del gusto y picazón

ENALAPRILAT tenía un IC50 veinte

veces menor que Captoril, sin embargo
no tenía buena absorción oral. Por ello
se desarrolló el ENALAPRIL
Inhibición Enzimática

Estudio (modificaciones y mecanismo)

•Tripéptidos N-acilados son sustratos de la enzima

•Aminoácidos preferidos: Prolina en posición C-terminal,
Alanina en la penúltima posición, amiinoácido aromático
en la antepenúltima
•Metaloenzima (cofactor Zn++)
 Inhibición Enzimática

Lisinopril: nueva droga basada en el Enalapril.

Ventajas:
●No es un profármaco
●Alta vida media (administración una vez por día)
 Inhibición Enzimática
Inhibidores de unión lenta y fuerte
Inhibidores de unión lenta: el equilibrio E∙I es lento
Inhibidores de unión fuerte: la inhibición se produce a [I] y [E] comparables
(necesita poco inhibidor)
Biosíntesis de colesterol
Inhibidores de unión lenta y fuerte: combinan ambas propiedades

Es una inhibición dependiente del tiempo: Cinética bastante similar a los inhibidores
irreversibles.
Análogos del estado de transición exhiben cinética de unión lenta y fuerte

1959. Berhnard y Ogel Inhibidores análogos

teorizaron que del estado
un inhibidor que se de transición
pareciese al estado de transición de
la reacción E-S debería estar más fuertemente unido a la enzima que el propio sustrato.
Para diseñar inhibidores análogos del estado de transición es necesario conocer el
mecanismo de reacción de la enzima para saber cual es el estado de transición a imitar.
Muchas reacciones catalizadas por enzimas tienen estados de transición similares (Ej: serin-
proteasas), por lo tanto, un análogo del estado de transición de una enzima puede ser
modificado para obtener análogos de otra enzima del mismo tipo.
 Inhibición Enzimática
Ejemplos de Inhibidores de unión lenta y fuerte - Análogos del estado de transición

Peptidil trifluormetil cetonas – Inhibidores de la HLE

Mecanismo de acción
de la enzima:

HLE: enzima liberada por el

sistema inmune en el
pulmón. Asiste defensas
antinflamatorias.
Degradación proteolítica de
microorganismos invasores y
tejido muerto.
Desbalance con inhibidores
naturales hace que la HLE
destruya proteínas
estructurales (colágeno,
fibronectina, elastina)
EFISEMA PULMONAR,
FIBROSIS QUÍSTICA,
ARTRITIS
 Inhibición Enzimática
Peptidil trifluormetil cetonas – Inhibidores de la HLE

Ejemplo de inhibidor
covalente reversible

imita estado de transición

 Inhibición Enzimática
Ejemplos de Inhibidores de unión lenta y fuerte - Análogos del estado de transición
Pentostatina (5.58)
Potente inhibidor análogo del estado de transición
Inhibe el enzima Adenosina deaminasa

2’-desoxiadenosina

2’-desoxiinosina
 Inhibición Enzimática
Clasificación de inhibidores

3.- Fuerza y velocidad de la interacción (reversibles)

1.-Clásicos (unión rápida)

2.- Unión fuerte
3.- Unión lenta
4.- Unión lenta y fuerte

4.- Por analogías (reversibles)

Análogos del estado de transición

Análogos del multisustrato
 Inhibición Enzimática
Análogos del Multisustrato
N-fosfonoacetil-L-aspartato (5.67, PALA)

Carbamil fosfato
N-carbamil-L-aspartato

El PALA se une a la enzima tres veces más fuerte de lo que se unen los dos sustratos en
conjunto
 Inhibición Enzimática
Inhibidores Irreversibles

Marcadores de afinidad
(o compuestos de afinidad marcada)
(compuestos reactivos)

Inhibidores Irreversibles

Basados en el mecanismo
(compuestos no reactivos activados
por la misma enzima)
 Inhibición Enzimática
Inhibidores Irreversibles - Marcadores de Afinidad
Los marcadores de afinidad son compuestos que contienen un grupo químicamente reactivo
que reacciona con el sitio activo de la enzima dado un aducto irreversible. Luego de formarse
el complejo reversible E∙I, se produce la reacción con algún nucleófilo del sitio activo para
formar la unión covalente y estable con la enzima

Kinact = constante de inactivación

KI = constante de formación del complejo E-I

Si el grado de disociación del complejo E∙I es relativamente rápido respecto a la formación

del enlace covalente (kinact), éste último paso es el determinante de la velocidad de reacción.
En estos casos, la cinética es dependiente del tiempo, tal como los inhibidores reversibles de
unión lenta y fuerte.

Problema de los agentes marcadores de afinidad:

Muy reactivos poca selectividad potencialmente tóxicos

Sin embargo HAY marcadores de afinidad NO TÓXICOS…..

 Inhibición Enzimática
Marcadores de Afinidad NO TÓXICOS (Ejemplos)
Antibióticos β-lactámicos

Inhibidores de transpeptidasa (cataliza el entrecruzamiento de cadenas

del peptidoglicano constituyente de la pared celular de las bacterias)
 Inhibición Enzimática
Marcadores de Afinidad NO TÓXICOS (Ejemplos)
Antibióticos β-lactámicos
Mecanismo acción transpeptidasa

Los antibióticos β-lactámicos actúan inhibiendo la última etapa de la biosíntesis de

la pared celular: el entrecruzamiento de las cadenas de peptidoglicano
 Inhibición Enzimática
Marcadores de Afinidad
NO TÓXICOS (Ejemplos)

Inhibición de transpeptidasas
por antibióticos β-lactámicos
 Inhibición Enzimática
Marcadores de Afinidad
NO TÓXICOS (Ejemplos)

Antibióticos β-lactámicos: Han sido consideradas drogas maravillosas, altamente

selectivas y sin problemas serios de toxicidad. En algún momento se consideró utilizarlas
como un complemento dietario…

Problema de los antibióticos β-lactámicos: La aparición de cepas resistentes lo que se

agrava con el uso intensivo de estos antibióticos…..
 Inhibición Enzimática
Inhibidores basados en el mecanismo (Irreversibles)

Un inhibidor (o inactivador) basado en el mecanismo es un compuesto inactivo que, al

unirse con el sitio activo de la enzima, se transforma en un producto altamente reactivo que,
en la mayoría de los casos, reacciona con la enzima para unirse covalentemente e
inactivarla.
Cinética: Tiene un paso adicional respecto a los marcadores de afinidad:

Tiene dos complejos E∙I, uno que lleva al compuesto reactivo y el segundo que produce la
unión covalente E-I.

Relación de partición: k3/k4 (relación producto liberado/inactivación)

Lo ideal (aunque casi nunca se logra) es: relación de partición 0 (no se

forman metabolitos potencialmente tóxicos)
 Inhibición Enzimática
Inhibidores basados en el mecanismo (Irreversibles)

Ventajas para el diseño de fármacos:

● Baja toxicidad
NO son reactivos de por sí
● Pocos efectos secundarios

Estos inactivadores son muy buenos candidatos a fármacos. Por ejemplo: la Eflornitina
(antiprotozoario) se puede administrar en dosis de hasta 30g por día sin efectos
secundarios.

Sin embargo, no hay en la actualidad en el mercado fármacos diseñados racionalmente

para ser inhibidores basados en el mecanismo. Sólo luego de su descubrimiento por otro
método se determinó que se trataba de inhibidores basados en el mecanismo
 Inhibición Enzimática
Inhibidores basados en el mecanismo. Ejemplos
Vigabatrin (anticonvulsivante)
Epilepsia: Toda enfermedad del sistema nervioso central caracterizada por convulsiones
● Idiopática: No se conoce la causa
Epilepsia: ● Sintomática: Debida a tumores, sílifis, esclerosis múltiple,
mal de Alzheimer, intoxicación con plomo, etc.

No se conoce el mecanismo que lleva a la epilepsia. Se cree que son muchos los
mecanismos involucrados. Se sabe de la importancia del ácido gama-amino butírico (GABA)
Disminución del nivel de
Convulsiones
GABA en el cerebro

La concentración de GABA en el cerebro está regulada por dos enzimas: una lo sintetiza
(glutamato
decarboxilasa, GAD)
y otra lo degrada
(GABA amino
transferasa, GABA-AT)
 Inhibición Enzimática
Inhibidores basados en el mecanismo. Ejemplos
Vigabatrin (anticonvulsivante)
Inhibidor de GABA amino transferasa, GABA-AT

Ácido 4-amino-5-hexenoico

Mecanismo de inactivación:
 Inhibición Enzimática
Inhibidores basados en el mecanismo. Ejemplos
Vigabatrin (anticonvulsivante)
Ácido 4-amino-5-hexenoico

El Vigabatrin atraviesa la barrera hematoencefálica mientras que el GABA no.

El agregado de un grupo vinilo al GABA aumenta el carácter lipofílico de la molécula ya que

éste es un atractor de electrones, disminuye la basicidad del grupo amina y, por lo tanto, es
menor la contribución en el equilibrio de la forma iónica (zwitterion).
 Inhibición Enzimática
Inhibidores basados en el mecanismo. Ejemplos
Inhibidores de β-lactamasas
Inactivación de penicilinas por β-lactamasas

Gran número de β-lactamasas descriptas, cada año se descubren nuevas:

La resistencia por β-lactamasas es un problema no resuelto:

•Heterogeneidad
•Descubrimiento de nuevas β-lactamasas
•Transferencia genética
 Inhibición Enzimática
Inhibidores basados en el mecanismo. Ejemplos
Inhibidores de β-lactamasas
 Inhibición Enzimática
Inhibidores basados en el mecanismo. Ejemplos
Inhibidores de β-lactamasas
 Inhibición Enzimática
Inhibidores basados en el mecanismo. Ejemplos
Inhibidores de β-lactamasas