Universidad Nacional Abierta y a Distancia

Vicerrectoría Académica y de Investigación

Curso: Cromatografía
Código: 401542

Guía de actividades y rúbrica de evaluación – Tarea 4

Técnicas cromatográficas específicas.

1. Descripción de la actividad

Tipo de actividad: Independiente

Momento de la evaluación: Intermedio
Puntaje máximo de la actividad: 60 puntos
La actividad inicia el: domingo, La actividad finaliza el: domingo, 29
1 de noviembre de 2020 de noviembre de 2020
Con esta actividad se espera conseguir los siguientes resultados de
aprendizaje:
• Distinguir técnicas cromatográficas específicas, a partir del análisis
químico cualitativo y cuantitativo de analitos de interés en la industria
de alimentos.

La actividad consiste en:

La tarea 4 está conformada por 2 ejercicios a desarrollarse de manera

individual:

Ejercicio 1. Cromatografía iónica.

Ejercicio 2. Cromatografía de fluidos supercríticos.

El desarrollo de los ejercicios consolídelos en el documento Anexo 3 – Guía

para el desarrollo de la Tarea 4, el cual se ubica en el entorno de aprendizaje
en la carpeta Guía de actividades y rúbrica de evaluación - Unidad 3 - Tarea
4 – Técnicas cromatográficas específicas.

Ejercicio 1. Cromatografía de gases

Realizar la lectura y análisis de las siguientes referencias bibliográficas que

se encuentran en el entorno de aprendizaje de la Unidad 3:

1
 • Burriel Martí, F., Arribas Jimeno, S., Lucena Conde, F., & Hernández
Méndez, J. (2008). Cromatografía. En: Química analítica cualitativa
(18a. ed.). (pp. 328-334). Madrid: Paraninfo.
• Doria, G. (2013). Introducción general a la Cromatografía. En Módulo
Cromatografía (pp. 47-49). Bogotá, Colombia. UNAD - Universidad
Nacional Abierta y a Distancia. (Este documento lo compartirá su tutor
en el foro)
• Gismera, G. M. J., Quintana, M. M. D. C., & Da, S. D. C. M. D. (2012).
Introducción a la cromatografía líquida de alta resolución. (pp. 119-
124) Madrid, ES: Editorial Universidad Autónoma de Madrid.
• Morante, Z. S., & Sierra, A. I. (2007). Generalidades de la
Cromatografía. En Desarrollo de métodos analíticos para la separación
quiral y su aplicación al estudio de procesos de síntesis asimétrica. (pp.
42-43). Madrid, España: Dykinson.

Descripción del ejercicio 1.1:

La cromatografía de iónica es un proceso que permite la separación de iones

y moléculas polares basadas en las propiedades de carga de las moléculas.
Puede ser usada en casi cualquier tipo de molécula cargada. En la actualidad
presenta varias aplicaciones dentro de las que se destacan las aplicaciones
en el análisis de aguas y medio ambiente.

Teniendo en cuenta lo anterior, a continuación, encontrará una serie de

oraciones asociadas a las generalidades de la cromatografía iónica, como:

• Resina.
• Débiles.
• Fuertes.
• Aniones.
• Cationes.
• Matriz aniónica.
• Matriz catiónica.
• Especies ionizadas.
• Intercambiadores iónicos.
• Solución amortiguadora de pH.
• Cromatografía de intercambio aniónico.
• Cromatografía de intercambio catiónico.
• La relación carga y fuerza del soluto es mayor.

2
Identificar las oraciones y completar la información del mapa conceptual que
se encuentra en la Tabla 1 del Anexo 3. Para desarrollar este ejercicio, es
importante que realizar una lectura comprensiva de las generalidades de la
técnica, así como las características de la fase móvil y fase estacionaria.

Con base en la lectura realizada y en la construcción del mapa conceptual,

indicar si las afirmaciones que se encuentran en la Tabla 2 del Anexo 3 son
falsas (F) o verdaderas (V). Justificar su respuesta y registrar las referencias
bibliográficas de consulta.

Descripción del ejercicio 1.2:

De acuerdo con el artículo de Merinoa, L., Darnerudd, P., Toldráb, F., &
Ilbäckd, N-G. (2006) Time-dependent depletion of nitrite in pork/beef and
chicken meat products and its effect on nitrite intake estimation. Food
Additives & Contaminants. 33(2), 186–192; y de D’Amore, T., Di Taranto,
A., Vita, V., Berardi, G., & Iammarino, M. (2019) Development and
Validation of an Analytical Method for Nitrite and Nitrate Determination in
Meat Products by Capillary Ion Chromatography (CIC). Food Analytical
Methods. 12(8), 1813–1822; los alimentos procesados como los productos
cárnicos emplean especies iónicas como nitritos (𝑁𝑂2− ) y nitratos (𝑁𝑂3− ) para
protegerlos de microorganismos que pueden generar toxicidad alimentaria.

En un laboratorio de calidad alimentaria se realizó un análisis de nitritos y

nitratos de tres productos cárnicos empleando cromatografía iónica. La
concentración de los nitritos y nitratos deben monitorearse, debido al
carácter carcinógeno que puede generar la formación de nitrosaminas a
partir del nitrito. En la Tabla 1, se registran los resultados del estudio
realizado.

3
 Tabla 1. Resultados del análisis de nitritos y nitratos por cromatografía
iónica.
Muestra
Concentración Concentración
Muestra Columna analizada
nitrito (μg/L) nitrato (μg/L)
(μg/kg)

Intercambio
Mortadela -- --
catiónico

Intercambio 450
Salchicha 50 35
aniónico

Intercambio
Longaniza 40 30
aniónico

A partir de la información anterior, indicar la posible causa o razón por la que

no se logró obtener una concentración de nitrito y nitrato para la muestra de
mortadela, tenga en cuenta la instrumentación empleada para el análisis.
Registrar su respuesta en la Tabla 3 del Anexo 3.

Según la Agencia de Protección Ambiental de los Estados Unidos (EPA), el

límite máximo permisible para nitrito es de 3,3 mg/L y para nitrato de 44
mg/L. Con base en los resultados del estudio, identificar si los productos
cárnicos analizados se encuentran o no en el nivel permisible de las especies
iónicas. Registrar su respuesta en la Tabla 3 del Anexo 3.

Ejercicio 2. Cromatografía de fluidos supercríticos

Realizar la lectura y análisis de las siguientes referencias bibliográficas que

se encuentran en el entorno de aprendizaje de la Unidad 3:

- Doria, G. (2013). Introducción general a la Cromatografía. En Módulo

Cromatografía (pp. 50-53). Bogotá, Colombia. UNAD - Universidad
Nacional Abierta y a Distancia. (Este documento lo compartirá su tutor en
el foro)

4
- Santamaria, M. R. (2003). Extracción con fluidos supercríticos. En
Industria alimentaria: tecnologías emergentes. (pp. 129-136;140-141;
162-163) Barcelona, ES: Universitat Politécnica de Catalunya.

Descripción del ejercicio 2.1:

La cromatografía de fluidos supercríticos es una técnica de separación de

compuestos no volátiles o inestables térmicamente, así como la separación
de compuestos que tienen grupos funcionales que no se pueden detectar en
un cromatógrafo de gases o en un cromatógrafo líquido de alta eficiencia. En
esta técnica, la separación de los componentes de una mezcla se da en fase
normal y se caracteriza por tener como fase móvil un fluido supercrítico y no
generar residuos.

Diligenciar la Tabla 4 del Anexo 3 justificando por qué la cromatografía de

fluidos supercríticos es una técnica en fase normal. Definir los conceptos de
temperatura y presión crítica, con el fin de completar la oración que aparece
en la tabla. Relacionar las referencias bibliográficas de consulta.

Un cromatógrafo de fluidos supercríticos se caracteriza por tener ocho

componentes: 1) región supercrítica (fase móvil), 2) fluido modificador, 3)
bombas, 4) sistema de inyección, 5) horno termostatizado, 6) columna, 7)
regulador de presión y 8) detector.

1. En la región supercrítica se calienta la fase móvil hasta alcanzar la

temperatura supercrítica. El agua y el dióxido de carbono supercríticos
son los más empleados como fase móvil, ya que pueden tener
características de líquido al lograr disolver compuestos, así como
características de gas al penetrar los poros de un sólido.

2. El fluido modificador tiene la función de mejorar la separación

cuando el fluido supercrítico empleado es incapaz de separar analitos
con altas polaridades.

3. La bomba se emplea para transferir el dióxido de carbono líquido al

cromatógrafo. Existe dos tipos de bombas, la reciprocante y la jeringa;
la primera se emplea para columnas cuya fase móvil tiene un
comportamiento como un líquido y la segunda para columnas cuya
fase móvil tienen un comportamiento como un gas.

5
 4. El sistema de inyección se realiza para un volumen fijo o para un
volumen variable.

5. El horno termostatizado es el encargado de controlar la temperatura

de la fase móvil al recorrer la columna.

6. La columna se caracteriza por tener adsorbentes como sílice,

poliestireno o alúmina. Existen dos tipos de columnas capilar o tubular
y de relleno o empaquetada.

Con el fin de completar la información anterior, diligenciar la Tabla 5 del

Anexo 3 e indicar la longitud, material y las características de cada tipo de
columna empleada para el análisis de fluidos supercríticos. Incluir las
referencias bibliográficas de consulta.

7. El regulador de presión tiene la función de mantener la fase móvil a

una temperatura supercrítica mediante un limitador de presión.

8. El detector permite que la técnica tenga un alto nivel de sensibilidad y

reproducibilidad. Son compatibles con los detectores de cromatografía
de gases y cromatografía líquida de alta eficiencia. Existe varios tipos
de detectores, entre los más utilizados se encuentran los detectores de
ionización de llama, absorción visible- UV, espectrometría infrarroja y
espectrometría de masas.

Diligenciar la Tabla 6 del Anexo 3 con el fin profundizar en los tipos de

detectores descritos. Incluir las referencias bibliográficas de consulta.

Con base en la información anterior y considerando que existen dos tipos de

cromatógrafos de fluidos supercríticos según el comportamiento de la fase
móvil, relacionar la imagen que se presenta en la Tabla 7 del Anexo 3, con la
lista de componentes del cromatógrafo de fluidos supercríticos que se ha
descrito.

Descripción del ejercicio 2.2:

Al conocer el sistema de operación de un cromatógrafo de fluidos

supercríticos, un grupo de estudiantes decide construir un diagrama de

6
fases, con el fin de comprender la relación que existe entre presión y
temperatura para que el dióxido de carbono se comporte como un fluido
supercrítico. En la construcción del diagrama, calcularon los puntos de
interfase sólido-líquido, líquido-gas y sólido-gas (Tabla 2).

Tabla 2. Puntos de interfase para el dióxido de carbono.

Puntos de Puntos de Puntos de
T (° C) interfase sólido- interfase líquido- interfase sólido-
líquido (Torr) gas (bar) gas (Torr)
-73 1500,12
-68 2250,19
-63 3000,25
-57 3750,31 5 3750,31
-53 45003,7
-48 75756,2 7
-43 10
-38 15
7 45
27 58
31 75

A partir de la información suministrada, construir el diagrama de fases para

el dióxido de carbono e indique la presión (bar) y la temperatura (K) del
punto crítico, así como la presión (bar) y la temperatura (K) del punto triple.
Realizar un análisis con base en la información solicitada, con el fin de
argumentar el estado supercrítico del dióxido de carbono. Diligenciar la Tabla
8 del Anexo 3 e incluir las referencias bibliográficas de consulta.

Descripción del ejercicio 2.3:

La cromatografía de fluidos supercríticos se puede aplicar en la separación de

polímeros, compuestos organometálicos, ácidos grasos, lípidos, triglicéridos,
así como su aplicación en la industria farmacéutica, petrolera, de productos
naturales y alimentos; para esta última, un grupo de estudiantes de
Ingeniería de Alimentos emplea la cromatografía de fluidos supercríticos para
hacer una identificación de lípidos mediante la separación de compuestos en

7
diferentes aceites para determinar la concentración del ácido
docosahexaenoico (DHA) y ácido eicosapentaenoico (EPA), ácidos grasos
esenciales del Omega 3, ya que contribuyen al normal funcionamiento del
corazón, así como a la conservación de los niveles normales de presión y
triglicéridos. Los resultados obtenidos por los estudiantes se presentan en la
siguiente Tabla:

Tabla 3. Resultados de concentración de EPA y DHA en muestras de aceites

comerciales.
%
Fase Presión Temperatura Concentración
Muestra
móvil (Torr) (F)
EPA DHA

CO2 0,19 148,73 50 90

Aceite de atún
Agua 0,16 -61,87 69 90

CO2 0,11-0,27 103,73 93 92

Aceite de girasol
Agua 0.13-0,27 -38,47 88 79

103,73-
CO2 0,13-0,20 95 --
Aceite de coco 139,73

Agua 0,07-0,33 -189,67 -- --

CO2 0,023 139,73 86 72

Aceite de bacalao
Agua 0,20-0,33 20,93 63 44

Con base en la información anterior, en la Tabla 9 del Anexo 3 realizar un

análisis comparativo entre la fase móvil empleada y los porcentajes de
concentración obtenidos. Si asocia la concentración de EPA y DHA como la
cantidad pura obtenida después del análisis; indicar si se pueden relacionar
las condiciones de análisis con los resultados obtenidos.

Para el desarrollo de la actividad tenga en cuenta que:

8
En el entorno de Información inicial debe: revisar la presentación del curso,
aceptar las normas y condiciones para el desarrollo del curso, revisar la
agenda del curso y realizar su presentación en el foro general del curso.

En el entorno de Aprendizaje debe: consultar el Syllabus y realizar la lectura

de las referencias bibliográficas correspondientes a la unidad 3 y participar
en el foro de la Tarea 4 – Técnicas cromatográficas específicas.

En el entorno de Evaluación debe: entregar en PDF el Anexo 3 diligenciado

con el desarrollo de los dos ejercicios.

Evidencias de trabajo independiente:

Las evidencias de trabajo independiente para entregar son:

• Desarrollar los dos ejercicios en el Anexo 3, el cual deberá publicar en

el foro habilitado para el desarrollo de la tarea en el entorno de
aprendizaje.
• En el Entorno de Evaluación - Tarea 4 Técnicas cromatográficas
específicas, subir un único archivo del Anexo 3 en formato PDF.

Evidencias de trabajo grupal:

En esta actividad no se requieren evidencias de trabajo grupal.

9
2. Lineamientos generales para la elaboración de las evidencias
de aprendizaje a entregar.

Para evidencias elaboradas independientemente, tenga en cuenta

las siguientes orientaciones:

1. Realice un reconocimiento general del curso y de cada uno de

los entornos antes de abordar el desarrollo de las actividades.
2. Identifique los recursos y referentes de la unidad a la que
corresponde la actividad.
3. Intervenga en el foro de discusión aplicando las normas de
netiqueta, evidenciando siempre respeto por las ideas de sus
compañeros y del cuerpo docente.
4. Antes de entregar el producto solicitado revise que cumpla con
todos los requerimientos que se señalaron en esta guía de
actividades, rúbrica de evaluación y por parte del tutor en el foro
de la actividad.
5. No cometa fraudes, ni plagios ni actos que atenten contra el
normal desarrollo académico de las actividades.

Tenga en cuenta que todos los productos escritos individuales o

grupales deben cumplir con las normas de ortografía y con las
condiciones de presentación que se hayan definido.
En cuanto al uso de referencias considere que el producto de esta
actividad debe cumplir con las normas APA

En cualquier caso, cumpla con las normas de referenciación y evite el

plagio académico, para ello puede apoyarse revisando sus productos
escritos mediante la herramienta Turnitin que encuentra en el campus
virtual.

Considere que en el acuerdo 029 del 13 de diciembre de 2013, artículo

99, se considera como faltas que atentan contra el orden académico,
entre otras, las siguientes: literal e) “El plagiar, es decir, presentar como
de su propia autoría la totalidad o parte de una obra, trabajo,
documento o invención realizado por otra persona. Implica también el
uso de citas o referencias faltas, o proponer citad donde no haya
coincidencia entre ella y la referencia” y liberal f) “El reproducir, o copiar
con fines de lucro, materiales educativos o resultados de productos de

10
investigación, que cuentan con derechos intelectuales reservados para
la Universidad”

Las sanciones académicas a las que se enfrentará el estudiante son las

siguientes:
a) En los casos de fraude académico demostrado en el trabajo
académico o evaluación respectiva, la calificación que se impondrá será
de cero puntos sin perjuicio de la sanción disciplinaria correspondiente.
b) En los casos relacionados con plagio demostrado en el trabajo
académico cualquiera sea su naturaleza, la calificación que se impondrá
será de cero puntos, sin perjuicio de la sanción disciplinaria
correspondiente.

11
 3. Formato de Rúbrica de evaluación

Tipo de actividad: Independiente

Momento de la evaluación: Intermedio
La máxima puntuación posible es de 60 puntos
Nivel alto: El estudiante reconoce los fundamentos de la
cromatografía iónica, a través de la identificación de conceptos
Primer criterio de relacionados a la técnica de separación.
evaluación: Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 6 puntos y 10 puntos.
Relación de
conceptos asociados Nivel Medio: El estudiante reconoce parcialmente los
a la cromatografía fundamentos de la cromatografía iónica, a través de la
iónica (Ejercicio identificación de conceptos relacionados a la técnica de
1.1). separación.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
Este criterio entre 1 punto y 5 puntos.
representa 10
puntos del total Nivel bajo: El estudiante no reconoce los fundamentos de la
de 60 puntos de la cromatografía iónica, al no identificar conceptos relacionados a
actividad. la técnica de separación.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 0 puntos.

Segundo criterio Nivel alto: El estudiante identifica los tipos de columnas con la
de evaluación: concentración de especies iónicas, mediante un análisis
cuantitativo y cualitativo de muestras aplicando cromatografía
Análisis de nitritos y iónica.
nitratos en Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
alimentos (Ejercicio entre 6 puntos y 10 puntos.
1.2).
Nivel Medio: El estudiante identifica parcialmente los tipos de
Este criterio columnas con la concentración de especies iónicas, al realizar un
representa 10 análisis cuantitativo o cualitativo de muestras aplicando
puntos del total cromatografía iónica.
de 60 puntos de la Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
actividad. entre 1 punto y 5 puntos.

12
 Nivel bajo: El estudiante no identifica los tipos de columnas
con la concentración de especies iónicas, al no realizar un
análisis cuantitativo y cualitativo de muestras en cromatografía
iónica.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 0 puntos.

Nivel alto: El estudiante identifica las características de las

columnas empleadas en cromatografía de fluidos supercríticos, a
partir de la descripción de la fase normal, temperatura y presión
Tercer criterio de crítica.
evaluación: Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 4 puntos y 5 puntos.
Reconocimiento
Nivel Medio: El estudiante identifica parcialmente las
operacional de la
características de las columnas empleadas en cromatografía de
cromatografía de
fluidos supercríticos, a partir de la descripción incompleta de la
fluidos supercríticos
fase normal, temperatura y presión crítica.
(Ejercicio 2.1)
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 1 punto y 3 puntos.
Este criterio
representa 5 Nivel bajo: El estudiante no identifica las características de las
puntos del total columnas empleadas en cromatografía de fluidos supercríticos,
de 60 puntos de la al no realizar una descripción de la fase normal, temperatura y
actividad. presión crítica.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 0 puntos.

Cuarto criterio de Nivel alto: El estudiante identifica el tipo de muestra que se

evaluación: puede analizar en cromatografía de fluidos supercríticos y las
relaciona mediante las características del detector.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
Reconocimiento
entre 4 puntos y 5 puntos.
operacional de la
cromatografía de
Nivel Medio: El estudiante identifica parcialmente el tipo de
fluidos supercríticos
muestra que se puede analizar en cromatografía de fluidos
(Ejercicio 2.1).
supercríticos, al no relacionarla con las características del
detector.
Este criterio Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
representa 5 entre 1 punto y 3 puntos.

13
puntos del total
de 60 puntos de la Nivel bajo: El estudiante no identifica el tipo de muestra que se
actividad. puede analizar en cromatografía de fluidos supercríticos, por
tanto, no la relaciona con las características del detector.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 0 puntos.

Nivel alto: El estudiante identifica dos cromatógrafos de fluidos

supercríticos según el comportamiento de la fase móvil,
Quinto criterio de
mediante los componentes que los caracterizan.
evaluación:
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 6 puntos y 10 puntos.
Reconocimiento
operacional de la Nivel Medio: El estudiante identifica parcialmente dos
cromatografía de cromatógrafos de fluidos supercríticos, al relacionar con
fluidos supercríticos dificultad el comportamiento de la fase móvil, y los
(Ejercicio 2.1). componentes que los caracterizan.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 1 punto y 5 puntos.
Este criterio
representa 10
Nivel bajo: El estudiante no identifica los cromatógrafos de
puntos del total
fluidos supercríticos, por lo que no relaciona el comportamiento
de 60 puntos de la
de la fase móvil, ni los componentes que los caracterizan.
actividad.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 0 puntos.

Sexto criterio de Nivel alto: El estudiante identifica la relación que existe entre
evaluación: presión y temperatura para que el dióxido de carbono se
comporte como un fluido supercrítico, al construir un diagrama
de fases ubicando correctamente la presión y temperatura
Construcción de
crítica, así como la presión y temperatura triple.
diagramas de fases
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
(Ejercicio 2.2).
entre 6 puntos y 10 puntos.

Este criterio Nivel Medio: El estudiante identifica parcialmente la relación

representa 10 que existe entre presión y temperatura para que el dióxido de
puntos del total carbono se comporte como un fluido supercrítico, al construir un
de 60 puntos de la diagrama de fases ubicando de manera incorrectamente la
actividad. presión y temperatura crítica, y/o la presión y temperatura
triple.

14
 Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 1 punto y 5 puntos.

Nivel bajo: El estudiante no identifica la relación que existe

entre presión y temperatura para que el dióxido de carbono se
comporte como un fluido supercrítico, al no construir un
diagrama de fases.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 0 puntos.

Nivel alto: El estudiante relaciona el tipo de fase móvil con la

presión y temperatura crítica, a partir del análisis de
porcentajes de concentración de analitos obtenidos por
Séptimo criterio
cromatografía de fluidos supercríticos.
de evaluación:
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 6 puntos y 10 puntos.
Aplicación de la
cromatografía de Nivel Medio: El estudiante relaciona parcialmente el tipo de
fluidos supercríticos fase móvil con la presión y temperatura crítica, al analizar
en alimentos algunos resultados de concentración de analitos obtenidos por
(Ejercicio 2.3). cromatografía de fluidos supercríticos.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 1 punto y 5 puntos.
Este criterio
representa 10
Nivel bajo: El estudiante no relaciona el tipo de fase móvil con
puntos del total
la presión y temperatura crítica, al no considerar los resultados
de 60 puntos de la
de concentración de analitos obtenidos por cromatografía de
actividad.
fluidos supercríticos.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 0 puntos.

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