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SIMBIOSIS MICORRÍZICA
2.1. Definición
La simbiosis se define como la relación de dos o más organismos que viven juntos, con base en esto se pueden encontrar dos principales tipos de simbiosis: 1) parasítica, en la que un organismo toma de otro los compuestos necesarios para vivir, pudiendo producir daños severos y muerte del otro organismo y, 2) mutualista, en la que los organismos involucrados obtienen beneficios mutuos. Por otra parte, el término micorriza (Mykes= Hongo y Rhiza= Raíz) se define como una estructura especializada que se forma por la asociación de un grupo específico de hongos con las raíces de las plantas y cuya función repercute en beneficios nutrimentales y fisiológicos para ambos organismos. De esta forma se constituye una simbiosis mutualista entre ambos componentes. recubren las raíces laterales (manto fúngico) y que al penetrar la epidermis, entre las células corticales, el micelio crece de tal forma que forma una extensa red de hifas denominada red de Hartig (Figura 17). Así, el micelio que esta fuera de la raíz contribuye en la absorción de agua y nutrimentos a partir del suelo, los cuales son dirigidos hacia el interior de la raíz, de forma que la planta los aprovecha en forma más eficiente(FerreraCerrato, 1993). A su vez, los hongos ectomicorrízicos, a través de su micelio externo, pueden llegar a generar cuerpos fructíferos (Figura 18), tanto en la superficie del suelo como subterráneos (Figura 19 y 20), que contienen esporas microscópicas responsables de la propagación de los hongos. Estos cuerpos fructíferos llamados también carpóforos pueden ser utilizados para la identificación de las diversas especies de hongos ectomicorrízicos que se pueden encontrar en un sistema forestal, además de servir como fuente de inóculo para aplicar a plantas o para aislar los hongos mediante técnicas de cultivo in vitro en laboratorio. La ectomicorriza es una simbiosis obligada, es decir, la planta de pino o cualquier conífera, no es capaz de crecer si no es colonizada por los hongos formadores de esta estructura. A pesar de encontrarse en la naturaleza más de 1500 especies de hongos formadores de ectomicorriza que están incluidos en diferentes grupos. En el cuadro 5 se aprecian las principales Clases taxonómicas, Familias y Géneros en los que se encuentran los hongos ectomicorrízicos. Éstos hongos presentan cierta especificidad hacia árboles tanto de clima templado como tropicales. En los cuadros 6 y 7 se muestran los géneros típicos de micobiontes y fitobiontes tanto de clima templado como tropical que establecen simbiosis ectomicorrízica.

2.2. Tipos de micorriza
En la naturaleza existen seis tipos bien diferenciados de micorriza y su distribución esta influenciada por aspectos ecológicos relacionados con el clima, disponibilidad nutrimental y especificidad hacia algunas familias de plantas. En si, los dos tipos de micorriza más importantes desde el punto vista forestal, agrícola, frutícola y hortícola son: 1) la ectomicorriza y 2) la endomicorriza arbuscular( Ferrera-Cerrato y Alarcón 2001).

2.3. Características morfológicas de la ectomicorriza
La ectomicorriza que se forma en las raíces, es posible observarla a simple vista y se pueden encontrar diferentes formas que van desde una estructura simple, bifurcada, coraloide hasta pinnada (Figura 16), mismas que se pueden caracterizar por el color que presentan. En la ectomicorriza, el micelio de los hongos formadores de esta estructura,

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a)

b)

c)

d)

e)

f)

Figura 16.

Estructuras ectomicorrízicas macroscópicas: a) Digitiforme (Cenoccocum geophylum); b) Bifurcada (Pisolithus tinctorius-Pinus radiata); c) Policotómica (Pseudotsuga sp.); d) Bifurcada con presencia de rizomorfas (Flecha, Pisolithus tinctorius-Pinus radiata); e) Morfología típica microscópica de las hifas de P. tinctorius mostrando fíbulas; f) Formación incipiente de cuerpos fructíferos de P. tinctorius en el cepellón de P. radiata.

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a)

Manto Fúngico

Red de Hartig Células corticales

b)

Figura 17.

Características macromorfológicas de las estructuras internas y externas de la simbiosis ectomicorrízica en el sistema radical de pinaceas y coníferas. a) Diagrama esquemático de la colonización y b) estructuras fúngicas internas de la raíz

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a)

c)

b)

Figura 18.

Características morfológicas externas de la simbiosis ectomicorrízica establecida en el sistema radical de pináceas. a) Colonización del sistema radical con estructuras ectomicorrízicas (Flechas) dicotómicas (bifurcadas); b) Cuerpo fructífero (Flechas) de Telephora terrestris en Pinus hartwegii; c) Cuerpo fructífero (Flechas) de Laccaria sp. en Pinus hartwegii.

a)

b)

c)

d)

Figura 19. Morfología de algunos cuerpos fructíferos (carpóforos) epigeos de hongos formadores de ectomicorriza del bosque del Cofre de Perote, México. a) Laccaria laccata, b) Amanita cesarea, c) Russula sp. y d) Boletus sp.

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Dentinum. Gyroporus.Trichoglossum Gyromitra. Stephanopus. Leucocortinarius. Rhizopogon. Byssosporia. Sclerogone Sphaerosoma Balsamia. Géneros con un asterisco indican que tienen muchas especies no micorrízicas (Brundrett et al. Royoungia Truncocolumella Cantharellus. Chamonixia. heimiella. Tylopilus. Geopora. Pseudohysterangium. Hydnocystis. Cortinarius. Lamprospora* Sphaerosporella. Labyrinthomyces. Hebeloma. Hydnangium. Cortinarius. Radiigera Astroboletus. Clavicorona.etc Endogone. Scleroderma Sedecula Stephanospora Strobilomyces Austrogautieria. Martellia. Ruhlandiella Geopora. Pulveroboletus. Lepista Leucopaxillus. Zelleromyces Gelopellis Gomphus Chroogomphus. Hygrocybe. Sarcocypha* Choiromyces. E= Hongos epigeos. Cystogomphus. Astroporina. H= Hongos Hipogeos. Pachyphloeus. Clavulinopsis. etc. Chalciporus. Phlebopus. tricholoma. Descomyces. Gymnomyces. laccaria. Cuphocybe. Russula Archangeliella. Podohydnangium TIPO Conidial H H H H H E E H E H E H E H H E H E H E H H E H E E E H H E H H H E E E E H H G H H E G E E H G H H H E H E E H Sarcoscyphaceae Terfeziaceae Tuberaceae BASIDOMYCETES Amanitaceae Astraeaceae Boletaceae Cantharellaceae Chondrogastraceae Clavariaceae Corticiaceae Cortinariaceae Cribbiaceae Entolomataceae Elasmomycetaceae Gelopellidaceae Gomphaceae Gomphidiaceae Hydnaceae Hygrophoraceae Hysterangiaceae Leucogastraceae Lycoperdaceae Melanogastraceae Mesophelliaceae Octavianinaceae Paxillaceae Pisolithaceae Polyporaceae Russulaceae Sclerodermataceae Sedeculaceae Stephanosporaceae Strobilomycetaceae Thelephoraceae Tricholomataceae 37 . Leptonia. Catathelasma. Hygrophorus*. Leotia*. Clavariadelphus. Cortinomyces. Richoniella Elasmomyces. Mycolevis Clitopilus. Cantharellula. etc. Leccinum. Clavaria. Sarcosphaera Amylascus. Diploderma. Mesophellia. Thaxterogaster.. CLASE/FAMILIA HYPHOMYCETES ZYGOMYCETES Endogonaceae ASCOMYCETES Ascobolaceae Balsamiaceae Elaphomycetaceae Geneaceae Geoglossaceae Helvellaceae Pezizaceae Pyronemataceae GÈNERO Cenococcum. Tricholomopsis* Gigasperma. Trappea Leucogaster. Helvella Barssia. Hydnobolites. Gymnohydnotrya. Stephensia Plectania*. Gummiglobus. Inocybe. Rhodocybe* Rhodogaster. Sphaerosporella. Buchwaldoboletus*. etc. Muciturbo. Pulvinia. Gyrodon. Limacella Torrendia Astraeus Pyrenogaster. Thelephora Clitocybe*. Fistulinella. Rubinoboletus. Paurocotys Reddellomyces. Descolea. Dingleya. jafneadelphus*.Cuadro 5. Malajczukia. Wilcoxina Choiromyces. Nothocastoreum Octavianina. Boletochaete. Gomphidius Bankera. Entoloma. Paradoxa. Hydnellum. Hydnotryopsis. Fischerula. dermocybe*. G =Globosos (Puffballs). Taxas de hongos ectomicorrízicos y ectendomicorrizicos.Geneaba Geoglossum*. 1996). Byssocorticium. Picoa Elaphomyces Genea. Gautieria. Trichophaea. Suillus. Macowanites Scleroderma Horakiella. Destuntzia. Piloderma. Mycoclelandia Aleuria*. Phellodon Bertrandia* Camarophyllus. Humidicutis*. Timgrovea Cribbea. Humaria. Hydnum. Tuber Amanita. Peziza. gastroboletus. Terfezia Mukagomyces.Pseudoplectania*. Hymenogaster Quadrispora. Cystangium. Sclerogaster Paxillus Pisolithus Albatrellus Lactarius. Cystoderma*. Chamonixia. Ramaria. Setchelliogaster. Wakefieldia Boletopsis. Elderia. Craterellus Chondrogaster Apelaría. Clavulina. Peziza*. Boletus. Leucophleps Lycoperdon* Melanogaster Castoreum. Rozites. Boletellus*. Gliphorus. Ramariopsis Amphinema. Hysterangium. Xanthoconium Alpova Boughera. Phillipsa*.

Pinus. Pinus. Lactarius. Eucalyptus. Lycoperdon. Elaphomyces. Hydnotria. Leccinum. Sphaerosporela. Amanita. Quercus. Cortinarius. Quercus. Betula. Martellia. Picea. Russula. Gautieria. Laccaria. Pseudotsuga. Polygonum. Pseudotsuga. Populus.Cuadro 6. Larix. Genea. Helvella. Suillus. Hysterangium. Hymenogaster. Fagus. Populus. 1998). Rozites. Tricholoma. Pseudotsuga 38 . Gomphidius. Alnus. Pinus. Larix. Corylus. Alnus. Salix y Tsuga Ascomycotina • Balsamia. Salix y Tsuga Zygomycotina • Endogone Eucalyptus. Cantharellus. Xerocomus Fitobiontes Abies. Pinus. Inocybe. Pseudotsuga Deuteromycotina • Cenococcum Abies. Scleroderma. Betula. Tylopilus. Hygrophorus. Hebeloma. Corylus. Tuber Abies. Pisolithus. Astraeus. Gastroboletus. Géneros típicos de hongos (micobiontes) y plantas (fitobiontes) de zonas templadas que establecen simbiosis del tipo ectomicorrízica (Tomado de Pérez-Moreno. Larix. Geopora. Rhizopogon. Entoloma. Picea. Fagus. División taxonómica y Micobiontes Basiodiomycotina • Alpova. Eucalyptus. Paxillus. Boletus.

Lycoperdon. Microberlinia. Pericopsis. Marquesia. Paxilus. Laccaria. Cantharellus. Elaphomyces. Cantharelus. Pisolithus. Tylopirus Nr Nr Nr Nr= Hongos no reportados para estos géneros de plantas Proteaceae • Faurea Sapotaceae • Glycoxylon Sapindaceae • Allophylhis. Hopea. Julbernarlia. Inocybe.Cuadro 7. Pisonia. Pisolithus. Instia. Suillus. Afzelia. Anthonota. Russula. Cantharelus. Russulla. Coltricia. Boletus. Brachystegia. Coltricia. Pulveroboletus. Eugenia. Geastrum. Xerocomus Nr Fabaceae • Castaneopsis. Dipeterocarpus. Xerocomus Familias y géneros de fitobiontes Leguminoseae (Fabaceae) • Acacia. Micobiontes Amanita. Gyroporus. Inga. Scleroderma. Scleroderma. Scleroderma. Gyroporus. Didolotia. Lactarius. Macrolobium. Géneros típicos de hongos (micobiontes) y plantas (fitobiontes) de zonas tropicales que establecen simbiosis del tipo ectomicorrízica (Tomado de Pérez-Moreno. Elasmomyces. Gyrodon. Monopetalanthus. Telephora. Monotes. Tubosaeta. Scleroderma Myrtaceae • Campomanesia. Telephora. Scleroderma. Nephelium 39 . Lithocarpus. Aphanocalyx. Dryobalanoptus. Sclerogaster. Isoberlinia. Tristania Nyctaginaceae • Neea. Berlinia. Russula. Hebeloma. Pasania Gnetaceae • Gnetum Quercus. 1998). Allocasuarina Dipterocarpaceae • Anisoptera. Lactarius. Telephora Agaricus. Aldinia. Boletus. Lactarius. Sghorea. Amanita. Scleroderma Amanita. Austrogauteria. Porphyrellus. Melaleuca. Rhizopogon. Eucalyptus. Nr Cenoccocum. Strobilomyces. Torrubia Polygonaceae • Coccoloba Pinaceae • Pinus Nr Cantharellus Amanita. Vateria Euphorbiaceae • Uapaca Amanita. Pisolithus. Tetraberlinia Casuarinaceae • Casuarina. Hysterangium.

A. permitiendo que la raíz posea un mecanismo alterno que explore mayor volumen de suelo. Partes típicas que integran al cuerpo fructífero (carpóforo) de Amanita muscaria que forma ectomicorriza con: Abies alba. L. P. 2000b). procera. Fagus sylvatica. 1998. P. 2000a). Picea abies.. sitchensis. 2. Eucalyptus camaldulensis. P. 2000). Quercus sp. Tilia europaea. Betula alba. ponderosa.4. los hongos formadores de esta simbiosis presentan una extensa red de hifas que favorecen la absorción de nutrimentos y agua (Bago et al. ésta crece a lo largo del tejido radical y llega a formar estructuras típicas de esta simbiosis (Figura 21b y c): 1) Hifas inter e intrarcelulares.. 2) Arbúsculos que facilitan en intercambio bidireccional de nutrimentos entre hongoplanta (Bago et al. 5) Esporas simples o esporocárpicas en el suelo. En el suelo.Pileo(sombrero) Margen Láminas conteniendo esporas Estípite Volva Micelio Figura 20. 40 .. pero algunas especies pueden esporular dentro de la raíz (Figura 21d). los hongos micorrízicos arbusculares no producen cambios visibles en la morfología de la raíz de sus hospedantes. Arbutus menziesii. 1999). Larix decidua. Pseudotsuga menziesii. Este micelio puede formar estructuras microscópicas que favorecen la propagación de los hongos. que almacenan reservas para el hongo. P. radiata.. Características morfológicas de la micorriza arbuscular A diferencia de la ectomicorriza. cembra. éstas son las esporas que pueden estar libres o agrupadas (Declerck et al. 4) Enrrollamientos hifales y. banksiana. Una vez que alguna hifa del hongo penetra la raíz. P. Populus tremula x tremuliodes. entre otros (Yang et al. 3) Vesículas. Su presencia puede ser detectada mediante observaciones al microscopio óptico. occidentalis.. Tsuga heterophylla.

1993) y están agrupados dentro del orden de los Glomales. Los hongos micorrízicos arbusculares se consideran como simbiontes obligados y requieren nutrirse de una raíz viva (biotrofos 41 obligados) (Bago et al. Ferrera-Cerrato y Alarcón 2001). En contraste con los hongos ectomicorrízicos. los hongos formadores de micorriza arbuscular conocidos hasta la fecha no sobrepasan las 150 especies (Walker y Trappe. estos hongos pueden establecerse en el sistema radical de aproximadamente 85% de las especies vegetales que han sido identificadas y se cree que éstos fueron determinantes en la capacidad de adaptación de las plantas en el ecosistema terrestre ( Malloch et al.a) b) c) d) Figura 21. Morfología de la colonización de hongos micorrízicos arbusculares en el sistema radical de las plantas: a) raíz no colonizada... 1993. implica la creación de sistemas de producción de inóculo eficientes que satisfagan los requerimientos de los viveros (Alarcón y Ferrera-Cerrato 1999. por lo que para propagarlos con éxito. se requiere del uso de plantas trampa (Morton 1990. 1995). González-Chávez. 2000b). c) vesículas y micelio intrarradical y d) formación de esporas dentro de la raíz (en algunos géneros). . Taylor et al.. 1980. b) raíz colonizada con hifas intrarradicales y arbúsculos (flechas). El reto del uso de estos hongos en la agricultura o en la dasonomía como inoculante. 2001). el cual esta conformado por siete géneros (Morton y Redecker.. Sin embargo.

de los cuales se procede al aislamiento del hongo en el laboratorio (Ferrera-Cerrato.. se refiere al uso de los cuerpos fructíferos o mezclas de ellos finamente fragmentados e introducirlos como inoculo en el sustrato de crecimiento de las plantas con fines de inducir la micorrización. el cual debe ser colectado de la rizósfera de plantas sanas. se basa en la colecta de suelo de monte. raíces colonizadas y en su caso suelo rizosférico donde se detecte una abundancia de hifas de hongos micorrízicos provenientes de un sistema de raíz sano (Alarcón y Ferrera-Cerrato. Estas esporas también sirven para realizar los estudios taxonómicos correspondientes a los hongos involucrados en las cepas( Morton. para conocer su grado de micorrización y efecto en el desarrollo de las plantas.5. Una vez cumplidos los puntos anteriores. Otra fuente de inóculo importante. 42 • • • • .1993. se procede al seguimiento de la ruta biotecnológica que se presenta en la figura 22 y que a continuación se describe de manera general: • Con base en un muestreo en campo y extracción de los diferentes propágulos micorrízicos. aceites. tallo o raíces para establecerlos en los diversos sistemas de producción agrícola. con el fin de seleccionar aquellas cepas que tengan mayor capacidad de micorrización a la vez de favorecer el crecimiento de las plantas. se procede a su propagación y purificación en plantas trampa o en laboratorio a través de medio de cultivo Una vez purificadas las cepas micorrízicas.6.1999). utilizando sustratos estériles. Una forma tradicional de fuente de inoculo muy utilizada. el inoculante puede ser manejado con el fin de establecer los microorganismos en las hojas. De este modo. el carbón activado. que consiste en incrementar el volumen del inoculante seleccionado en forma escalada. la fuente inoculante proviene del conjunto de hongos que están asociados a las raíces o que se encuentran en el suelo rizosférico de las plantas. Definición de inoculante Como inoculante debe entenderse a aquel producto biológico que facilita la introducción de microorganismos con diversa actividad fisiológica que favorece el crecimiento y desarrollo de las plantas. Brundrett et al. hortícola. alginatos y otros soportes orgánicos e inorgánicos. Los propágulos conocidos como esporas. ya sea líquidos o sólidos en los que se utilizan acarreadores como la turba. Otra fuente de inoculo poco frecuente. Fuentes de inoculante En el caso de los hongos micorrízicos arbusculares. Este procedimiento permite obtener cepas puras que serán ensayadas en los diferentes hospedantes. se realizan ensayos de selección basándose en su capacidad de colonización y promoción del crecimiento en los hospedantes. Para los hongos ectomicorrízicos. 2. mismas que pueden ser inoculadas directamente en el sustrato como se ha hecho con las esporas de hongos como Pisolithus. se procede a una propagación inicial para estudios a nivel de invernadero y en pequeñas parcelas. fragmentos de cuerpos fructíferos. independientemente del tipo de simbionte micorrízico. una de las fuentes de inoculo pueden ser los cuerpos fructíferos colectados en ecosistemas forestales. Paralelamente a la identificación. ya sea en ecosistemas y agroecosistemas.1990). Rhizopogon y Tuber. Este inoculante puede presentar diferentes aspectos físicos. A partir de las diferentes fuentes de inoculantes. En el caso de los hongos micorrízicos el inoculantes puede consistir de esporas. se procede a realizar una propagación a nivel piloto. frutícola y forestal. Estos propágulos son separados del suelo empleando la técnica de Gerdermann y Nicolson (1963). son separados y propagados en plantas trampa mantenidas en invernadero. se procede a su identificación taxonómica. Scleroderma.1996). son las esporas contenidas en los cuerpos fructíferos.2. hifas. Con los resultados de vivero y pequeñas parcelas. aunque no muy adecuada.

tiene que cumplir con controles de calidad. Muestreo de Campo Estudios ecológicos Ensayos en suelos marginales Evaluación de colonización y aislamiento de esporas Ensayos en plantas hortofrutícolas Uso en viveros Purificación de esporas Cultivo in vitro Cultivos trampa Propagación piloto (4 toneladas) Control de calidad de inoculante producido: Micorrización Patología Sistemas de propagación de plantas Identificación taxonómica Pruebas de selección: Infectividad versus efectividad Ensayos especiales: Componentes de rendimiento. antes de ser empleado. Un inoculante con estas características puede ser empleado en diferentes sistemas de propagación de plantas horto-frutícolas. Tolerancia a agentes contaminantes. supervivencia y vida de anaquel. Propagación inicial Vivero de plantas forestales Figura 22. 43 . así como utilizarlos en diferentes sistemas de producción.• • El inoculante producido en esta fase. en suelos marginales con diferentes grados de perturbación y contaminación. Proceso biotecnológico de la producción de inoculantes a base de hongos micorrízicos para uso en viveros hortícolas. para evaluar su tolerancia a ambientes adversos. 2001). forestales y ornamentales. frutícolas y forestales (Modificado de Alarcón. mantener la capacidad de colonización y promoción de crecimiento. etc. que consisten en la ausencia de patógenos.

1. Tipos de inoculante Independientemente del sustrato en el que se produzcan los inoculantes. fibra de trigo y otros desechos vegetales. las estructuras mencionadas no son susceptibles de ser propagadas en medios de cultivo convencionales (caldos nutritivos. se puede apreciar la diversidad morfológica de las esporas algunos géneros de hongos micorrízicos arbusculares.. Para este fin se requieren de condiciones específicas que permitan su proliferación tales como sustratos orgánicos y/o inertes y presencia de plantas vivas. 2. etc. fermentadores. 3) materiales inertes: vermiculita.7.7. roca fosfórica. así como la adición de soluciones nutritivas de modo que la fisiología tanto de la planta como del microorganismo sean beneficiadas (Sylvia.2. En la figura 24. arcillas y suelo. 2) compostas y vermicompostas obtenidas a partir de estiércoles de animales. sulfato de calcio y alginatos. Manjarrez et al. Propágulos infectivos Se considera como propágulo infectivo a aquél que permita el crecimiento y proliferación de los microorganismos aún y cuando se presenten condiciones adversas tanto al momento de la aplicación como en los procesos de elaboración de los inoculantes y almacenamiento de los mismos. Para el caso específico de hongos micorrízicos arbusculares. Los inoculantes pueden ser elaborados mediante el uso de diversos acarreadores los cuales se clasifican en tres principales categorías: 1) sustratos orgánicos: turba. agrolita. raíces colonizadas por hifas y esporas. Propágulos infectivos de hongos micorrízicos arbusculares consistentes en: a) hifas externas que se encuentran en el suelo y. Otros propágulos de gran importancia por ser estructuras de dispersión y supervivencia de los hongos. b) hifas internas colonizando el sistema radical. 2000) y poder así obtener un inoculante de excelente calidad en función de los propágulos que contiene.). en el caso de hongos micorrízicos se pueden utilizar el micelio que se encuentra en el suelo. a) b) Figura 23. aceites de soya y cacahuate. zeolita. En el caso particular de los hongos micorrízicos. éstos pueden ser producidos a partir de diversas estructuras que son típicas de los microorganismos. 44 . los propágulos que deben ser considerados en la evaluación del control de calidad de los inoculantes son la cuantificación del micelio externo (Figura 23a) que se presenta en el suelo así como aquel que se encuentra colonizando la región cortical de la raíz (Figura 23b). 1999. carbón activado. son las esporas.

Esporas típicas de hongos micorrízicos arbusculares: a y b) Glomus sp. e) Gigaspora margarita y f) Acaulospora delicata.a) b) c) d) e) f) Figura 24. d) Entrophospora infrequens. 45 .. c) Sclerocystis sp..

solo para el llenado de los semilleros. En función de la calidad del inoculante (cantidad de propágulos contenidos) se puede aplicar desde 1 a 15 g de inóculo por planta. mantienen por tiempo prolongado sus cotiledones cuyas reservas propician en mayor grado. permite que la simbiosis se establezca en corto tiempo y con ello su efecto benéfico. el uso de inoculantes en semilleros debe considerar el tipo de semilla a sembrar ya que semillas de corto período de germinación (especies consideradas como hortalizas) con pocas reservas en los cotiledones. Sin embargo. tinctorius). Por otra parte. Es posible mezclar inoculantes peletizados en turba o en cualquier material utilizado como sustrato antes de efectuar la siembra de las semillas. Las proporciones de inoculo deben de mantenerse y vigilarse ya que este tipo de aplicación al romperse las proporciones se expresaría como baja micorrización o ausencia. Es importante mencionar que en el caso de los hongos endomicorrízicos es difícil lograr grandes volúmenes de inoculo conteniendo un numero adecuado de esporas y que un inoculo compuesto por pedazos de raíces. permite a los hongos mayor probabilidad de establecerse y expresar sus beneficios (Figura 25d y e) en corto tiempo (de uno a cuatro meses. 2.8. los hongos micorrízicos. se pueden ser inoculados en las diversas fases que involucra la propagación de plantas (semillas. Inoculación en semilleros Con base a que la preparación de almácigos y semilleros requiere de la manipulación de poco sustrato. 2. estacas. este es el método más recomendado para aplicar los hongos micorrízicos (arbusculares y ectomicorrízicos). Esta característica hace que los beneficios de los hongos micorrízicos no se expresen o se retarden ya que éstos requieren de fuentes carbonadas procedentes de hojas fotosintéticamente activas.3. hifas y esporas es el mas recomendable debido a que en la mezcla del inoculo. en el agujero donde se transplantaran las plántulas (Figura 25b y c) y sobre su sistema radical. el sistema radical de la planta encontrara alguno de estos elementos infectivos. se debe de cuidar la proporción inoculo sustrato y que al menos debe de ser de un 50%. Inoculación al transplante Sin duda. acodos e incluso micropropagación) tanto en almácigos hortícolas. el crecimiento de las plantas. 1999). la mayoría de las plántulas obtenidas por semillas (de plantas de corte arbustivo o leñoso). 46 . Inoculación crecimiento al sustrato de Este método representa facilidad de manejo para el viverista. Cuando se utilizan semillas de largo tiempo de germinación. Alarcón y Ferrera-Cerrato.8. la viabilidad de los propágulos de los hongos micorrízicos puede ser alterada por el exceso de humedad que se requiere para la germinación. En el caso de hongos micorrízicos arbusculares. como en viveros de especies frutales y forestales (González-Chávez et al. Métodos de inoculantes aplicación de Dependiendo del tipo de inoculante. 1998.. esto es fácil lograrlo cuando empleamos esporas de los hongos del grupo de los gasteromicetos (como P.1.2.2. Sin embargo. A continuación se mencionan las principales formas de aplicación de inoculantes elaborados a partir de hongos micorrízicos: 2. dependiendo de la especie forestal o frutal de que se trate).8.8. la aplicación directa del inoculante en el sustrato. la aplicación de inoculante micorrízico es factible de utilizarse en estos sistemas.

Las plántulas una vez podadas. Una alternativa para inocular estas esporas • • . donde se vierte una suspensión densa de esporas. las plántulas son transplantadas en recipientes nuevos conteniendo el sustrato previamente fumigado con productos químicos o vaporizado con vapor de agua (Figura 26g y h). También es posible generar inoculante a partir de esporas. Rhizopogon o Pisolithus. la inoculación al momento del transplante es factible mediante una suspensión de esporas y en ella remojar las raíces de las plántulas (Figura 26). A continuación se describen los pasos de este proceso: • Se toma un recipiente limpio. Este proceso consiste en liberar las esporas de los carpóforos y colectarlas en bolsas de plástico desinfectadas y hacer observaciones al microscopio para conocer el tipo de esporas que se están inoculando (Figura 27 a. De un semillero. d) expresión benéfica en las plantas inoculadas con HMA en portainjertos de cítricos injertados a los 310 días. c) transplante de la plántula al agujero inoculado. Obsérvese el escaso crecimiento de las plantas testigo (Flecha). según la especie. a) semillero conteniendo las plántulas a inocular. 47 obtenidas en el paso 1. con el fin de que las raíces queden impregnadas con las esporas del hongo ectomicorrízico a inocular (Figura 26e y f). Para el caso de hongos ectomicorrízicos. se toman plántulas de aproximadamente 12-15 cm de altura. Después de este paso. obtenidas directamente del carpóforo de algunos hongos altamente productores de esporas como Scleroderma. b) inoculación previa al transplante. Testigo Forma de inoculación de hongos micorrízicos arbusculares al momento del transplante. se sumergen en la suspensión de esporas. la cual se agita vigorosamente para tener una mejor distribución de las esporas (Figura 26a y b). previamente desinfectado con alcohol. b y c).a) b) c) d) Plantas inoculadas Figura 25. a la misma edad. y se procede a podar la raíz con el fin de evitar la deformación llamada “cola de cochino” (Figura 26c y d).

en diferente proporción. f y g). El extremo cargado con esporas (Figura 26g). Con una estaca. clavo o lápiz.consiste en mezclarlas homogéneamente. se introduce en el sustrato quedando un agujero impregnado de éstas. se introduce en el interior de la bolsa para que se adhieran las esporas (Figura 27e. se coloca en los diferentes recipientes utilizados en el vivero y se procede al transplante. 48 . propiciando con ello. con el extremo humedecido con agua. con el sustrato previamente fumigado (Figura 26 d). consiste en tener las esporas de los hongos micorrízicos en bolsas pequeñas. las plántulas que quedarán de esta forma inoculadas (Figura 27h). aseguran que las plántulas crecerán con el simbionte previamente inoculado. los beneficios de la simbiosis. el cual recibirá posteriormente. Una vez inoculado el sustrato. Las tres metodologías de inoculación mencionadas. Otra alternativa práctica de inoculación.

poda e impregnación con el inoculante. g y h) cama de transplante y transplante de plantas micorrizadas).a) b) c) d) e) f) g) h) Figura 26. 49 . d. Método de inoculación de plántulas de pino producidas en vivero con esporas de hongos ectomicorrízicos (P. a y b) preparación de la suspensión del inoculante en agua. c. tinctorius) en suspensión. e y f) extracción de la plántula.

En cada caso obsérvese el color café de las esporas. f) impregnación de esporas de Pt mediante estacas (lápiz) antes del transplante. e) esporas de Pt .a) b) c) d) e) f) g) h) Figura 27. Inoculación de plántulas de pináceas con esporas de hongos ectomicorrízicos. g) inoculación de las esporas en el sustrato. b y c) esporas del hongo vistas al microscopio de campo claro. a) Esporocarpos de Pisolithus tinctorius (Pt). 50 . h) transplante en el sustrato inoculado. d) mezcla de esporas con el sustrato.

Para aplicar el inoculante en sistemas de aspersión. la cual debe tener la coloración típica de las esporas que conforman al inoculante (Figura 28e).4.4.8 kg en 10. Otras técnicas de inoculación 2. se requiere que el producto se homogenice con agua hasta obtener una suspensión. c) dilución del inóculo en bomba de agua calibrada.600.8.000 litros de agua. Inoculación con hongos ectomicorrízicos a plántulas de Abies mediante sistemas de riego por aspersión: a y b) suspensión del inóculo esporal de Pisolitus tinctorius en agua. La suspensión y el proceso de su dilución en agua se calcula en 3. 51 . Con esta solución inoculante es posible inocular 1.2. por lo se debe tener cuidado en la selección del inoculante a aplicar. el sistema de riego por aspersión podría obstruirse. la cual se hace pasar por un inyector calibrado (Figura 28c) que permita que se suspenda la solución inoculante hasta obtener una proporción 1:200 y proceder a asperjar las plantas (Figura 28d). ya que de no ser así.8. se colocan vasos de poliestireno en los que se captura la solución inoculante.000 plantas. c) d) e) Figura 28. lo más uniformemente posible a) b) (Figura 28a y b). Una de las consideraciones más importantes es que los soportes del inoculo sean completamente solubles en el agua. Con el fin de garantizar que el inoculo salga correctamente por el sistema de riego.1. Inoculación por riego Es posible inocular hongos ectomicorrízicos por sistemas de riego por aspersión o con bomba de mochila. d) aspersión de la solución inoculante en las plantas y e) suspensión del inóculo esporal recibida por el sistema de riego por aspersión.

Si bien la simbiosis micorrízica se puede establecer en más del . Por otra parte las plantas con denso sistema radical y abundantes raíces laterales y pelos radicales (tipo graminoide) como maíz. Plantas con raíces con escasos pelos radicales y del tipo magnoloide (la mayoría de los frutales. 1996. existen plantas que si se encuentran establecidas en sustratos con alta disponibilidad de nutrimentos.4. los cuales se mencionarán a continuación.. Este mismo procedimiento puede ser utilizado para inocular hongos ectomicorrízicos en campo. también es cierto que algunas de ellas responden de manera diferencial a la inoculación de hongos micorrízicos. Además. éstas son capaces de aprovechar los nutrimentos aún cuando se hayan establecido los hongos micorrízicos en la raíz. Inyección al suelo La inyección al suelo de inoculantes de hongos MA es factible mediante bombas de aspersión especial (Tipo Confidor) y que se pueda graduar.9. quenopodiaceas. Sin embargo.8. aunque esto no garantiza que la germinación de ellas se lleve a cabo.. Con base a lo anterior. etc. No obstante. el cual se puede medir con base a la promoción en altura.1. principalmente) son altamente dependientes a la actividad de los hongos.9. amarantáceas. Davies et al. Estos aspectos. especies forestales. En cada inyección es posible aplicar de 800 a 2000 esporas y se debe realizar varias inyecciones alrededor del árbol. Es decir.2. 80% de las plantas conocidas. Lupinus albus) aunque si pueden establecer una simbiosis efímera.1.9. Planta El conocimiento de la especie vegetal que se pretenda propagar es un aspecto importante a considerar. La micotrofía puede clasificarse en tres tipos: (a) plantas no micotróficas. diámetro de tallo y crecimiento. las esporas pueden ser parasitadas muy rápidamente y con esto evitar que la simbiosis se establezca y sea funcional. pero si estas mismas plantas se establecen en sustratos con limitación de nutrimentos. es importante realizar la caracterización de plantas considerando la susceptibilidad a ser colonizadas por estos hongos (plantas micorrízicas) y el grado de respuesta a la inoculación (micotrofismo). existen diversos factores que están directamente involucrados en la mayor expresión de la efectividad de los inoculante en el vivero (Alarcón y FerreraCerrato 1999). (b) plantas micotróficas facultativas. aquellas que tienen mayor dependencia hacia los hongos de acuerdo con la presencia (disponibilidad) o limitación de nutrimentos en el sustrato. ciperáceas. entonces la respuesta y la dependencia hacia los hongos 52 2. por lo que dependen menos de la simbiosis micorrízica.1. se debe de asegurar que las esporas estén viables. ni que la simbiosis se establezca en las raíces.2. la cual se introduce en el suelo (10-15 cm de profundidad). la inyección de inoculante micorrízico en campo puede tener como desventaja la escasa competitividad de los hongos micorrízicos al enfrentarse con otros microorganismos presentes en ese suelo. trigo.. Factores que afectan la efectividad de los inoculantes La efectividad de un inoculante se refiere a la capacidad de estimular el beneficio en la planta inoculada. 2. Micotrofía Por micotrofía se debe entender el grado de dependencia de las plantas en su crecimiento y nutrición por la presencia de los hongos micorrízicos establecidos en el sistema radical. 2000a y b). Gran parte de su respuesta positiva se debe a la presencia de sistemas radicales con limitación para absorber y aprovechar los nutrimentos contenidos en un suelo o sustrato. Bajo estas condiciones de inoculación. así como por la calidad de planta producida(Lovato et al. algunas leguminosas. Esta bomba tiene un estilete perforado en la punta. permiten predecir la posible respuesta de las plantas a la inoculación de hongos micorrízicos. sorgo. 2. cuya su nutrición no depende del establecimiento de los hongos (crucíferas.

el sustrato es fundamental en el establecimiento y funcionalidad de la simbiosis micorrízica y para que el efecto benéfico de la simbiosis se exprese. es posible determinar la dependencia micorrízica de las plantas de un vivero.9. para los hongos micorrízicos arbusculares. sino que es posible utilizar 53 Otros conceptos que deben ser bien comprendidos por el viverista que incluya la inoculación con hongos micorrízicos. Sin embargo. 2.9.1. en función de las características de fertilidad de los sustratos en los que se establezcan las plantas. Sylvia. 1999) Cabe aclarar que estos dos conceptos no están correlacionados. fumigación. Tsuga y Pseudotsuga. Con base en lo anterior. la cual es afectada por las practicas realizadas en el vivero. 2. es necesario saber qué tipo de micotrofismo presenta la planta en propagación en el vivero.2. es decir. sanidad y vigor de las plantas ( Ferrera-Cerrato y González-Chávez 1998. las características químicas de los sustratos utilizados en viveros son fundamentales para abastecer de nutrimentos a las plantas. Como infectividad se entiende la capacidad de los hongos de un inoculante para establecerse en el sistema radical de las plantas. La efectividad. Las plantas micotróficas obligadas (c) son aquellas que requieren forzosamente del establecimiento de la simbiosis micorrízica para poder así satisfacer sus requerimientos nutrimentales y presentar mayor capacidad de crecimiento y mayor vigor. 2. ya que se pueden encontrar hongos que colonicen la raíz en menor proporción (1540%) y muestren excelentes efectos en la nutrición y crecimiento de las plantas.1. en el sistema radical de las plantas.9. de tal forma que se plantee la inoculación de hongos micorrízicos arbusculares y se asegure el éxito de su aplicación. Con esto se trata de puntualizar que no precisamente se requiere utilizar sustratos ricos en nutrimentos (tanto orgánicos como inorgánicos) como el “suelo de monte” (el uso de este tipo de sustrato contribuye al proceso de degradación de sustratos de bosques por lo que es necesario utilizar otras fuentes de sustratos alternos). De esta misma forma. Relación infectividad efectividad versus grado de colonización que estos hongos presenten en el sistema radical. vaporización) del sustrato con el fin de evitar posibles daños por la presencia de microorganismos fitopatógenos que además de ser una fuente de diseminación de enfermedades también pueden influir en la capacidad de los hongos micorrízicos de colonizar el sistema radical. Con ello. 1999. se requiere de la esterilización y/o desinfección (solarización. Características químicas Sin lugar a dudas. Mediante esta sencilla práctica no solo se asegura que la simbiosis se establezca y sea funcional sino también se evita la proliferación de enfermedades de hábito radical que afectan la sanidad. Alarcón y Ferrera-Cerrato. por su parte. Sustrato Como se mencionó en el capítulo de viverismo. no necesariamente los hongos que se establezcan abundantemente (80-90% de colonización).2. pueden inducir mayores efectos. pueden inhibir la simbiosis micorrízica. Abies. se relaciona con la capacidad de los hongos de un inoculante en promover el crecimiento. entendiéndose ésta como el grado de respuesta en crecimiento o nutrición de las plantas por efecto de la inoculación de hongos micorrízicos (expresado en porcentaje). en cualquiera de las variables que se tengan como objetivo. principalmente para los hongos ectomicorrízicos y la mayoría de las especies frutales arbóreas y algunas forestales latifoliadas. independientemente del .2. crecimiento y vigor de las plantas. es necesario tener en cuenta que sustratos altamente ricos en materia orgánica y particularmente fósforo. el sustrato de crecimiento para las plantas tiene relevante importancia en función del contenido nutrimental y características físicas y biológicas. son la capacidad infectiva y efectiva de los inoculantes.son significativamente mayores. Con esto se denota la importancia de utilizar hongos cuya característica principal sea propiciar el mayor beneficio a la planta. caso de pináceas.

3. retención de humedad y disponibilidad de nutrimentos).0 dS m-1. este beneficio de los hongos permite utilizar en forma más racionada los fertilizantes y con ello reducir los costos de producción de plantas.9.8–7. se recomienda utilizar estos productos en dosis menores al 12%. Con base a esto. es importante conocer algunos aspectos considerados como adecuados en la literatura como el pH que debe de ser 5. Fertilización La aplicación de fertilizantes. Aun cuando el uso de estos productos es un aspecto importante de manejo en el vivero.9.1. 2.2. es posible utilizar otros tipos de sustratos. Como materiales orgánicos que pueden ser utilizados se tienen los productos derivados del composteo y vermicomposteo.9. de modo que las plantas en simbiosis puedan aprovechar los nutrimentos durante sus diferentes etapas fenológicas. materia orgánica menor al 2. 1-[(6-cloro 3-pirinidil) metil]–nNitro-2-imidalidimina) y otros insecticidas organofosforados cuya formulación y forma de 54 . 2.9. En el caso de los insecticidas.2. ya que los hongos favorecen el aprovechamiento más eficiente de los nutrimentos inorgánicos contenidos en el sustrato. Aplicación de biocidas En la actualidad es posible encontrar diversos productos de biocidas (plaguicidas) que se venden comercialmente. se eviten problemas relacionados con la disminución de la efectividad de los hongos micorrízicos así como evitar problemas de contaminación ambiental que se generan por su aplicación. cachaza. Además. como los mencionados en el capítulo de viverismo. Como ejemplo de ellos.3. de acuerdo a su acción sobre organismos específicos se pueden clasifican en insecticidas. 2. Manejo de vivero 2.1. se tiene el insecticida sistémico Marathon 1% granular (ingrediente activo: imidacloropird.3. aún cuando se apliquen productos sistémicos. que no sólo afectan la simbiosis. Además. bonote de coco.5. y con ello favorecer la efectividad de la simbiosis micorrízica. sino también a las plantas del vivero. es la aplicación de productos químicos como los fertilizantes y plaguicidas.sustratos con limitación nutrimental de modo que la simbiosis establecida funcione adecuadamente en el aprovechamiento de los nutrimentos existentes y que deben de reflejarse en el buen desarrollo de las plantas. particularmente fosfatados. fungicidas y herbicidas. etc.0% y tener una conductividad eléctrica o contenido de sales menor a 1. Todos ellos pueden afectar diferencialmente a la simbiosis micorrízica. No obstante. Sin embargo.3. el uso de diversos materiales tanto orgánicos como inorgánicos debe de considerar la elaboración de mezclas en proporciones tales.9.2. 2. contenido de fósforo disponible menor de 20 µg g-1 de sustrato. Insecticidas Uno de los aspectos importantes que repercuten en la efectividad de los inoculantes con base en hongos micorrízicos en el incremento de la calidad de las plantas. es mejor utilizarlos en menor proporción y en dosis adecuadas de modo que con ello. puede ser reducida cuando se utilizan los inoculantes de hongos micorrízicos. Composición de mezclas El sustrato debe tener características adecuadas para el crecimiento de las plantas (aireación. estos materiales son muy ricos en materia orgánica y para tener un efecto benéfico por la simbiosis. que permitan a las plantas crecer sin problemas. de acuerdo con la susceptibilidad de los hongos al ingrediente activo así como por su modo de acción (sistémico o de contacto).2. Es posible utilizar fertilizantes de liberación lenta. al parecer su efecto no es perjudicial para el establecimiento y efectividad de los hongos micorrízicos en el sistema radical de las plantas. nematicidas. en el vivero.

principalmente.) G. mientras que se tenga la necesidad de usar fungicidas sistémicos. cuyos efectos han sido reportados como negativos para la simbiosis. es preferible utilizar aquellos funguicidas cuyo modo de acción sea de contacto. Para este caso.1996) y Acacia cyanophylla (Gardezi et al. se toman en consideración aspectos morfológicos de crecimiento y fisiológicos. 2. En muchos de los casos es posible aplicar fungicidas en dosis más bajas (50%) a las recomendadas para cada producto. Incluso se ha evaluado la aplicación de insecticidas de origen orgánico. Don. éstos aparentemente no afectan la actividad de los hongos micorrízicos y se pueden aplicar sin contrarrestar la actividad benéfica de la simbiosis. particularmente de hábito radical. 1988. Catharanthus roseus (L. Thiabendazol. 1988) (Figura 29). Carbaryl y Diazinon.. Kahiluoto y Vestverg. La inoculación con hongos micorrízicos arbusculares ha propiciado efectos significativos en la promoción del crecimiento de plantas como Casuarina equisetifolia (Alarcón y Ferrera-Cerrato 1995. y Eucalyptus sp. Fungicidas Uno de los principales productos utilizados en el control de enfermedades. Sarvamangala et al. estos efectos son diferenciales de acuerdo al tipo de planta propagada y la combinación del hongo micorrízico (arbuscular o ectomicorrízico) que se inocule.9. nim. Shetty. Efecto en crecimiento la morfología y Como aspectos morfológicos y de crecimiento se tienen aquellos relacionados con la inducción de mayor altura. Sylvia. Davies Jr.3.).10. 2000). Pierre)(Bhatnagar y McCormick. comunicación personal). Todas estas variables son modificadas por la aplicación de hongos micorrízicos. Como ejemplo de estos productos se tienen al Temik. et al. Parthenium hysterophorus L y Pongamia pinnata (L.. no se tienen reportes sobre el efecto que tienen las aplicaciones de productos orgánicos (extractos vegetales. 2000) 2. Maneb.. Nematicidas En el caso de los nematicidas. 1997.aplicación no produce daño para la simbiosis (Dr.2. estos deben ser Selectivos (específicos) a ciertos grupos de hongos fitopatógenos como el Previcur en dosis de 0. 2000. De este modo.. particularmente por la proporción de materia orgánica utilizada. En la figura 28a se observa que la adición de 12. Evaluación de la efectividad de los inoculantes La efectividad de los inoculantes puede ser evaluada con base en los efectos benéficos que tienen en las plantas a las cuales se realizó la aplicación.. e incluso calidad de planta y sanidad. No obstante. e incluso combinarse con productos de origen natural. Benomyl.3. Cuando se varía la concentración de 55 . Kahiluoto et al.3. Por otra parte. Se debe tener cuidado de utilizar productos como Captan. como el caso de extractos vegetales (Azadirachta indica L. Clorotalonil.2.9. expansión foliar...15% para el control de Oomycetos como Pythium y que no afecta a la micorriza.5% de vermicomposta en combinación con los hongos micorrízicos.10. Martins et al. asignación de crecimiento a determinada parte de la planta (relación raíz:parte aérea) y acumulación de materia seca. etc. Calotropis gigantea L. así como su capacidad de adaptación a condiciones extremas. Captafol. el desarrollo de la planta se ve potenciado en comparación con el testigo no inoculado.1. Frederick T.2. 1989.) en la colonización y efectividad de los hongos micorrízicos. son los fungicidas. 2. 1989. diámetro de tallo. 1993) y algunos de ellos no tienen efectos perjudiciales en la efectividad de los hongos ( Manjarez-Martinez y FerreraCerrato. En muchos de los casos. 2.. 1996.. de modo que el beneficio de esta simbiosis sea evaluado con base en estas variables (Lovato et al.. la expresión benéfica de los hongos puede ser diferencialmente modificada de acuerdo con la composición del sustrato. Bayleton y Cercobin. área foliar específica.

Plascencia et al.. Zulueta et al. así con aspectos fisiológicos como relación aguaplanta. ya sea con base a la evaluación de altura. Inducción de crecimiento velocidad de Las plantas inoculadas con los endófitos micorrízicos presentan mayor tasa de crecimiento (Figura 28b). se han encontrado en otras plantas de importancia forestal como Leucaena leucocephala. La respuesta a inoculación con hongos arbusculares es superior a los 50 y 100 mg de P kg-1 e igual a lo observado con 150 mg de P kg-1 (Figura 29d). 56 . 1999. 1995. Para corregir el bajo desarrollo de algunas pináceas inoculadas con hongos ectomicorrízicos. arquitectura de la parte aérea y arquitectura de la raíz. morfológicos y fisiológicos.10. se requiere el análisis del costo-beneficio económico de las plantas producidas tanto con simbiosis micorrízica como por aquella obtenida con fertilizantes.10. Calidad de planta producida El concepto de calidad de planta ha tenido en la actualidad gran interés. 2001) En el caso de hongos ectomicorrízicos. 1981. globulus. Fraxinus pensylvanica. Existen criterios para definir la calidad de planta. 2001). Rios. Efectos benéficos de la inoculación con hongos micorrízicos arbusculares. Eucalyptus camaldulensis.vermicomposta al 25%. 2. se recomienda el uso de picomódulos (fertilizante de liberación lenta) considerados compatibles con los hongos simbiontes utilizados en plantas de interés forestal (Figura 29b). este concepto es relativo ya que se pueden presentar variaciones de acuerdo con la especie propagada. potencial de regeneración radical. Por otra parte. nutrición. En el caso de leguminosas arbóreas. liberarla para uso en los programas de reforestación. Cedrella odorata. diámetro del cuello del tallo. etc.2. cociente altura/diámetro. es posible injertar variedades comerciales (en algunos casos) e incluso. sitio donde se va a plantar definitivamente y objetivos de la producción de las plantas (Mohedano.3. se sigue observando el efecto de la micorriza arbuscular comparado con el testigo. Por otra parte. En la figura 29c se observa el efecto de la inoculación de los endófitos micorrízicos comparado con la respuesta del testigo y con el tratamiento en el que se inoculó la bacteria fijadora de nitrógeno del grupo Rhizobium. Cruz.. Eysendhartia polystachia. sin embargo. el viverista tiene ventajas ya que por un lado. la producción de planta micorrizada puede tener menor costo de producción. 2. Así. las respuestas a la inoculación con estos hongos. (Brown et al. pero también se observa respuesta del tratamiento no inoculado a la aplicación de vermicomposta (Figura 29b). Tabebuia donell-smithii. fotosíntesis. su efectividad no sólo se expresa en la inducción de mayor altura. ya que se trata de predecir el éxito de una plantación con base al establecimiento de índices de calidad de planta producida en vivero. sino que también en el vigor y estado nutricional de pináceas como Pinus michoacana (Figura 30a). E. transpiración y cantidad de carbohidratos en cuello del tallo y raíz. García. 2000. pueden ser diferentes de acuerdo con el hospedante al que se inoculan. Para definir bien este ultimo beneficio. Mediante este beneficio aportado por la simbiosis micorrízica. al disminuir el uso y frecuencia de aplicación de fertilizantes. Lyquidambar styraciflua. materia seca acumulada o diámetro de tallo. la inoculación con Pisolithus tinctorius puede ser efectivo en Pinus michoacana y presentar poca efectividad en el crecimiento y desarrollo de Pinus pseudostrobus (Figura 30a y b). 1995. la inoculación con hongos arbusculares incrementa la altura y la biomasa de Acacia cyanophylla. Sidhu y Behl. 1991. los cuales se pueden basar en aspectos morfológicos: altura. se acorta el tiempo de estancia de las plantas en el vivero y por ello.. La calidad de planta involucra aspectos genéticos.

a) b) Glomus intrarradices Glomus Zac-19 Testigo Glomus intrarradices Glomus Zac-19 50:25:25 Suelo: vermicomposta:arena Testigo 12. 57 . Efectividad de hongos micorrízicos arbusculares en la altura de plantas de Casuarina equisetifolia L.5:75 Suelo:vermicomposta:arena c) d) Testigo Rhizobium Glomus Zac-8 + Rhizobium Glomus Zac-8 Testigo 50 ppm P2O5 100 ppm P2O5 150 ppm P2O5 Figura 29. establecidas en dos condiciones de aplicación de vermicomposta (a y b) y en plantas de Acacia cyanophylla con y sin la doble inoculación HMA-Rhizobium (c) y su comparación con el efecto de la aplicación de tres niveles de fertilización fosfatada (P2O5) (d).5:12.

de tal forma que también se puede proceder el tiempo de liberación de la planta a condiciones de campo e incluso. se pueden establecer diversos índices con base en las diferentes prácticas utilizadas en la producción de . inoculación de hongos micorrízicos. En el cuadro 8.a) Testigo Inoculado con esporas de Pisolithus tinctorius Testigo b) Inoculado con esporas de Pisolithus tinctorius Testigo Inoculado con Pisolithus tinctorius + Picomódulo Figura 30. 2. (1960) que expresa la combinación entre la relación raíz:parte aérea-raíz (peso seco) y el índice de robustez que relaciona la altura (cm) y el diámetro del tallo (mm) de la planta: Índice de calidad = Peso seco total de la planta (g) Altura (cm) Diámetro de tallo (mm) + Peso seco parte aérea (g) Peso seco de raíz (g) plantas (podas aéreas. es el aumento de su capacidad de adaptación y tolerancia al estrés que implica su establecimiento en el campo. es el de Dickson et al. Adaptación a condiciones limitantes Una de las ventajas que presentan las plantas que fueron previamente inoculadas con hongos micorrízicos (arbusculares o ectomicorrízicos) cuando son liberadas a condiciones de campo. Promoción del crecimiento y vigor de plántulas de (a) Pinus michoacana y (b) Pinus pseudostrobus inoculados con esporas de Pisolithus tinctorius. denotará mayor calidad de las plántulas producidas en el vivero. Picomóudulos-fertilizante de liberación lenta. De este modo.). se hace mención de algunos efectos benéficos 58 Entre más cercano sea el valor obtenido de la ecuación a la unidad.4. fertilizaciones.10. por ejemplo. en forma de pastilla (García y Ferrera-Cerrato. 1982). Uno de los índices de calidad que es fácilmente calculado y utilizado en pináceas. etc. se puede utilizar para establecer el índice adecuado para efectuar la injertación de variedades comerciales en portainjertos.

la prolongada exposición de estrés hídrico representa una limitante para el establecimiento de plantaciones forestales con fines de rehabilitación de zonas con este tipo de problema. confiere a estas plantas mayor capacidad de adaptación y tolerancia a sales mediante la modificación de su fisiología en función de la síntesis de compuestos orgánicos internos de la planta que propician mayor capacidad de aprovechamiento del agua (prolina. No obstante. de modo a que se favorezca el crecimiento y desarrollo de las plantas propagadas en el vivero.3..4. se deben utilizar preferentemente. el uso de especies forestales con mayor grado de adaptación a esta condición adversa favorece el éxito de la plantación. etc. inocular con hongos micorrízicos arbusculares ecológicamente adaptados a las zonas áridas. 1992). Por otra parte.4. Sin embargo. Estas características contribuyen en la reducción del daño por la condición salina del suelo y que se propicie la adaptación de la planta. puede representar un excelente potencial para este tipo de zonas. el uso de especies con tolerancia a estrés hídrico como algunas leguminosas arbóreas (Prosopis.. especies micotróficas obligadas). Un aspecto importante a considerar es la producción de planta con menor porte en altura y mayor volumen radical. así como su capacidad de adaptación y desarrollo en el sitio. la inoculación con hongos micorrízicos arbusculares. no solo en la reforestación sino que también en su aprovechamiento por el hombre. según el hospedante. también se pueden producir en el vivero. sanidad. solo que en este caso. En este caso. Mimosa.que la simbiosis micorrízica aporta a las plantas establecidas en diversas condiciones de estrés comunes en el campo. Salinidad La condición salina de un suelo produce efectos negativos en el crecimiento de la mayoría de las plantas que comúnmente se producen en el vivero. 59 .10. Eysendhartia. así como favorecer la relación nutrimental que posibilita a las plantas adaptarse a estos ambientes. especies que ecológicamente están adaptadas a este problema edáfico como pinos piñoneros (Pinus cembroides) Salix bonplandiana. otros solutos y trehalosa producida por los hongos). Salix sp. con el fin de obtener plantas más vigorosas y con mayor capacidad de adaptación a las condiciones edáficas mencionadas. entre otras. 2.10. su producción en el vivero debe incluir la inoculación con hongos micorrízicos arbusculares para favorecer su crecimiento.10. plantas nativas del sitio y a la vez. Con base en lo anterior. 1999). nutrición y vigor. es posible realizar diferentes prácticas de manejo (aplicación de mejoradores de suelo tanto orgánicos como inorgánicos) con el fin de propiciar cambios en el grado de acidez o alcalinidad y con ello favorecer el crecimiento de plantas con la capacidad de tolerar dichas condiciones. 2. De este modo.. Casuarina sp. 2. por ejemplo. Leucaena. se presentan condiciones de acidez o alcalinidad que redundan en el pobre y limitado crecimiento de las plantas que en ellos se establecen.2. la sequía representa problemas semejantes a los que se presentan en plantas expuestas a condiciones salinas.1. Al propagar estas plantas en el vivero..4. Tolerancia a condiciones acidez y alcalinidad de En diversos suelos de México. es posible proceder a la inoculación con hongos micorrízicos arbusculares o ectomicorrízicos. Sequía En buena parte. Dada la condición micorrízica y micotrófica de estas plantas (Carrillo-García et al. Casuarina obesa (Sidhu y Behl.

estas cifras son variables en función de la variabilidad ambiental y del 60 tiempo de exposición del suelo a la intensidad de los agentes de erosión. fertilidad pobre Fertilidad pobre Acidez Acidez Sequía.10. 2. metales pesados Acidez Sequía 2. al propiciar la creación de manchones o islas de fertilidad (Carrillo-García et al. 1992. fertilidad pobre Sequía. Especies arbóreas con uso potencial en la recuperación de suelos con posibilidad de inocularlas exitosamente con hongos micorrízicos arbusculares (HMA) o ectomicorrízicos (HECM) en el vivero. alta humedad Sequía Acidez. 2. Desertificación La desertificación es un proceso originado por la actividad de los agentes de erosión e inadecuados manejos agrícolas y minería.Cuadro 8. Allen E. salinidad Alta humedad. en cierta forma.1. 1995) es un aspecto que debe ser considerado al momento de la producción de plantas en vivero. 1999. Álvarez y Ferrera-Cerrato. mientras que por acción del agua es de 1 mm año-1. contribuirán a la expansión de mayor cobertura vegetal y con ello a la restauración de la zona. Con lo anterior.2. la erosión tanto eólica como hídrica contribuye en forma significativa en la pérdida de la capa fértil de los suelos. ya que éstas deben tener características adecuadas que permitan que su tasa de supervivencia sea mayor y se garantice. Sin embargo.4.10.. por lo que la pérdida de suelo puede ser mayor en ciertas zonas. Erosión Sin lugar a dudas. sequía. permite aplicarlos utilizando principalmente plantas consideradas como permanentes y que además sean susceptibles de formar micorriza. Algunas estimulaciones señalan que la pérdida de suelos por acción del viento es de 10 mm año-1 .4. la sucesión vegetal se lleva acabo en forma lenta y se caracteriza por la presencia de especies pioneras y posterior aparición y colonización de especies permanentes (Allen M.4. Nombre científico Tipo de planta Simbiontes micorrízicos HMA HMA HECM HECM HMA HMA HMA HMA HECM HECM HMA HECM HMA Condición de adaptación Acacia spp Acer pseudoplatanus Betula papyrifera Betula pubescens Casuarina equisitefolia Crotalaria anagyroides Fraxinus americana Leaucaena leucocephala Pinus caribbea Pinus cembroides Platanus occidentalis Populus spp Prosopis spp Leguminosa tropical Deciduo Deciduo Deciduo Tropical Leguminosa Tropical Deciduo Leguminosa Tropical Conifera Conifera Deciduo Deciduo Leguminosa Sequía Sequía Acidez. De forma natural. El conocimiento de estos procesos de sucesión. 1999a y b) que a largo plazo. Este proceso se caracteriza por la sucesiva pérdida . 1999). Grado de perturbación El grado de perturbación de los suelos (alteración del estado del suelo debido al impacto de fenómenos atmosféricos y manejo de los sistemas por el hombre.4.4. el éxito de las plantaciones con fines de restauración o rehabilitación de zonas perturbadas.10.4. es posible crear condiciones que favorezcan los procesos de restauración de zonas.

En ambos casos es posible utilizar especies arbustivas y arbóreas como leguminosas (Mimosa luisana. En cualquiera de los casos. Andropogon gerardii. sauces (especies formadoras de ectomicorriza). Así.. La medición de la colonización puede realizarse mediante métodos no sistemáticos y . 2. están la fitodescontaminación y la fitoestabilización en las que se tiene la participación directa de la planta y su microflora rizosférica (Cunningham et al. Por otra parte. representan una posibilidad de disminuir los riesgos de los contaminantes en el suelo. Como alternativas para la recuperación de áreas contaminadas con hidrocarburos o metales pesados. Dickson y Smith. arundinaceae. las especies creciendo cerca de suelos mineros como Festuca rubra. el propósito es identificar si las raíces fueron colonizadas por el hongo y en que cantidad. Contaminación La contaminación del suelo puede ser originada por la deposición de diferentes compuestos tóxicos. ovina. el método más utilizado para evaluar la colonización por hongos micorrízicos arbusculares. sin interferencias. Un proceso de clareo y tinción de la raíz resulta indispensable cuando se han inoculado hongos formadores de micorriza arbuscular. Esta evaluación varía desde una simple observación de las raíces e identificación de la formación de la micorriza. 2. mismas que son susceptibles de ser colonizadas por los hongos micorrízicos arbusculares los cuales confieren ventajas fisiológicas a condiciones de estrés hídrico y temperaturas extremas. biológicas del suelo. Para esto. ya que representa un constante riesgo para el ambiente y para la salud humana. 1998) e incluso con anilina o tinta china (Dr. fucsina ácida (Brundrett et al. Estas alternativas biológicas de remediación tienen como ventaja su bajo costo (comparado con la remediación de suelos mediante técnicas químicas y de ingeniería). Agrostis capilaris. 2000) y algunas gramíneas como Bouteluoa gracillis. es aquél donde se emplea KOH al 10% para eliminar todo el contenido celular.11. F.. tienen la capacidad de formar micorriza arbuscular La magnitud del problema de contaminación en México permite predecir el enorme potencial de los hongos micorrízicos con el fin de expandir su uso práctico en la fitorremediación de suelos contaminados al inocularlos. F. La presencia de los hongos ectomicorrízicos y hongos micorrízicos arbusculares es de vital importancia para el establecimiento de especies arbustivas y arbóreas en suelos contaminados. así como reestablecer la vegetación en estas áreas (Jasper. hasta la cuantificación microscópica basada en métodos específicos ya probados. Acer y Salix (que establecen simbiosis con hongos ectomicorrízicos y micorrízicos arbusculares). Chris Walker comunicación personal).4. Prosopis laevigata.) (Reyes-Quintanar et al. Actualmente este problema ha tenido especial preocupación tanto en nuestro país como en muchas otras regiones del mundo. se recurre a la evaluación de muestras frescas de raíces con crecimiento secundario. así como pigmentos con el fin de observar. 1994). además de tener bajo o nulo impacto ecológico. abedules. así como su aceptación pública para su aplicación. A. que definen la fertilidad del mismo. 61 Ejemplos de éstas son: pinos.. las estructuras fúngicas que son teñidas con azul tripano y con otros colorantes como negro E de clorazol. 1996). Al igual que en las zonas erosionadas.10. no así para el caso de la ectomicorriza donde la cuantificación se realiza directamente. Evaluación micorrízica de la colonización En todos los sistemas donde se aplican los hongos formadores de micorriza es necesario evaluar la colonización. ya sea por hidrocarburos o metales pesados. químicas. Holcus lanatus. 1996. en zonas desérticas es posible implementar procesos de restauración con base al manejo de especies con tolerancia a dichas condiciones y de acuerdo al conocimiento de los procesos de sucesión vegetal. El uso de hongos micorrízicos en la fitorremediación de suelos contaminados.3. etc.de las propiedades físicas.4. stolonifera y Deschampsia flexuosa.

2. Pisolithus tinctorius forma estructuras micorrízicas de color café y Cenococcum geophylum de color negro. para facilitar su tinción (Figura 32). la cual es utilizada por el USDA Forest Service de Georgia. etc.). con este tipo de métodos se cuantifica la intensidad de la colonización y el tipo de estructuras presentes (hifas. pero no proporciona información del tipo de estructuras fúngicas presentes.05% en lactoglicerol (100 mL de ácido láctico comercial. expuesta a calor (a ebullición o en olla de presión a 10 lb) durante 10 minutos. 2. Las raíces se enjuagan nuevamente y se adiciona una solución de HCl al 10% durante 10-15 minutos. por lo que se requiere utilizar otros métodos. El tipo de estructura micorrízica formada (digitiforme. Las raíces se exponen a calor (a ebullición o en olla de presión a 10 lb). las raíces son enjuagadas con agua corriente para después exponerlas a agua oxigenada comercial durante 10-15 minutos. En el caso de la micorriza arbuscular. Pasado este tiempo el ácido se elimina. como es el caso de pigmentación amarilla en raíces de cebolla. 62 El establecimiento de la escala de colonización puede ser ajustada mediante la observación del sistema radical al microscopio estereoscopio en la que se realiza una revisión minuciosa de toda la raíz de la planta (separada cuidadosamente del sustrato de crecimiento) para detectar las ramificaciones y deformaciones de las raíces alimentadoras (feeder roots) inducidas por el hongo ectomicorrízico (Figura 16a-d). su evaluación consiste en determinar si los hongos ectomicorrízicos se establecieron en la planta. 2001). . Métodos no sistemáticos Para la micorriza arbuscular. que de acuerdo con cierto proceso es posible realizarlo en los viveros o preferentemente enviar las muestras a laboratorios especializados para dar un diagnostico más completo en la colonización tanto por hongos micorrízicos arbusculares como ectomicorrízicos (Alarcón. Por ejemplo. durante 10 minutos. arbúsculos. 100 mL de glicerina comercial y 100 mL de agua destilada). Métodos sistemáticos Los métodos sistemáticos conllevan el seguimiento de procesos bien definidos que permiten evaluar cuantitativamente la colonización fúngica en la raíz con mayor precisión. 2. Con base lo anterior. se compara con la arquitectura original del sistema radical de plantas no colonizadas por los hongos (Ferrera-Cerrato. Para el caso de la ectomicorriza. bifurcada. se pueden crear clases subjetivas que consisten en comparar el grado de formación de estructuras ectomicorrízicas en la raíz (Figura 31a-d). ver figura 17). Mediante esta observación es posible estimar el porcentaje de colonización por ectomicorrízicos con base en el tipo y color de la estructura micorrízica que éstos forman. vesículas) por cada segmento de raíz evaluado.11. coraloide. 1993).métodos sistemáticos. los métodos no sistemáticos involucran la revisión subjetiva de la muestra que permite inferir la presencia de hongos micorrízicos arbusculares colonizando las raíces. 11. etc. polifenoles. Este proceso inicia con la exposición de las raíces en una solución de KOH al 10%. repitiendo este paso hasta obtener la raíz libre de pigmentos (taninos. y sin enjuagar. El procedimiento utilizado se basa en aquel que fue propuesto por Phillips y Haymann (1970).1. Esta comparación permite obtener valores numéricos subjetivos en forma de escala. Posteriormente. Esta observación no representa para el evaluador ninguna seguridad de la frecuencia ni proporción del sistema radical colonizado por los hongos. tomando en consideración varias repeticiones para establecer los diferentes grados de colonización. pinnada. las raíces son sumergidas en una solución colorante de azul tripano al 0.

se tiene otro método con base al uso de cajas de Petri con cuadrícula de 1cm2 (intersección de cuadrantes. El método consiste en colocar aproximadamente un gramo de raíces. mediante el establecimiento subjetivo de una escala (0-100 %) que representa la presencia. La caja se coloca bajo el . En cada portaobjetos se montan de 25 segmentos de raíz por cuatriplicado y finalmente. sobre portaobjetos con unas gotas de lactoglicerol. multiplicado por 100: Número de segmentos colonizados (Hifas. Una vez teñidas las raíces. en las cajas de Petri cuadriculadas. Este procedimiento. se procede a calcular el porcentaje de la frecuencia de colonización (Biermann y Linderman. por cualquier estructura fúngica. 1980) y la observación de las raíces al microscopio estereoscópico. 1981). se basa en la observación microscópica de segmentos de raíz teñidos y en ellos. arbúsculos y vesículas). en porcentaje. 1-25% 26-50% 51-75% 76-100% Evaluación de la colonización ectomicorrízica en raíces de pináceas. de las diferentes estructuras ectomicorrízicas en el sistema radical de las plantas hospedantes. Las raíces se distribuyen en el interior de la caja y se les agrega un poco de agua para que no se deshidraten. generado por Giovanetti y Mosse. a la vez de contar los segmentos no colonizados.5 centímetros de largo (procurando que sean las raíces más finas) y se colocan en forma paralela. éstas se cortan en segmentos de 1.0% Figura 31. quedando la preparación lista para su observación al microscopio óptico a objetivo de inmersión 100x (Figura 33). El porcentaje de colonización total se determina dividiendo el número de segmentos de raíz colonizados. arbúsculos o vesículas) ------------------------------------Número de segmentos totales observados % Colonización = x 100 Por otra parte y considerando su rapidez de evaluación. se les coloca un cubreobjetos. previamente teñidas. contabilizar aquellos que 63 presentan estructuras fúngicas (hifas. permite realizar una mejor estimación de la colonización de las diferentes estructuras características de los hongos micorrízicos arbusculares en las células corticales. a pesar de su laboriosidad. y haber procedido a contar los segmentos radicales colonizados o no colonizados por los HMA. entre el número de segmentos totales observados (suma de los segmentos colonizados y los segmentos no colonizados). La determinación del porcentaje de colonización. Una vez realizada la observación microscópica de las raíces.

05% en lactoglicerol. i) cápsulas con raíces teñidas. b) cápsulas de raíces en solución de KOH al 10% . a) corte de raíces y colocación de raíces en cápsulas esterilizadas. se contabiliza el total de raíces colonizadas y 64 el total de raíces no colonizadas y con base en el total de segmentos cuantificados. se estima el porcentaje de longitud de raíz colonizada e incluso el porcentaje de longitud total de la raíz (Figura 34c). se toman lecturas de las intersecciones de las raíces sobre las líneas de la cuadrícula y de aquellas raíces en las que se detecte colonización por los hongos micorrízicos arbusculares. d) cápsulas expuestas a solución de agua oxigenada por 10 minutos. c) b) a) d) KOH 10% KOH 10% 10 libras. Pasos metodológicos de clarificación y tinción de raíces colonizadas por hongos micorrízicos arbusculares. e) enjuague de las cápsulas con agua corriente. Una vez cuantificadas todas las intersecciones.microscopio estereoscópico y se comienza la observación. 10 minutos Raíces teñidas Figura 32. . empezando por las líneas de la cuadrícula horizontal y al finalizar. f) cápsulas expuestas a HCl al 10% durante 10 minutos. 10 minutos H2O2 10% 10 minutos e) f) g) h) i) Enjuague con agua corriente HCl 10% 10 minutos Azul tripano 0. c) cápsulas expuestas a calor por ebullición o sometidas a presión (10 lb) durante 10 minutos. h) exposición de las cápsulas a calor por ebullición o a presión durante 10 minutos. Conforme se hace el recorrido de las líneas horizontales y verticales.05% Tinción con calor 10 libras. siguiendo las líneas de la cuadrícula. g) cápsulas expuestas a solución colorante con azul tripano 0. continuar con las líneas de la cuadrícula vertical (Figura 34). listas para su montaje.

con base al montaje de raíces teñidas sobre portaobjetos: a) colocación de raíces teñidas en cajas de Petri. poro. permite observar la colonización por los hongos micorrízicos arbusculares.) cuya existencia y grado de colonización. b) montaje de raíces en portaobjetos con lactoglicerol. La determinación del porcentaje de raíz colonizada mediante el método de intersección de cuadrantes se calcula mediante la siguiente ecuación: Longitud de raíz colonizada (%) = Total de intersecciones colonizadas (cm) -----------------------------------------------------------------------------Total de intersecciones no colonizadas (cm) X 100 + Total de intersecciones colonizadas (cm) 65 . mientras que no muy es recomendable para raíces de consistencia semileñosa o leñosa (árboles forestales o frutales).b) a) c) ) Figura 33. b) observación de las preparaciones al microscopio de campo claro a objetivo de inmersión 100x e identificación de las estructuras fúngicas intrarradicales. por su dificultad para teñirlas. Este método es recomendable para raicillas de fácil observación (cebolla. etc. lechuga. Evaluación de la colonización por hongos micorrízicos arbusculares en el sistema radical de las plantas.

con una simbiosis micorrízica bien establecida que confiera a las plantas mayor capacidad de adaptación a las condiciones tanto edáfica como climática del sitio.a) Líneas horizontales RM 1 NRT 2 3 3 6 6 6 3 c) / / / / / / / b) 2 3 3 2 4 1 Líneas RM 0 Verticales / NRT 0 3 / 7 5 / 11 2 / 11 4 / 10 1 / 6 4 / 6 0 / 0 Total de raíces micorrizadas (RM) = 35 Total de raíces observadas (NRT) = 80 (35 / 80) x100 = Longitud de raíz colonizada = 43. c) Secuencia del seguimiento de la observación de las cajas de Petri (flechas en dirección vertical y horizontal) para la cuantificación de segmentos colonizados por hongos micorrízicos arbusculares ubicados sobre las líneas de la cuadrícula ( ◊ ). la frecuencia en realización de estas determinaciones dependerá fundamentalmente de los objetivos del viverista. Este método es muy similar al de intersección de cuadrantes descrito para la evaluación de hongos micorrízicos arbusculares (ver Figura 34).7% Figura 34. de modo que con ello se asegure liberar planta. considerando un tiempo mínimo de tres meses para realizarlo. pueden aplicarse a cualquier especie vegetal donde se inoculen los hongos que forman micorriza arbuscular. a los sitios definitivos de transplante. b) Observación al microscopio estereoscópico. El procedimiento del método se lleva a cabo con base a los siguientes pasos: • Las raíces se cortan en segmentos y se colocan en cajas de Petri cuadriculadas (1 cm2) • Las cajas con las raíces se colocan en el microscopio estereoscópico y se realizan evaluaciones de las intersecciones de las . Método de evaluación de la colonización micorrízica por intersección de cuadrantes: a) Colocación de raíces teñidas en caja de Petri con cuadrícula de 1cm2. Ambos métodos descritos. Para cualquier simbiosis. 66 Para el caso de los hongos ectomicorrízicos. ya que en ese tiempo ya es posible encontrar colonización en raíces de plantas forestales leñosas. el procedimiento sistemático para la evaluación de la colonización consiste en contabilizar las puntas con estructuras ectomicorrízicas en las raíces de coníferas (Figura 35).

97% Figura 35. b) observación al microscopio estereoscópico. Método de evaluación de la colonización por hongos ectomicorrízicos mediante el método de intersección de cuadrantes: a) colocación de raíces de coníferas en caja de Petri con cuadrícula de 1cm2.. c) observación de la caja de Petri (en dirección vertical y horizontal) para la cuantificación de la longitud radical y las puntas radicales con estructuras ectomicorrízicas que se sobrepongan a las líneas de la cuadrícula.• raíces en el sentido vertical y horizontal de la cuadrícula Se procede a cuantificar cada intersección de la cuadricula con las raíces y se contabilizan las raíces colonizadas (con presencia de las estructuras ectomicorrízicas) y las no colonizadas • • Los valores se expresan en centímetros cuadrados para cada condición de raíz evaluada Además. 67 . 1996): c) a) b) 75 Raíces sin colonizar 44 Raíces colonizada s Longitud radical total = 119 cm Longitud de raíz colonizada = 44 cm (44/119) x 100 = Longitud radical colonizada = 36. es posible determinar la longitud radical de la muestra con base a la suma del conteo de raíces no colonizadas y raíces colonizadas A continuación se ilustran las estructuras ectomicorrízicas típicas a observar y cuantificar con el método de intersección de cuadrantes (Tomado de Brundrett et al.

su posible actividad fisiológica (fijadores de nitrógeno.12. atribuirse al efecto del hongo micorrízico que incluye el inoculante. no se cuenta con un organismo que regule y evalúe la calidad de los mismos. hongos y actinomicetos que vienen en conjunto con un inoculante micorrízico. se debe acudir a personal especializado que además de cuantificar el número de microorganismos ajenos al inoculante (considerando la especificación del producto). básicamente. Para estudios microbiológicos se requiere del uso de productos sellados de origen.2.). ningún inoculante comercial pueden ser calificado como de alta calidad. El material que queda atrapado en los tamices se recoge en su totalidad y se observa al microscopio estereoscopio y se procede a cuantificar el número de esporas por gramo de inoculante. la suspensión se deja reposar durante unos segundos y el sobrenadante se pasa a través de tamices o mallas calibradas a 500. 2. Calidad biológica inoculantes de los A pesar de la importancia que actualmente tienen los inoculantes microbianos en México. efectos positivos en el crecimiento y desarrollo. cada compañía anuncia lo más apropiado para sus productos y como consumidores solo queda el recurso de aplicarlos y esperar resultados. 2. .12. La separación y el conteo de esporas se realizan un método muy sencillo pero laborioso. De acuerdo con la evaluación de los microorganismos. solubilizadores de fósforo. proceder a la evaluación del inoculante y corroborar si cumple o no con lo que se presenta en la etiqueta del producto. lo cual puede.2. ya que involucra la observación y evaluación al microscopio estereoscópico y en algunos casos en el microscopio óptico. Las técnicas microbiológicas se basan en el uso de medios de cultivo específicos para cada grupo microbiano y evaluar con ello. también pueda dar un diagnostico de la presencia de patógenos. debe realizarse mediante técnicas de laboratorio específicas para Microbiología de Suelos. En tal caso. la cantidad (población) de contaminantes en inoculantes comerciales suele en algunos casos sobrepasar a la cantidad de hongos micorrízicos pudiendo causar efectos negativos sobre la planta inoculada. Cuantificación de esporas El número de esporas en el inoculante micorrízico (hongos micorrízicos arbusculares y ectomicorrízicos) debe ser cuantificado antes de que éste sea utilizado. Dado que se carece de estándares que establezcan la cantidad mínima de propágulos infectivos de los hongos micorrízicos. Un inoculante debe contener una cantidad de propágulos de hongos micorrízicos que permita colonizar la planta y producir con el tiempo.12. Este procedimiento de decantación se repite al menos tres veces. equivocaramente. 250 y 44 micras para capturar las esporas de acuerdo a su tamaño. Es importante recalcar que el conteo de esporas debe ser realizado por personal con experiencia para evitar confusiones y errores en el conteo. de tal manera que se asegure que la colonización micorrízica se lleve a cabo. En este método.12. desafortunadamente. Con base en lo anterior. Para el caso de hongos micorrízicos arbusculares. Evaluación microbiológica de los inoculantes La determinación del número de bacterias. 100 g del inóculo se disuelve con 1L de agua. Evaluación micorrízicos de propágulos 2. etc. la separación del soporte en que van incluidas las esporas se realiza.1. patógenos. y evitar con ello la introducción de otros microorganismos por el manejo de los 68 inoculantes.2. o bien. así como de garantizar que los inoculantes estén libres de organismos fitopatógenos. mediante el método de tamizado y decantado en húmedo (Figura 36).1.

La cámara esta conformada por retículas (cuatro retículas periféricas con 16 cuadros y una retícula central con 400 cuadros).0 mL) / 0. e y f) Observación y cuantificación de las esporas al microscopio estereoscopio. se coloca la preparación en el microscopio óptico. b) agitación de la suspensión. Otra alternativa consiste en colocar la alícuota entre el cubreobjeto y la cámara de Newbauer. lo que equivale en 0. tal cantidad debe ser superior a inocular 1. d) Colecta de esporas retenidas en los tamices.0001 ml. Posteriormente. c) Decantado del sobrenadante y captura de esporas en tamices de malla 520 y 45 micras. Con base en que cada retícula tiene 1 mm2 de superficie y 0. Este tipo de determinaciones se pueden utilizar para generar recomendaciones de la cantidad de producto para aplicar a una determinada cantidad de plantas. La alícuota pasara por capilaridad y con un papel filtro o absorbente se elimina el exceso. 10-8 o 10-9) se colecta una alícuota de 100 µL y se vierte ya sea en una caja de Petri cuadriculada y se observa al microscopio estereoscópico. a) Muestra de suelo (100 g) depositada en 1 litro de agua. Una vez contabilizadas las esporas. . Un método muy sencillo para efectuar el conteo de esporas de hongos ectomicorrízicos se basa en diluciones seriales.1 mm de profundidad.0001 mL]. 1963) utilizado para la extracción de esporas de hongos micorrízicos arbusculares tanto para aislamiento como para cuantificación en muestras de suelo o en inoculantes. y en cada suspensión se agregan unas gotas de Tween 20 al 1% para propiciar la separación de las esporas y su suspensión total en el aproximadamente. Dado que el número de esporas se puede reportar por mililitro.1 mm3. se suma el total de ellas y se divide entre cinco (retículas) para obtener un promedio.1 x 106 esporas por plantas. Método de tamizado y decantación en húmedo (Gerdemann y Nicolson. se procede a calcularlo de la siguiente forma: X=[(número de esporas x 1. Tanto en la retícula central como en las periféricas. Con base a la dilución más alta (10-7. el promedio obtenido es el que se encuentra en 0.a) b) c) d) e) f) Figura 36. se 69 procede a contar las esporas que estén tocando las líneas de la retícula.

aplicación racional de plaguicidas. movilización de fuentes insolubles de nutrimentos. En los últimos años.13. lo cual contribuye en la estabilidad de las comunidades de vegetales que conforman el ecosistema. puesto que se realizan algunas prácticas que favorecen su establecimiento en el sistema radical como la esterilización o desinfección de recipientes. modificando el desarrollo y función de las raíces para mejorar la absorción de agua y nutrimentos y contribuir en el control de microorganismos patógenos. Myrica. Bacterias fijadoras de Nitrógeno De acuerdo con diversas investigaciones reportadas en la literatura. se ha podido establecer el efecto benéfico que tiene la doble inoculación hongo micorrízico arbuscular-bacterias fijadoras de nitrógeno atmosférico. La doble simbiosis en leguminosas forestales con propósitos de regeneración o conservación de suelos. Además la extensa red de hifas. el uso de fórmulas fertilizantes de lenta liberación o en bajas dosis. por lo 70 que tienen mayor capacidad de aprovechar N y P contenido. Colletia. Las leguminosas herbáceas y semileñosas suelen presentar micorriza arbuscular. Purshia. 2000). Discaria. 2. Dryas y Coriaria pueden establecer simbiosis con los tres simbiontes al mismo tiempo: actinorriza. Los efectos de estas interacciones sobre la planta se manifiestan en la nutrición y crecimiento del . Algunos como Casuarina. Comptonia. micorriza arbuscular y ectomicorriza. presentas otras importantes actividades fisiológicas como fijar nitrógeno atmosférico.13. El éxito de la introducción de estas bacterias y de los hongos micorrízicos en la propagación de plantas en el vivero es seguro. mediante la secreción de sustancias antibióticas. Bacterias crecimiento promotoras de El término bacterias promotoras de crecimiento es aplicado a aquellas bacterias del suelo capaces de colonizar las raíces de las plantas y estimular el desarrollo de las mismas. Esta simbiosis se establece en 20 géneros de especies vegetales que en su mayoría son árboles y arbustos de vida perenne. envases y sustratos.13. a través de la síntesis de reguladores del crecimiento como el ácido indolacetico (AIA) (Azcon. Muchas de éstas bacterias. sobre todo en especies de lento crecimiento. El establecimiento de ambos microorganismos en las leguminosas se establece a los pocos días de la inoculación y al parecer no existe competencia entre el hongo y la bacteria por los puntos de colonización dando como resultado mayor crecimiento en el hospedante. Dalea bicolor. se da en plantas no leguminosas que forman nódulos en la raíz y a la asociación con actinomicetos del género Frankia (actinorriza). Robinia sp. no solo beneficia a la planta originalmente inoculada sino también a otras plantas que cohabitan en el mismo sitio. Interacción con otros microorganismos benéficos 2. mientras que Alnus. que explora el suelo y transloca nutrimentos. Es posible disminuir considerablemente los requerimientos nutrimentrales suministrado mediante fertilización química (Azcon. pues establecen simbiosis con Rhizobium y hongos micorrízicos. Hyppophae.1.2. además de promover el crecimiento vegetal. mientras que algunas leguminosas arbóreas pueden presentan ectomicorriza (Cuadro 7). mismos que repercuten en los beneficios tanto planta como a los simbiontes. Un tipo de planta que resulta beneficiada de este tipo de asociaciones son las leguminosas.1. Ceanothus. Prosopis laevigata. 2000). Eleagnus. y Leucaena leucocephala mayor adaptación y supervivencia en condiciones edafológicas y climáticas adversas. es una alternativa que permitiría a algunas especies como Acacia schaffneri. Otra interacción importante de la micorriza con fijadores de N. pudiendo actualmente formularse recomendaciones para su uso en los viveros.1. se ha incrementado la información de los beneficios de estas bacterias. así como hacer el seguimiento del contenido de humedad. Robus y Dastica además de asociarse con Frankia establecen simbiosis con hongos micorrízicos arbusculares.

. Algunas de éstas producen compuestos que inmovilizan nutrimentos (Fe) que los hongos patógenos utilizan para su nutrición. disminuyendo así la población de los mismos por efecto de competencia (Crowley. putida.1.3. Lara et al. Estas bacterias.1. impidiendo que la población de patógenos se convierta en un problema. donde las bacterias no patogénicas. aguacate.13. capulín.2. ya que producen hormonas del crecimiento como citocininas.13. Por último. además de Agrobacterium y otras cuyo efecto antibiótico no afecta a la micorriza sino que en ciertas ocasiones favorecen la germinación de las esporas o estimulan el desarrollo del micelio hacia la raíz. Las bacterias solubilizadoras de fosfatos (fosfobacterias) de algunos géneros como Pseudomonas y Agrobacterium facilitan el aporte de fósforo a la planta mediante algunos mecanismos como la secreción de enzimas fosfatasas que permite que el fósforo se haga disponible a la planta. aile y muchas otras de interés hortícola. Bacterias solubilizadoras de fósforo y productoras de reguladores del crecimiento vegetal Existen bacterias que han mostrado actividad antibiótica a hongos patógenos son Pseudomonas fluorescens y P. con mínima fertilización química. Existen muchos ejemplos del efecto conjunto en el crecimiento de las plantas por el empleo de los hongos micorrízicos y estas bacterias promotoras en limonero. giberelinas y ácido indol-acético además de algunas vitaminas y otras sustancias que inducen el crecimiento vegetal. 1998a y b). Otra forma incluye la competencia por nutrimentos en la raíz. son más competitivas. 2001). este tipo de bacterias no han sido inoculadas ni evaluadaspoco se les ha asociado con especies forestales y mucho menos en combinación con hongos micorrízicos arbusculares. pueden ser también promotoras de crecimiento. 1998. la fijación biológica de N también la realizan bacterias de vida libre (diazotrofos). 2. por lo que pueden usarse conjuntamente. Cuando estas bacterias son inoculadas en combinación con hongos micorrízicos la captación de este elemento aumenta y se promueve considerablemente el crecimiento de la planta. 71 . sin embargo. 2. Bacterias antibióticas El control de ciertos patógenos del suelo puede también lograrse con el empleo de bacterias (Lara.hospedante. por lo general.

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y su calidad se verifica en función de la evaluación de su efectividad en plantas indicadoras. Carretera México-Texcoco km 35. etc). así como instituciones gubernamentales. Ronald Ferrera-Cerrato Área de Microbiología. capacidad antibiótica a hongos fitopatógenos. así como de no llevar consigo microorganismos fitopatógenos.1.2. Evaluación de la efectividad de los inoculantes micorrízicos.3. Montecillo 56230.3. Instituto de Recursos Naturales. SERVICIOS REQUERIDOS 3.mx 3. Este proceso se realiza. acudir a: Dr. Estado de México) tiene la infraestructura necesaria para desarrollar programas de servicio y asesoría para las diferentes instancias productoras de plantas en vivero. solubilización de fosfatos inorgánicos insolubles. básicamente en la promoción del crecimiento 73 • . presencia de bacterias con diferente capacidad fisiológica (fijación de nitrógeno en vida libre. Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas. Para solicitar este tipo de servicios. las siguientes pruebas realizadas con base al seguimiento de los protocolos establecidos en el Área de Microbiología: • Microbiológicas: pruebas de patogenicidad (bacterias y hongos). Servicio de microbiológica en inoculantes evaluación plantas e La evaluación de la calidad de los inoculantes comprende de manera general.colpos.5. por lo menos con seis meses con de anticipación. 3. Tel-Fax: + 5 9520287 correo electrónico: ronaldfc@colpos. etc. Abastecimiento de inoculante previa programación La producción de inoculante puede ser generada por sistemas de producción con base a la programación en la que se contemplen los futuros requerimientos de los viveros. estado de México. Instituciones nacionales pueden dar servicio que • • Pruebas de viabilidad de esporas de hongos micorrízicos Evaluación de la colonización de hongos micorrízicos en el sistema radical de las plantas inoculadas El Área de Microbiología de Suelos del Instituto de Recursos Naturales del Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas (Montecillo.