CUADRO COMPARATIVOS TIPOS DE PCR

PARÁMETROS
TIPO DE ETAPAS
MG
PCR MOLD TIPO DE TIPO DE
dNTP’S CL DESNATURALIZ HIBRIDACIÓN EXTENSIÓN Consideracio Aplicación
E POLIMERASA CEBADOR
2
ACIÓN nes
Se emplea para Durante este paso la La enzima -Finamente se -Clonación de
romper temperatura polimerasa puede secuencias de
completamente la disminuye para incorpora visualizar el ADN en
estructura permitir que los nucleótidos ADN a partir vectores, como
secundaria del cebadores se unan complementari de pueden ser los
ADN molde. por os a partir de 3´ electroforesis plásmidos.
se lleva a cabo complementariedad oh libre de la en gel. -Secuenciación
Un par de elevando la t° al ADN molde y está región en la que -
cebadores alrededor de 94 °C basada en la han hibridado - Genotipificación
Por lo general 1 ADN polimerasa que deben durante un minuto. temperatura de fusión los cebadores Conservación: -Ciencias
uL a una Taq polimerasa contener de de los primers (Tm) y y empieza su a corto plazo a forenses
concentración de (mayor preferencia 6 a 40 puede estar entre 45 función temperaturas (filiación)
PCR
10 mM. Mg por su nucleótidos a 68°C. Este paso se catalítica a una de 4-15°C. -Medicina
CONVENCIO DNA
Contienen de 40- +2 termoestabilidad) pero da durante 45 velocidad muy (Detección de
NAL
60% de G-C Temperatura de normalment segundos aprox. rápida; creando enfermedades,
generalmente máxima actividad 75- e de 18 a así cadenas mutaciones).
amplicones del 80°C 25 completas de
100-150 pb ADN. Se lleva a
. cabo a una
temperatura de
70 a 74°C
comúnmente
72°C durante 2
minutos.

Se emplea para Durante este paso la Síntesis de la -Se añaden a -Cuantificación :

romper temperatura nueva cadena la mezcla 1. Absoluta: En
completamente la disminuye para de ADN sondas que se base a
estructura permitir que los generando así unen estándares.
secundaria del cebadores se unan dos copias del únicamente a 2. Relativa:
Par de
ADN molde. por adn inicial esta secuencias basada en la
cebadores.
PCR Generalmente ADN polimerasa se lleva a cabo complementariedad etapa se específicas cuantificación
DNA, Mg Oligonucleó
TIEMPO amplicones del Mas conocida Taq elevando la t° al ADN molde y está ejecuta una vez del ADN por por
DNAc +2 tido de 18-
REAL 100-150 pb polimerasa alrededor de 94 °C basada en la dada la amplificado estándares de
25
durante un minuto. temperatura de fusión hibridación la para que un gen de
nucleótidos
de los primers (Tm) y polimerasa emitan referencia.
puede estar entre 45 empieza a fluorescencia -
a 68°C. Este paso se sintetizar la en el genotipificación
da durante 45 nueva hebra de momento en -Detección de
segundos aprox. En ADN que se vaya OMG(organism
 punto intermedio del agregando amplificando os
gen se une una sonda dNTPs el ADN. genéticamente
que tiene un correspondient - En la modificados).
fluoróforo reportero + e en dirección mayoría de -Determinar la
apagador(mientras la 5’-3’ a su paso los casos es cigosidad
sonda este integra el se topa con la necesario un (homocigoto o
apagador absorbe la sonda termociclador heterocigoto)
señal del fluoróforo). degradandola y con sensores
separando el de
fluoróforo del fluorescencia.
apagador y así - Esta PCR se
la señal puede efectúa en la
ser detectada mayoría de
al final del ciclo los casos
dando un después de la
indicio de que RT-PCR.
ocurrió una -Se emplean
amplificación. sondas como
SyberGreen
(inespecífica y
bajos costo) y
sonda
Taqman (alta
especificidad
y alto costo).
Se calienta la A lo anterior se le Se agrega la -Detecta un -Amplificación
mezcla de agrega una mezcla transcriptasa número muy exponencial.
ARN+primer+dNT (9uL) de inversa bajos de -Métodos de
P’s a 65°C por 5 buffer+MgCl2+DTT+ específica copias detección
minutos separando RNasaOUT y se (manteniendo (altamente molecular de
la hebra. Enfriar en incuba a 42°C por 2 en hielo) e sensible). genes para
hielo por 2 minutos minutos. incubar a 42°C - Para estudiar el
y mcricentrifugar por 50 minutos completar la genoma de
para sedimentar el y agregar amplificació Virus de ARN.
ARN. RNasa H e n se debe -cuantificación
RNA y
Generalmente 1 incubar a 37°C de la expresión
posteri Transcriptasa inversa proceder a
uL a una Mg por 20 minutos. génica
RT-PCR ormen y a su vez enzimas oligo dt efectuar
concentración de +2 Se puede (combinada con
te RNasa una PCR
10 mM. almacenar el la Northern
DNAc convencion
ADNc blot).
resultante en al. - Ha permitido
congelación insertar genes
para una Eucariotas en
posterior PCR organismos
convencional. procariotas. (ya
que genera
ARNm formado
únicamente por
exones ).
 -Aplicaciones
clínicas como :
diagnóstico de
tumores ,
respuesta a
medicamentos
en cánceres.
-Genotipado (
diferenciación
de alelos y
detección
polimorfismo).
-Detección del
SARS- CoV 2

- -Detectar un
LAMP(amplific amplio espectro
4o6 ación de dianas
cebadores. isotérmica incluyendo :
incluidos mediada en Proteínas
dos No existen variantes en los procesos fundamentales de las plazo) ,células,
cebadores tres etapas teniendo en cuenta esta PCR con la PCR Tolerantes a moléculas
externos, convencional. los inhibidores pequeñas e
Generalmente 1
uL a una
ADN polimerasa Bst sentido y Cabe resaltar la ejecución de una sola temperatura (60- dura 30 min iones.
(actúa con antisentido 65°C) durante todo el proceso. -Resultados -la amplificación
PCR DNA concentración de
Mg (F3 y B3), positivos a isotérmica junto
ISOTÉRMIC RNA 10 mM.
+2 una temperatura dos partir de los 15 a la
A DNAc constante de 60 a cebadores minutos lo cual nanotecnología
Ribonucleótidos
trifosfatados 65 °C) internos permite decidir ha surgido
(FIP y BIP), acciones como una
y dos correctivas. alternativa
cebadores -Se optimiza el prometedora
de tipo proceso de en:
bucle (LF y amplificación biosensores,
LB). al emplear bioimágenes y
más de un par nanomedicina.
de cebadores.
Se emplea para Se da de la misma La enzima Uso de un -Secuenciación
romper forma que en una polimerasa termociclador -Clonación
Un par de
completamente la PCR convencional incorpora de gradiente. -Medicina
ADN polimerasa cebadores
Generalmente 1 estructura con la variación en su nucleótidos
Taq polimerasa que deben
uL a una secundaria del temperatura en este complementari
(mayor preferencia contener de
concentración de ADN molde. punto; La idea es os en lla región
PCR DE Mg por su 6 a 40
DNA 10 mM. se lleva a cabo optimizar la ™, para en la que han
GRADIENTE +2 termoestabilidad) nucleótidos
generalmente elevando la t° ello se aumentará la hibridado los
Temperatura de pero
amplicones del alrededor de 94 °C temp de 5°C en 5°C cebadores,
máxima actividad 75- normalment
100-150 pb durante un minuto. desde 45°C hasta creando así
80°C e de 18 a
llegar casi a la Tm cadenas
25
calculada (óptima). completas de
ADN. Se lleva a
 cabo a una
temperatura de
70 a 74°C
comúnmente
72°C durante 2
minutos.

Referencias
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utilizan-para-detectar-el-coronavirus
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9. Chirinos-Arias, M. 2015. Guía práctica de PCR en tiempo real. Figshare. http://dx.doi.org/10.6084/m9.figshare.1417599

Presentado por:
Jennifer Gutiérrez
Juan Sebastian Santofimio
Martha Carvajal
Nayua Daza