Facultad de Ciencias Naturales e Ingeniera

Departamento de Ciencias Bsicas

Qumica Orgnica
Gua de laboratorio No. 7
Santiago Snchez Castaeda. Angie Alejandra Montoya Ramrez

LABORATORIO 7: SEPARACIN DE AMINOCIDOS POR CROMATOGRAFA EN

PLACA FINA

OBJETIVOS
Llevar a cabo la separacin de aminocidos por medio de las cromatoplacas de fase estacionaria celulosa,
siendo la fase mvil el eluyente que fue una mezcla de solventes butanol-acetona-cido actico-agua
(28:28:6:18). Se utilizaron para esto 17 aminocidos, divididos en dos grupos de trabajo, donde el grupo
A tuvo ocho, y el B tuvo nueve, adems de la muestra problema.
Comprender los mecanismos y principios de la cromatografa en placa fina identificando los diferentes
aminocidos de una muestra de mandarina, a travs de la comparacin de los diferentes valores de relacin
de frentes.

RESUMEN
En esta prctica se realiz una de las tcnicas ms sencillas para identificacin de aminocidos que fue la
combinacin de la cromatografa en capa fina con la reaccin de la ninhidrina con la cual se pueden identificar
los aminocidos por el teido de color morado que se presenta en ellos, excepto con la prolina la cual, da un
tono amarillo al reaccionar con la ninhidrina debido a que no produce amonio al reaccionar con ella, lo que
indica que los dems aminocidos que si presentaron esta reaccin.

ANLISIS DE RESULTADOS

Para la prueba realizada de reconocimiento de aminocidos, nos corresponda la siembra de la parte A de los
aminocidos, de los cuales se tuvo el siguiente resultado.

En donde la numeracin corresponde a:

1. Tirosina
2. Valina
3. Fenilalanina
4. Lisina
5. Metionina
6. Glicina
7. Triptfano
8. Treonina
El numero 9 corresponde a los
aminocidos desprendidos de la
muestra de mandarina.

Por otra parte parte se hizo tambin el anlisis a la siembra de la parte B

correspondida a otro grupo de trabajo, de las que se obtuvieron los
siguientes resultados:

La clasificacin de los aminocidos en esta placa esta dada por:

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a) Serina
b) Arginina
c) Acido glutmico
d) Prolina
e) Leucina
f) Asparragina
g) Isoleucina
h) Histidina
i) Alanina
La letra J pertenece al desprendimiento de aminocidos de la muestra de mandarina

Hay que tener en cuenta que los aminocidos estuvieron disueltos en una solucin de metanol agua 1:1 y el
extracto de jugo de mandarina en etanol, lo cual pudo afectar los Rf y la distancia recorrida por los aminocidos.

Para la extraccin en capa fina, se utilizo una fase estacionaria de celulosa y una fase mvil de butanol-acido
actico- agua en proporciones 28:28:6:18. Adems se observo que se desprendieron de la muestra de mandarina
7 aminocidos. Al medir la distancia de cada aminocido y de la distancia total recorrida por el solvente se
obtuvieron los siguientes datos

DISTANCIA DISTANCIA
AMINOCIDO RECORRIDA DE RF
(cm) SOLVENTE
TIROSINA 3 7,3 0,41
VALINA 3,2 7,3 0,44
FENILALANINA 4 7,3 0,55
LISINA 1,1 7,3 0,15
METIONINA 3,4 7,3 0,47
GLICINA 1,3 7,3 0,18
TRIPTFANO 3,6 7,3 0,49
TREONINA 1,8 7,3 0,25
SERINA 1,4 7,3 0,19
ARGININA 1,2 7,3 0,16
ACIDO GLUTMICO 2,2 7,3 0,30
PROLINA 2,7 7,3 0,37
LEUCINA 4,6 7,3 0,63
ASPARRAGINA 1,6 7,3 0,22
ISOLEUCINA 4,6 7,3 0,63
HISTIDINA 0,9 7,3 0,12
ALANINA 2,4 7,3 0,33
Se desprendieron de la muestra de mandarina 7 aminocidos.
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Al revisar varios informes realizados con practicas similares se determino que los valores de la relacin de frentes
de los diferentes aminocidos son muy cercanos, lo cual nos da un indicio de que la prueba estuvo bien
realizada(MANCILLA, CASTREJN, BLANCO, & y PREZ, s.f.)

REACCIN DE LA NINHIDRINA PARA LA IDENTIFICACIN DE AMINOCIDOS

Para todas las reacciones de identificacin de aminocidos con este compuesto, se sigue el mismo proceso de
reaccin, es decir, todos los aminocidos (con aminas primarias y secundarias en la estructura) reacciona igual;
Con la nica diferencia en la coloracin segn el grado de la amina que este en su estructura. Aminas
primarias: Violeta Aminas secundarias: Amarillo

Figura 1. Reaccin general para la identificacin de aminocidos con ninhidrina.

La figura 1 muestra los pasos dados por combinacin de la ninhidrina con los aminocidos, empezando por la
reaccin de los dos compuestos para formar el primer intermedio (2), seguido a esto, el mismo se descarboxila y
se deshidrata para formar el in dipolar (3), el cual se hidroliza para dar paso a la formacin de la amina del
aminocido correspondiente (4), para que dicha amina se condense con la otra molcula de ninhidrina para
formar el complejo de color violeta o prpura de Ruhemann (5).

Reaccin con Aminocido de clase

En la figura 2 se ilustrar los pasos por los cuales nuestro aminocido utilizado en la prueba de laboratorio
result positivo para aminocidos. (Coloracin prpura)

Figura 2. Reaccin de identificacin entre la -Alanina y la ninhidrina. (Lellar, s.f.)

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Figura 3. Muestra los aminocidos vistos en clase, con su estructura y abreviatura, adems de su carcter polar.

La migracin posible de los aminocidos presentes en la muestra problema, en orden ascendente fue:

Muestra problema (Rf) Posible A.A #1 Posible A.A #2

0,06 Tiempo muerto Tiempo muerto
0,13 Histidina Rf: 0,12 Lisina Rf: 0,15
0,2 Asparragina Rf: 0,22 Glicina Rf: 0,18
0,27 Treonina Rf: 0,24 Acido glutamico Rf: 0,30
0,32 Alanina Rf: 0,32
0,43 Valina Rf: 0,43
0,57 Fenilalanina Rf: 0,54

La explicacin para que la fase mvil polar arrastrara consigo a los componentes apolares, lo cual esta errneo,
es debido a que los aminocidos antes de la practica se diluyeron en Metanol-Agua 1:1, as que posiblemente el
disolvente arrastr consigo a estos aminocidos por que era muy a fin a su dilucin.

Al determinar los factores de retencin se puede observar que el fenilalanina es el que mayor factor de retencin
obtuvo, esto debido a que es el que tiene mayor afinidad por el disolvente, as sean de polaridad diferentes,
recalcamos que posiblemente ocurri eso por la dilucin hecha anteriormente a los aminocidos, y el de menor
factor de retencin fue la histidina, es decir, tuvo menor afinidad por el disolvente. (MANCILLA,
CASTREJN, BLANCO, & y PREZ, s.f.)

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CONCLUSIONES

Se logr concluir que el factor de retencin de los aminocidos varan tanto por su carcter polar o no,
como por factores previos como diluciones, combinaciones etc. Como se pudo evidenciar en donde el
compuesto mas apolar fue arrastrado ms por el disolvente polar, por la dilucin hecha antes.

Se evidenci que el nico aminocido que no libera amoniaco para la formacin del prpura de Rohemann,
era la prolina, debido a que su nitrgeno esta ciclado, es decir, es una amina secundaria para la cual esta
prueba arroja un resultado de coloracin amarilla.

Se evidencio visualmente y tericamente que el tiempo de retencin y la distancia recorrida depende de

la afinidad polar de la muestra con la fase mvil y la fase estacionaria, pudiendo de esta manera y gracias
a esta caracterstica, la identificacin de los diferentes aminocidos en la muestra de extracto de mandarina
con la comparacin de los valores Rf obtenidos.

BIBLIOGRAFA

Lellar. (s.f.). Aminocidos y proteinas. Recuperado el 14 de 05 de 2016, de Monografias:
http://www.monografias.com/trabajos96/aminoacidos-y-proteinas/aminoacidos-y-proteinas.shtml

MANCILLA, C. G., CASTREJN, C. R., BLANCO, E. Z., & y PREZ, S. L. (s.f.). Scribd. Recuperado el 14
de 05 de 2016, de www.scribd.com: https://es.scribd.com/doc/16675140/3-CROMATOGRAFIA-DE-
AMINOACIDOS