VERIFICACIÓN DE LA TRANSFORMACIÓN GENÉTICA DE E.

coli

La transformación genética consiste en la captación de ADN libre en el medio, producto de lisis celular,
el cual va a ser captado por una célula receptora con homología significativa para llevar a cabo una
recombinación con la finalidad de que la célula huésped (competente) adquiera una nueva
característica (transferencia horizontal).
En el momento de inserción del ADN a la célula competente su doble cadena va a ser captada por
proteínas específicas de unión y por consiguiente penetra a la célula, pero en algunos casos las
nucleasas degradan una de las dos hebras del ADN, ingresando la restante a la receptora. Este se
recombinará con el ADN nativo homólogo de la célula por medio de las proteínas RecA y otras
moléculas, de no ser así será degradado en el citoplasma. El ADN nativo separado no se replica y al
final se degrada.
En el caso de que la secuencia del ADN donante como la del ADN receptor tengan diferencias en sus
regiones, estas serán “reparadas” con el fin de buscar la homología o complementariedad entre sus
bases.
Alternativa para la verificación del establecimiento del material genético externo
Se considera establecer 2 serotipos de una bacteria, observando una característica propia de cada una
de ellas; serotipo A es termosensible (<60°C) y el serotipo B es termorresistente (<100°C), propiedad
codificada por el gen MJSY1. Se desea transformar al serotipo A, volviéndolo termorresistente. El
serotipo B se cultiva en medio líquido (lisozimas) que permite la lisis celular por medio de procesos
mecánicos como es el caso de la ultracentrifugación o centrifugación y este proceso se hace bajo
condiciones de bajas temperaturas (4°C) con el fin de inactivar la acción de las nucleasas. Así se
obtiene como resultado la sedimentación de los restos celulares y el ADN libre se mantiene en
suspensión, el cual contiene el fragmento específico con nuestro gen de interés (MJSY1). Según lo
anterior el serotipo B se convierte en célula donante. El ADN libre de la célula donante se transfiere al
cultivo de las células del serotipo A que en este caso serían las células receptoras, anteriormente
sometidas a un proceso de competencia. Una vez realizado esto se encuentra que; el ADN de la célula
donante en el medio extracelular junto a las bacterias del serotipo B en el mismo medio de cultivo, lo
cual facilitará la penetración o inserción del ADN donante a la célula receptora, lo que continuará con
el debido proceso de transformación y recombinación del material genético. Se verificará el éxito en la
transformación de la célula receptora mediante el sometimiento de un cultivo (anteriormente incubado
en condiciones normales (37°C)) de estas, a temperaturas mayores a 70°C, con la finalidad de observar
la resistencia de la bacteria del serotipo A a altas temperaturas.

Presentado por:
Jennifer Gutiérrez
Martha Carvajal
Nayua Daza
Sebastian Santofimio