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PRÁCTICA N° 11

ELABORACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y PREPARACIÓN


DE CULTIVOS BACTERIANOS
COMPETENCIA
 Identifica los principales componentes para la elaboración de los medios
de cultivo para bacterias y hongos.
 Emplea técnicas para la elaboración de medios de cultivo sólido y
líquido, y técnicas de aislamiento y manejo de microorganismos.
 Comprenden la importancia de los microorganismos en las actividades
del hombre.

I. INTRODUCCIÓN
A través de la historia las aplicaciones biotecnológicas de los microorganismos
han sido documentadas; desde la fermentación de granos de cereales para
producir una bebida alcohólica (Norte de Mesopotamia en 5400 aC), el inicio de
la producción del vino (en Grecia en 5000 aC), la producción del pan con
levadura (en Egipto en 2000 -1200 aC) hasta la producción a gran escala de la
penicilina por Fleming (Reyno Unido en 1940), el desarrollo de procesos
industriales basados en microorganismos (en Francia al final de la Segunda
Guerra Mundial), la manipulación genética de microorganismos (iniciado en
Francia en 1980), el descubrimiento de organismos promotores de crecimiento
vegetal (Estados Unidos en el 2016), etc.; los microorganismos tienen una gran
aplicación en la industria de alimentos (Ostos et al., 2019). Asimismo, las
bacterias, hongos, archeas tienen una gran aplicación en la agricultura,
medicina, el ambiente, procesos mineros, entre otros.

Para el estudio de microrganismo es necesario la manipulación de éstos


usando medio de cultivo adecuados. Los medios de cultivo pueden encontrarse
en estado sólido, semisólido o líquido, según su contenido en agentes
solidificantes; y contienen una solución de nutrientes que permite el desarrollo
de microorganismos; consta de un gel o una solución que cuenta con los
nutrientes necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y
temperatura, el crecimiento de microorganismos y según lo que se quiera hacer
crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones.

Estos medios de cultivo permitirán la propagación de microorganismos


(bacterias, cianobacterias, microalgas, protozoos, levaduras y hongos
filamentosos) con fines de estudio, o aplicaciones industriales.
II. OBJETIVOS
 Preparar un medio de cultivo sólido y líquido empleando materiales e
insumos caseros y cultivar bacterias provenientes de superficies
ambientales
 Preparar un medio de cultivo sólido a base de avena y cultivar hongos
provenientes de superficies vegetales.
 Observar los microorganismos que se desarrollarán en los medios de
cultivo e interpretar las observaciones.

III. MATERIALES
Se presenta a lista de materiales que se requerirán en la presente
práctica.
Para la preparación del cultivo
Otros
bacteriano
 Un sobre de gelatina sin sabor  Pinzas de metal o de madera
(20 g)  Agua y jabón a disposición
 Un cubito de caldo (Maggy)  1 litro de agua
 5 a 6 envases achatados de  Cacerolas, cocina y refrigerador
vidrio con tapa  Papel toalla
 Un litro de agua  Film
 30 g Avena  Periódico o papel de aluminio
 Una rama de planta infectada  Marcador indeleble o rotulador
 Azúcar
 Sal

Implemento de Bioseguridad:
- Debido al uso de medios de cultivo y manipulación de muestras biológicas,
se recomienda el uso de mascarilla.
- Contar con un aspersor de alcohol al 70% para uso constante en la
desinfección de las manos.
- Tener a la mano un mantel limpio húmedo y otro seco, en caso se requiera
su uso.
- Desinfectar con agua con lejía o alcohol la superficie de la mesa donde se
realizarán los procedimientos
- No se recomienda uso de guantes de látex cuando se trabaja cerca al
fuego.
- Mantener alejado del fuego todas los materiales o sustancias inflamables.

IV. PROCEDIMIENTO
a. Preparación de los medios de cultivo

1. Disponga de un espacio adecuado y limpio para realizar la práctica.


Tenga a la mano un mantel limpio humedecido.
2. En un recipiente (cacerola) colocar 250 mL (1 vaso) de agua y agregar
un cubito de caldo y una proporción muy pequeña de sal, agitar hasta
conseguir que se disuelva completamente y agregar otros 250 mL de
agua (1 vaso), y coloque en fuego hasta el punto de ebullición.
3. Separe la mitad de este contenido en un recipiente estéril y dispense en
dos o tres frascos de vidrio estériles.
4. Sobre la otra mitad que quedó del caldo agregar 5g (cuarta parte del
sobre) de la gelatina sin sabor y disuelva completamente. Luego retirar
del fuego y distribuir en tres o cuatro envases de vidrio.
5. Agar-avena: En otro recipiente colocar 250 mL (1 vaso) de agua y
agregar 10 g de avena y una proporción muy pequeña de azúcar, agitar
hasta conseguir homogenizar completamente, dejar hervir por 15
minutos. Agregar 5g de gelatina sin sabor y disolver completamente.
Retirar el recipiente del fuego y dispensar el contenido en tres o cuatro
envases de vidrio.
6. Rotular con cada frasco anotando la fecha de inicio, nombre del
estudiante y nombre del medio de cultivo
7. Asegurarse de que todos los recipientes estén bien cerrados y dejarlos
enfriar al ambiente por 20 a 30 minutos; luego colocarlos en
refrigeración.
Esterilización de los frascos y/o recipientes de vidrio.
 Colocar en una cacerola suficiente agua (500 mL) y disponer dentro del
recipiente todos los frascos con tapa (ligeramente abiertos) que se
emplearán en el presente ensayo; incluir un frasco extra conteniendo 10
hisopos con puntas de algodón. Colocar la cacerola al fuego de la cocina
y permitir la ebullición por 10 a 15 minutos.
 Extraer los frascos y asegurarse que estén bien cerrados, dejarlos
enfriar al ambiente.

b. Cultivo de microorganismos en medio sólido y líquido.

1. Contar un aspersor con alcohol al 70% para desinfección de la mano


antes de comenzar las actividades y antes de manipular las muestras
biológicas. Distanciar el alcohol de toda fuente de calor o fuego; y
mantener siempre un mantel húmedo a la mano, ante cualquier situación
de emergencia. Asimismo, se recomienda usar mascarilla para
manipular los medios y las muestras biológicas.
2. En medio Agar-Avena para cultivo de hogos: Cortar el tallo y hojas de
las plantas infectadas en trozos de 5 -10 mm de lado con ayuda de una
tijera esterilizada con alcohol. Con una pinza estéril colocar entre 3 a 5
trozos de muestra y distribuidos de forma equidistante sobre la superficie
del agar avena en cada frasco. Toda operación hacerlo cerca al fuego
de la cocina a fin de mantener la esterilidad; finalmente taparla o cubrirla
con film o su respectiva tapa. Se recomienda mínimamente tener tres
frascos con medio de cultivo para emplear dos de los envases con
muestras y uno como control (sin muestras).
3. En medio Agar-Caldo para cultivo de bacterias: Con ayuda de un hisopo
estéril tomar muestras de dos superficies distintas (por ejemplo, la
superficie corporal, superficie interna del refrigerador, perilla de la
puerta, etc.) y sembrar en forma de estrías cruzadas en la superficie del
agar caldo. Dejar un envase con medio de cultivo como control.
4. En medio de cultivo líquido para cultivo de bacterias: Tomar muestras
similares al punto anterior y colocarlas en el medio líquido, dejando
siempre un envase como control.
5. Cubrir los envases con papel de aluminio/ papel toalla o periódico; y
colocarlos bajo oscuridad a 25°C aproximadamente

c. Seguimiento y evaluación.

 Evaluar de forma periódica el crecimiento de hongos y bacterias.


Considerando las normas de bioseguridad. No abrirlas directamente,
solo si es necesario abrir los envases, hacerlo muy cerca del mechero
de alcohol.
 Realizar la evaluación de bacterias por 5 días, y la evaluación de hongos
por 7 días. Anotar características y número de colonias.

V. CUESTIONARIO
1. Detalle las diferencias entre el uso de los medios de cultivo líquido y
sólidos.
2. ¿A que grupos de micoorganismos corresponderían las colonias
visualizadas en los envases de vidrio?
3. ¿Por qué es importante el uso de determinados medios de cultivo en el
manejo de microorganismos?
4. ¿Por qué es necesario el cultivo los microorganismos?
5. ¿Cómo se deben eliminar y/o desechar los medios de cultivos
contaminados? Detalle el procedimiento
6. Elabore un informe presentando los resultados tanto de la primera como
de la segunda actividad. Incluya vistas fotográficas del procedimiento y
gráficos.

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS


Ostos, OL; Rosas, SM; González, JL. (2019). Aplicaciones biotecnológicas de los
microorganismos. NOVA. 2019; 17 (31): 129-163
https://aefa-agronutrientes.org/uso-de-microorganismos-en-la-agricultura
https://www.ecured.cu/Cultivo_de_microorganismos
http://alvaradobiotech.blogspot.com/2013/02/tarea-medios-de-cultivo.html