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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA

CURSO: QUÍMICA ANALÍTICA – LABORATORIO

INFORME DE LABORATORIO N° 2

TÍTULO: VOLUMETRÍA ÁCIDO-BASE DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO ORGÁNICO /

MÉTODO KJELDAHL

GRUPO N° 3

Apellidos y nombres de integrantes Có digo

Espinoza Guillen, Rut Sahara 20160101

Inche Arroyo, Kayla Selina 20160445

Garcia Garcia Neill Omar 20200046

Meneses Celis, Estrella Alisson 20180427

Chiara Sotomayor, Piero 20191498

Horario de práctica (día y hora): LUNES 2PM-4PM

Apellidos y nombres del profesor de laboratorio: Mariella Cortez Caillahua

Fecha de la práctica: 19/07/2021

Fecha de entrega del informe: 26/07/2021

LA MOLINA - LIMA – PERÚ

ÍNDICE
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Contenido
I.INTRODUCCIÓN................................................................................................................. 3
1.1.Justificación 3
1.2. Objetivos de la práctica 3
1.3. Hipótesis 4
II.REVISIÓN DE LITERATURA..............................................................................................4
2.1. Determinación de Nitrógeno por el Método Kjeldahl............................................4
2.1.1. Digestión 4
A. Digestión- proceso 5
2.1.2. Destilación 5
B. Destilación- proceso 6
2.1.3. Valoración o Titulación 6
C. Titulación- proceso 7
2.2. Porcentaje de Nitrógeno......................................................................................8
2.3. Porcentaje de proteínas en la muestra...............................................................9
III.MATERIALES Y MÉTODOS............................................................................................10
3.1. Materiales 10
3.2. Procedimiento experimental 11
IV.RESULTADO Y DISCUSIÓN...........................................................................................12
4.1. Resultados 12
4.1.1. TABLA N° 1: DATOS EXPERIMENTALES 12
4.1.2. TABLA 2: Determinación de Nitrógeno orgánico 13
4.1.3. Ecuación 1: Determinación del porcentaje de nitrógeno 14
4.1.4. Ecuación 2: Alternativa para la determinación del porcentaje de
nitrógeno 14
4.1.5. Ecuación 3: Determinar el porcentaje de proteína 14
4.1.6. Ecuación 4: Determinar el porcentaje de proteína (factor universal
convencional) 14
4.2. Discusión 14
V.CONCLUSIÓN..................................................................................................................15
VI.RECOMENDACIONES....................................................................................................15
VII.REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS................................................................................15
VIII.ANEXOS........................................................................................................................ 16
IX. CUESTIONARIO.............................................................................................................17
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I. INTRODUCCIÓN

El contenido de proteínas en los alimentos puede determinarse por medio de diversos

métodos. La forma má s habitual es su cuantificació n de forma indirecta y aproximada, bien a
partir del contenido en nitró geno de la muestra, o bien reduciendo su cantidad a partir del
contenido de uno o dos aminoá cidos particulares que conforman la proteína, fá ciles de
identificar y de cuantificar por su reactividad química específica.

El método má s comú n para determinar nitró geno orgá nico es el método de Kjeldahl, el cual
está basado en una valoració n de neutralizació n. El procedimiento es sencillo, no requiere
equipo especial y es fácilmente adaptable a los aná lisis rutinarios de un gran nú mero de
muestras. El método de Kjeldahl, o alguna de sus modificaciones, es el procedimiento
está ndar para determinar el contenido de proteínas en granos, carne y materiales
bioló gicos. Dado que la mayoría de las proteínas contienen aproximadamente el mismo
porcentaje de nitró geno, la multiplicació n (Skoog,2015).

El compuesto nitró geno forma parte de sustancias orgá nicas e inorgá nicas, y conocer la
cantidad de nitró geno total en un determinado alimento es de interés industrial y de
investigació n; así como conocer la cantidad de proteínas totales (nitró geno (%) por factor).
El método Kjeldahl no solo determina proteínas o aminoá cidos libres sino también ácidos
nucleicos, sales de amonio y también nitró geno ligado de compuestos orgá nicos o vitaminas;
el nitró geno ligado orgá nico se expresa como proteína total, por lo general los alimentos
só lo contienen cantidades traza de compuestos aromá ticos nitrogenados y de vitaminas,
siendo así el error cometido despreciable (Biol.unlp.edu.ar, 2018).

En general, el método de Kjeldahl tiene la ventaja de poderse ejecutar mediante equipos no

muy sofisticados y puede ser realizado por técnicos poco experimentados.

El método Kjeldahl ha sido reconocido oficialmente por un gran nú mero de entidades

oficiales y asociaciones.

1.1. Justificación

El método se basa en la destrucció n de la materia orgá nica con ácido sulfú rico
concentrado, formá ndose sulfato de amonio que, en exceso de hidró xido de sodio, libera
amoniaco; el que se destila recibiendo en á cido sulfú rico, donde se forma sulfato de
El amonio y el exceso de á cido es valorado con hidró xido de sodio en presencia del rojo
de metilo.

1.2. Objetivos de la práctica

Determinar la concentració n de nitró geno amoniacal en compuestos inorgá nicos y

orgá nicos por la técnica de volumetría ácido - base por retrovaloració n titulando con
NaOH estandarizado y aplicando las leyes de la estequiometría.
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1.3. Hipótesis

La concentració n del amoniaco, NH3, una base Bronsted y lowry porque acepta iones H+
forma NH4+, puede determinarse desprendiendo y arrastrá ndolo como gas NH+, con
vapor de agua en una reacció n ácido base la técnica de retrovaloració n o valoració n
inversa aplicando las leyes de la estequiometría.

II. REVISIÓN DE LITERATURA

2.1. Determinación de Nitrógeno por el Método Kjeldahl

El método Kjeldahl se utiliza para poder determinar el contenido de nitró geno en las
muestras que se van a estudiar, ya sean orgá nicas e inorgá nicas. La determinació n del
nitró geno Kjeldahl se realiza tanto para alimentos como bebidas, carne, piensos, cereales y
forrajes para el cá lculo del contenido en proteína. Esto también ayuda para la
determinació n de nitró geno en aguas residuales, suelos y otras muestras. Es un método
oficial y descrito en mú ltiples normativas: AOAC, USEPA, ISO, DIN, Farmacopeas y distintas
Directivas Comunitarias. El método Kjeldahl consta de tres etapas:

2.1.1. Digestión

El objetivo del procedimiento de digestió n es poder romper todos los enlaces de

nitró geno de la muestra y convertir todo el nitró geno que se encontraba unido
orgá nicamente en iones amonio (NH4 +). El carbono orgá nico y el hidró geno forman
dió xido de carbono y agua. En este proceso la materia orgá nica se carboniza dando lugar
a la formació n de una espuma negra. Durante la digestió n, la espuma se descompone y
finalmente se convierte en un líquido claro que indica que la reacció n química ha
terminado. Para ello, la muestra se mezcla con ácido sulfú rico a temperaturas entre 350
y 380 ºC. Cuanto má s alta sea la temperatura, má s rá pido será el proceso de digestió n.
La digestió n también se puede acelerar con la adició n de sales y catalizadores. Se añ ade
sulfato de potasio para aumentar el punto de ebullició n del á cido sulfú rico y se añ aden
catalizadores para aumentar la velocidad y la eficiencia del procedimiento de digestió n.
También se pueden añ adir agentes oxidantes para mejorar aú n má s la velocidad.

Una vez la digestió n ha finalizado, se deja enfriar la muestra a temperatura ambiente, se

diluye con agua y se trasvasa a la unidad de destilació n.
 5
A. Digestión- proceso

Fig.1 Representación obtenida de PanReac, 2018.Determinación de Nitrógeno por el

Método Kjeldahl

2.1.2. Destilación

Durante el proceso de destilació n los iones amonio (NH4+) se convierten en amoniaco

(NH3) mediante la adició n de un álcali (NaOH). El amoniaco (NH 3) es arrastrado al vaso
receptor por medio de una corriente de vapor de agua.

El vaso receptor para el destilado se llena con una solució n absorbente para capturar el
gas amoniaco disuelto.

• La solució n absorbente má s comú n es el ácido bó rico [B(OH)3 ] en solució n acuosa al

2-4%. El amoniaco es capturado cuantitativamente por la solució n de á cido bó rico
formando iones de amonio solvatados.
 6
También pueden utilizarse otros á cidos, dosificados con precisió n, como el á cido
sulfú rico o clorhídrico para capturar el amoniaco en forma de iones de amonio
solventados.

B. Destilación- proceso

El NH3
Se añaden 50 mL de condensa
sodio hidróxido al 50 %
para neutralizar el pH
de la muestra y
-El NH3 se captura en 50 mL de
convertir el NH4+en
ácido bórico al 4 % conteniendo
NH3 . 6-7 gotas de indicador de
Tashiro.
-Cuando el NH3 reacciona con
el ácido bórico, la solución vira
de rojo violeta a verde (pH 4,4-
5,8) debido al cambio del
indicador al pasar de la forma
ácida a la forma básica.
-En la solución de ácido bórico
se capturan alrededor de 150
Una corriente de vapor
mL del condensado.
de agua se burbujea
-Esto puede llevar aprox. 5
en la muestra y
minutos
arrastra el NH3
formado.

Unidad de
destilación
Muestra ya digerida
con ácido sulfúrico 98
%

Fig.2 Representación obtenida de PanReac, 2018.Determinación de Nitrógeno por el

Método Kjeldahl

2.1.3. Valoración o Titulación

Aquí el amonio procedente de la destilació n se recoge frecuentemente en un exceso de

á cido está ndar y se determina por una valoració n por retroceso con disolució n de á lcali
está ndar. Se ha visto que. La prá ctica má s comú n es el uso de á cido bó rico para atrapar
el amoniaco. (García & Martin, 2018)
Ahora, la concentració n de los iones amonio capturados puede determinarse por medio
de dos tipos de valoració n:
 7
• Cuando se utiliza el ácido bó rico como solució n absorbente, posteriormente se lleva a
cabo una valoració n á cido-base, aquí se utilizará una solució n estandarizada de á cido
sulfú rico o clorhídrico y una mezcla de indicadores. El rango de concentració n de la
solució n utilizada varía entre 0,01N a 0,5N, esto depende de la cantidad de iones de
amonio presentes. El punto final de la valoració n también se puede determinar
potenciométricamente con un electrodo de pH. Esta valoració n se llama valoració n
directa.

Cuando se utiliza una solució n valorada de ácido sulfú rico como solució n absorbente, el
á cido sulfú rico residual (es decir, el exceso que no reacciona con NH3) se valora con una
solució n estandarizada de hidró xido só dico y la cantidad de amoniaco se calcula por
diferencia. Esta valoració n se llama valoració n indirecta o por retroceso

C. Titulación- proceso

Primero el ácido bó rico remanente del destilado se titula con la solució n de HCl a 0.1 N
valorada, hasta el cambio de color, recomendació n de hacerlo gota a gota
homogenizando el movimiento constante del matraz.

Fig.3 Representación obtenida de Muñoz & Vega (2014). Determinación de

proteínas método Kjeldahl
 8
Luego de la titulació n de la muestra con 0.1N de HCl. Muestra un color violeta, lo que
indica el punto final de la titulació n. La comparació n de este color es con el del blanco.
Cada equivalente de HCl usado corresponde a un equivalente de NH3 y esto a un
equivalente de N en la muestra original. El peso del N en mg está dado por
miliequivalentes del á cido X (el peso equivalente del N).

2.2. Porcentaje de Nitrógeno

Del consumo de disolució n valorante (H+) durante la valoració n del á cido bó rico
sobrante resulta con un cálculo sencillo el contenido porcentual de nitró geno de la
muestra inicial. Aquí se aplica la siguiente ecuació n:

% N = (ceq * (V - VBL) * M * 100 %) / E

Donde:
❖ ceq: Concentració n equivalente de la disolució n valorante [mol/l]
❖ V: Consumo disolució n valorante muestra [l]
❖ VBL: Consumo disolució n valorante con valor del blanco [l]
❖ M: Peso molar nitró geno [g/mol]
❖ E: Peso o masa de la muestra [g]

Sí cambiamos molaridad (M) por normalidad (N), entonces

0.014…….miliequivalentes del nitró geno

% Nitrógeno = V*N* 0.014*100 / E

La siguiente figura muestra un resumen de un sistema completo para el aná lisis de

nitró geno segú n el método Kjeldahl:

Fig 4: Sistema completo para el análisis de nitrógeno según el método Kjeldahl compuesto
por sistema de digestión KT-L20 de 20 posiciones (centro) con lavador de gases
TURBOSOG (derecha) y unidad de destilación por arrastre de vapor VAPODEST 500 con
valoración implementada (izquierda) (Gerhard, 2021).
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2.3. Porcentaje de proteínas en la muestra

Para calcular el porcentaje de proteína basta con multiplicar por un factor de conversió n
el % de nitró geno calculado. El contenido de nitró geno en diferentes proteínas es
aproximadamente 16% por lo que multiplicando el por ciento del nitró geno obtenido
por el factor 6.25 se obtiene la cantidad de proteínas presentes en los alimentos. Sin
embargo, la relació n nitró geno-proteínas varía en forma trascendente.

% Proteína = % N x 6,25.

En la Fig 5, se recogen los factores para algunos alimentos.

Alimentos Factor (K)

Harina de trigo 5,70

Trigo, centeno, 5,83

cebada

Arroz 5,95

Cacahuetes 5,46

Almendras 5,18

Soja 5,71

Semillas oleaginosas 5,30

Leche y derivados 6,38

Carne y derivados 6,25

Clara de huevo 6,70

Fig. 5 Factor de conversión para obtener la tasa de proteína bruta a partir del nitrógeno
total.Obtenido de Martinez (2012).Determinación de proteínas de un alimento por el método
Kjeldahl. Valoración con un ácido fuerte.

III. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1. Materiales

 01 bureta calibrada de 25 o 50 mL
 02 matraz Erlenmeyer de 125 mL o 250 mL
 10
 02 vasos de precipitado de 50 o 100 mL
 01 frasco lavador con agua destilada
 Pipetas volumétricas de 5, 10 o 20 mL
 Matraz volumétrico (fiola) de 50 o 100 mL
 Pizeta con agua destilada
 Probeta graduada de 15 o 20 mL
 Bombillas de succió n
 02 balones de digestió n Kjeldahl de 100 mL
 Frascos goteros con indicador
 Muestra problema de tejido bioló gico u orgá nico
 Catalizador (mezcla de 100g K2SO4 má s 0,25g CuSO4)
 Á cido sulfú rico concentrado
 Hidró xido de sodio 12 M
 Á cido sulfú rico 0.10 M estandarizado
 Á cido clorhídrico 0,05 M estandarizado.
 Solució n de ácido bó rico el cual presenta indicadores: verde de bromofenol al
0,1% y rojo de metilo al 0,1%.
 Equipos:
 Balanza analítica
 Equipo de digestió n en campana extractora para capturar gases emitidos
 Equipo de destilació n Kjeldahl

3.2. Procedimiento experimental

11
 12

IV. RESULTADO Y DISCUSIÓN

4.1. Resultados
4.1.1. TABLA N° 1: DATOS EXPERIMENTALES

MUESTRA QUINUA SOYA

Peso de muestra (g) 0.5598 1.9005

Molaridad del H2SO4 0.055 -

Volumen H2SO4 (ml) 25 -

Volumen de H3BO3 (4%) (ml) - 15

Molaridad NaOH 0.0968 -

Volumen NaOH gastado en la titulació n (ml) 19.7 -

Molaridad HCl - 0.1

Volumen HCl gastado en la titulació n (ml) - 1.9

Fuente: Elaboració n propia

4.1.2. TABLA 2: Determinación de Nitrógeno orgánico

Quinua
A Peso de muestra en g 0.5598

B Volumen de H2SO4, mL tomado para captura del NH3 7.8

C Molaridad de H2SO4, estandarizada (cuatro decimales) 0.055

Volumen de NaOH gastado en la titulació n 19.7

 13
D
Molaridad del NaOH estandarizado (cuatro decimales) 0.0968
E
Factor estequiométrico de NaOH a H2SO4 2 NaOH + H2SO4 à Na2SO4 + 2 1/2
F H2O
G Factor estequiométrico de H2SO4 a NH3 2 NH3 + H2SO4 à (NH4)2SO4 1/2

Milimoles de H2SO4 que reaccionó con el NH3 0.429

H

I Milimoles de amoniaco NH3 equivalente 0.858

J Milimoles de N equivalente 0.858

K W en g de nitró geno = (Jx0.014 g/mmol) 0.012

2.14
L % N (p/p)
13.37
M % Proteínas (p/p) = % N x factor gravimétrico
Fuente: Elaboració n propia

4.1.3. Ecuación 1: Determinación del porcentaje de nitrógeno

(VxMH2SO4 total - VxMNaOH x 0.5 exceso) x 2 x 0.014

%N = ------------------------------------------------------------x 100
W(g)de muestra

4.1.4. Ecuación 2: Alternativa para la determinación del porcentaje de nitrógeno

W (g) de N en la muestra
%N = ----------------------------------------x 100
W(g) de muestra

4.1.5. Ecuación 3: Determinar el porcentaje de proteína

% Proteína = (% N) x (factor conversió n gravimétrico de N a proteína)

4.1.6. Ecuación 4: Determinar el porcentaje de proteína (factor universal

convencional)

% Proteína = % N x 6,25

4.2. Discusión

Como resultado de diversos procesos, obtuvimos que el porcentaje de proteína en una

muestra de quinua de masa 0.5598 g es del 13.37%, con lo cual nos indica que nuestro
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resultado obtenido en el laboratorio es el correcto, ya que la fluctuació n del porcentaje
de proteína presente en la quinua debe ser 12,5 a 16,7%. (FAO,2011)

Por otro lado, obtuvimos como resultado que el porcentaje de nitró geno fue de 2.14%.
Lo que caracteriza a la quinua es que debe tener un valor de porcentaje de nitró geno de
1.92% -2.16%, para poder obtener un valor del 12%-13.5% de valor proteico.
(Ministerio de Agricultura y Riego, s.f.)

Teniendo el valor de referencia del porcentaje de proteínas realizado por el Ministerio

de Agricultura y Riego, podemos confiar en nuestro resultado obtenido en el laboratorio.
Si se hace una comparació n entre la composició n nutricional de la quinua y de otras
especies de alimentos, como cereales del tipo: trigo (12%), arroz (7-9%) y maíz (11-
12%)

Podemos llegar a notar que los valores dentro del rango de proteína que reportan para
la quinua son superiores a los tres cereales en cuanto al contenido de proteína (Rojas et
al., 2010)

Ahora, si queremos enfocarnos má s a fondo podríamos hacer un tipo de comparació n

del grado nutricional en cuanto a porcentaje de proteína con otros alimentos esenciales
en la alimentació n como: Carne (30%), Huevo (14%), Queso (18%) y Leche Vacuna
(3,50%).(FAO, 2011).

Como punto de comparació n y de guía para la investigació n, tomamos en cuenta a un

proceso Kjeldahl hecho en la Universidad Del Valle De Guatemala, en el cual se hizo el
estudio del porcentaje proteico del frijol rojo, como resultado dieron un 23.44% y un
valor del 3.75% de nitró geno. (UNIVERSIDAD DEL VALLE DE GUATEMALA, 2015)

V. CONCLUSIÓN

Se determinó de manera satisfactoria la cantidad de proteínas en la muestra de la

quinua; ya que, el porcentaje obtenido (13,37%) se encuentra dentro del rango
establecido por la FAO y el MINAGRI.
Se verifica que con los resultados obtenidos se instaló y evaluó correctamente el equipo
de Kjeldahl.

VI. RECOMENDACIONES

La primera y muy importante es tener el equipo de Kjeldahl limpio, así como también los
otros materiales que se van a utilizar dentro del laboratorio.
También sería má s ventajoso no tener dudas con respecto a la determinació n de
proteínas en una muestra de quinua, es saber el tipo de quinua y la procedencia de esta
para obtener un nivel de confianza que se requiere en el experimento.

se recomienda que la

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

● Biol.unlp.edu.ar. (2018). Aná lisis de alimentos. [online] Disponible en:

https://www.biol.unlp.edu.ar/analisisdealimentos/tp-proteinas-2014.
 15
● Juan Carlos Palma (2016). Guía de prá cticas de laboratorio Química Analítica.
Universidad Nacional Agraria La Molina.
● Skoog, D. et al. 2015. Fundamentos de Química Analítica. 9na ed. México D.F, MX,
Cengage Learning

● FAO. (julio de 2011). Obtenido de http://www.fao.org/3/aq287s/aq287s.pdf

● Ministerio de Agricultura y Riego. (s.f.). Obtenido de Ministerio de Agricultura y

Riego: https://www.agrorural.gob.pe/wp-
content/uploads/transparencia/dab/material/ficha%20tecnica%20quinua.pdf

● UNIVERSIDAD DEL VALLE DE GUATEMALA. (24 de abril de 2015). Obtenido de

UNIVERSIDAD DEL VALLE DE GUATEMALA:
file:///C:/Users/USER/Downloads/Practica_4_Proteinas_Metodo_de_Kjeldhal.pdf
● Lemus, M., Cortez, L. (2015). Bioquímica General: Fundamentos y aná lisis de
laboratorio. Ecuador: UTMACH.
● Ferná ndez E. et al. (2014). Métodos para la cuantificació n de proteínas. Rabanales,
Españ a. Universidad de Rabanales.
● Bradford M. (1976). Un método rá pido y sensible para la cuantificació n de
cantidades de microgramos de proteína que utilizan el principio de unió n proteína-
colorante. Nueva York. Mc Graw Hills
● Garcia, A. & Martin, J. (2018).Una anotació n sobre el método de Kjeldahl. Disponible
en: https://analesranf.com/articulo/8501_mrev01/
● PanReac, 2018.Determinació n de Nitró geno por el Método Kjeldahl. Disponible en:
https://www.itwreagents.com/uploads/20180122/A173_ES.pdf
● Martinez, E. (2012). Determinació n de proteínas de un alimento por el método
Kjeldahl. Valoració n con un á cido fuerte. Disponible en:
https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/16338/Determinaci%C3%B3n
%20de%20proteinas.pdf
● Gerhard, C. (2021). ANÁ LISIS DE NITRÓ GENO EL MÉ TODO DE JOHAN KJELDAHL.
Disponible en:
https://www.gerhardt.de/fileadmin/Redaktion/downloads/Stickstoffanalyse_-
_Die_Methode_von_Johan_Kjeldahl_gekuerzt_f_Homepage-spa-ES.pdf
● Muñ oz, A. & Vega, J. (2014).Determinació n de proteínas método Kjeldahl. Disponible
en: https://es.slideshare.net/vegabner/determinacion-de-proteinas-metodo-
kjeldahl

VIII. ANEXOS

Cuadro 1. Composició n del valor nutritivo de la quinua en comparació n con alimentos bá sicos
(%)

Fuente: Informe agroalimentario, 2009 MDRT- BOLIVIA

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Cuadro 2: Contenido de nutrientes del cultivo de quinua (Chenopodium quinoa)

Fuente: Ficha técnica de la quinua, MINAGRI

IX. CUESTIONARIO

9.1. ¿Cuál es el título, propósito e hipótesis de la Práctica 2?

Título: Determinació n de nitró geno orgá nico por Método Kjeldahl.

Propó sito: Determinar la concentració n del nitró geno amoniacal en compuestos
orgá nicos e inorgá nicos por la técnica de volumetría ácido-base por retrovaloració n
titulando con NaOH y HCl y aplicando las leyes de la estequiometría.
Hipó tesis: La concentració n de amoníaco NH3, , una base de Bronsted y Lowry porque
acepta iones H+ formando amonio NH4+, puede determinarse desprendiendo y
arrastrá ndolo como gas NH3 con vapor de agua en una reacció n á cido-base usando la
técnica de la retrovaloració n o valoració n inversa y aplicando las leyes de la
estequiometría.

9.2. ¿Cómo demuestra que el resultado reportado por usted es confiable?

A pesar de que la prá ctica se realizará de manera virtual, se puede garantizar que los
resultados obtenidos y reportados son confiables, debido a la buena realizació n de
cálculos, seguimiento del procedimiento paso a paso; ademá s de comparar los
resultados obtenidos con la literatura.

9.3. ¿Cómo demuestra usted que trabajó de manera segura?

Como se mostró en la prá ctica virtual, en todo momento se usaron los equipos de
protecció n personal necesarios dentro del laboratorio, ademá s del buen uso de manual
de buenas prácticas de laboratorio.

9.4. ¿Cómo demuestra usted que el impacto ambiental de su actividad en el laboratorio

fue mínimo?

Se demostró que se cuidó el ambiente del laboratorio ya que existió un buen manejo de
residuos al momento de culminar, hubo la separació n debida de reactivos, ademá s
durante el proceso, se tuvo el debido cuidado tanto con los instrumentos como equipos
de laboratorio.

9.5. Investigue el fundamento analítico para la determinación de proteínas por cada uno
de los siguientes métodos:

Método de Biuret

El método de Biuret se fundamenta mediante la formació n de un complejo coloreado

entre el Cu2 + y los grupos NH de los enlaces peptídicos en medio bá sico. Cu2 + se
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acompleja con 4 NH. La intensidad de coloració n es directamente proporcional a la
cantidad de proteínas (enlaces peptídicos) y la reacció n es bastante específica, de
manera que pocas sustancias interfieren (Fernandez, 2014).

Método de Lowry

El método se utiliza para aumentar la sensibilidad de la reacció n de biuret, el complejo

proteína-Cu2+ se hace reaccionar con el reactivo de Folin-Cicocalteus, que da una
coloració n azul, a causa de la reducció n del á cido fosfomolíbdico/fosfotú ngstico a azul
de heteropoli molibdeno de composició n no definida, por medio de los residuos
tirosilos,triptó fanos y en menor grado de histidinas de las proteínas que forman el
complejo con el Cu2+ (Lemus, M. y Cortez, L., 2015).

Método del ácido Bicinconínico (BCA)

El ácido bicinconínico, sal só dica, es un compuesto capaz de formar un complejo

pú rpura intenso con inones Cu1+ en medio alcalino. Este reactivo forma la base de un
método analítico capaz de monitorizar el ió n cuproso producido en una reacció n entre
las proteínas con Cu2+ en medio alcalino (reacció n de Biuret). La estabilidad del
reactivo y el cromó foro proporciona un método para la cuantificació n de proteínas que
es sencillo, rá pido, muy sensible, y que muestra una gran tolerancia a compuestos que
afectan a otros métodos (Fernandez, 2014).

Proteína + Cu2+ → Cu1+

Cu1+ + BCA → complejo pú rpura BCA- Cu1+

Método de absorción UV a 280 nm

Debido que ciertas proteínas poseen restos de aminoá cidos aromá ticos, un método
rá pido para el cá lculo de proteínas es la absorció n de UV a 205 y 280 nm, a partir del
cual se pueden detectar los picos de absorció n de proteínas en una corrida
cromatográ fica ya que un detector UV se acopla a la salida de la muestra de la columna.
De esta manera se puede saber la cantidad de proteínas presente en un alimento o
solució n. Una desventaja sobre este método, se debe a que algunas proteínas no poseen
grupos aromá ticos (por ejemplo, una solució n de hidrolizado de colá geno
comercializada como gelatina) y será n indetectables por este método (Ferná ndez,
2014).

Método de adhesión de colorante

Se mide el colorante no adherido, soluble posterior a la equilibrarían de la reacció n y la

remoció n del complejo insoluble por centrifugació n y filtració n. El colorante no
adherido está inversamente relacionado al contenido proteico de la muestra. (Bradford,
1976)
Proteína + exceso de colorante → Complejo proteína-colorante insoluble + colorante no
adherido soluble

Método de Bradford

Se basa en la unió n de un colorante, Coomassie Blue G-250 (también Serva Blue) a las
proteínas. El colorante, en solució n á cida, existe en dos formas una azul y otra naranja.
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Las proteínas se unen a la forma azul para formar un complejo proteína-colorante con
un coeficiente de extinció n mayor que el colorante libre. Este método es sensible (1-15
µg), simple, rá pido, barato y pocas sustancias interfieren en su determinació n. Entre las
sustancias que interfieren está n los detergentes y las soluciones bá sicas (Ferná ndez,
2014).

Método de la Ninhidrina

La ninhidrina reacciona con compuestos que presenten por lo menos un grupo amino y
un grupo carboxilo libre, esto genera una coloració n que sirve para la determinació n de
proteínas. Esta reacció n de coloració n surge por una reacció n de ó xido-reducció n de la
ninhidrina en presencia de amoniaco.

Método turbidimétrico

La relació n directa entre los datos de turbidez y la concentració n de só lidos suspendidos

depende de muchos factores, entre los cuales se incluye el tamañ o de las partículas, la
forma, la distribució n y el estado de la superficie, índice de refracció n de las partículas
de dispersió n y de la longitud de onda de la luz utilizada (Lemus, M. y Cortez, L., 2015).

9.6. Un determinado cereal contiene 16 % de proteínas. Calcular el peso del cereal que se
tomaría como muestra para que al analizar con el método de Kjeldahl del ácido bórico se
utilice 50 mL de HCl 0,025 M ; (factor de conversión = 5,7).

9.7. Una muestra de leche desecada pesa exactamente 1 g y se analiza por el método de
Kjeldahl. El amoniaco se recoge en 50 mL de HCl 0,122 M y el exceso de ácido gasta 20,7
mL de NaOH 0,145 M. Calcular el % de proteínas.
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9.8. Una muestra de 0,5 g de un embutido es analizada por la técnica de Kjeldahl

(modificación: ácido bórico). El gasto de HCl 0,116 M fue de 7,2 mL. Calcular el % de
proteínas totales en la muestra.

9.9. Un gramo de un fertilizante comercial es analizado por el procedimiento de Kjeldahl.

El amoniaco destilado es recibido en 30 mL de solución de ácido bórico al 2 %.
Finalmente se necesitaron 45,32 mL de HCl 0,182 M. calcular el % de nitrógeno en el
fertilizante.
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9.10. ¿Cuál será el peso en gramos de muestra que se analizará para que por la técnica de
Kjeldahl, variante ácido bórico, el gasto de HCl 0,1 M consumido en la titulación final sea
igual al porcentaje de proteínas totales de la muestra?

9.11. Una muestra impura de 0,25 g de urea es analizada por la técnica de Kjeldahl. El
gasto en la valoración final fue de 44,2 mL de HCl 0,35 M. Calcular el % de pureza de la
muestra.

9.12. Se sabe que un embutido contiene 20,09 de proteínas totales. ¿Cuál será el volumen
de HCl 0,125 M que se gastará en la valoración final si se analiza una muestra de 0,875 g
por la técnica de Kjeldahl?