Luis Rivadeneira Comision 10

TP4: SEMBRADO DE MATERIAL sobre medios de cultivos.

Reacciones de identificación: Marcha para Estafilococos y para
Estreptococos.
CUESTIONARIO:
Parte I.
1- Graficar los elementos de siembra
a. Placa de Petri
b. Tubo de ensayo
c. Ansa
d. Hilo
e. Mechero
2- Dibujar patrones de crecimiento en tubos de agar
inclinados. 3- Siembra en placas: graficar las siguientes
técnicas de siembra:
a. Estrías múltiples
b. Por agotamiento
c. De los cuatro cuadrantes
d. Por mezcla
4- Buscar imágenes del resultado de crecimiento en cultivos de medios líquidos
(turbidez, formación de velo en la superficie, sedimento en el fondo del tubo,
etc.)
5- Enumerar los recaudos a tener en cuenta para la siembra y
aislamiento de microorganismos anaerobios.

Parte II:
1- Confeccionar el siguiente cuadro sobre pruebas

bioquímicas: A modo de ejemplo queda completa una

prueba:

Prueba Fundamento Objetivo Técnica Interpretación

Catalasa La enzima Separar Colocar una gota de El
descompone Estafilococos H2O2 sobre un desprendimiento
el peróxido de portaobjetos y luego de burbujas se
(H2O2) de Estreptococos trasferir una colonia considera una
hidrogeno realizándose prueba positiva
en agua una emulsión.
(H2O) y
oxigeno
(O2)
Coagulasa Es una proteína Produce • Si
Se ponen 2 gotas de
producida por coagulación, con es positivo:
solución salina en un
varios una acción Se podrá
portaobjetos rotulado
microorganismos similar a la observar
con el número de
que permite la protrombina del aglutinación
muestra, Test (T) y
conversión plasma macroscópica
control (C). Las 2 gotas
del fibrinógeno sanguíneo. en el plasma
son emulsionadas con
en fibrina. en los 10
el organismo de prueba
segundos,
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mediante el uso de un mientras que
cable de lazo, cable no se
recto, o un aplicador de observará
madera. Se pone una aglutinación
gota de plasma en la gota de
(plasma con solución
anticoagulante en la salina.
gota de solución salina • Si
inoculada es negativo:
correspondiente a la No se
prueba y se mezcla observara
bien con un aplicador aglutinación.
de madera. Agitar el
portaobjeto con
cuidado unos 10
segundos.

DNAsa Es una prueba Comprobar si un 1. Sembrar el Si sale un halo

enzimática que microorganismo microorganism claro alrededor del
se emplea para problema tiene o problema en crecimiento
diferenciar actividad el centro de la bacteriano el
distintas desoxirribonucle placa de petri, resultado es
especies asa. sobre el medio positivo. Si no se
de Staphylococ de cultivo, en observa ninguna
cus Aureus, que forma de rejilla zona clara es
normalmente apretada. negativo.
produce 2. Incubar a 35-
desoxirribonucle 37ºC de 18 a
asas, de otros 20 horas. En el caso de
Staphylococcus. 3. Sacar la placa nuestro grupo de
prácticas, el
de la estufa y
resultado fue
añadir unas
completamente
gotas de HCL
1N sobre la negativo. El
zona que está estafilococo que
teníamos en clase
sembrada.
no era del género
4. Dejar reposar
Aureus por
de 3 a 5
razones evidentes
minutos.
5. Visualizar y (pese a que se
anotar el venden
modificados
resultado.
genéticamente
para no ser
patógenos). Por
tanto no tenía
actividad
desoxirribonucleas
a.

Novobiocina Varias especies Separar Se siembra una placa Un halo de

del Género S.saprophyticus de agar sangre con un inhibición de
Staphylococcus (resistente a la hisopo embebido en crecimiento menor
son resistentes a novobiocina) de una suspensión de la o igual a 16mm
la novobiocina los demás cepa a estudiar. Luego corresponde a
(disco de 5 µg). estafilococos se aplica el disco de S.saprophyticus.
coagulasa novobiocina y se Un halo de
negativos incuba a 35º por 18 inhibición mayor
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horas. de 16mm
corresponde a
otros estafilococos
coagulasa
negativos.
Hemolisis en Muchos Determinar las Se realiza una siembra •
Hemolisis
agar de sangre microorganismos distintas formas del cultivo puro Alfa: es una
son capaces de de hemólisis que mediante la técnica hemólisis
crecer en agar pudieran tener del agotamiento de parcial y la
zona de
sangre y cuando lugar. asa en una placa de
crecimiento
lo hacen agar sangre. aparece
responden de Tras 24 horas de rodeada de
diferente manera incubación observar la un halo de
según realice presencia de halos de color
n o no la lisis de hemólisis alrededor de verdoso.
los glóbulos rojos las colonias e • Hemólisis
(hemólisis) produ identificar el tipo de beta: en
cida por la hemólisis que este caso la
acción de una realiza nuestro hemólisis
enzima llamada microorganismo. es total y el
hemolisina. halo que
rodea a las
colonias es
totalmente
transparent
e.
Hemólisis gamma
(no hemólisis): el
microorganismo en
cuestión no es
capaz de realizar la
hemólisis y por tanto
no existe halo
alrededor de la
colonia.
Bacitracina Se basa en en Diferenciación de Se inocula un Sensible :
que ciertas estreptococos microorganismo en AS cualquier zona de
sustancias son beta hemolíticos según técnica de Kirby- inhibición del
sensibles a la del grupo A de Bauer utilizando discos desarrollo
bacitracina otros de Bacitracina
estreptococos
beta hemolíticos
CAMP Se basa en que Separar Se realiza estriando un La prueba positiva
los Str.agalactiae de cultivo de estreptococo se evidencia por la
estreptococos los demás ß-hemolítico en forma presencia de una
del grupo B estreptococos ß- perpendicular a una zona de
producen un hemolíticos estría de un potenciación de la
factor llamado estafilococo productor hemólisis en forma
CAMP (factor de de ß-lisina en agar de puntas de
monofosfato de sangre. Se incuba 18- flecha en el lugar
adenina cíclica) 24 horas a 37ºC donde se
que aumenta la contactan las dos
zona de estrías.
hemólisis
producida por un
estafilococo
productor de
ßlisina
Bilis esculina Se basa en la Separar los Se inocula el La beta
capacidad de estreptococos microorganismo en la glucosidasa
ciertas bacterias del grupo D de superficie de un pico de escinde la esculina
(Streptococos los demás flauta. Incubar 24 hs. en glucosa y
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del grupo D) grupos de esculetina. Esta
para hidrolizar la estreptococos. ultima es soluble
escualina en en el medio y
presencia de 1- forma un complejo
4% de sales de color negro con
biliares Fe +3. La hidrolisis
de esculina se
observa como un
oscurecimiento del
medio (color
negro) en 24 hs de
incubación a 35°C.
Raramente se
requieren 48 hs de
incubación hasta
que la hidrolisis
sea aparente.
PYR Detecta la se usan para la Realizar un alto inoculo Disco rosado o
enzima L- detección de la (2 Mac Farland) e rojo (+)
pirrolidonil-beta actividad de introducir un disco de Disco y/o solución
naftilamida, para pirolidonil PYR amarillo a incoloro
la identificación arilamidasa en (-)
rápida de ciertos grupos de
enterococos bacterias, como
Streptococcus
pyogenes (grupo
A estreptococo),
Enterococcus
spp., Algunos
estafilococos
coagulasa
negativos y
algunas
enterobacterias
Optoquina Se basa en la Diferenciar Estriar un cuadrante de Halos de inhibición
sensibilidad de S.pneumoniae una placa de agar mayores de 15mm
S.pneumoniae a de otros sangre en varias son característicos
una estreptococos α- direcciones con una de S.pneumoniae
concentración hemolíticos. suspensión Mc Farland
menor o igual a 0,5. Colocar luego un
5µg/ml de disco de optoquina en
hidroxicuprina el centro del área
(optoquina) estriada. Incubar 18-24
horas a 37ºC

Completar el cuadro con las siguientes pruebas:

- Coagulasa
- DNAsa
- Novobiocina
- Hemolisis en agar sangre
- Bacitracina
- CAMP
- Bilis esculina
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- PYR
- Optoquina

2- Buscar imágenes relacionadas a cada una de las pruebas descriptas en el cuadro del
punto 1.

DESARROLLO

1.
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2.

3.
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4.
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2)

3.

a-b.
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c.

4.

5. Para sembrar en microbiología es necesario mantener la habitación sin

corrientes de aire y estar al lado de la llama de un mechero (no más de 15 cm.
de distancia). También se puede trabajar bajo campana, o en flujo laminar,
previa esterilización con luz UV.
La siembra puede realizarse en medio líquido, sólido o semisólido, utilizando
ansa, hilo, o bien hisopo o pipeta estéril. Se debe esterilizar en la llama (hasta
que todo el filamento se haya puesto al rojo vivo) el ansa o el hilo y enfriar,
antes y después de realizada la siembra. Para transferir los microorganismos,
se recomienda:
a) Medio líquido a medio líquido: utilizar pipeta Pasteur o graduada, ansa o
hilo.
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b) Medio líquido a medio sólido: utilizar pipeta Pasteur o graduada, ansa o hilo,
e hisopo. El ansa se toma del mango como si fuera un lápiz.
c) Medio sólido a medio sólido: utilizar ansa o hilo.
d) Medio sólido a medio líquido: ansa o hilo.
Luego de sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura
adecuada para el crecimiento.

2)
Coagulasa

DNasa
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Novobiocina
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Hemolisis de agar de sangre

Bacitracina
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CAMP

Bilis Esculina
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PYR
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Optoquina