UNIVERSIDAD

NACIONAL DE TRUJILLO
Facultad de Farmacia y Bioquímica

Curso: Inmunología

Tema: Práctica 4 y 5

Docente: Manuela Luján Velásquez

Alumna:| Mariely Guerrero Torres

Ciclo: Cuarto

Sección: “A”

Trujillo, diciembre 2022

 AGLUTINACIÓN EN LÁMINA Y EN TUBO COMO DIAGNÓSTICO.
INMUNOPRECIPITACIÓN EN GEL. DOBLE DIFUSIÓN-OUCHTERLONY

I. INTRODUCCIÓN
La reacción de aglutinación fue desarrollada hacia finales del siglo pasado por Durham
en esta reacción el antígeno siempre está en suspensión, pues se trata de partículas; La
reacción puede utilizarse como prueba directa o indirecta el mecanismo de esta reacción
es simple: si en un sistema buffer, usualmente solución salina buffer, se coloca una
apropiada dilución de un suero que contenga anticuerpos específicos contra
determinados grupos antigénicos del antígeno en suspensión, las moléculas de
anticuerpos reaccionan con los grupos antigénicos de las partículas del antígeno y
actúan como puente produciendo grumos fácilmente visibles.
Las técnicas directas de aglutinación son ampliamente utilizadas en Bacteriología para
la identificación serológica de los microorganismos género y especie. utilizan sueros
mono específicos producidos comercialmente. Las pruebas de hemoclasificación son
típicas pruebas de aglutinación directa. Las técnicas indirectas de aglutinación fueron
introducidas como herramientas diagnósticas para investigar la presencia de anticuerpos
dirigidos contra un determinado agente, el hallazgo de tales anticuerpos, visualizado por
una reacción de aglutinación, frente a una suspensión pura del microorganismo
sospechoso de ser el agente causal del cuadro clínico en estudio, confirma
indirectamente que ese microorganismo estuvo presente en el huésped y estimuló una
respuesta inmune en términos de anticuerpos circulantes.

La precipitación ocurre con la mayoría de los antígenos debido a que el antígeno es

multivalente, es decir, tiene varios determinantes antigénicos por molécula a los que se
pueden unir los anticuerpos. Los anticuerpos tienen al menos dos sitios de unión a
antígeno, por lo que se forman grandes agregados o retículos de antígeno y anticuerpo.
La doble difusión en dos dimensiones es un procedimiento simple inventado por el
científico sueco Örjan Ouchterlony. Las soluciones de antígeno y anticuerpo se colocan
en pocillos separados cortados en una placa de agarosa. Los reactivos se difunden desde
los pozos uno hacia el otro y precipitan donde se encuentran en proporciones
equivalentes. Un único antígeno se combinará con su anticuerpo homólogo para formar
una única línea de precipitación. Cuando dos antígenos están presentes, cada uno se
comporta independientemente el uno del otro. Por lo tanto, el número de bandas de
precipitación indica que hay al menos muchos pares de anticuerpos y antígenos
presentes. Las flechas indican patrones de difusión de antígenos y anticuerpos.

Reacciones de aglutinación que se utilizan en el diagnostico medico

 Aglutinación directa
Un antígeno celular o de partículas insolubles es aglutinado directamente por el
anticuerpo. Un ejemplo de esto es la aglutinación de los eritrocitos del grupo A por
antisueros antiA, la aglutinación de los eritrocitos RH positivos por el antisuero anti-D o
la aglutinación del antígeno brucelar por anticuerpos anti-Brucella. Gran cantidad de
partículas como pueden ser eritrocitos, bacterias, hongos y virus pueden ser aglutinados
por anticuerpos séricos, algunas veces de manera inespecífica y otras muy específica,
siendo ésta última, respuesta a una previa inmunización del organismo productor de los
anticuerpos séricos.
 Aglutinación indirecta
Se refiere a la aglutinación de las células recubiertas de antígeno o a las partículas
inertes que son portadoras pasivas de antígenos solubles. Se tienen ejemplos de lo
anterior en la utilización de partículas de gelatina en la búsqueda de anticuerpos contra
Treponema pallidum por aglutinación pasiva (TPPA), la fijación del látex para VDRL
en la sífilis y en la utilización de eritrocitos en la prueba de hemaglutinación indirecta
(HAI) en la búsqueda de anticuerpos contra Tripanosoma cruzi, agente causal de la
enfermedad de Chagas.
 Hemaglutinación viral
Otra categoría de aglutinación que involucra la aglutinación espontánea de los
eritrocitos por ciertos virus, es la reacción de hemaglutinación viral, la cual puede
inhibirse de manera específica en presencia de anticuerpos antivirales.
 Hemaglutinación indirecta (pasiva)
Este tipo de aglutinación se lleva a cabo utilizando eritrocitos recubiertos de antígenos,
o anticuerpos acoplados de manera espontánea (adsorción pasiva) o mediante un
acoplamiento químico.
 Inhibición de la hemaglutinación
La inhibición de la aglutinación de los eritrocitos recubiertos con antígeno por el
antígeno homólogo es un método sensible y específico para la identificación de
pequeñas cantidades de antígeno soluble en la sangre o en otros líquidos de los tejidos.
Pruebas de inmunoprecipitado
La prueba también conocida como electroforesis de proteínas, mide los niveles de
ciertas proteínas en la sangre. Las proteínas juegan muchos papeles importantes, entre
ellos, suministrar energía al cuerpo, reconstruir los músculos y apoyar el sistema
inmunitario.
II. OBJETIVOS:
 Realizar el proceso de aglutinación tanto en lámina como en tubo.
 Identificar cada prueba de aglutinación con los distintos tipos de muestra.
 Observar el proceso de inmunoprecipitación en gel doble de difusión de
Ouchterlony.
III. MATERIALES Y MÉTODOS
A. MATERIALES
 Jeringa de tuberculina
 Jeringa de 3ml
 Pipeta
 Lamina portaobjetos
 Placa Petri
 Tubo de ensayo
 Cultivo de S. aureus
 Suero anti – S. aureus
 Suero fisiológico
 Suero humano
 Suero de conejo (anti – humano)
 Agar agar
 B. MÉTODO
1. AGLUTINACIÓN EN LÁMINA

Cosechar cultivo s.aureus con Agregar 2 gotas de suspensión

solución salina fenolada 0.5% en cada extremo de la lamina

Agregar 2 gotas de suero anti-

s.aureus

Agregar 2 gotas de suero

fisiológico

Dejar actuar por 5 minutos y

hacer lectura

Homogeneizar con un palito

 2. AGLUTINACIÓN EN TUBO
Añadir a cada tubo lo señalado en el siguiente cuadro
Tubo N° 1 2 3 4 5 6 7 8 (control)
SSFF 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
0.5 de
Suero anti tubo 6
s.aureus 0.5 0.5 de 0.5 de 0.5 de 0.5 de 0.5 de Extraer -
tubo 1 tubo 2 tubo 3 tubo 4 tubo 5 0.5 y
desechar
Suspensión 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
s.aureus
Incubación Homogenizar y colocar en baño maría a 37°C x 24 horas
Lectura Observar y reportar aglutinación positiva, parcial y negativa
 3. INMUNOPRECIPITACIÓN EN GEL

C A B C A B

C A B C A B

Hacer los pocillos en la lámina

Agregar 3 – 5 ml de Agar-agar Sellar fondo con 1 gota de agar-
con la parte superior de una
3% en lámina y dejar solidificar agar
pipeta y rotular

Rótulo A B C
Suero humano 2 - -
Agregar suero humano, suero
(gotas) anti humano y SSFF en cada
Suero anti humano - 2 - pocillo según el cuadro

(gotas)
SSFF (gotas) - - 2
Incubación Cámara húmeda a 37°C x 24horaas
Lectura Observar bandas de precipitación
 IV. RESULTADOS
1. AGLUTINACIÓN EN LÁMINA

2. AGLUTINACIÓN EN TUBO

Tubo N° 1 2 3 4 5 6 7 8
©
Aglutinación + + - - - - - -

3. INMUNOPRECIPITACIÓN EN GEL

Línea de precipitación
4. COMENTARIO
Las aglutinaciones son suspensiones bacterianas estabilizadas (muestras
colocadas en un medio líquido) que son utilizadas a fin de identificar la
existencia de aglutininas, la prueba de aglutinación es de enorme
trascendencia diagnóstica en la detección de los anticuerpos específicos
(agentes que el cuerpo humano usa para combatir a invasores) hechos en el
curso de todas estas patologías. La prueba de aglutinación en tubo detecta
anticuerpos IgM e IgG2, por medio de la técnica de aglutinaciones seriadas
de suero en tubos.
En el experimento en lamina se observa claramente la aglutinación, sin
embargo, en el segundo experimento solo se observa la aglutinación en el
1er y 2do tubo, por ende, se escoge el 2do para su denominación, que es de
20.
En el experimento de la inmunoprecipitación tanto el antígeno como el
anticuerpo se difunden radialmente desde los fosos uno hacia otro y por lo
tanto se establece un gradiente de concentración, conforme la equivalencia
se alcanza, se produce una línea visible de precipitación que se observa en la
primera línea Ag – Ac – C a diferencia de la segunda donde no se identifica
ninguna línea de precipitación.
La precipitación ocurre con la mayoría de los antígenos, debido a que éstos
tienden a ser multivalentes, es decir, tienen varios determinantes antigénicos
por molécula, al que los anticuerpos pueden enlazarse. Cada anticuerpo, a su
vez, tiene por lo menos dos sitios de unión para los antígenos, de modo que
se entrecruzan formando una gran matriz de agregados antígeno: anticuerpo.
De forma experimental, una proporción de antígeno se incorpora de forma
incrementada a una cantidad constante de anticuerpo en solución. el antígeno
participa en el precipitado, lo que se sabe cómo una región de exceso a
medida que se incorpora más antígeno, la proporción de la concentración del
antígeno excede a la de los anticuerpos, y la proporción de precipitación
disminuye.
 5. CONCLUSIONES

 Se realizó el proceso de aglutinación tanto en lámina como en tubo,

en el primero se observó sin ningún problema, en el segundo solo se
identificó aglutinación en el tubo 1 y 2.
 Se observó el proceso de inmunoprecipitación en gel doble de
difusión de Ouchterlony e identificó correctamente la precipitación
en la placa petri .

6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Aguilar-García, Vicente. "VI. Reacciones de aglutinación." Gaceta Médica

de México 140.S3 (2004): 50-52.
2. Pedroza Vázquez A, Zamora A, Resumen P. Utilidad de pruebas de
laboratorio en el diagnóstico de mieloma múltiple [Internet].
Medigraphic.com. [citado el 24 de diciembre de 2021].
Disponible en:
https://www.medigraphic.com/pdfs/patol/pt-2015/pt151i.pdf
3. Examen de inmunofijación en sangre [Internet]. Medlineplus.gov. [citado el
24 de diciembre de 2021]. Disponible en:
https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/003543.htm
4. Beda BE, Mereles Rodríguez E. Técnicas inmunológicas [Internet].
Dyndns.org. [citado 24 de diciembre de 2021]. Disponible en:
http://www.aulavirtual-
exactas.dyndns.org/claroline/backends/download.php?
url=L1RFQ05JQ0FTX0l
OTVVOT0zTR0lDQVNfREVfSU5URVJBQ0NJ005fU0VDVU5EQVJid=e
s&c id3DVU5EQVCJR&C
5. Interacción antígeno-anticuerpo el procedimiento ouchterlony
[Internet]. Bioted.es. [citado 24 de diciembre de 2021]. Disponible en:
https://www.bioted.es/protocolos/ANTIGENO-ANTICUERPO.pdf

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