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Caracterización Bioquímica de Enterobacterias y Bacilos
Caracterización Bioquímica de Enterobacterias y Bacilos
1. RESUMEN
La comprensión del tipo de hidrólisis ó fermentación que lleva a cabo cada bacteria, le da una
cultivo, con el fin de estudiar las reacciones producidas en un lapso de 48 horas, confirmando
2. INTRODUCCIÓN
alimentos son los únicos factores que nos protegen de las toxiinfecciones generadas por estos.
Es por ellos que el estudio microbiológico de cualquier materia prima ó derivado, es de vital
importancia para la prevención del crecimiento microbiano no deseado (Mandell G.; Douglas
realizar su debida fagocitosis, debido a ello con el paso del tiempo se han desarrollado
diversos medios de cultivo, con los cuales se busca comprender, lo más directo posible, el
Claudia Giovanna, Acosta Dibarrat, Jorge Pablo, & Velázquez Ordoñez, Valente. 2015).
Medios de cultivo tales como la Urea de Christensen y el citrato de simmons, nos ayudan a
de citrato permeasa respectivamente. Con ello se hace posible deducir que, con la gran
variedad de medios de cultivo, podemos generar una precisa determinación del modo de
acción para cada microorganismo cultivado, exponiendo así también, la naturalidad de ellos,
Por lo cual, se hace primordial el buen entendimiento e identificación del género y especie en
3. MATERIALES Y MÉTODOS
Se hizo el cultivo de los microorganismos a probar sembrados en agar Mc Conkey. Con el fin
de observar su morfología, tamaño, aspecto y color de las colonias (aquellas que presentaron
Movilidad, Prueba de indol, Reacción del rojo de metilo y Reacción de Vogues Proscaver.
- 3.1.1 TSI: Se inoculó el medio de cultivo con asa recta en profundidad y estría en
permeasa.
- 3.1.4 Urea de Christensen: Si la bacteria posee la enzima ureasa, hidroliza urea del
el asa recta, punzando el agar en profundidad, con cuidado de sacar el asa por el
inoculación.
- 3.1.6 Prueba de indol: Después de incubar 24 horas los tubos con reactivo SIM, se
- 3.1.7 Reacción del rojo de metilo: Se hizo la siembra con el asa a un tubo con caldo
MRVP, incubando por 24- 48 horas, pasado este tiempo se adicionaron 5 gotas de la
- 3.1.8 Reacción de Vogues Proscaver: Sembrar con el asa un tubo con caldo MRVP,
incubar por 24-48 horas, pasando este tiempo adicional 5 mL de la solución de sulfato
bacterias lactosa positivas forman colonias en tonos rosados a rojos. Los organismos
De la caja de Petri que contiene el cultivo bacteriano, se siembra con un asa, una muestra de
cada uno de los tubos que contienen los siguientes medios: Agar leche, agar almidón, agar
gelatina, caldo nitrato, caldo glucosa, caldo arabinosa, caldo xilosa y se incuba a 37°C por 48
horas. Pasado el tiempo se realiza una lectura de las pruebas bioquímicas en cada medio de la
siguiente manera:
- 3.2.1 Agar almidón: Se cubrió la superficie del tubo con solución de lugol; si se ha
eliminando después de 5 minutos, se hizo el lavado del tubo con agua corriente. La
- 3.2.3 Agar leche: Se observó una zona clara que aparece alrededor del crecimiento
Arabinosa –
Xilosa –
5
observe el color que presenta. El color rojo representa prueba positiva de reducción de
4. RESULTADOS
4.1.1 TSI
para utilizar citrato de sodio como única fuente de carbono para su metabolismo y crecimiento. La
ureásica
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4.1.5 MOVILIDAD
medio de cultivo.
(E.Coli) para producir y mantener estables los productos finales ácidos a partir de la
fermentación de la glucosa. En la Figura 8 se muestran los obtenido durante las dos pruebas.
De una caja petri que contenía el cultivo de Bacillus Cereus se hizo el sembrado en un agar
arabinosa, xilosa y nitrato. En la Figura 11 se observan los datos obtenidos después del
5. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
En la Tabla 1 se muestran los resultados teóricos que deberían ser obtenidos durante las
Donde:
5.1.1. TSI
Se observó el color del medio de cultivo y la producción de gas, que se obtuvo una superficie
ácida con una profundidad ácida, esto quiere decir, un pico amarillo con fondo amarillo.
ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en
medio ácido. Los resultados de la prueba debe ser leídos luego de 18-24 horas de incubación.
Si la lectura se efectúa a tiempos menores pueden existir falsos positivos por la presencia de
acidez o la acidez generada no sea la suficiente para producir el viraje del indicador rojo de
superficie alcalina de pico violeta y una profundidad alcalina con un fondo violeta.
(MacFaddin, 2003)
produce un viraje de la totalidad del medio de cultivo al color amarillo. Los microorganismo
bacteriano y permanencia de color verde. Escherichia coli, junto con las especies Shigella,
sodio mantiene el equilibrio osmótico. El fosfato dipotásico actúa como un sistema tampón.
través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente,
orgánicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos
Se observó que la Escherichia coli no hidroliza la urea, por lo cual el medio de cultivo
El medio tiene como indicador de la producción de acidez o alcalinidad el Rojo Fenol. Los
microorganismos que poseen actividad ureasa , actúan sobre la urea presente en el medio,
hace que el medio vire de anaranjado-amarillo a rosa fuerte. Los microorganismos que no
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medio con un color amarillo o incluso no alterarlo al ser pequeña la presencia de este azúcar
2015).
5.1.5 MOVILIDAD
pues esta posee cierta movilidad gracias a una serie de flagelos que rodean su estructura; esta
particularmente de la tripteina y puede ser metabolizado por algunas bacterias para formar
de ser semisólido, condición necesaria para detectar movilidad, que se evidencia por el
enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde más allá de la línea de siembra del
las bacterias móviles producen bacterias inmóviles que parecen estables y en raras
El Indol es uno de los productos de degradación del metabolismo del aminoácido triptófano.
Las bacterias que tienen la enzima triptofanasa pueden escindir el triptófano y producir así
indol, ácido pirúvico y amoníaco. La presencia del indol se detecta por una coloración roja al
2008). El tubo analizado con la bacteria Escherichia coli indica que la bacteria posee la
enzima triptofanasa.
horas, lo que indica que ésta bacteria degrada la glucosa por fermentación ácida mixta,
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a través de distintas vías
metabólicas. Según la vía utilizada se originan productos finales acidos (acido lactico, acido
acetico, acido fórmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol). Esta diferencia en
el metabolismo bacteriano, podría ser reconocida por la adición de un indicador como rojo de
metilo, para revelar la presencia de productos ácidos (Britania, 2015). Luego de una
continúan con la producción de ácidos, lo que origina un pH de terminal bajo que vence el
sistema buffer fosfato y mantiene un ambiente ácido en el medio de prueba (pH 4.2 o menor).
La prueba de rojo de metilo (MR) es una prueba cuantitativa basada en el uso de un indicador
de pH (MacFaddin, 2003).
acetoína.
Voges y Proskauer, describieron una coloración rojiza que aparece después de adicionar
hidróxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en medio con glucosa. Esta
coloración se debe a la oxidación de acetil metil carbinol a diacetilo el cual reacciona con la
peptona del medio para dar un color rojo. La prueba de Voges-Proskauer se basa en la
del ácido pirúvico, las bacterias pueden seguir muchos caminos metabólicos para la
por la acción de exoenzimas amilasas, que lo degradan a maltosa y glucosa (Alarcón , 2004).
Para observar la hidrólisis se agregó lugol en el agar, el cual hace que las zonas hidrolizadas
tomen un color claro y los alrededores de las zonas hidrolizadas se tornen de un color azul. El
por lo tanto al agregar el lugol la mayor parte del agar se tornó de color azul.
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En el agar gelatina el Bacillus cereus hidroliza la gelatina, la cual es una proteína fibrosa. La
líquida (Alarcón, 2004). Luego de retirar el mercurio al 15% se observaron zonas claras
rodeando las estrías de incubación después del lavado, debido a que no se hidrolizó por
completo.
La bacteria Bacillus cereus hidroliza la caseína, la cual es una proteína que se encuentra en la
leche. Cuando la leche se mezcla con un medio de cultivo, el medio pierde su transparencia y
se vuelve turbio dado que la caseína reacciona con los iones calcio y forma complejos
agar leche utilizado en la identificación del Bacillus cereus, se observaron zonas claras
coloración rosada en el medio de cultivo. Por otro lado se observa la presencia de burbujas en
sin presentar cambio de color. En la Tabla 2 se encuentran los resultados obtenidos de cada
prueba.
El Bacillus Cereus se caracteriza por ser un bacilo gram positivo, que presenta una
producción de ácido a partir de glucosa, hidrólisis y uso de almidón como única fuente de
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La reducción de nitratos a nitritos o gas nitrógeno por medio de la enzima nitrato reductasa
es un proceso de oxidación por el cual el nitrato proporciona oxígeno para ser usado como
viraje de color pero si se observó burbujas en el medio las cuales corresponden a nitrógeno
6. CONCLUSIONES
La forma de inoculación del medio de cultivo TSI depende de la técnica utilizada por el
profesional. Se puede inocular primero el fondo y luego el pico o de manera opuesta. Esto no
Para un correcto ensayo, agregar el indol reactivo luego que se interpretó el resultado de
las bacterias aerobias estrictas ya que solo crecen en la superficie del medio de cultivo.
Examinar los tubos y realizar la prueba de rojo de metilo y Voges Proskauer luego de la
incubación durante 48-72 horas. No se deben realizar las pruebas a las 24 horas debido a la
Cuando se siembra una serie de pruebas bioquímicas a partir del mismo cultivo, se debe
esterilizar la aguja de inoculación antes de inocular la prueba del citrato o sino inocular
primero. Cualquier arrastre de materia orgánica puede originar resultados falsos positivos.
Las características del Bacillus Cereus están presentes también en otras bacterias, por ello la
B. cereus son móviles). Un prolongado tiempo de incubación produce una hidrólisis completa
del agar almidón, gelatina y leche impidiendo la identificación de la bacteria Bacillus cereus.
7. BIBLIOGRAFÍA
Department of Agriculture)
- Laboratorios Britania. TSI Agar (Triple sugar iron agar). 2015. Disponible en:
britanialab.com
- Laboratorios BD. Triple sugar iron agar (TSI Agar). 2003. Disponible en: bd.com
andina medica.com.
páginas.
- Montoya García, Nancy, Peñuela Rivas, Claudia Giovanna, Acosta Dibarrat, Jorge
108.
8. ANEXOS
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a. Liste cuáles son las ventajas y razones por la cuales se usan las pruebas
enzima, ya que no todas las bacterias poseen las mismas propiedades, por lo cual se investiga
si estas poseen alguna enzima en particular mediante la adición del sustrato y esperando a que
ocurra la reacción. Comúnmente esta determinación viene dada por un cambio de color o de
pH en el medio de cultivo.
entéricos, a partir de bacilos entéricos, a partir de muestras clínicas, aguas servidas y otros
materiales.
Oxidasa: Esta prueba se usa para identificar microorganismos que contienen la enzima
c. Existen bacterias que tienen una acción hemolítica, confirmadas por medios
confirmadas esta acción y justifique por qué son riesgosas en el ser humano y
cuáles son los productos alimenticios que se ven grandemente afectados por la
también produce otitis media, mastitis, infecciones en las capas superficiales de la piel
(impétigo)