Evaluación de Medios de Cultivo

R
SEP
Institutos Tecnológicos
Dirección General de Educación Superior Tecnológica
Instituto Tecnológico de Colima
"EVALUACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

PARA VERIFICAR SU REPRODUCTIBILIDAD
Y SELECTIVIDAD"
OPCIÓN X
MEMORIA DE RESIDENCIA PROFESIONAL
QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE

INGENIERO BIOQUÍMICO
PRESENTA
JANETTE ESMERALDA CAMPOS RADILLO
ASESOR
DR. ARGELIA JUÁREZ ALCARAZ
06
PREMIO a la
INTRAGOB
2006
ESTUDIAR PARA PREVER

Y PREVER PARA ACTUAR
Villa de Álvarez, Col., Noviembre de 2013 S G C
CERTIFICADO BAJO LA
NORMA ISO 9001:2008
IMNC-RSGC-617
RSGC - 617
SNEST INICIO: 2012.09.28 ISO 9001:2008
IMNC-RSGC-617 TERMINO: 2015.09.28 PROCESO EDUCATIVO
ÍNDICE
1. INTRODUCCIÓN ...................................................................................................................... 1
2. JUSTIFICACIÓN....................................................................................................................... 3
3. OBJETIVOS GENERALES Y ESPECÍFICOS ..................................................................... 3
3.1 OBJETIVO GENERAL ..................................................................................................... 3
3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS .......................................................................................... 3
4. CARACTERIZACIÓN DEL ÁREA .......................................................................................... 4
4.1 MISIÓN............................................................................................................................... 4
4.2 VISIÓN ............................................................................................................................... 4
4.3 POLÍTICA DE LA CALIDAD............................................................................................ 5
4.4 SERVICIOS ....................................................................................................................... 5
5. PROBLEMÁTICA A RESOLVER ........................................................................................... 6
6. ALCANCES Y LIMITACIONES .............................................................................................. 6
7. FUNDAMENTO TEÓRICO ..................................................................................................... 7
8. PROCEDIMIENTO Y DESCRIPCIÓN DE LAS ACTIVIDADES REALIZADAS ............ 19
8.1 CONSERVACIÓN DE CEPAS A MEDIANO PLAZO EN ACEITE MINERAL....... 21
8.2 CRITERIOS DE CALIDAD EN LA EVALUACIÓN FÍSICA Y BIOLÓGICA DE
MEDIOS DE CULTIVO PREPARADOS ................................................................................. 25
8.3 PRUEBA DE PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO EN CALDOS .............................. 28
8.4 PRUEBA DE PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO EN CALDOS SELECTIVOS ........ 32
8.5 PRUEBA ECOMÉTRICA EN AGARES SELECTIVOS, DIFERENCIALES E
INDICADORES. .......................................................................................................................... 36
8.6 PRUEBA DE TOXICIDAD DEL DILUYENTE............................................................. 41
8.7 PORCENTAJE DE RECUPERACIÓN BACTERIANA EN AGARES PARA
CUENTA EN PLACA ................................................................................................................. 44
9. RESULTADOS ........................................................................................................................ 46
10. CONCLUSIÓN Y RECOMENDACIONES ...................................................................... 50
11. ANEXO 1 ............................................................................................................................. 52
12. ANEXO 2 ............................................................................................................................. 78
13. GLOSARIO .......................................................................................................................... 82
14. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................................ 84
I
1. INTRODUCCIÓN
Los medios de cultivo son mezclas de sustancias nutritivas que fueron

ideadas para favorecer el crecimiento, la reproducción o identificación de
microorganismos.
Los requisitos nutricionales de las bacterias reflejan su capacidad

biosintética, y la célula puede obtener sus nutrientes para desarrollarse
tomándolos directamente del medio o sintetizándolos a partir de otros materiales.
Las necesidades nutricionales de los microorganismos pueden ser:

elementales, energéticas o específicas.
Las elementales consisten en aquellas sustancias que necesitan para su

composición celular, como los ácidos nucleicos, glúcidos y lípidos; estas
necesidades son comunes para todas las bacterias, pero existen diferencias en la
forma de utilizar tales sustancias para simulación, dependiendo de la capacidad de
degradación y de síntesis de cada especie.
Los elementos necesarios son carbono, hidrógeno, nitrógeno, oxígeno, azufre y

fósforo; en menor cantidad potasio, magnesio y fierro, además de otros
oligoelementos como manganeso, zinc, cobre, cobalto y molibdeno. Las fuentes
de carbono pueden ser el CO2 atmosférico, compuestos simples como el citrato o
sustancias más complejas como azúcares y aminoácidos. El nitrógeno pueden
obtenerlo algunas bacterias del aire, pero la mayoría lo requieren en forma de
nitratos, sales de amonio o compuestos orgánicos de nitrógeno. El azufre lo
obtienen de compuestos orgánicos como la cisteína o inorgánicos como sulfuros o
tiosulfatos. Las necesidades energéticas de las bacterias las satisfacen las
reacciones de óxido-reducción, como la oxidación o fermentación de azúcares o
ácidos orgánicos.
Las sustancias específicas son compuestos como aminoácidos, vitaminas,

bases púricas, carbohidratos, etc. que deben ser proporcionados, debido a que no
se encuentran en operación sus vías sintéticas. Además de los nutrientes, los
1
medios de cultivo deben reunir condiciones físico-químicas específicas de
actividad de agua, pH y potencial de óxido reducción. El contenido de agua es un
factor muy importante para el desarrollo bacteriano, ya que esta sustancia
interviene en muchas de las reacciones químicas dentro de la célula y es
indispensable para disolver los compuestos que atraviesan la pared celular.
Es muy importante el ajuste del pH del medio para un buen desarrollo

bacteriano. La mayoría de las bacterias crece a un pH cercano a la neutralidad; sin
embargo, hay microorganismos que requieren pH ácido o alcalino.
Durante la esterilización, el oxígeno disuelto se libera, bajando el potencial

de óxido-reducción; al enfriarse el medio, el oxígeno se re-disuelve. Por esta
causa, se calientan los medios para sembrar bacterias anaerobias. Posteriormente
se deberá aislar el medio del oxígeno atmosférico mediante capas de vaselina,
aceite o agar, o inactivarlo agregando sustancias productoras como tioglicolato o
cisteína [1].
2
2. JUSTIFICACIÓN
El presente proyecto se elaboró con la finalidad de mejorar el control en los distintos

factores que pudiesen repercutir o afectar de manera directa o indirectamente a los medios de
cultivo que son utilizados para llevar a cabo las determinaciones y análisis realizados en el
Laboratorio Estatal, además de garantizar una mejor calidad y veracidad de los resultados
obtenidos, por medio del control de calidad de los medios de cultivo.
3. OBJETIVOS GENERALES Y ESPECÍFICOS
3.1 OBJETIVO GENERAL
Evaluar cada uno de los procedimientos específicos establecidos en el

área de control de calidad de medios, para verificar la reproducibilidad y
selectividad de los medios de cultivos utilizados en el Laboratorio Estatal de Salud
Pública
3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Confirmar que los medios de cultivo adquiridos en forma deshidratada

comercialmente y utilizados en el área de preparación de medios cumplan
con la función requerida de Productividad y Selectividad.
 Establecer los lineamientos para garantizar que las cepas microbianas

obtenidas de las áreas microbiológicas del Laboratorio Estatal cumplan con
las características de viabilidad, pureza y estabilidad.
3
4. CARACTERIZACIÓN DEL ÁREA
Este proyecto se llevó a cabo en el Laboratorio Estatal de Salud Pública

del Estado de Colima (LESP), dentro del departamento de Control Ambiental, en
el Área de Control de Calidad de Medios de Cultivo.
El Laboratorio Estatal de Salud Pública del Estado de Colima (LESP), es

una organización dependiente de la Secretaría de Salud, que enfoca su servicio
principalmente a la vigilancia Epidemiológica y Salud ambiental, adoptando para
esto, una cultura de calidad como forma de trabajo en beneficio de la población
colimense.
La Secretaría de Salud es la dependencia del ejecutivo federal que tiene

fundamentalmente como objetivo proteger la salud de la población. En el
departamento de Control Ambiental su objetivo es brindar apoyo a las actividades
de vigilancia sanitaria con métodos de laboratorio.
4.1 MISIÓN
Somos el Laboratorio de Referencia del Estado de Colima que realiza

análisis especializados, oportunos y confiables a los usuarios del Sector Salud y a
la población del Estado de Colima, en las áreas de epidemiología y de protección
contra riesgos sanitarios.
4.2 VISIÓN
Ser un Laboratorio Acreditado del Sistema Nacional de Salud, que aplique

tecnología de vanguardia y un marco analítico que dé satisfacción a las
necesidades de la población, contribuyendo a mejorar la salud de nuestra
comunidad.
4
4.3 POLÍTICA DE LA CALIDAD
Quienes trabajamos en el Laboratorio de Salud Pública de Colima estamos

comprometidos en lograr la satisfacción de nuestros usuarios aplicando las
buenas prácticas de laboratorio, nos capacitamos para garantizar nuestra
competencia técnica y aplicamos la mejora continua de nuestros Sistemas de
Gestión de Calidad.
4.4 SERVICIOS
 Analizar las muestras recibidas del programa de control sanitario enviadas

por la dirección de regulación sanitaria y las jurisdicciones sanitarias I, II, y
III.
 Asesorar al personal de regulación sanitaria y de las jurisdicciones cuando
lo soliciten.
 Colaborar con el departamento de vigilancia epidemiológica en caso de
brotes de enfermedades vehiculizadas por alimentos.
 Apoyar a las instituciones del sector salud para el análisis de aguas,
alimentos y superficies vivas e inertes en centros de desarrollo infantil.
 Capacitar y/o asesorar al personal de la red de laboratorios para que
realice el monitoreo ambiental de las salas quirúrgicas y toco quirúrgicas de
los hospitales de la Secretaría de la Salud.
 Realizar análisis microbiológico e investigación de Vibrio cholerae en aguas
negras y blancas, recolectadas por la comisión de agua potable y
alcantarillado de manzanillo (CAPDAM), así como las jurisdicciones
sanitarias, I, II, III y hospitales privados y del sector salud.
 Ofrecer análisis microbiológicos y fisicoquímicos de alimentos, sal, vísceras
de res, aguas de red, de pozo, de tanque, de fuentes naturales, aguas
purificadas y/o bebidas no alcohólicas, hielo en barra y/o purificado a
clientes particulares que requieran el servicio.
 Capacitar y adiestrar a prestadores de servicio social y prácticas
profesionales.
5
 Realizar los estudios microbiológicos en apoyo al programa de vigilancia
de diarreas y agua limpia.
5. PROBLEMÁTICA A RESOLVER
Hoy, más que nunca, el laboratorio necesita soluciones rápidas, fiables y de

gran calidad. El control de la calidad en la preparación y evaluación de los medios
de cultivo es considerado como una esencial y buena práctica de laboratorio,
necesaria para mantener el nivel y la ejecución de cualquier técnica
microbiológica. En el Laboratorio Estatal de Salud Pública no se cuentan
implementados los procedimientos para la evolución de medios de cultivo.
Este es un proceso continuo que se extiende desde las materias primas, a

través del productor hasta el producto final utilizado en las áreas posteriores.
Por esta razón, se le confiere una gran importancia y está considerado

como uno de los puntos críticos de control en el análisis microbiológico, del cual
depende la seguridad de los resultados que emiten los laboratorios de ensayo.
6. ALCANCES Y LIMITACIONES
 El presente trabajo tendrá como propósito evaluar los medios de

cultivo sólidos, semisólidos y líquidos elaborados en el área de preparación de
medios. Se aplicaran cada uno de los procedimientos establecidos por el área de
control de calidad, se realizara el respectivo reporte y se establecerán los formatos
correspondientes de cada técnica donde se aprobara o rechazara el medio
evaluado. Se adquirirá la habilidad para el manejo del equipo requerido para la
ejecución de la técnica mencionada en el Laboratorio Estatal.
6
7. FUNDAMENTO TEÓRICO
Medios de cultivo:
Son necesarios para el aislamiento, mantenimiento, la reproducción y
la identificación de los microorganismos.
 Contienen sustancias nutritivas
 pH adecuado
 Deben estar estériles.
2. Incubación:
Depende del metabolismo del microorganismo a cultivar.
 La atmósfera empleada.(aerobio, microaerofílico, anaerobio)
 Tiempo.
 Temperatura.
Clasificación de medios de cultivo
1. De acuerdo al Manual de recomendaciones generales para la

preparación de medios de cultivo (1989), los medios de cultivo pueden
clasificarse siguiendo diferentes criterios convencionales; según su
consistencia, pueden ser sólidos, líquidos o semisólidos.
En base a su uso pueden clasificarse en:
- Medios de pre-enriquecimiento.
- Medios de enriquecimiento.
- Medios selectivos.
- Medios diferenciales.
- Medios indicadores.
- Medios nutritivos (simples o enriquecidos).
- Medios para conservación de cepas.
Medios de pre-enriquecimiento. Tienen la función de reanimar e iniciar la

proliferación de microorganismos potencialmente afectados en su viabilidad,
7
permitiendo su recuperación a partir de productos que han sido sometidos a
tratamientos como la desecación, congelación, procesos caloríficos, etc., que
pueden dañar alguna o algunas de las estructuras celulares. Estos medios no
tienen agentes bacteriostáticos y se utilizan en productos con baja carga
microbiana.
Medios de enriquecimiento. Son medios que favorecen el desarrollo de un

grupo particular de microorganismos, para facilitar su aislamiento posterior. En
este caso, se utilizan agentes bacteriostáticos que afectan lo menos posible al
germen seleccionado, pero inhiben lo suficiente el desarrollo de los
microorganismos acompañantes no deseables.
Medios selectivos. Son medios que favorecen el crecimiento de ciertos

microorganismos inhibiendo a otros no deseados. Estos medios pueden tener
varios grados de selectividad y ésta suele ser inversamente proporcional a su
sensibilidad.
Medios diferenciales. Son medios sólidos que permiten obtener colonias

de aspecto característico, para poder distinguirlas de colonias de microorganismos
no deseados que también pueden desarrollarse en el mismo medio.
Medios indicadores. Estos medios están constituidos por una base

adicionada de una o varias sustancias que permitan poner en manifiesto una o
más características fisiológicas del germen.
Medios nutritivos (simples o enriquecidos). Son medios que permiten el

desarrollo o conservación de microorganismos. Para el aislamiento de
microorganismos exigentes en sus requerimientos nutricionales, pueden
emplearse medios simples adicionados de nutrientes ricos en proteínas, hidratos
de carbono, etc. A estas variantes se les conoce como medios enriquecidos.
Medios para conservación de cepas. Estos medios son muy variables,

pues su composición dependerá de los microorganismos que se van a conservar.
Es recomendable que los medios no contengan en lo posible sustancias que al ser
metabolizadas pueden afectar la viabilidad de los microorganismos, o en su
defecto estos medios deben de contener sistemas reguladores.
8
Almacenamiento y conservación de los medios preparados
La estabilidad de los medios de cultivo ya preparados es limitada; algunas

fórmulas que contienen sustancias inestables tales como antibióticos deben
emplearse inmediatamente después de su preparación. En los casos en que el
medio conste de una base o sustancias agregadas posteriormente (como Baird-
Parker, agar sangre) es preferible preparar la base que puede almacenarse y el
día de su uso agregar el complemento inestable.
La mayoría de los medios deben de conservarse en refrigeración entre 4 y

10°C durante un tiempo limitado, debido a su deshidratación. Otros medios, como
los que contienen tioglicolato o fosfatos se conservan mejor a temperatura
ambiente. Es recomendable conservar los medios de cultivo en placa en bolsas de
plástico para evitar su deshidratación. Debe permitirse que los medios
conservados en refrigeración adquieran a temperatura ambiente antes de su
empleo.
Garantía de la calidad
La exactitud de un informe depende, de manera importante, de la calidad de

los medios y reactivos que se emplean en el análisis y del cuidado que se tuvo en
su preparación y empleo.
El uso extenso de preparaciones deshidratadas de medios de cultivo, ha

facilitado enormemente el trabajo de los laboratorios de microbiología,
asegurándose entre otras cosas una mayor uniformidad en los constituyentes de
las fórmulas. Aunque es responsabilidad del fabricante asegurar la calidad de sus
preparaciones deshidratadas, es un hecho que un medio fabricado con el mayor
cuidado y sometido a los controles de calidad más estrictos, pierde su valor si el
usuario no lee y sigue cuidadosamente las instrucciones de preparación, o si para
ésta emplea agua de mala calidad o material sucio; por estos motivos, es
ineludible que, para asegurar la calidad del medio preparado, el usuario efectúe un
mínimo de pruebas de control que incluyan tanto determinaciones físicas como
biológicas.
9
Aspecto
El primer punto a considerar en la evaluación de calidad de un medio de

cultivo preparado es su aspecto: Ciertas características pueden ser indicativas de
algunos errores técnicos, de la calidad inadecuada de algún ingrediente o de la
preparación incorrecta de los recipientes que lo contengan.
Para el caso de caldos, en éstos no debe presentarse turbidez ni

precipitación; su existencia puede indicar una mala calidad del agua empleada en
su preparación, desde el punto de vista de su contenido de iones, el uso de
recipientes sucios, el sobrecalentamiento durante su preparación o un ajuste de
pH incorrecto.
Si el color de un medio es distinto al habitual puede ser indicio de un ajuste

de pH incorrecto, particularmente en el caso de medios que contengan
indicadores, o bien de un sobrecalentamiento durante la preparación, que pudo
ocasionar la caramelización de azúcares o la destrucción o deterioro de
colorantes; además, el envasar el medio en recipientes sucios puede ser el origen
del cambio de color.
Por lo que respecta al punto de solidificación y a la estabilidad del gel, éstos

pueden verse afectados por varios factores. Se espera que los medios que
contienen agar permanezcan con una consistencia firme entre los 33 y los 39°C.
un punto de solidificación muy alto puede indicar que se ha pesado demasiado
medio de cultivo, que la calidad del agar es inadecuada o que se agregó mayor
cantidad de agar que la requerida por la formula. Por el contrario, una estabilidad
del gel muy baja, esto es, cuando el medio no solidifica satisfactoriamente, puede
obedecer entre otras causas, a que se empleó menos medio del requerido, a que
el medio no se disolvió completamente, a que sufrió un sobrecalentamiento
durante su preparación, en particular a pHs extremos, o a que el agar es de
calidad pobre.
10
Esterilidad
El control de la esterilidad de un lote de medio de cultivo, puede llevarse a

cabo difiriendo su uso por 24 horas desde su preparación, y observando la
ausencia de crecimiento. No obstante, ya que esta prueba solo es indicativa de
contaminación masiva y principalmente de origen bacteriano, se recomienda
también incubar 4% de los tubos o cajas preparadas durante un tiempo
prolongado (entre 5 y 7 días) y a temperatura que favorezca el desarrollo de
bacterias como de hongos (37 y 25 °C, respectivamente). Como esta prueba daría
resultados extemporáneos al trabajo adecuado, es de primordial contar con
sistema adecuado de validación de los procesos de esterilización, que incluya el
uso de indicadores no solo químicos sino también biológicos. Conviene recordar
que la cinta testigo no indica el tiempo de exposición de los materiales a cierta
temperatura, y su vire ocurre a temperatura inferior a la de esterilización. La
presencia de contaminación de un lote de medio preparado, puede indicar no solo
esterilización deficiente, si no también contaminación post-esterilización, como
durante el envasado, o bien el empleo de aditivos contaminados que se agreguen
a las bases [1].
11
Control de la reactividad de algunos medios de cultivo en placa
Tabla 1. Control de la reactividad de cada microorganismo al medio de cultivo [1].
Incubación Resultados esperados

Medio de Microorganismos Características del cultivo
Temperatur
cultivo Tiempo testigo Morfología de las colonias
a
Agar Baird- 24-48 h 35°C Staphylococcus aureus Colonias negras, lustrosas,
Parker convexas, de 1 a 5 mm de
diámetro, rodeadas por un halo
claro o transparente.
Staphylococcus
epidermidis Colonias negras, lustrosas, de
forma irregular. Al cabo de 24 h,
presencia de zonas opacas
alrededor de las colonias.
Agar bilis y 24 h 35°C Escherichia coli Colonias rojas, de 1 a 2 mm de

rojo violeta diámetro, con halo de
precipitación rojizo.
Proteus vulgaris
Colonias incoloras.
Streptococcus faecalis
Colonias pequeñas, de color
rosado.
Agar sulfito de 48 h 35°C Salmonella Colonias negras, rodeadas por un
bismuto typhimurium halo negro o grisáceo, con brillo
metálico.
Escherichia coli Desarrollo ocasional. Colonias

pequeñas, verdosas o incoloras.
Agar Mac 18-24 h 35°C Escherichia coli Colonias grandes, rosadas o

Conkey rojas con precipitado opaco.
Proteus mirabilis Colonias incoloras y

transparentes.
Enterococos
Inhibición del crecimiento.
Colonias escasas, puntiformes y
opacas.
Agar SS 18-24 h 35°C Salmonella Colonias incoloras, transparentes

typhimurium con centro negro.
Colonias transparentes, incoloras.

Shigella flexneri
Colonias pequeñas de color
Escherichia coli rosado o rojo; poco crecimiento o
completa inhibición.
12
Agar TCBS 18-24 h 35°C Vibrio Colonias pequeñas con el centro
parahaemolyticus verde azulado.
Colonias grandes, amarillas.

Vibrio alginolyticus
Inhibición del crecimiento.
Streptococcus faecalis
Agar verde 18-24 h 35°C Salmonella Colonias transparentes, de color
brillante typhimurium rosa palido.
Colonias de color vcerde-

Escherichia coli amarillento opacas, con halo
amarilliento.
Staphylococcus aureus Inhibición del crecimiento.
Agar XLD 24-18 h 35°C Escherichia coli Colonias amarillas.
Salmonella Colonias rojas, transparentes con

typhimurium centro negro.
IDENTIFICACIÓN DE CEPAS
Consiste en la determinación de las características fenotípicas y/o

genotípicas y la comparación de estas características con los diferentes taxones
de la clasificación considerada. Las características a determinar y su número
depende principalmente del tipo de bacteria y del fin que se persigue en la
identificación.
Pruebas bioquímicas
Son pruebas clínicas realizadas al grupo de las enterobacterias.
Se puede resumir en los siguientes puntos:
- Sustrato (contenido en medio de cultivo)

- Enzima o vía metabólica (secretada en el interior del microorganismo)
- Producto
- Revelados y/o indicador
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Prueba de citrato
Principio: determinar si un microorganismo es capaz de utilizar el citrato como

única fuente de carbono para el metabolismo y el crecimiento con alcalinidad
resultante [8].
Medio de Citrato de Simmons

Sustrato: Citrato de sodio.
Vía: Varias dependientes del pH del medio.
Producto: Acetato/formato en condiciones alcalinas y Acetato, CO 2,
lactato/Acetoína y CO2 en condiciones ácidas.
Indicador: Azul de bromotimol.
Un microorganismo que puede utilizar el citrato como única fuente de carbono
también utiliza las sales de amonio del medio como única fuente de nitrógeno. La
extracción de nitrógeno de las sales de amonio produce amoniaco y se alcaliniza
el medio virando el indicador al alcalino [8]. Véase Fig. 1 (Anexo 2).
Prueba TSI (Agar con Hierro de Kliger/azúcar triple y hierro.)
Principio: determinar la capacidad de un microorganismo para atacar un hidrato

de carbono específico incorporado en un medio de desarrollo basal, con
producción de gas o sin ella, junto con la determinación de la posible producción
de ácido sulfhídrico (H2S) [8].
Las bacterias incapaces de fermentar utilizan las peptonas y liberan aminas que
alcalinizan todo el medio. Las bacterias que solo fermentan la glucosa,
inicialmente también utilizan aeróbicamente la glucosa. Debido a la baja
concentración de glucosa (0.1%), metabolizan las peptonas alcalinizando la
superficie del medio. Las bacterias fermentadoras de glucosa y lactosa, fermentan
la glucosa 0.1% y al término de esta, fermentan la lactosa 1%, permitiendo la
acidificación completa del medio. Véase Fig. 2 (Anexo 2).
14
Prueba de SIM
Principio: En presencia de tiosulfato en el medio o la degradación de proteínas

liberando aminoácidos azufrados, algunos microorganismos forman H2S gaseoso
por medio de las enzimas tiosulfato reductasa y cisteína desulfurilasa. El gas
incoloro H2S reacciona con el citrato de amonio férrico para producir un
precipitado negro insoluble de sulfuro ferroso metálico [8].
Las enzimas triptofanasas oxidan el triptófano para formar tres metabolitos: indol,
metil indol y ácido indolacético. Los reactivos de Erhlich o Kovacs contienen
DMABA que reacciona con el indol producido formado un compuesto quinónico
color violeta, que se observa por la aparición de un anillo en la superficie del
medio
El medio de cultivo tiene consistencia semisólida por lo que la movilidad se
observa por el crecimiento del microorganismo en todo el tubo, más allá de la zona
de inoculación (picadura). Los microorganismos inmóviles solo crecerán en la
zona inoculada [8]. Véase Fig. 3 (Anexo 2).
Prueba de Ureasa
Principio: determinar la capacidad de un microorganismo de hidrolizar la urea en

dos moléculas de amoniaco por la acción de la enzima ureasa, con la resultante
alcalinidad.
La hidrólisis de la urea por la enzima ureasa libera dos moléculas de amoniaco

que alcaliniza el medio, entonces se vira el indicador de pH, en el caso del rojo de
fenol una prueba positiva es color bugambilia [8]. Véase Fig. 4 (Anexo 2).
Prueba descarboxilasa (Lya)
Principio: determinar la capacidad enzimática de un microorganismo de

descarboxilar un aminoácido para formar una amina con la resultante alcalinidad.
Los aminoácidos al perder el grupo carboxilo se convierten en diaminas lo que

incrementa el pH del medio y el indicador (púrpura del bromocresol) vira a violeta.
Las descarboxilasas son útiles en la diferenciación de enterobacterias [8]. Véase
Fig. 5 (Anexo 2).
15
Prueba de la Coagulasa
Principio: probar la capacidad de un microorganismo de coagular el plasma por la

acción de la enzima coagulasa.
La enzima producida por S. aureus es excretada al medio extracelular, el

mecanismo propuesto es la acción de esta enzima sobre los factores de la
coagulación presentes en el plasma y formar un coagulo visible [8].
Prueba Oxidasa
Principio: determinar la presencia de enzimas oxidasas.
Se basa en la producción bacteriana de una enzima oxidasa intracelular. Esta

reacción se debe a un sistema de citocromo oxidasa que activa la oxidación del
citocromo reducido por el oxígeno molecular, el que a su vez actúa como un
aceptor de electrones en la fase terminal del sistema de transferencia de
electrones. La prueba positiva se observa por la oxidación del reactivo incoloro en
pocos segundos formándose un producto colorido [8].
Prueba de Voges Proskauer
Caldo RM/VP
Sustrato: Glucosa.
Vías: Fermentación ácida o neutra.
Producto: Acido orgánicos o acetoína.
Reveladores: Solución de Rojo de Metilo,
Alfa Naftol y KOH 40%.
Fermentación ácido mixta: Los productos finales son ácidos orgánicos que
provocan un descenso brusco del pH inicial del medio (viraje del indicador de
amarillo pH por encima de 5,1) y rojo (pH por debajo de 4,4). Estos
microorganismos por cada 4 moléculas de piruvato formadas, reducen dos a ácido
láctico y dos las metabolizan para formar ácido acético y fórmico; parte del acetato
pasa a etanol y parte del fórmico a CO2 y H2 en cantidades iguales [8].
16
Reacciones bioquímicas en enterobacterias
Tabla. 2 Reacciones bioquímicas de los microorganismos [7].
Escherichia coli
Shigella sonnei
Otras Shigella
E. aerogenes
Salmonella
P. mirabilis
P. vulgaris
C. freundii
TIPICA
Indol + V - +
Rojo de metilo + + + + + + +
Voges-Proskauer + V
Uso de citrato V + + V (V)
(Simmons)
H2S (TSI) + + + +
Urea - V(W + V
)
Cianuro de potasio + + + +
Movilidad V + + + + +
Gelatina (22°C) V + +
Descarbox. lisina V - - + - + - -
Arginina dehidrolasa V - V - (V) V(W - -
)
Descarbox. ornitina V + - + V + - +
Desaminac. - + +
Fenilalanina
Malonato V V
Gas de glucosa + B + + + V +
Lactosa + d (V) +
Sacarosa V d V + + V
D-Manitol + + V - + + - -
Dulcitol V V - V -
Salicina V V + V V
Adonitol +
I(meso)-inositol +
D-sorbitol V V - + + +
L-arabinosa + + V V + + -
Rafinosa V d V - V + -
L-ramnosa V (+) V - + + - -
+ = 90% muchos son positivos con 48 h.
V = son el 10% positivos en 48 h.
(+) = del 10% al 89.9% son positivos en 48 h.
17
(V) = el 90% son positivas entre 3 y 7 días.
W = el 50% son positivas en 48 h y el 90% son positivas de 3 a 7 días.
d = débilmente positiva.
b = muchas cepas de S. sonnei dan reacciones relativamente positivas de lactosa

(88%) y sacarosa (85%).
C = algunos serotipos de S. flexnerii producen gas de glucosa.
18
8. PROCEDIMIENTO Y DESCRIPCIÓN DE LAS ACTIVIDADES
REALIZADAS
EVALUACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
El tipo de evaluación que debe practicarse a un medio de cultivo, depende

íntimamente de su propósito. El objetivo que cada evaluación consiste en verificar
los siguientes parámetros:
a) El desarrollo de pequeños inóculos en los medios nutritivos.

b) La aparición de las reacciones deseadas en los medios para las
pruebas bioquímicas.
c) El crecimiento de organismos típicos en los medios diferenciales.
d) El crecimiento de los organismos deseados y la inhibición de los
microorganismos indeseables en los medios selectivos o de enriquecimiento.
e) La mayor recuperación de microorganismo en los medios de pre-
enriquecimiento.
f) La formación y el aspecto de las colonias en los medios sólidos.
Dada la complejidad de algunas de estas pruebas para valorar estos

parámetros, no es práctico efectuarlas con la misma periodicidad.
Las pruebas deben realizarse toda vez que el aspecto o pH del medio no
correspondan a lo esperado. En caso contrario, se sugiere probar:
 Los medios nutritivos cada vez que se cambie de lote de medio

deshidratado, comparándolo con el que está en uso, para asegurar que no
es inferior en capacidad de sostener el crecimiento de microorganismos.
 Los medios selectivos de uso esporádico, cada vez que se prepare un lote,
utilizando las cepas correspondientes.
En los medios de alta selectividad se deben incluir testigos tanto positivos

como negativos, en todas las pruebas.
19
Entre los defectos que un medio puede presentar desde el punto de vista de
su efectividad biológica, cabe destacar la presencia de alteración y la cantidad de
crecimiento, la de crecimiento difuso y la de crecimiento atípico.
Un medio puede presentar escaso crecimiento, debido a la existencia de

sustancia inhibidoras en el recipiente donde se envasó o preparó, en el agua
donde se rehidrató o en la misma muestra que se sembró. Otras causas de este
defecto son un pH incorrecto, algunos aditivos inhibidores agregados en
cantidades incorrectas, el sobrecalentamiento y presencia de organismos
dañados, bien en la muestra o debido a un procedimiento incorrecto, como el
empleo de medio caliente durante una cuenta de vaciado en placa.
Un crecimiento excesivo en un medio de cultivo puede ser causado por la

destrucción de los inhibidores selectivos por sobrecalentamiento o por el uso de
aditivos inhibidores en cantidades incorrectas.
La participación de crecimiento difuso puede ser motivada por la

destrucción de inhibidores del fenómeno por sobrecalentamiento, por el uso de
placas con la superficie muy húmeda o por el empleo de un inóculo excesivo.
Finalmente, la aparición de crecimiento atípico puede obedecer a una mala

formulación del medio, a la adición de sustancias complementarias en cantidades
incorrectas o de selección de mutantes [1].
20
8.1 CONSERVACIÓN DE CEPAS A MEDIANO PLAZO EN ACEITE
MINERAL
El uso de los microorganismos ha sido clave en el enfrentamiento y solución

de los graves problemas de la humanidad en los diferentes sectores. Estos
necesitan ser viables al menos durante el estudio y los experimentos, para lo cual
deberán ser mantenidos y conservados en una colección de cultivos microbianos
garantizando su disponibilidad.
1. CULTIVO INICIAL
1.1 A partir del cultivo primario tomar una asada y depositarlo en 10 ml de

Caldo Soya Tripticaseina o BHI (Infusión Cerebro Corazón).
1.2 Incubar a 35 ± 2°C por 24 horas.
2. CULTIVO DE RESERVA O MADRE
2.2 Inocular por estría cruzada en placa de Agar nutritivo.
2.3 Incubar a 35 ± 2°C por 24 horas.

2.4 Realizar descripción morfológica de las colonias desarrolladas.
2.5 Tomar una colonia y realizar siembra masiva.
2.6 Incubar a 35°C por 24 horas.
2.7 Tomar inóculo y realizar siembra por estría en 4 tubos previamente
etiquetados y que contienen agar nutritivo con bisel corto (cultivo
intermedio), incubarlos a 35°C por 24 hrs.
2.8 También realizar a partir de esta placa frotis para Gram y para pruebas
bioquímicas convencionales.
NOTA: Si las pruebas bioquímicas se realizan con el sistema API

(Sistemas de identificación multipruebas) anexar el formato respectivo.
21
2.9 Realizar otras pruebas complementarias como: Confirmación de
serotipo, movilidad, oxidasa, coagulasa, termonucleasa y hemólisis de
sangre en caso de que aplique.
Los resultados se registrarán en el formato control de calidad de cepas

microbianas APM- F- 019.
2.10 Sellar con cinta parafilm las placas de AN y almacenar en

refrigeración.
3. CULTIVO INTERMEDIO
3.1 Realizar etiquetas con la siguiente información: Nombre de la cepa,

clave interna, fecha de pase, CI (cepa o cultivo intermedio) y No. de
tubo.
3.2 Verificar la presencia de desarrollo en los 4 tubos de AN.
3.3 Adicionar aceite mineral estéril 1cm arriba del pico del agar inclinado.
3.4 Sellar con cinta parafilm y almacenar a temperatura ambiente (23 a

27°C) o en refrigeración (4 a 8°C).
Cada mes realizar evaluación para verificar su pureza, viabilidad y

estabilidad aplicando los puntos 1 y 2 de este procedimiento.
4. CULTIVO DE TRABAJO
4.1 Realizar etiquetas con la siguiente información: Nombre de la cepa,

clave interna, fecha de pase, CT (cepa o cultivo de trabajo) y No. de
tubo.
4.2 Etiquetar 4 tubos de 13 x 100 que contienen agar nutritivo (AN) con bisel
largo.
22
4.3 El día del control de cepas, sacar un tubo del refrigerador (Cultivo
intermedio) atemperar y sembrar en placa de AN para obtener colonias
aisladas.
4.4 Picar una colonia desarrollada en la placa de Agar Nutritivo y sembrar

por estría en bisel largo los tubos (Cepa de trabajo) Incubar a 35 ± 2°C
por 24 horas.
4.5 Observar desarrollo, sellar con cinta parafilm, guardar en gaveta a

temperatura ambiente hasta su uso.
Inactivar los cultivos y materiales de contacto provenientes de las cepas

adicionando cloro al 0.5% y dejar actuar por un lapso de 30 min.
En la Fig.1 se detalla la forma en que se realiza el procedimiento

mencionado [4].
23
Fig. 1 Proceso para la conservación de cepas.
24
8.2 CRITERIOS DE CALIDAD EN LA EVALUACIÓN FÍSICA Y
BIOLÓGICA DE MEDIOS DE CULTIVO PREPARADOS
Solicitar al Área de Preparación de Medios (APM) los pedidos de medios

preparados en frasco, tubo y placa solicitados comúnmente por el Área de Control
Ambiental.
1. EVALUACIÓN FÍSICA DE MEDIO EN CALDO
Se debe de verificar en forma visual la apariencia y color, en los caldos no

debe haber turbiedad o material precipitado, existen excepciones como el caldo
tetrationato cuya apariencia física particular y diferente se especifica en la parte de
fórmulas de cada medio de cultivo. Se deberán de verificar los volúmenes de los
caldos con una probeta.
1.1 Inspeccionar y verificar los medios entregados por el APM observando:
Criterios de evaluación física y biológica en caldos y diluyentes:
 Envases etiquetados con la siguiente información: Nombre o

abreviatura del medio de cultivo, volumen, fecha de preparación, No. de
lote, personal que los preparó,
 Envases en buenas condiciones.
 Ausencia de turbidez y precipitación.

 Envases con tapa de rosca bien cerrada.
 Ausencia de materia extraña.
 Incoloro (donde aplique, diluyentes)
 Presencia de campanas Durham (donde aplique, caldos)
 pH finales dentro de los límites establecidos por el fabricante.
 Volúmenes dentro del rango requerido (donde aplique, diluyentes)
 Color característico del medio (donde aplique, caldos)
25
 Prueba de esterilidad del medio entregado (donde aplique, caldos)
2. EVALUACIÓN FÍSICA EN PLACAS
Los agares deben de tener una consistencia firme y de color característico.
2.1 Inspeccionar físicamente y verificar con la prueba de esterilidad del

medio entregado por el APM observando:
Criterios de evaluación física y biológica en placas:
 Envases etiquetados con la siguiente información: Nombre o abreviatura del

medio de cultivo, Fecha de preparación, No. de lote, personal que los
preparó.
 Coloración característica del medio.
 Solidificación y estabilidad del gel adecuada.
 Ausencia de rajaduras en su superficie.
 Ausencia de humedad en la tapa y superficie.
 Ausencia de coágulo por enfriamiento del medio.
 pH finales dentro de los límites establecidos por el fabricante.
 Ausencia de burbujas en el medio.
 Ausencia de colonias contaminantes.
 Placas rotuladas en placa.
 Envasadas en bolsas de plástico e identificadas con etiquetas.
Se registran todos los medios de cultivo recibidos en el formato FO-08-16-

1508 y registran si el producto es o no conforme, así mismo se deberán registrar
las causas de rechazo. A continuación en la Fig. 2 se resume el procedimiento
mencionado [3].
26
INICIO
SOLICITUD DE MEDIOS DE CULTIVOS

AL APM
RECEPCION DE LOS MEDIOS DE

CULTIVO
REGISTRAR EN APLICACIÓN DE LOS

FORMATO FO-08-16- CRITERIOS DE DEVOLVER PRODUCTO
1508 ACEPTACIÓN Y AL APM
RECHAZO
NO
CUMPLE
SI
CUMPLE
GUARDAR PRODUCTOS EN
SI
LUGAR CORRESPONDIENTES.
FIN
Fig. 2 Evaluación física de los medios de cultivo.
27
8.3 PRUEBA DE PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO EN CALDOS
1. PREPARACIÓN DE LAS CEPAS EN PLACA

1.1 Sembrar en placas de agar nutritivo por separado la cepa deseada y la
interferente.
1.2 Incubar a 35 ± 2°C/ 18 - 24 horas.
2. PREPARACIÓN DEL INÓCULO

2.2 Tomar una colonia aislada de la cepa deseada e interferente e inocular
por separado a tubos que contienen 10 ml de BHI (Caldo Infusión
Cerebro Corazón), previamente rotulados con el nombre o clave
correspondiente.
2.3 Incubar a 35 ± 2°C/ 18 horas.
3. DÍA DEL CONTROL

Preparación del material de trabajo
3.1 Preparar en una gradilla dos hileras de 10 tubos del diluyente 9 (9 ml) y
rotular cada hilera de la siguiente manera: 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6,
10-7, 10-8, 10-9, 10-10.
3.2 En la misma gradilla acomodar a la par de cada hilera a partir del tubo
10-6, cinco tubos que contienen el caldo a evaluar y marcarlos como 10 -
6
, 10-7, 10-8,10-9, 10-10.
3.3 Rotular simultáneamente 10 placas Petri desechables estériles con 10-6
hasta 10-10.
Desarrollo experimental
3.4 Cumplidas las horas de incubación de la cepa deseada e interferente,

tomar 1 ml de la suspensión que contiene la cepa deseada y realizar las
diluciones decimales correspondientes a partir de las dilución 10-6
28
depositar 1 ml a placas estériles vacías y 1 ml a los tubos que contienen
el caldo a evaluar [5].
3.5 Repetir este procedimiento para la cepa interferente.
3.6 Realizar el vaciado en placa con agar cuenta estándar.
3.7 Dejar solidificar e incubar las placas a 35°C durante 24 horas. En forma
simultánea incubar los caldos a evaluar de acuerdo a las condiciones
requeridas.
4. DESARROLLO EN CALDO
4.1 Una vez transcurrido el tiempo de incubación de los caldos evidenciar
con registro y visualmente las características típicas del crecimiento.
5. SIEMBRA EN MEDIO SELECTIVO

5.1 Una vez transcurrido el tiempo de incubación de los caldos sembrar la
dilución 10-6 hasta la dilución 10-10 en placas de Salmonella shigella
(SS), agar verde brillante (VB), Agar sulfito bismuto (SB).
6. CONTEO DE PLACAS
6.1 A las 24 horas contar las colonias desarrolladas en las placas de cuenta
estándar para conocer en que dilución se tienen una concentración de
100 a 150 UFC / ml [6].
7. CRITERIOS DE EVALUACIÓN
Un medio de cultivo es considerado como aquel que tiene un

funcionamiento adecuado de selectividad y productividad cuando:
- Se observa suficiente inhibición del crecimiento del microorganismo que

debe ser inhibido (interferente) y suficiente crecimiento del microorganismo
deseado (control).
29
Expresar lectura e interpretación de los resultados en el formato FO-08-16-
1504 (Formato Promoción de crecimiento en caldo).
En la Fig. 3 se detalla la forma en que se realiza la promoción de

crecimiento en caldos [3].
30
Fig. 3 Promoción de crecimiento de microorganismos en caldos.
31
8.4 PRUEBA DE PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO EN CALDOS
SELECTIVOS
1. PREPARACIÓN DE LA CEPA
1.1 Sembrar en placas de agar nutritivo por separado las 3 cepas (la cepa
deseada y dos cepas interferentes):
Tabla 1. Cepas deseadas e interferentes para la promoción de

crecimiento en caldos selectivo.
PRUEBA DE PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO EN CALDOS SELECTIVOS
Cepas
Salmonella typhimurium Deseada
Escherichia coli Interferente
Interferente
Citrobacter freundii
1.2 Incubar a 35°C/ 18 - 24 horas.

2.1 Tomar una colonia aislada de cada una de las cepas e inocular por
separado en tubos que contienen 10 ml de BHI (Caldo Infusión Cerebro
Corazón), previamente rotulados con el nombre o clave correspondiente.
2.2 Incubar a 35 ± 2°C durante18 horas
3. DÍA DEL CONTROL

Preparación del material
3.1 Preparar en una gradilla una hilera de 10 tubos del diluyente 9 (9 ml) y
rotular de la siguiente manera: 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8,
10-9, 10-10.
3.2 En la misma gradilla acomodar a la par de la hilera a partir del tubo 10 -6,
cinco tubos que contienen el caldo selectivo a evaluar el caldo
32
Tetrationato (CTT) y el caldo Rappaport Vassiliadis (CRp) y marcarlos
como 10-6, 10-7, 10-8,10-9, 10-10.
3.3 Sacar de la incubadora los tres tubos de BHI que contienen el cultivo o
suspensión de cada una de las cepas.
3.4 Transferir las 3 suspensiones de los tubos de BHI y colocarlos en un
matraz Erlenmeyer y agitar.
3.5 Tomar 1 ml de la suspensión y realizar las diluciones decimales
correspondientes, a partir de la dilución 10-6 depositar 1 ml a los tubos
que contienen el caldo selectivo a evaluar [5].
3.6 Incubar los caldos selectivos a evaluar a 35°C durante 24 horas.
4. SEMBRADO POR ESTRÍA EN MEDIOS SELECTIVOS
4.1 Rotular las placas con los medios selectivos Verde Brillante (VB), agar
Xilosa, Lisina, Desoxicolato (XLD), agar Sulfito Bismuto (SB), agar
Salmonella shigella (SS) que corresponden a cada caldo selectivo
utilizado de acuerdo a la dilución (10-6 ,10-7, 10-8, 10-9 y 10-10).
4.2 Una vez transcurrido el tiempo de incubación de los caldos que contienen
la mezcla de las 3 cepas tomar una asada e inocular en los medios
selectivos sembrando por estría cruzada en superficie.
4.3 Incubar a 35 ± 2°C, 24 a 48 horas.
Se evalúan los medios según su productividad y selectividad. En relación a

si productividad: El caldo selectivo debe permitir el desarrollo de un cultivo puro de
33
la cepa deseada con un inóculo bajo y un desarrollo pobre o nulo del cultivo de la
cepa interferente en mayor concentración.
En la Fig. 4 se detalla la forma en que se realiza la promoción de

crecimiento en caldos selectivos [3].
34
Fig. 4 Promoción de crecimiento de microorganismos en caldos
selectivos.
35
8.5 PRUEBA ECOMÉTRICA EN AGARES SELECTIVOS,
DIFERENCIALES E INDICADORES.
1. DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD
1.1 Usar tres cepas de microorganismos deseados y tres interferentes para
cada tipo de agar.
Tabla 2. Cepas deseadas e interferentes para la prueba ecométrica
PRUEBA ECOMÉTRICA EN AGARES SELECTIVOS DIFERENCIALES E
INDICADORES
Cepas
Staphylococcus aureus Deseada
Staphylococcus aureus ATCC6538 Deseada
Staphylococcus epidermidis Deseada
Enterobacter aerogenes Interferente
Proteus mirabilis Interferente
.
1.2 Sembrar en placas de agar nutritivo por separado cada una de las cepas e
incubar a 35°C durante 24 horas.

2.1 Inocular por separado una colonia aislada de cada una de las 6 cepas
de reserva a 6 tubos que contienen 10 ml de caldo infusión cerebro
corazón (BHI) previamente rotulados con el nombre o clave de las 3
cepas deseadas y de las 3 cepas interferentes.
2.2 Mezclar perfectamente los tubos e incubar 18 horas a 35°C±1°C.
36
3. PREPARACIÓN DE LAS PLACAS
3.1 Seleccionar 6 cajas de petri que contienen el medio selectivo
a evaluar y 6 cajas de petri que contiene el medio de referencia.
3.2 Dividir cada una de las 12 cajas petri por la parte posterior de
la base marcándolas en 4 cuadrantes.
4. SIEMBRA
4.1 Tomar con un asa calibrada un 1microlitro de cada uno de los 6 tubos
de la suspensión bacteriana e inocular las 6 cajas de Petri que
contienen el medio a evaluar y otras 6 que contienen el medio de
referencia (se eligen 12 cajas de Petri: 3 que contengan el medio a
evaluar y 3 con el medio de referencia para inocular las cepas
deseadas. Se eligen 3 placas con el medio a evaluar de las cepas
interferentes y 3 con el medio de referencia para inocular las cepas
interferentes).
4.2 Trazar 5 estrías paralelas entre ellas sobre la superficie del medio en el
primer cuadrante.
4.3 Repetir las 5 estrías en cada uno de los demás cuadrantes de la placa
sin cargar el asa con cultivo y sin flamearla.
4.4 Trazar una última estriada central en el punto donde se unen los
cuadrantes.
En la Fig. 5 se detalla la forma en que se realiza la siembra.
Fig. 5 Siembra por estría para la técnica ecométrica en agares selectivos e

indicadores
37
4.5 Incubar las placas en posición invertida de acuerdo a las condiciones
en que se va a utilizar el medio de cultivo.
5.1 Determinar el valor de cada estría.
Efectuar la lectura de las cajas petri teniendo en cuenta que cada estría
tiene un valor de 0.2, este valor corresponde a crecimiento completo o parcial
(considerándose válida cualquier estría que tenga crecimiento en más del 25% de
la línea).
5.2 Determinar el valor en cada cuadrante de una placa.
El valor de 0.2 se multiplica por el número de estrías que se realizó en cada
cuadrante que son 5, por lo tanto cada cuadrante tiene un valor total de 1.
5.3 Determinar el valor de la estría central.
La estría central tiene un valor de 1 este valor corresponde a crecimiento completo
o parcial que se presente en ella.
5.4 Determinar el valor de la placa
La placa está dividida en 4 cuadrantes si cada cuadrante tiene valor de 1 entonces
4 x 1= 4 a este valor le sumamos el valor de la estría central que es de 1 y
tenemos que la placa tiene un valor máximo de 5.
Expresar en forma simultánea el desarrollo en el formato APM-F-017
valores de selectividad y reproductividad.
Los resultados obtenidos se expresan con un número de 6 cifras, en que las
primeras 3 representan la presencia de crecimiento en las estrías de las cepas
que deben crecer en el medio, y las otras 3 representan la presencia en las estrías
de las cepas que no deben crecer.
Así, un medio muy selectivo estaría representado por el número (5, 5,5, 0,
0,0), en el que las cepas que se esperaban que crecieran, se desarrollaron en las
5 estrías de las 3 cajas, y las que no deberían no lo hicieron en las 5 estrías de las
3 cajas.
38
Son aceptables para un medio selectivo las formulas (5,5,5,0,0,0), (5,5,4
0,0,1) y (5,4,4 1,1,0). Para los medios indicadores se deben probar con cepas que
produzcan las reacciones características y otras que no las den [3].
En la Fig. 6 se detalla la forma en que se realiza la prueba ecométrica.
39
Fig. 6 Prueba para evaluar el Método ecométrico.
40
8.6 PRUEBA DE TOXICIDAD DEL DILUYENTE
1.1 Sembrar en una placa de agar nutritivo la cepa de Escherichia coli
ATCC 25922 e incubar a 35°C durante 24 horas.
2. PREPARACIÓN DEL INÓCULO.

2.2 Tomar una colonia aislada de la cepa e inocular en un tubo con 2 ml de
caldo nutritivo.
2.3 Incubar durante 18 horas a 35°C.
3. DÍA DE CONTROL
3.1 Preparar 3 frascos con diluyente 99 ml y rotularlos con 10-2, 10-4 y 10-6.
3.2 Rotular 5 cajas petri con la dilución 10-6 para el tiempo 0 (T0),
simultáneamente otras 5 cajas petri con la dilución 10 -6 para el tiempo
45 (T45).
3.3 Transferir 0.1 ml del cultivo que se encuentra en el caldo nutritivo a un

matraz Erlenmeyer con 100 ml de caldo nutritivo. Incubar 4 horas a
35°C.
3.4 Transferir 1 ml del cultivo anterior al frasco de la dilución 10-2 que
contiene el diluyente 99 (peptona gelatina).
3.5 A partir de la dilución anterior (1:100), realizar diluciones decimales en el
diluyente a probar hasta la dilución 1:1,000,000.(10 -6) para tener un
inóculo de 100 a 250 UFC/ml.
3.6 Inmediatamente transferir 2 ml de la última dilución (10-6) a 5 cajas de
petri estériles rotuladas con (T0) y agregar por vaciado en placa 15 ml de
41
Agar Rojo Violeta Bilis fundido a 45°C, dejar solidificar y agregar una
segunda capa (5 ml) de agar rojo violeta.
3.7 Dejar transcurrir 45 minutos, se agita el frasco y de la misma dilución se
transfiere 2 ml a 5 cajas de Petri rotuladas con T45.
3.8 Agregar por vaciado en placa 15 ml de agar rojo violeta bilis fundido a
45°C dejar solidificar y agregar una segunda capa (5 ml) de Agar Rojo
Violeta Bilis [5].
3.9 Incubar ambas series de cajas de petri invertidas a 35°C durante 24
horas.
4. CONTEO DE PLACAS
4.1 Contar las colonias desarrolladas en las dos series de cajas (T 0’ y T45’) y
hacer un promedio de cada serie[6].
4.2 Calcular el porciento de cambio en la población entre el T 0’ y T45’
mediante la siguiente formula:
FÓRMULA
5. ANÁLISIS DE RESULTADOS
Se considera aceptable si el porcentaje se encuentra entre 20% ± 5%
En la Fig. 7 se detalla la forma en que se realiza la prueba de toxicidad de

diluyente [3].
42
Fig. 7 Prueba para determinar la toxicidad del diluyente
43
8.7 PORCENTAJE DE RECUPERACIÓN BACTERIANA EN AGARES
PARA CUENTA EN PLACA
1.1 Sembrar en placas de agar nutritivo por separado las cepas:
 Escherichia coli
 Staphylococcus aureus
 Bacillus subtillis
1.2 Incubar a 35°C/ 18 - 24 horas.

2.1 Tomar una colonia aislada de cada cepa y sembrar por separado en 3
tubos de BHI e incubar a 35°C 18hrs.
3. DÍA DE CONTROL
3.1 Preparar en una gradilla una hilera de 10 tubos del diluyente 9 (9 ml) y
rotular cada hilera de la siguiente manera: 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6,
10-7, 10-8, 10-9, 10-10.
3.2 Rotular simultáneamente 10 placas petri estériles con 10 -6, 10-7, 10-8,
10-9, 10-10.
3.3 Depositar el contenido total de cada una de las suspensiones

bacterianas del BHI en un matraz estéril de 100 ml y agitar suavemente.
3.4 A partir de la mezcla anterior, transferir 1 ml y hacer las diluciones
decimales 10-1, 10-2 hasta llegar a 10-10 [5].
3.5 Simultáneamente transferir 1 ml a partir de la dilución 10 -6, 10-7, 10-8,
10-9, 10-10 por duplicado a cajas Petri estériles para realizar el vaciado
44
en placa, las primeras 5 placas con el medio a evaluar Agar Rojo Bilis
Violeta y las restantes con el medio de referencia Agar Cuenta Estándar
(15 ml de cada medio fundidos a 45°C) observar Fig 7.
3.6 Dejar solidificar e incubar a 3 5± 1°C por 24 horas.
4. CONTEO DE COLONIAS
4.1 Seleccionar las placas con una cuenta ≥ 100 UFC/ml. Anotar los
resultados [6].
5. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
El Porcentaje de recuperación bacteriana o proporción de productividad del

agar de interés, se calcula con la siguiente ecuación:
PR= (Ns/No)(100)
Dónde:
PR: Proporción de Productividad
Ns: Es el recuento total de colonias obtenido en el medio de cultivo a probar

(obtenido de uno o más placas)
No: Es el recuento total de colonias obtenido en el medio de cultivo de

referencia definido obtenido de uno o más placas que debe ser ≥100 UFC [6].
En general para que el medio de cultivo no selectivo (utilizado en recuento

en placa) sea conforme en cuanto a productividad su PR debe ser mayor o igual a
un valor límite de 0,7 [2].
45
9. RESULTADOS
- Conservación de cepas.
Se realizó la purificación de cepas microbianas a mediano plazo en aceite
mineral, obteniendo satisfactoriamente el crecimiento de los microorganismos, por
el método anteriormente descrito, se realizó la identificación por medio de pruebas
bioquímicas, tinción de Gram, agares selectivos. Se hizo uso del equipo Sistema
MicroScan WalkAaway plus de la marca Siemens Healthcare Diagnostics, para
corroborar los resultados de las pruebas bioquímicas para identificación cepas. Se
realizó la elaboración y modificación del formato correspondiente (véase
conservación de cepas anexo 1).
Microorganismos identificados
Cepa Clave
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Stapylococcus aureus ATCC 25923
Vibrio cholerae 01 OPS-OMS
Salmonella grupo G 3277
Shigella sonnei 3283
Salmonella grupo B 3355
Salmonella sp urbana 3321
Salmonella newport 4344
Shigella boydi 2965
- Criterios de calidad en la evaluación física y biológica de

medios de cultivo preparados.
Se establecieron los criterios de evaluación para caldos, diluyentes y
placas. Se realizaron las modificaciones correspondientes dando como resultado
el FO-08-16-1508 (formato criterios de calidad en la evaluación física de medios
de cultivo). (Ver anexo 1 Criterios de calidad en la evaluación física de medios de
cultivo).
46
- Prueba de promoción de crecimientos en caldos.
Aplicando el procedimiento anteriormente mencionados se evaluación los
siguientes medios.
MEDIO A CEPA DESEADA CEPA INTERFERENTE RESULTADO

EVALUAR (marca)
Caldo lauril (s) Escherichia coli Staphylococcus aureus Aceptado
Difco
Caldo lauril (s) Escherichia coli Staphylococcus aureus Aceptado
Bioxon
Caldo Lauril [1.5] Escherichia coli Staphylococcus aureus Aceptado
bioxon
Caldo Ec. Con Escherichia coli Enterobacter aerogenes Rechazado
Mug Difco
Caldo lauril Mug Escherichia coli Staphylococcus aureus Aceptado
Caldo lactosado
bilis verde Escherichia coli Staphylococcus aureus Aceptado
brillante Bioxon
Los medios fueron aceptados ya que se demostró la inhibición de la cepa

interferente, resultando como rango de sensibilidad la dilución 10-7, el medio caldo
Ec. con Mug fue rechazado ya que no presento crecimiento en el rango de
sensibilidad. Los resultados fueron registrados en el formato FO-08-16-1504
(promoción de crecimiento en caldos), a este formato se realizaron modificaciones.
(Véase Anexo 1 Promoción de crecimiento en caldos).
- Promoción de crecimiento en caldos selectivos

Realizando el procedimiento anteriormente descrito, se evaluó con las
siguientes cepas:
Cepas
Salmonella typhimurium Deseada
Interferente
Citrobacter freundii
47
Evaluando el caldo selectivo Tetrationato (CTT) y el caldo Rappaport Vassiliadis
(CRp).
Caldos Evaluados Medio selectivo de recuperación

CTT con Verde Brillante y CTT base VB, XLD, SB
CTT con verde brillante y CTT base VB, SS, SV
Se demostró que el caldo CTT c/VB tuvo una recuperación en la dilución 10-6 y
10-7 en los medios VB, XLD y SB, el verde brillante es inhibidor de la cepa
Citrobacter y E. coli. Los medios selectivos son aceptables para su
reproducibilidad. (Ver anexo 2 FIG 6 y FIG 7).
En el CTT base se obtuvo una mayor recuperación en los medios selectivos
VB, XLD, SB, SS. (Ver anexo 1. Prueba de promoción de crecimiento en caldos
selectivos).
- Prueba Ecométrica en agares selectivos, diferenciales e indicadores.
Se usaron las tres cepas deseadas y las tres interferentes dando resultados
aceptables demostrando que los medios selectivos agar salado manitol (ASM) y el
Agar eosina azul de metileno (EMB) (ver anexo 2 FIG. 8), son aceptados para
trabajar con ellos. (Ver anexo 1 Prueba ecométrica).
- Prueba de Toxicidad del diluyente.

Se realizó el procedimiento anteriormente descrito, evaluando lo siguiente:
DILUYENTE CEPA RESULTADO
Solución amortiguadora Escherichia coli ATCC Aceptado
de fosfatos 25922
Peptona de gelatina Escherichia coli ATCC Aceptado
25922
Se considera aceptable si el porcentaje se encuentra entre 20% ± 5% y se

demostró que los diluyentes analizados son viables para trabajar con ellos. (Ver
anexo 1. Toxicidad de diluyente).
48
- Porcentaje de recuperación bacteriana en agares para cuenta en placa.
Utilizando las cepas:
 Escherichia coli
 Staphylococcus aureus
 Staphylococcus epidermidis
Se evaluaron los medios Agar Billis Rojo Violeta (ABRV) y el medio agar cuenta
estándar (ACE), utilizando como cepa control: Escherichia coli, cepas
interferentes: Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis. Ver anexo 2
FIG. 9. Se seleccionaron las placas con una cuenta ≥ 100 UFC/ml. (Ver anexo 1.
Porcentaje de recuperación bacteriana en agares para cuenta en placa).
49
10. CONCLUSIÓN Y RECOMENDACIONES
El trabajo realizado en esta investigación, cumplió los objetivos que se

plantearon al 100 %. La evaluación de medios de cultivo resultó ser el
procedimiento más importante del departamento de control ambiental, ya que el
desarrollo de los procedimientos en el área de Microbiología de alimentos
depende de la buena calidad de un medio. Sin un medio de cultivo viable se
tendría falsos positivos en cada una de las pruebas realizadas en estos. Control
de calidad es un área importante en todos los laboratorios, manteniendo
controladas las diferentes variables que pueden afectar a un medio se logra un
resultado confiable tanto para el mismo laboratorio como para el cliente.
Las condiciones de trabajo en el laboratorio, el equipamiento e instalaciones

no fueron las más adecuadas, sin embargo, se logró realizar cada uno de los
procedimientos descritos anteriormente.
Con la experiencia adquirida se recomienda lo siguiente:
a) Se implemente un plan de trabajo complementario en las áreas de

preparación de medios de cultivo, control de calidad de medios y
Microbiología de Alimento, desarrollando cronogramas de actividades de
cada área mencionando los medios de cultivo a utilizar, la cantidad de
medio y el tiempo en que se desarrollará dicha actividad, con el fin de
mejorar la comunicación, coordinar y facilitar cada una de las actividades
correspondientes de cada departamento.
b) Información adecuada y oportuna a través de talleres para que manejen
adecuadamente sus equipos e instalaciones.
c) Qué se tomen acciones inmediatas para el equipamiento del área de control
de calidad de medios.
d) Es indispensable que se logre una mejor comunicación entre todas sus
áreas y trabajadores.
50
e) Es relevante la importancia de continuar con este proyecto ya que como
área nueva dentro de este laboratorio, sin un buen control de calidad no se
aseguran resultados confiables.
La cooperación incondicional y apoyo de los Químicos Analistas, fue parte

de este logro. El trabajo concluido en tiempo y forma, fue de acuerdo a lo
planeado inicialmente y de acuerdo al cronograma de actividades.
Dentro de los logros realizados en el proyecto, se obtuvo experiencia en el

manejo e implementación de control de calidad en medios de cultivo. Además de
tomar las decisiones en el momento adecuado bajo presión. Por otro lado, quedó
claro que el trabajo en equipo, propicia que los resultados sean exitosos y
confiables.
51
11. ANEXO 1
CONSERVACIÓN DE CEPAS
52
53
CRITERIOS DE CALIDAD EN MEDIOS DE CULTIVOS: CALDOS
54
55
CRITERIOS DE CALIDAD EN MEDIOS DE CULTIVOS: DILUYENTES
NOMBRE DEL DILUYENTE Dil 9 Dil 99 Dil 9 Dil 99 Dil 99

FECHA DE EVALUACIÓN 19/06/12 19/06/12 21/06/12 22/06/12 29/06/12
CANTIDAD EVALUADA 5/100
5/100 3/6 5/100
5/100 2/6 2/4
FECHA DE PREPARACIÓN 14/06/12 14/06/12 21/06/12 21/06/15 29/06/12
LOTE DE PREPARACION 24-4 224-3 25-4 225-5 26-5
MARCA COMERCIAL BIOXON BIOXON BIOXON BIOXON BIOXON
No DE LOTE 9313901 9313901 9313901 9313901 9313901
CUMPLE CON LOS CRITERIOS? SI NO SI NO SI NO SI NO SI NO
Volumen dentro del rango requerido     
Ausencia de turbidez y precipitación     
Incoloro.     
Envase con tapa bien cerrada.     
Ausencia de materia extraña.     
Envases en buenas condiciones     
Presencia de etiquetas     
pH dentro del limite establecido     
PUNTOS INCUMPLIDOS 0 0 0 0 0
% DE CUMPLIMIENTO 100% 100% 100% 100% 100%
RESULTADO 1.-9ml 1.-90ml 1.-9ml 1.-90ml 1.-90.3ml
VERIFICACIÓN DE VOLUMEN 2.-8.9ml 2.-89.9ml 2.-8.9ml 2.-90.3ml 2.-90.4ml
3.-9.1ml 3.-90.5ml 3.-9.1ml 3.-90.2ml 3.-91ml
4.-8.9 4.-89.7ml 4.-8.9 4.-89.8 4.-89.9
5.-9ml 5.-90ml 5.-9ml 5.-90.2ml 5.-90.1ml
56
CRITERIOS DE CALIDAD EN MEDIOS DE CULTIVOS: PLACAS
FECHA DE EVALUACIÓN 29/05/12 29/05/12 29/05/12 29/05/12 08/06/12 12/06/12 12/06/12

ABREVIACIÓN MEDIO EN PLACA ASM EMB AN AN(3%N AVB ASM EMB
aCl)
CANTIDAD EVALUADA 8 9 18 13 17 15 18
FECHA DE PREPARACIÓN 28/05/12 28/05/12 27/05/12 17/05/12 31/05/12 07/06/12 07/06/12
LOTE PREPARACIÓN 22-1 22-1 20-4 21-4 23-1 23-4 23-4
MARCA COMERCIAL BIOXON BIOXON BIOXON BIOXON MCD-LAB BIOXON BIOXON
No LOTE 1355936 7082277 0124694 2067037 71911120 1355936 7082277
SI NO SI NO SI NO SI NO SI
26 NO SI NO SI NO
CUMPLE CON LOS CRITERIOS?
Presenta coloración característico       
Solidificación y estabilidad de gel       
adecuado
Ausencia de rajaduras en superficie       
Ausencia humedad tapa y superficie       
No Hemolisis y coágulos de sangre NA NA NA NA NA NA NA NA NA NA NA NA NA NA
Ausencia de coágulo formado por       
enfriamiento del medio
Libre de materia extraña.       
pH dentro del límite establecido       
Ausencia de burbujas en el medio       
Ausencia de colonias contaminantes       
Placas rotuladas en tapa       
Envasadas en bolsas de plástico e       
identificadas con etiqueta.
PUNTOS INCUMPLIDOS 0 0 0 0 0 0 0
PORCENTAJE DE CUMPLIMIENTO 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100%
57
PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO EN CALDOS
58
59
60
61
62
63
CEPA CONTROL CLAVE CEPAS INTERFERENTES CLAVE
Citrobacter freundii ATCC8090

Salmonella typhimurium ATTCC14028
Escherichia coli ATCC25922
FECHA DE EVALUACIÓN 06/06/12
MEDIOS A EVALUAR CTT c/VB CTT (base)
Marca Comercial Bioxon LOTE 1013423 Marca Comercial Bioxon LOTE 1013423
FECHA preparación 01/06/12 LOTE preparación 22-05 FECHA preparación 01/06/12 LOTE preparación 22-5
pH referido N/R pH final 8.13 pH referido N/R pH final 8.11
RECUPERACIÓN RECUPERACIÓN
No. DIL ACE (UFC) Medios selectivos ACE (UFC) Medios selectivos
VB XLD SB VB XLD SB
10-6 133 + + + 133 ++ ++ ++
10-7 12 + + + 12 ++ ++ ++
10-8 1 - - - 1 - - -
10-9 0 - - - 0 - - -
Placa control ACE 0 UFC
64
CEPA CONTROL CLAVE CEPAS INTERFERENTES CLAVE
Citrobacter freundii ATCC8090

Salmonella typhimurium ATTCC14028
MEDIOS A EVALUAR CTT c/VB CTT s/VB (base)
Marca Comercial BIOXON LOTE 1013423 Marca Comercial BIOXON LOTE 1013423
FECHA preparación 22/06/12 LOTE preparación 25-05 FECHA preparación 22/06/12 LOTE preparación 25-05
pH referido N/R pH final 7.60 pH referido N/R pH final 7.57
RECUPERACIÓN RECUPERACIÓN
No. DIL ACE (UFC) Medios selectivos ACE (UFC) Medios selectivos
VB SS SB VB SS SB
10-6 96 + ++ + 96 ++++ ++ ++++
10-7 5 + + + 5 ++++ ++ ++
10-8 1 + + + 1 ++ ++ ++
10-9 0 0 0 0 0 - - -
Placa control ACE 0 UFC
65
PRUEBA ECOMETRICA
66
67
TOXICIDAD DEL DILUYENTE
CEPA CONTROL No. DE COLECCIÓN CLAVE
Escherichia coli ATCC25922 CCM-Esc-01
NOMBRE DEL DILUYENTE FECHA DE EVALUACIÓN
Solución amortiguadora de fosfatos 22/02/2012
Marca Preparado por

comercial ingredientes Lote N/A Fecha preparación 20/02/2012
pH referido 7.0 ± 0.2 pH final 7 Lote preparación 8-1
PLACA 1 PLACA 2 PLACA 3 PLACA 4 PLACA 5

Minutos SUMATORIA PROMEDIO
UFC UFC UFC UFC UFC
TIEMPO0 150 105 115 114 169 653 130.6
TIEMPO45 155 136 166 110 204 771 154.2
Placa ABRVCONTROL= 0 UFC Lote preparación8-2
RESULTADO 15.30%
68
Solución amortiguadora de fosfatos 07/03/2012
Marca Preparado por

comercial ingredientes Lote N/A Fecha preparación 29/02/2012
pH referido 7.0 ± 0.2 pH final 7 Lote preparación 9-2

UFC UFC UFC UFC UFC
TIEMPO0 110 147 147 150 118 806 134.4
TIEMPO45 148 165 185 166 117 781 156.2
RESULTADO 16.22%
69
Peptona de gelatina 07/03/2012
Marca
comercial BIOXON Lote 9313901 Fecha preparación 05/03/2012
pH referido 6.5 ± 0.7 pH final 7.11 Lote preparación 10-1

UFC UFC UFC UFC UFC
TIEMPO0 104 72 78 65 124 88.6
TIEMPO45 115 98 87 86 125 102.2
RESULTADO 15.34%
70
Marca

UFC UFC UFC UFC UFC
TIEMPO0 164 165 188 175 209 901 180.2
TIEMPO45 142 245 240 198 220 1053 210.6
Placa ABRVCONTROL= 0 UFC Lote preparación
RESULTADO 16.87%
71
Marca

UFC UFC UFC UFC UFC
TIEMPO0 165 169 147 152 138 771 154.2
TIEMPO45 195 182 164 174 180 895 179
RESULTADO 16.08%
72
Marca

UFC UFC UFC UFC UFC
TIEMPO0 144 165 118 139 127 693 138.6
TIEMPO45 168 184 135 143 169 799 159.8
RESULTADO 15.29%
73
PORCENTAJE DE RECUPERACIÓN BACTERIANA EN AGARES PARA CUENTA EN PLACA
CEPA CONTROL No DE COLECCIÓN CEPAS INTERFERENTES No DE COLECCIÓN
Staphylococcus aureus ATCC25923

Staphylococcus epidermidis ATCC12228
MEDIO A EVALUAR Agar Bilis Rojo Violeta (ABRV)
FECHA Preparación LOTE Preparación
MARCA LOTE 23-5 pH Referido
MEDIO DE REFERENCIA (UFC)

No de dilución MEDIO EVALUADO (UFC)
Agar Cuenta Estándar
Dilución 10-6 >250 >250
Dilución 10-7 35 41
Dilución 10-8 3 0
Dilución 10-9 0 0
Medio Control Placa Control 0 UFC Placa Control 0UFC
74

MEDIO A EVALUAR Agar Cuenta Estandar (ACE)
FECHA Preparación 24/05/2012 LOTE Preparación 21-4
MARCA BIOXON LOTE 1139270 pH Referido 7.0 ± 0.2
MEDIO EVALUADO (UFC) MEDIO DE REFERENCIA (UFC)

No de dilución
Agar Cuenta Estándar (ACE) Agar Soya tripticasa
Dilución 10-6 322 312
Dilución 10-8 2 2
Dilución 10-9 <1 <1
75

Staphylococcus epidermidis ATCC12228
FECHA Preparación LOTE Preparación
MARCA LOTE pH Referido
MEDIO DE REFERENCIA (UFC)

No de dilución MEDIO EVALUADO (UFC)
Agar Cuenta Estándar
Dilución 10-6 >250 >250
Dilución 10-7 198 277
Dilución 10-9 <1 0
76

FECHA Preparación 01/03/2012 LOTE Preparación 09-4
MARCA BIOXON LOTE 1199727 pH Referido 7.4 ± 0.2
MEDIO EVALUADO (UFC) MEDIO DE REFERENCIA (UFC)

No de dilución
Agar Cuenta Estándar (ACE) Agar Soya tripticasa
Dilución 10-7 3 6
Dilución 10-8 0 0
Dilución 10-9 0 0
77
12. ANEXO 2
FIG. 1 REACCIÓN POSITIVA DE CITRATO FIG. 2 REACCIÓN TSI POSITIVA CON

GENERACION ACIDO SULHÍDRICO
FIG 3 REACCIÓN NEGATIVA DE MOVILIDAD

FIG 3. REACCIÓN POSITIVA INDOL
78
FIG 4. REACCIÓN POSITIVA UREASA FIG. 5. REACCIÓN POSITIVA DE LYA
FIG 6. PLACA DE SULFITO DE BISMUTO CTT
79
FIG. 7 PLACA SS. CRECIMIENTO DE SALMONELLA
FIG 8. IZQ. PLACA DE ASM. DER. PLACA DE EMB. AMBAS PRESENTANDO ALTA
SELECTIVIDAD Y PRODUCTIVILIDAD,
80
FIG. 9. PLACAS DE ABRV
81
13. GLOSARIO
Aseguramiento de Calidad: Conjunto de actividades planeadas y sistemáticas,

que lleva a cabo una empresa, con el objeto de brindar la confianza apropiada, de
que un producto o servicio cumple con los requisitos de calidad especificados.
Caldos enriquecidos: Son medios líquidos que por su composición permiten el

crecimiento de microorganismos determinados y la inhibición de microorganismos
no deseados, permitiendo la recuperación de bajas cargas microbianas.
Caldos Selectivos: Son medios líquidos que por su composición suprimen el

crecimiento de microorganismos indeseables y permite el desarrollo de un
microorganismo en especial.
Cepa bacteriana: Es aquella que proviene de una célula aislada o de un grupo de

células que presentan las mismas características genéticas.
Cepario: Conjunto de cultivos o cepas de microorganismos viables, aislados y

conservados por diferentes métodos.
Control de Calidad: Conjunto de métodos y actividades de carácter operativo,

que se utilizan para satisfacer el cumplimiento de los requisitos de calidad
establecidos.
Conservación a mediano plazo: Método de cultivo sobre medio inclinado y

aceite mineral. Permite obtener cultivos intermedios, para uso y conservación.
Cultivo primario o de donación (cepa primaria): Subcultivo proveniente de un

material de referencia, utilizado únicamente para realizar el número de resiembras
óptimas, tales que no originen cambios fenotípicos y genotípicos del cultivo.
Cultivo intermedio (cepa intermedia): Subcultivo proveniente de un cultivo

primario, utilizado únicamente para realizar pruebas de pureza y viabilidad en cada
resiembra.
82
Cultivo de trabajo (cepa de trabajo): Subcultivo proveniente de un cultivo
intermedio, el cual es utilizado para control interno de la calidad en los ensayos del
laboratorio y el cual no se debe replicar.
Diluyente: Sustancia adecuada donde se han demostrado no tener actividad

antimicrobiana bajo las condiciones de prueba (usados en diluciones).
Esterilización: Es la eliminación completa de toda forma de vida microbiana.

Puede conseguirse a través de métodos químicos, físicos y gaseosos
Esterilización por calor húmedo: Es un proceso capaz de eliminar todas las

formas microbianas por desnaturalización y coagulación de sus proteínas
celulares, este proceso se realiza en autoclave mediante vapor saturado a
presión.
Inocuidad: Garantía de no hacer daño.
Material estéril: Es aquel material libre de microorganismos patógenos, no

patógenos y esporas, después de haberse sometido a un proceso de
esterilización.
Medios selectivos: Son medios sólidos que eliminan el crecimiento de

microorganismos indeseables y permiten el desarrollo de un microorganismo o
grupo de microorganismos.
Toxicidad: Es una medida usada para medir el grado tóxico o venenoso de

algunos elementos. La toxicidad puede referirse al efecto de esta sobre un
organismo completo, como un ser humano, una bacteria, etc.
Productividad: Recuperación o supervivencia de los microorganismos.
Selectividad: Inhibición o supresión de los microorganismos no deseados.
83
14. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Manual de recomendaciones generales para la preparación de medios de

cultivo 1989.
2. Manual de organización. Laboratorio estatal de salud pública de Colima
2012 SSA.
3. Comisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura (CCAYAC). 2008.

Catálogo oficial de medios de cultivo. Laboratorio estatal de salud pública
de Colima.
4. CCAYAC. Taller teórico practico control de calidad de medios, manejo y

conservación de cepas2012.
5. NORMA Oficial Mexicana NOM-110-SSA1-1994, Bienes y servicios.

Preparación y dilución de muestras de alimentos para su análisis
microbiológico.
6. NORMA Oficial Mexicana NOM-092-SSA1-1994, Bienes y servicios.

Método para la cuenta de bacterias aerobias en placa. Mesófilos aerobios
por vertido en placa.
7. INDRE. Manual de técnicas de laboratorio 1997.
8. Mac faddin, Jean F. (2000). Pruebas bioquímicas para la identificación de

bacterias de importancia clínica. (3era edición). Buenos aires, Argentina:
Editorial medica Panamericana.
84

Evaluación de Medios de Cultivo

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R

Dirección General de Educación Superior Tecnológica

Instituto Tecnológico de Colima

"EVALUACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE

ESTUDIAR PARA PREVER

Los medios de cultivo son mezclas de sustancias nutritivas que fueron

Los requisitos nutricionales de las bacterias reflejan su capacidad

Las necesidades nutricionales de los microorganismos pueden ser:

Las elementales consisten en aquellas sustancias que necesitan para su

Los elementos necesarios son carbono, hidrógeno, nitrógeno, oxígeno, azufre y

Las sustancias específicas son compuestos como aminoácidos, vitaminas,

Es muy importante el ajuste del pH del medio para un buen desarrollo

Durante la esterilización, el oxígeno disuelto se libera, bajando el potencial

El presente proyecto se elaboró con la finalidad de mejorar el control en los distintos

3. OBJETIVOS GENERALES Y ESPECÍFICOS

3.1 OBJETIVO GENERAL

Evaluar cada uno de los procedimientos específicos establecidos en el

3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Confirmar que los medios de cultivo adquiridos en forma deshidratada

 Establecer los lineamientos para garantizar que las cepas microbianas

Este proyecto se llevó a cabo en el Laboratorio Estatal de Salud Pública

El Laboratorio Estatal de Salud Pública del Estado de Colima (LESP), es

La Secretaría de Salud es la dependencia del ejecutivo federal que tiene

Somos el Laboratorio de Referencia del Estado de Colima que realiza

Ser un Laboratorio Acreditado del Sistema Nacional de Salud, que aplique

Quienes trabajamos en el Laboratorio de Salud Pública de Colima estamos

 Analizar las muestras recibidas del programa de control sanitario enviadas

Hoy, más que nunca, el laboratorio necesita soluciones rápidas, fiables y de

Este es un proceso continuo que se extiende desde las materias primas, a

Por esta razón, se le confiere una gran importancia y está considerado

 El presente trabajo tendrá como propósito evaluar los medios de

1. De acuerdo al Manual de recomendaciones generales para la

En base a su uso pueden clasificarse en:

Medios de pre-enriquecimiento. Tienen la función de reanimar e iniciar la

Medios de enriquecimiento. Son medios que favorecen el desarrollo de un

Medios selectivos. Son medios que favorecen el crecimiento de ciertos

Medios diferenciales. Son medios sólidos que permiten obtener colonias

Medios indicadores. Estos medios están constituidos por una base

Medios nutritivos (simples o enriquecidos). Son medios que permiten el

Medios para conservación de cepas. Estos medios son muy variables,

La estabilidad de los medios de cultivo ya preparados es limitada; algunas

La mayoría de los medios deben de conservarse en refrigeración entre 4 y

La exactitud de un informe depende, de manera importante, de la calidad de

El uso extenso de preparaciones deshidratadas de medios de cultivo, ha

El primer punto a considerar en la evaluación de calidad de un medio de

Para el caso de caldos, en éstos no debe presentarse turbidez ni

Si el color de un medio es distinto al habitual puede ser indicio de un ajuste

Por lo que respecta al punto de solidificación y a la estabilidad del gel, éstos

El control de la esterilidad de un lote de medio de cultivo, puede llevarse a

Tabla 1. Control de la reactividad de cada microorganismo al medio de cultivo [1].

Incubación Resultados esperados

Agar bilis y 24 h 35°C Escherichia coli Colonias rojas, de 1 a 2 mm de

Escherichia coli Desarrollo ocasional. Colonias

Agar Mac 18-24 h 35°C Escherichia coli Colonias grandes, rosadas o

Proteus mirabilis Colonias incoloras y

Agar SS 18-24 h 35°C Salmonella Colonias incoloras, transparentes

Colonias transparentes, incoloras.

Colonias grandes, amarillas.

Colonias de color vcerde-

Staphylococcus aureus Inhibición del crecimiento.

Agar XLD 24-18 h 35°C Escherichia coli Colonias amarillas.