Microbiología Ambiental

Informe Práctica de Laboratorio

Presentado por:

Jhon Fredy Mellizo

Código: 1.063.810.590
Tatiana Meneses Espinosa
Código: 1063812451
Alexandra
Código:
Danna Isabella Daza
Código
Juan Manuel Marellano
Código:

Tutor de curso:
William James Tandioy

Universidad Nacional Abierta y a Distancia (UNAD)

Escuela de Ciencias Agrícolas Pecuarias y del Medio Ambiente (ECAPMA)
Ingeniería Ambiental
Popayán (Cauca) 8 de mayo del 2019
 INFORME

MOMENTO 2
a. Crecimiento de Mohos en el Pan

b. Observación de Levaduras

c. Observación de bacterias probióticas

ESTACION 1
-Bacterias en el Suelo

OBJETIVO: Realizar una captura, aislamiento y reconteo de los microorganismos presentes en una muestra de
suelos, mediante técnicas de cultivo e incubación por laboratorio.

MATERIALES/REACTIVOS:
 Suelo cernido
 peptona pancreática.
 agua destilada estéril
 caja de Petri
 Pipeta
 Vaso
 Incubadora
 Mechero

Procedimiento:

 Pese 10 g de suelo y mézclelos con 90 mL de agua destilada estéril. Adicione 0.1 g de peptona pancréatica
de caseína. Agite gentilmente por 10 minutos e incube a 37 °C por 30 min. Nota: Esta preparación
corresponderá a la dilución 100.
 Agite la dilución 100. Tome 1 mL y mézclelo en 9 mL de agua destilada estéril. Nota: Esta corresponderá
a la dilución 10-1.
 Repita el paso anterior utilizando la dilución 10-1 como partida para preparar la dilución 10-2. Realice el
mismo procedimiento hasta obtener la dilución 10-4.
 Tome 0.1 mL de la dilución 10-4 y dispénsela en una caja de Petri con agar nutritivo (AN). Realice un
duplicado.
  Utilizando la misma pipeta, tome 0.1 mL de la dilución 10-3 y dispénsela en
una caja de Petri con AN. Realice un duplicado.
 Utilizando la misma pipeta, tome 0.1 mL de la dilución 100 y dispénsela en una caja de Petri con agar
nutritivo. Realice un duplicado.
 Disperse cada gota sobre la superficie completa del medio de cultivo. Asista esta labor con un rastrillo de
plástico estéril para todas las cajas de Petri utilizadas. Nota: disperse primero aquellos montajes
correspondientes a la dilución mayor. Primero las dos cajas de 10-4, luego las dos de 10-3 y finalmente las
dos de 100.
 Marque las tapas de las cajas de Petri e incube a 37 °C por 2 días. Nota: el docente a cargo o el técnico
de laboratorio se encargará de sacarlas de la incubadora y ponerlas en refrigeración hasta la segunda
sesión.
 Realizar conteo de unidades formadoras de colonia (UFC)

RESULTADOS EXPERIMENTAL

MICROORGANISMOS POR INCUBACION

OBSERVACIONES
SEMANAL (SUELO)
El recuento de microorganismos viables en
matrices ambientales se puede realizar
mediante la técnica basada en contar las UFC
presentes en un gramo o mililitro de muestra. Se
considera que cada colonia que se desarrolla en
el medio de cultivo proviene de un
microorganismo de la muestra bajo estudio, el
cual es capaz de reproducirse y formar una
colonia con características macroscópicas,
siendo está clasificado con UFC. (Antiqoquia,
2017)
Para esta actividad no se puede presentar los
valores de dilución, reporte y conteo dado que la
primera sesión no se realizó el montaje y por
consecuencia en la segunda practica se realiza
el montaje para cada que una semana después
solo se detalla cambios representativos. Lo cual
es un impedimento sin las herramientas como
microscopio con el que se puede dar valores
cualitativos y cuantitativos de la muestra.

DISCUSION DE LOS RESULTADOS.

En una parte importante de la composición de suelo se encuentran bacterias, hongos, algas y protozoarios, los
cuales juegan un papel indispensable en la formación y estructuración del suelo y en la movilización de nutrientes,
de allí surge la necesidad de realizar recuentos de la biomasa presente en los suelos
con el fin de cubrir necesidades de conocimiento aplicados a la optimización de procesos ambientales.
Un aspecto importante identificado de la muestra, son las características de la colonia de la bacteria púes esta
define su distribución en el espacio, sin embrago, las características de estas ocurren en varios grados y
combinaciones dependiendo de las bacterias, por lo cual es necesario estudiar las características microscópicas y
fisiológicas de los microorganismos para realizar una identificación completa

ESTACION 2
- Recuperación de hongos acuáticos y verdaderos

OBJETIVO: Realizar una captura, aislamiento y reconteo de los microorganismos presentes en una muestra de
semillas de girasol, mediante técnicas de cultivo e incubación por laboratorio.

MATERIALES/REACTIVOS:
 Semillas de girasol
 agua destilada estéril
 caja de Petri
 Mechero
 Etanol
 Incubadora
 Gota de azul de lactofenol
 Portaobjetos
 Asa micológica

PROCEDIMIENTO:

 Limpie las semillas que trajo con agua destilada estéril durante 30 s, puede asistirse de unas pinzas
estériles. Manténgase cerca de un mechero.
 Realice un segundo lavado con etanol durante 30 s y rápidamente elimine el exceso con agua. Manténgase
cerca de un mechero.
 Realice cortes de las semillas utilizando láminas o bisturí estéril. Manténgase cerca de un mechero.
 Disponga las semillas en una caja de Petri vacía y coloque 20 mL de la muestra de agua que trajo. 5.
Incube a temperatura ambiente en un lugar oscuro por una semana.
 Revise el crecimiento micelial blanco observado alrededor de las semillas.
RESULTADOS EXPERIMENTALES
MICROORGANISMOS POR INCUBACION
OBSERVACIONES
SEMANAL (SEMILLAS)
Los resultados reflejados en esta práctica se
orientan a explicar los hongos presentes en la
muestra y sus colonias.
Para esta actividad al igual que la anterior, no se
puede presentar la continuidad de identificación
de hongos presentes en el medio dado que la
primera sesión no se realizó el montaje y por
consecuencia en la segunda practica se realiza
el montaje para cada que una semana después
solo se detalla cambios representativos y
observacionales. Esto es un impedimento sin las
herramientas como microscopio con el que se
puede dar valores cualitativos y cuantitativos de
la muestra.
DISCUSION
Los hongos acuáticos son los más primitivos. Sus zoosporas poseen dos flagelos lisos o barbados, el barbado
actúa como hélice y el liso como timón. En las formas más primitivas, las esporas y los gametos están adaptados
a la vida acuática mientras que en algunos grupos se observa adaptación a la vida terrestre. Generalmente son
parásitos muy importantes y viven en ambientes acuáticos (ríos, lagos, estuarios) y hay dos grupos: los saprobios
y los parásitos.
Los Mohos mucilaginosos también se les conocen como hongos acuáticos. Algunos autores los incluyen dentro del
grupo de los Protoctistas ya que son similares a las amebas y en la fase vegetativa pueden desplazarse con
movimiento ameboide. El hábitat de estos hongos es el bosque húmedo con suelos fríos y ricos en materia en
descomposición. Se conocen dos tipos de mohos mucilaginosos, los mohos mucilaginosos celulares, que se
asocian formando grupos de células y los mohos mucilaginosos acelulares, que están formados por un plasmodio
(CoaHuila, 2016)
Las semillas sirven como cebo para los hongos acuáticos, que presentan flagelo y por quimiotaxis se desplazan y
colonizan la semilla. Son mucoides y brillantes. Sobre el desarrollan un color blanco amarillento, son poco elevadas
y de bordes continuos.
 ESTACION 3
- Recuperación de hongos transitorios por filtración

ESTACION 4
- Aislamiento de bacterias habitantes de la piel

OBJETIVOS

Objetivo General:
 Conocer los procedimientos adecuados para el aislamiento e identificación de
bacterias habitantes en la piel a partir de las muestras tomadas.

Objetivos Específicos
 Identificar medios de cultivo en el desarrollo y crecimiento de microrganismos de
interés (bacterias).

 Establecer que bacterias son producidas en el cultivo realizado, mediante la toma

de muestras de piel.

MARCO TEORICO
Las comunidades bacterianas y fúngicas son moldeadas por diferentes factores. Así, los
autores encontraron que Malassezia es predominante en la cabeza y el tronco, mientras
que las manos, que albergan una gran diversidad de bacterias, son el hogar de
relativamente pocos tipos de hongos. En contraste, los pies, incluyendo las uñas, talones
y dedos, contienen gran diversidad. Según apunta Kong, 'los hongos en los pies de las
personas sanas son más diversos que en los brazos, la cabeza y el tronco. Estos
hallazgos ayudarán a orientar la futura investigación sobre el papel de los hongos y las
bacterias en la piel'.
La piel en buenas condiciones es la primer línea de defensa del cuerpo y forma una
barrera protectora que cubre toda la superficie corporal está compuesta por dos capas
principales, la dermis y la epidermis.

MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales:
2 Cajas Petri
4 Escobillones
1 Mechero
-Microscopio
-Asa
-Pinzas
-Papel vinipel

Reactivos:
-Agua destilada
-Alcohol – metanol
-Cristal violeta
-Azul de metileno

METODOLOGIA

Se tomó una caja petri esterilizada y se marcó una división con (AN) agar nutritivo, sobre la parte
externa se hizo una división con un marcador a la caja de modo que quedaron cuatro partes, donde
dos corresponden a la mano, muestra 1- mano contaminada, muestra 2- mano limpia, y 2 a la boca
muestra 1- boca sucia, muestra 2- boca limpia.

Posteriormente la caja se flamea en el mechero se abre y se le agregan las muestras de piel, (mano)
separadas, para este proceso se realizó un frotis sobre la mano con un escobillón diferente para cada
toma, este debidamente humedecido con agua destilada, se realizó un barrido de forma inmediata
sobre la caja petri, seguidamente se tapa, se flamea nuevamente y se hace sellado con papel vinipel,
este medio de cultivo es llevado a incubadora a 37°C por 48 horas y después se dejó a temperatura
ambiente

De igual forma se tomó la caja petri se flamea en el mechero se abre y se le agregan las muestras de
boca separadamente, para este proceso se realizó un frotis sobre la boca con un escobillón diferente
para cada muestra, este debidamente humedecido con agua destilada, se realizó un barrido de forma
inmediata sobre la caja petri, se tapa rápidamente, se flamea nuevamente y se hace sellado con
papel vinipel, este medio de cultivo es llevado a incubación a 37°C por 48 horas, pasado este tiempo
se dejó a temperatura ambiente.

NOTA: Duplicado del proceso

Al cumplir el periodo de tiempo de incubación, se toman las respectivas muestras para

hacer la observación en el microscopio, para el proceso se colocó una gota de agua
destilada sobre un portaobjetos, tomándose una pequeña muestra de una colonia y
diluyéndose en el portaobjetos. Se fijó la muestra al calor, en un mechero; enseguida se
colocó el portaobjetos sobre un soporte y la muestra se cubrió con cristal violeta, y luego
de un minuto se escurrió y enjuagó. La muestra se cubrió con solución de lugol, durante
un minuto, se envolvió con alcohol (metanol) durante unos segundos se enjuago y
finalmente se cubrió con fuscina y dejo actuar por 15 se eliminó el exceso y lavo con
agua se procedió a observación en el microscopio.

NOTA: Para cada muestra

RESULTADOS
Se llevó a cabo la evaluación de la siembra de microorganismos de piel específicamente, boca y
mano de 2 personas, se usaron cajas petri con agar nutritivo y debidamente esterilizadas, de las
muestras obtuvimos como resultado un cultivo de bacterias, fue más notable, denso el cultivo
realizado con la muestra de mano, mientras que el de boca fue más escaso, se observaron los
microorganismos con en el microscopio utilizando los 4 objetivos: 4x, 10x, 40x y 100x.

DISCUSION DE RESULTADOS

A través de una siembra de muestras tomadas de la piel se logró establecer que las principales
bacterias que habitan en la mano y boca son los cocos de forma redonda y bacilos siendo estos de
forma alargada, las bacterias son causantes de múltiples enfermedades,
de ahí la importancia de mantener un habito en la higiene.

REGISTRO FOTOGRAFICO
Cultivo de bacterias obtenidos por las muestras sembradas,

que fueron piel, de mano y boca COCOS

ESTACION 5
- Aislamiento de microorganismos endófitos
MATERIALES Y REACTIVOS :

- Caja de Petri AN y ASD

- Etanol 70%
- Agua destilada
- Hojas
- Azul de metileno
- Microscopio

Metodología

Se realizó una división en una caja de Petri con AN, y en una caja de Petri con ASD.
Se limpió la hoja de planta que trajo con agua durante 30 s para remover polvo y tierra.

-Se realizó un segundo lavado con etanol al 70 % (v/v) durante 30 s y rápidamente elimine el exceso con agua.
Manténgase cerca de un mechero.

-Realice 6 cortes de la hoja de 1 cm x 1 cm. Se mantuvo siempre cerca de un mechero.

- se Realizó una impresión de los 3 cortes sobre la primera mitad de la caja de Petri con AN, y luego se las
dispuso en la segunda mitad.
Se realizó el mismo procedimiento para dos cajas de Petri AN y ASD.

Hipótesis:

Se asemeja a los riesgos que hoy en día se consideran departe del crecimiento de estos hongos endófitos que
aparentemente no causan ningún cambio o reacción en la planta entonces se pasa desapercibidamente en la
actualidad se han descubierto muchos usos en agronomía y medicina entonces se cuestiona por eso es
importante saber ¿si existe mutualismo entre la planta y el hongo endófito?

OBSERVACION SECCION N°2

- Se usó una cinta Scott la cual tenía el adhesivo hacia afuera y se tomó un especie de huella de manera
muy delicada a los cortes foliares de las hojas que se encontraban hace 15 días en ambas cajas de
Petri AN y ASD , posteriormente se lo llevo al porta objetos donde se le adiciono 1 gota de azul de
metileno y se observó.

- Los aislamientos obtenidos se conservarán en condiciones apropiadas con el fin de mantenerlas como
cepas de referencia
 CONCLUSIONES

 Se logró reconocer los tipos de microorganismos que habitan en las cavidades,

específicamente la boca, desarrollando para este proceso métodos aprendidos con
anterioridad (tinción gram) para así llegar a los objetivos planteados.

 E el ambiente se encuentran diversos tipos de microorganismos desde hongos hasta

bacterias, incluso por estos medios se propagan gran parte de los virus, por eso es necesario
esterilizar las sustancias y objetos para evitar margen de error en los laboratorios, debido a la
contaminación microbiana que se encuentra en el ambiente.

 Nuestro cuerpo es gran portador de microrganismos, tanto benéficos, como perjudiciales

 Las muestras de suelos de distintos orígenes nos permiten concluir que hay gran diversidad microbiana
en esta matriz ya que se observaron colonias con distintas características macroscópicas; esta variedad
está determinada por las condiciones ambientales presentes en distintas áreas del suelo.
Experimentalmente no se cumplió la regla del factor de dilución dado lo inconvenientes, por ende, no es
posible determinar una cifra exacta de la concentración microbiana presente en las muestras analizadas
al tener en cuenta todas las diluciones.
 BIBLIOGRAFIA

REFERENCIAS

Antiqoquia, U. d. (2017). Studocu. Obtenido de Microbiología Industrial Y Ambiental:

https://www.studocu.com/es/document/universidad-de-antioquia/microbiologia-industrial-y-
ambiental/informe/informe-1-aislamiento-y-recuento-de-microorganismos-en-suelo/2674789/view

CoaHuila, B. (2016). Generalidades de los Hongos Acuaticos. Obtenido de Universidad Autónoma de Coahuila:
https://www.studocu.com/es-mx/document/universidad-autonoma-de-coahuila/biologia-
1/practica/practica8-hongos-acuaticos-hy-l/2985880/view

Malajovich, M. A. (MARZO de 2018). Biotecnología. Obtenido de

https://bteduc.com/guias_es/28_Analisis_de_la_columna_de_Winogradsky.pdf

Microbiología, I. y. (2012). Departamento de Química Biológica. Obtenido de Universidad de Buenos Aires:

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioBiodiversidad.htm

G, V. Elena. PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA (2009 – 2010) Recuperado de:

https://www.uib.cat/depart/dba/microbiologia/micro2/practicas.pdf

Triviño R albertp (2011).conceptos y practica de microbiología general. universidad nacional de Colombia

.Recuperado de: http://bdigital.unal.edu.co/4999/1/albertorojastrivino.2011.pdf