Propuesta trabajo de grado (2019-I)

Estudiante: Michael Stiven Granados Álvarez Director: Jimena Sánchez Nieves

C.C. 1033736807

Titulo:Aislamiento y evaluación cualitativa de la actividad de bacterias fijadoras biológicos de nitrógeno, solubilizadoras

de fosfatos y celulíticas de suelos del pertenecientes al resguardo Andoke,Araracuara, municipio de Solano (Caqueta -
Colombia).

Antecedentes y justificación: Los microorganismos de la rizosfera desde hace millones de años han desarrollado y
mantenido una relación estrecha con las plantas desde que estas últimas iniciaron la colonización de la tierra (Selosse y
Le Tacon, 1998), y han contribuido de manera fundamental al mantenimiento y la estabilidad ecosistémica, mediante el
mantenimiento de la diversidad de las especies y comunidades vegetales. (Read, 1998); este mecanismos de relación
que han favorecido la adquisición de nutrientes y agua por parte de la planta y de carbono por parte del microorganismo.
Es de esta forma como el uso de fertilizantes de síntesis química de manera intensiva en Colombia, ha podido generar
cambios en las características Ffiísico- quíimicas del suelo con resultados nocivos para la flora y la fauna (Mantilla,.
2011).

El sistema suelo es el elemento fundamental para el equilibrio ecológico (Torres, 2010.) y en el proceso de
descomposición de la materia orgánica es donde entran los microorganismos como actores principales garantizando que
el nitrógeno, fosforo y potasio, al igual que los elementos trazas contenidos en eésta, puedan volver a integrarse al ciclo
estando disponibles de manera gradual para las plantas (Avellaneda – Torres, 2010); en este sentido, se pueden utilizar
grupos funcionales de organismos como bioindicadores para evaluar disturbios en el suelo o la fertilidad a nivel biológico
(Andrade, 2004). Los grupos funcionales que se plantea quieren considerar ren el presente estudioeste estudio son
aquellos que participan directa o indirectamente en los ciclos de los nutrientes y en la recirculación de la materia
orgánica, teniendo en cuenta que estos interactúan entre síi, con las plantas y los demás factores físicos y químicos del
suelo, por lo cual y en este caso resulta se hace mas interesante su esta evaluación dado que pues se desarrolla en
suelos con un uso agrícola muy reducido. ;Los cultivos amazónicos llamados chagras, se caracterizan por una pluralidad
de plantas en producción y una rotación del lugar de las chagras una vez el suelo empieza a decaer su nivel de
producción. Por esta razón, las chagras amazónicas suelen estar en producción por máximo 10 años y luego son
abandonadas para que la selva las consuma. (Chaves &Vieco, 1987. )

Es por esto que el desarrollo de investigaciones que se propongan identificar y evaluar grupos funcionales de
microorganismos nativos (Sanchez,, 2015) con gran potencial de bioprospeccióon es de gran importancia, y en el
presente trabajpste caso se desea identificar puntualmente bacterias fijadoras de nitrógeno, solubilizadoras de fosfatos y
bacteriasceluloliíticas en el resguardo Andoke, Araracuara, municipio de Solano (Caqueta - Colombia), que permitan
generar un primer acercamiento desde el punto de vista microbiológico a los grupos funcionales cultivables
anteriormente mencionados en esta parte de Colombia, teniendo en cuenta que donde las investigaciones en este
campo en dicha zona este momento son nula,sya que pues hasta la fecha este momento sería la primera evaluación
microbiológica que se efectuaría en de estos suelos, lo que permitiría a futuro la generación de diversos trabajos en
microbiología y bioprospeccioón. a partir de los grupos funcionales microbiológicos identificados.

Objetivo general

 Evaluar los grupos funcionales de bacterias (Ffijadoraseas de nitrógeno, solubilizadoras de fosfatos y

celuloliticas)a partir de muestras de suelo del resguardo AndokeAraracuara, municipio de Solano
(Caqueta, Colombia).

Objetivos específicos
- Caracterizar bacterias fijadoras de nitrógeno, solubilizadoras de fosfatos, celulolíticas cultivables presentes en
suelo rizosféricodel resguardo Andoke Araracuara, municipio de Solano (Caqueta, Colombia).

- Evaluar la potencial actividadde aislamientos bacterianos fijadores de nitrógeno, solubilizadores de fosfatos,

celulolíticos provenientes de la zona de estudio.

 Caracterizar las cepas obtenidas a través de pruebas bioquímicas y de una descripción morfológica
para poder identificar al genero que pertenecen.
 Realizar una caracterización fisicoquímica de los suelos que permitan asociar los géneros
bacterianos encontrados con la actividad biológica de estos.

Metodología: Se realizara un viaje a Araracuara, municipio de Solano (Caquetá), resguardo Andoke de Aduche, . La
actividad de muestreo se realizara en Araracuara, municipio de Solano (Caquetá), resguardo Andoke de Aduche,en
aproximadamente dos hectáreas en pleno corazón de la selva húmeda tropical característico de la región (S 00°32.867
´W 72°19.778´), en una “Chagra” (sistema de producción indígena) y en bosque profundo El ; el muestreo a realizar será
en X en donde se tomaran 5 submuestras (4 submuestras en cada esquina y 1 en la parte central) , dichas muestras
serán tomadas en suelo rizosfeérico a una profundidad aproximada de 15 cm, y al final serán reunidas para obtener una
muestra integrada tanto de la chagra y del como de bosque profundo.

pPosteriormente, estas las muestras serán trasportadas bajo refrigeración al laboratorio de microbiología del suelo del
departamento de biología de la Universidad Nacional de Colombia sede Bogotá, en. En donde se desarrollaran los
procedimientos para la caracterización físico-química del suelo evaluando pH, textura, porcentaje de materia orgánica
entrete otros. Ely el aislamiento de las bacterias os microorganismos se efectuará según los protocolos descritos por
(Leon, 2014; ) (Moratttoet al ., 2005; ) y (Mantilla et al., 2009).

Para el aislamiento de las bacterias se realizará series de dilución y siembra el placa para recuento de células viables en
agar nutritivo e incubando a 37 °C por triplicado hasta observar crecimiento., posteriormente, se seleccionarán las
diluciones contables (entre 30 y 300 UFC/g) y se realizarán repiques en medio s selectivospara bacterias fijadores de
nitrógeno, solubilizadoras de fosfatos y celulolíticas y para comprobar su pureza, se realizará descripción macro y
microscópica de las colonias, tinción de Gram y otras tinciones diferenciales (Valencia, 2004).

Evaluación de potencial actividad solubilizadora de fosfatos.

Para la evaluación de la potencial actividad de solubilización de fosfatos inorgánicos, se utilizará medio SRS (Gupta et
al., 1994) a y se incubarán a 37 °C por 24 a 48 horas. Se realizarán de los aislamientos bacterianos siembras masivas
en el medio SRS con sales de fosfato de calcio y púrpura de bromocresol como indicador de pH, y teniendo en cuenta
como resultado positivo se identificarán como positivas para los aislamientos las colonias aquellos que crezcan
acidificando el medio de cultivo (visualizadas por halos de transparencia alrededor de las colonias) o por viraje del pH y
del color del medio de púrpura a amarillo, lo cual se verá en forma de viraje del medio.

Evaluación de la potencial s actividad es de fijación de nitrógeno.

Se utilizará medio selectivo NFB (nitrogen free broth) para aislamiento de bacterias fijadoras biológicas de nitrógeno
(Rennie, 1986) y se incubará a 37 °C durante 48 horas, se tomará como resultado positivo en este medio la observación
de crecimiento bacteriano.
 Evaluación de potencial actividad celulolítica

Para evaluar la actividad celulolítica se sembrarán aislamientos bacterianos en medio carboximetil celulosa (CMC)
dejándolos incubar durante dos días a 37°C, el resultado será efectuado por adición de rojo congo 1% (P/V), luego de 15
minutos se retirará el exceso de este reactivo y se añadirá NaCl 0,1M dejándolo reposar durante 15 minutos más para
luego observar la presencia de un halo de transparencia (Theater& Wood, 1982).

Análisis estadístico.

Se efectuaráun análisis por medio de un ANOVA. El tratamiento adicional de los datos dependerá totalmente del
comportamiento de estos.

Resultados esperados: Sse espera obtener aislamientos bacterianos con potencial actividad fijadora de nitrógeno,
solubilizadorade fosfatos,celulolítica a partir de la zona de estudio, para los cuales se efectuará caracterización mediante
métodos microbiológicos tradicionales.

poder identificar a nivel de genero las diferentes bacterias pertenecientes a los grupos funcionales anteriormente
expuestos, y la biodiversidad de estas en una zona que hace parte de un ecosistema de selva húmeda tropical altamente
conservado y que pueden tener a futuro grandes utilidades en bioprospección para la recuperación de terrenos
altamente deteriorados por el uso intensivo de agroquímicos y fertilizantes, además se espera poder generar un estado
de la calidad del suelo a partir de estos microorganismos pues los estudios en esta zona son in existentes y este seria el
primero de su tipo, lo cual ayudaría a la comunidad a apropiarse aún más de su territorio y generaría procesos de
conciencia frente a la conservación del mismo.

Cronograma de actividades, 18 semanas

Actividad/semana 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 1 18
7

Revisión de literatura X X X X X X X X X X X X X X X X X
Salida de campo-Muestras X X X

Recopilación de Información en X X X
campo

Trabajo en laboratorio X X X X X X X X X X X X X X
Descripción X X X X X X X X X X

Informe preliminar X X X X
Análisis de resultados X X X X
preliminares

Evaluación preliminar X X X

Entrega de proyecto final X X X X

POR FAVOR INCLUIR ESTAS REFERENCIAS EN BIBLIOGRAFÍA Y ELIMINAR LAS QUE SOBREN QUE NO ESTÉN
EN EL TEXTO CITADAS:

● Gupta, R., Singal, R., Shankar, A., Kuhad, R. & R., Saxena. (1994). A
modifiedplateassayforscreeningphosphatesolubilizingmicroorganism. J. Gen. App!.Microbiol., 40, 255-260
● Rennie, R.1983. Techniquesforquantifying N2 fixation in associationwithnonlegumesunderfield and
greenhouseconditions. CAN. J. MICROBIOL. VOL. 29.

● Theater, R. & P, Wood. 1982. Use of red- polysaccharideinteraction in enumeration and characterization of
cellulolytic bacteria fromthebovine rumen. ApplEnviron. Microbiol. 43: 777-780.

● Valencia, H. 2004. Manual de prácticas de microbiología básica. Universidad Nacional de Colombia (Bogotá)-
Facultad de ciencias. Primera edición. Página 20-50

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D. Werner y R. Hampp (eds.). Plantsurfacemicrobiology. Springer-Verlag, Berlin.

2. Avellaneda-Torres, L. (2010).Caracterización de comunidades microbianas asociadas a prácticas agrícolas y

usos del suelo de la vereda el bosque ‐ parque nacional natural de los nevados. Proyecto de Tesis Doctoral.
Universidad Nacional de Colombia. Facultad de agronomía. Departamento de agroecología. Colombia.
3. Chaves Margarita & Vieco Juan José. 1987. “Indigenas del Alto Putumayo” en Introducción a la Colombia
Amerindia, editado por Instituto Colombiano de Antropología. Virtual, disponible en
http://www.banrepcultural.org/blaavirtual/antropologia/amerindi/putucaqu.htm
4. León L. Determinación del potencial promotor del crecimiento vegetal de las enterobacterias aisladas de la
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“Mantilla, M. 2007. Evaluación de la acción de un bioinoculante sobre un cultivo de crisantemo
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5. Mantilla L, Oviedo O, Betancur C. Bacterias nativas con potencial en la producción de ácido indolacético para
mejorar los pastos. Revista de Zootecnia Tropical. 2011. Vól: 29(2): 187-194
6. Sánchez, J. Aspectos generales de microorganismos eficientes en la promoción de crecimiento vegetal y en la
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Nacional de Actualización en Fertilidad del Suelo. Sociedad Colombiana de la Ciencia del Suelo. Auditorio
máximo “Olga Tonny Vidales”. Universidad Surcolombiana. Neiva, Colombia. Octubre 27 - 28 de 2015. 272 p.
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