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MICROBIANO
2
TIPOS DE CRECIMIENTO
3
Secuencia de acontecimientos identificables que ocurren desde que surge una
nueva célula hasta que ésta se divide en dos hijas.
En el ciclo existen diferentes
períodos:
• Replicación del ADN
cromosómico.
• Formación del septo y
división celular.
Fisión binaria
La célula duplica su tamaño y luego
se produce la division celular.
4
FORMACIÓN DEL
SEPTUM
Para que la división celular tenga lugar se debe formar un tabique o septo que separe la
célula original en dos células hijas (fisión binaria).
Cada una de ellas recibe un cromosoma completo y la porción correspondiente de
citoplasma.
Superposición
FtsZ
5
FORMACIÓN DEL
SEPTUM
En la formación del septo intervienen las proteinas Fts (Filamentous temperature sensitive), que
forman el aparato de división de la célula o divisoma.
7
¿POR QUÉ EL DIVISOMA SE FORMA EN EL CENTRO DE
LA CÉLULA?
9
SÍNTESIS DE PEPTIDOGLICANO Y DIVISIÓN CELULAR
El peptidoglicano preexistente debe ser cortado para permitir la inserción del recién
sintetizado. Actúan autolisinas.
Peptidoglycan Transglycosylase Growing point
activity of cell wall
Cytoplasmic Autolysin
membrane activity
Out
In
Pentapeptide
Bactoprenol
SÍNTESIS DE PEPTIDOGLICANO Y
DIVISIÓN CELULAR
11
DETERMINACIÓN DE LA FORMA CELULAR: PROTEÍNA MreB
FtsZ Cell wall
Cytoplasmic
membrane
MreB determina la forma en
procariotas formando un
citoesqueleto que recluta otras
proteínas que dirigen el
crecimiento de la pared en
patrones específicos. MreB
lla
MreB forma un espiral por debajo de la
Sites of cell wall synthesis
membrana plasmática, contactando con
e en varios puntos. En esos sitios ocurre
la síntesis de nuevo peptidoglicano.
Se rellenan agujeros dejados por acción de
autolisinas, que rompen enlaces
glicosídicos y amida (por ej.: D-D
carboxipeptidasas, D-D endopeptidasas,
amidasas, transglicosilasas líticas).
MreB no está presente en cocos. La inactivación
del gen que codifica para MreB en bacilos
convierte esas células en cocos.
12
Para que esto ocurra el cultivo bacteriano debe crecer en un medio adecuado, sin
limitación de nutrientes y sin productos tóxicos de desecho.
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ASPECTOS CUANTITATIVOS DEL CRECIMIENTO
BACTERIANO
g=t/n
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EXPRESIÓN MATEMÁTICA DEL CRECIMIENTO
BACTERIANO
dZ = µ . Z
19
dt
EXPRESIÓN MATEMÁTICA DEL CRECIMIENTO
BACTERIANO
Considerando el número de células N
dN = µ . N
dt
Agrupando dN = µ . dt
N
Integrando ∫ dNN = ∫µ . dt
ln N = µ . (t – t0)
N0
ln N – ln N0 = µ . (t – t0)
(t – t0) y N = 2 N0
N0
ln 2N0 = µ . (t – t0) = µ . g N0
ln 2 = µ . g
g = ln 2 µ = ln 2
µ g
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CONDICIONES AMBIENTALES QUE DETERMINAN EL
CRECIMIENTO MICROBIANO
2.- agua 3.- presión osmótica
1.- nutrientes
Cuantificación
Crecimiento de viables
del individuo Conteo de
Ciclo microorganismos
celular (Métodos de
Crecimiento cuantificación)
poblacional Cuantificación
de totales
2
2
NUTRIENTES: Aportan los elementos constitutivos de las biomoléculas de los
microorganismos, además de proporcionar a muchos de ellos la energía para sus
procesos metabólicos.
2
3
AGUA: Es un agente solvente de muchas biomoléculas polares y de sustancias
inorgánicas. Permite funcionamiento de la membrana para el paso de solutos entre
el exterior-interior-exterior, además es el ambiente en donde la mayoría de las
enzimas realizan su actividad catalítica.
Disponibilidad del agua: Actividad del agua (aw): relación entre la presión de vapor del aire en
equilibrio con una sustancia o solución y la presión de vapor del agua, a la misma temperatura
tomando como referencia el agua pura. Sus valores se encuentran entre 0 y 1 y afecta la ósmosis
celular.
aw material ejemplo de microorganismo
5
PRESIÓN OSMÓTICA (cont.) Los organismos pueden clasificarse de acuerdo
a sus requerimientos o resistencia a la concentración de solutos.
Halófilo
Halotolerante
La presión osmótica afecta Halófilo extremo
Staphylococcus
Vibrio cholerae Halobacterium
función de membrana, actividad aureus
salanarium
de enzimas y funcionalidad de
proteínas.
Crecimiento
No halófilo ni
halotolerante
Escherichia coli
6
0 Concentración de soluto
TEMPERATURA: Los procesos metabólicos liberan energía en forma de calor,
aunque muchos microorganismos requieren una temperatura ambiental para poder
realizar su metabolismo.
Termófilo
Geobacillus Hipertermófilo
Hipertermófilo
stearotermophilus Thermococcus
Pyrodictium
celer
brockii
Mesófilo
Escherichia
coli
Velocidad de Psicrófilo
Crecimiento Flavobacterium
sp
Temperatura (oC)
TEMPERATURA: También se pueden clasificar en grupos fisiológicos de acuerdo
a la necesidad de temperatura.
80
70
60
Temperatura en 0C
50
40
Termófilos
extremos
30 o hipertermófilos
Termófilos
20
facultativos
(Termófilos)
10 Mesófilos
0
Psicrófilos
-10
Grupos fisiológicos
9
TEMPERATURA: puede acelerar o retrasar la actividad enzimática, lo que incide
directamente en el metabolismo del microorganismo. Sin embargo si la temperatura
es excesiva puede afectar estructuras y moléculas hasta su desnaturalización
irreversible o calcinación.
Velocidad de
crecimiento
Mínimo Máximo
Temperatura (oC)
La membrana se gelifica, el
transporte a través de ella es tan Desnaturalización protéica,
lento que no hay crecimiento colapso de la membrana, lisis térmica
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pH: La acidez o alcalinidad del ambiente en donde desarrollan los microorganismos
es importante para la función celular, sobre todo por la actividad enzimática, que es
muy sensible a las variaciones de pH.
11
pH: Pueden afectar la velocidad H+ OH-
de reacción hasta lograr la 0 Suelos y aguas volcánicas 1 10-14
desnaturalización reversible o
Fluidos gástricos,
irreversible de las proteínas. 1
jugo de limón
10-1 10-13
14 10-14 1
Oxígeno: La presencia de oxígeno es importante para los microorganismos,
ya sea porque muchos lo necesitan para su respiración o porque es tóxico
para otros.
Anaerobios
Aerotolerantes No fermentación Streptococcus pyogenes
Estrictos Letal fermentación Methanobacterium formicicum
Estrictos Letal anaeróbico (S0 aceptor) Thermococcus aquaticus
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Oxígeno: Según el
desarrollo se determinará
las condiciones del
requerimiento de oxígeno. El
medio ideal para determinar
estas condiciones evitaría la
difusión del oxígeno.
Los organismos aerobios cuentan con enzimas para degradar formas tóxicas del
oxígeno, procedentes de su respiración, como:
Los anaerobios no tienen estas enzimas, para algunos el oxígeno es letal ya que es
un agente oxidante que actúa sobre su metabolismos. Los anaerobios
aerotolerantes poseen sistemas enzimáticos que no son afectados
34
por el oxígeno.
4.2 CRECIMIENTO CELULAR Y DE POBLACIONES EN
MICROORGANISMOS UNICELULARES Y FILAMENTOSOS.
CRECIMIENTO DEL INDIVIDUO: Los CRECIMIENTO POBLACIONAL: Para
microorganismos se reproducen dando origen facilitar el estudio de los microorganismos,
a otros organismos. Es el ciclo que muchas veces se estudian como poblaciones.
comprende desde que nace la célula hasta
que da origen a otra. En este caso el tiempo de generación
poblacional se define como el tiempo en que
El tiempo que tarda una célula en completar una población tarda en duplicarse.
su ciclo vital se llama tiempo de reproducción
o generación individual.
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4.3 CURVA DE CRECIMIENTO MICROBIANA: FASES Y CARACTERÍSTICAS.
CINÉTICA DE CRECIMIENTO. TIPOS DE CULTIVOS IN VITRO.
Cultivos sincrónicos
lag o
adapta- logarítmica estacionaria muerte o lisis
ción
9.0 1.0
Turbidez 0.75
(densidad óptica)
Viables
8.0
0.50
7.0
0.25
6.0
5.0
0.1
Tiempo 38
Log10 m.o. Densidad
viables Fases de crecimiento (2 fuentes de C en cultivo en lote) óptica
1.0
9.0
Turbidez
(densidad óptica) 0.75
Viables
8.0
0.50
7.0
0.25
6.0
5.0 Tiempo 19
0.1
Log10 m.o. Densidad
viables Fases de crecimiento (cultivo contínuo en quimióstato) óptica
lag o
adapta- logarítmica estacionaria muerto o lisis
ción
9.0 1.0
Turbidez 0.75
(densidad óptica)
Viables
8.0
0.50
7.0
0.25
6.0
5.0
0.1
Tiempo
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Condiciones que modifican las curvas de crecimiento, o curvas de
crecimiento según condiciones de cultivo.
Crecimiento en cultivo estático o en lote, Crecimiento en cultivo estático o en lote
con una sola fuente de carbono. con dos o más fuentes de carbono.
Curva normal con sus cuatro etapas. Efecto diáuxico. Curva con dos fases
lag, dos fase log, casi dos fases
estacionarias y una fase de muerte.
La curva puede presentar una fase lag, y una fase log teóricamente infinita.
41
4.4 ESTRATEGIAS PARA LA MEDICIÓN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO.
· Turbidimetría
· Cámara de Petroff-Hauser
· Método de Breed
· Contadores electrónicos
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Turbidimetría
Luz
Monocromática
Instrumento ajustado
para leer 100% de
transmitancia luminosa
Filtro
Fuente de luz Fotocelda
A Tubo con agua
destilada o medio no
inoculado
El aparato hace la
determinación y reporta el
resultado. En función de
la cantidad de proteína en
muestra se calcula el total
de microorganismos.
Este puede indicarse para
que sea por mL, dL u otra
medida.
44
Cámara de Petroff-Hauser
El aparato se ajusta y
programa para el conteo. El
resultado también puede
programarse.
1,258,976
27
Flujo
CONTEO DE MICROORGANISMOS VIABLES
48
Dilución y vertido en placa
650 60 5 0
1345 146 15 2
2600 248 26 3
49
Método de extensión superficial
El cálculo se hace en función del volumen agregado:
En el ejemplo tenemos 19UFC por 0.1 mL, por lo tanto tendríamos 190 UFC/mL. Si se
hace a partir de una dilución se deberá tomar en cuenta para reportar el valor final.
50
Método de la gota o Miles y Misra
0.02 mL de
líquido Se ve cómo la gota se
a una altura esparce al chocar con el
de 2.5 cm medio
Incubar
0.02 mL – 3 UFC
1 mL - X
X = (3 *1) /0.02
= 150 UFC/mL = 1.5x102 UFC/mL
15 UFC/200mL tapa
Filtrado
Si se filtraron 100 mL de
estéril
muestra y crecieron 8 UFC
se reporta: Trampa de
algodón en la
8 UFC/100mL línea de vacío
línea de
32
vacio
Retención de Microorganismos por tamaño de partícula y carga.
Es importante verificar la 5
tabla y metodología que se
siguen, ya que cada tabla
está calculada y ajustada a
3
un determinado proceso.
1
Ejemplos: la tabla de
Cochran y la de diluciones
decimales.
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Los microorganismos requieren de condiciones adecuadas para su crecimiento. Cada especie
tiene ciertos parámetros, fuera de los cuales su metabolismo se hace más lento o
simplemente muere al cambiar alguna condición.
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AGENTES FÍSICOS
Efecto General Actúa sobre
Desnaturalización Proteínas estructurales y enzimas, también puede
de proteínas (calor, pH) afectar a otros polímeros (carbohidratos, lípidos,
ácidos nucleicos)
38
Aplicación de agentes físicos en el control de microorganismos
59
Aplicación de agentes físicos en el control de microorganismos
60
CARACTERÍSTICAS DE LOS AGENTES QUÍMICOS
01.Actividad antimicrobiana
02.Solubilidad
03.Estabilidad
04.No ser tóxico al hombre u otras especies de interés
05.Homogeneidad
6. No reaccionar con materiales orgánicos
7.Debe ser tóxico en condiciones normales de temperatura
08.Capacidad de penetración
09.No debe corroer ni teñir
10.Propiedades desodorantes o no tener olor desagradable
11.Tener propiedades detergentes
12.Disponibilidad
61
AGENTES QUÍMICOS EN GENERAL
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EJEMPLOS DE LOS MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE ANTIBIÓTICO
Antibiótico Obtenido de Espectro primario Modo de acción
Formación de
microtúbulos:
GriseofulvinaP
olienos
Síntesis de ácidos
nucleicos: 5-
Fluorocitosina 45
Lugares de acción de algunos agentes quimioterapéuticos en
células procariotes. ARN polimerasa dependiente
Pared celular ADN girasa Elongación del del ADN
Cicloserina Ácido nalidíxico ARN Rifampicina
Vancomicina (quinolona) Actinomiocina Estreptovaricinas
Bacitracina Ciprofloxacina
(quinolona) Síntesis de proteínas
Penicilinas
Novobiocina (inhibidores de la
Cefalosporinas
subunidad 50s)
Monobactamas
Eritromicina (macrólidos)
Carbapenemas
Cloranfenicol
ADN Estreptomicina
Gentamicina
THF
Kanamicina
Amikacina
ARNm
Nitrofuranos
DHF Ribosoma
s
Metabolismo
50 50 50
del ácido
fólico 30 30 30
Trimetroprima Síntesis de proteínas
Sulfonamida (inhibidores de la
subunidad 30s)
PABA Tetraciclinas
Espectinomicina
Estreptomicina
Gentamicina
Kanamcina
Estructura y función Biosíntesis de lípidos
Amikacina
de la membrana Plantesimicina
Nitrofuranos
citoplasmática 46
Polimixinas
Daptomicina
Agentes quimioterapéuticos y su espectro de acción sobre los
microorganismos y otros agentes causantes de enfermedad
Tobramicina Penicilinas
Azoles Inhibidores de la
Alilaminas transcriptasa
Ciclohexi-mida Sulfonamidas reversa no
Cefalosporinas nucleosídicos
Polienos
Quinolonas Inhibidores de
Polioxinas
proteasas
Análogos de Estreptomicina Inhibidores de la
ácidos nucleicos
fusión
Equinocandinas
Tetraciclina Análogos de
nucleósidos
Interferon
Plantensimina
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Cloranfenico Penicilina
l
Tetraciclina Cefalosporina C
Demeclociclina
48
Cefalexina
Mecanismos de resistencia bacteriana a los antibióticos
Mecanismo Ejemplo de Base genética de la Ejemplo de microorganismos
Antibiótico resistencia
Permeabilidad Penicilinas Cromosómica Pseudomonas aeruginosa,
reducida Bacterias entéricas
Inactivación del Penicilina Plasmídica, cromosómica Staphylococcus aureus,
antibiótico Bacterias entéricas, Neisseria
gonorrhoeae
Cloranfenicol Plasmídica, cromosómica
Staphylococcus aureus,
Bacterias entéricas
Aminoglicósidos Plasmídica
Staphylococcus aureus
Alteración de la diana Eritromicina, Cromosómica Staphylococcus aureus
Rifampicina, Bacterias entéricas
Estreptomicina, Bacterias entéricas
Norfloxacina Bacterias entéricas,
Staphylococcus aureus
70
Resistencia a los antibióticos por
inactivación
71
Resistencia a los antibióticos por
alteración de diana
72
Resistencia a los antibióticos por
vía bioquímica resistente
73
Resistencia a los antibióticos por
bomba de expulsión (eflujo)
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TÉCNICAS DE ESTERILIZACIÓN A NIVEL INDUSTRIAL
a) Esterilización de fermentadores
b) Esterilización de conservas y alimentos
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Plantas y equipo para la esterilización de
agua.
Por procedimiento los hospitales deben contar con dos aparatos, uno para
preparar material estéril y otro para esterilizar el material contaminado que se
genera en los procedimientos médicos.
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Autoclaves industriales. Grandes unidades que pueden medir mas de tres
metros de diámetro y 15 metros de largo, en ellos se coloca el material que se
va a esterilizar, generalmente son de un solo uso ya que lo que se esteriliza en
ellos se termina de empacar y se distribuye.
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HORNO
Equipo que por calor seco carboniza la materia orgánica y destruye a los
microorganismos. Se aplica en material limpio y seco, o productos que pueden
ser sensible a la humedad, o que sean impermeables. Se esteriliza a 180oC
durante una hora o a 160oC en dos horas.
80
CONTROLES DEL PROCESO DE ESTERILIZACIÓN
81
INCINERADOR
6
2
USO DE GASES (ÓXIDO DE ETILENO)
Se utiliza para material plástico termolábil como jeringas y agujas, cajas petri,
etcétera.
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RADIACIONES GAMA
84
FERMENTADORES
66
4.6 FUENTES DE CONTAMINACIÓN MICROBIOLÓGICA EN DIVERSOS
AMBIENTES.
Microbiota normal
Son el conjunto de
microorganismos
presentes en un
ambiente y que
normalmente se
desarrollan en él.
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CONTAMINACIÓN MICROBIOLÓGICA: La presencia de microorganismos no
deseados en ciertos ambientes se considera contaminación microbiológica.
También el lugar habitual del microorganismo puede determinar si se considera contaminante o no.
Cualquier microorganismo que penetre por una Proteus vulgaris es parte de la microbiota
herida puede causar una infección. normal del intestino y contaminante en el
tracto urinario, causa infecciones en vías
urinarias.
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TIPOS Y FUENTES DE CONTAMINACIÓN MICROBIOLÓGICA.
AÉREA
POR ORGANISMOS
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Aérea: Los microorganismos presentes en el polvo al ser llevados por
corrientes de aire pueden depositarse en cualquier superficie o
medio.
Tolvaneras.
Por la diversidad de vida presente en los suelos, es posible que tengamos contaminación
microbiológica si se pone en contacto el suelo o tierra con algún objeto limpio.
Otros entornos ecológicos pueden verse afectados por ciertas condiciones ambientales,
cambiando la microbiota “sana” autóctona por otros microorganismos que pueden causar
problemas en el entorno.
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Líquidos: Aguas de drenaje pueden contaminar productos o alimentos, además de
personas y animales.
Las descargas de drenaje en ríos y mares alteran la flora normal, también por mezclarse
aguas de desecho con agua potable.
Aunque el agua pueda parecer pura o limpia, es posible que tenga microorganismos que
causen problemas, aunque no sean patógenos pueden descomponer fácilmente los
alimentos causando problemas diarréicos (por ejemplo la enterotoxina de Staphylococcus
aureus) al ser consumidos o simplemente su sabor y aspecto ya no es apetecible al
consumidor.
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Por organismos: Las especies de microorganismos presentes en plantas, animales
o personas pueden pasar a otros organismo o materiales diversos.
Hay enfermedades que requieren un vector biológico para cerrar su ciclo infeccioso y
causar enfermedad.
O la elaboración de solución salina isotónica estéril, que por sus características el control y
monitoreo es severo, debido a que este producto será introducido directamente al torrente
sanguíneo, con lo que la presencia de cualquier tipo de microorganismo es indeseable.
Tienen el mismo principio que los métodos convencionales, logran una ventaja la
mayoría porque son miniaturizados y no se requiere mucho tiempo para tener
resultados, algunos de ello pueden leerse a 8 horas de realizada la prueba.
Técnica Tiempo para Observaciones
el resultado
Petrifilm 8 a 16 horas Es un medio de cultivo, que al agregar una
suspensión del problema hidrata los componentes y
permite el desarrollo.