Bioquímica de Microorganismos

Programa de Microbiología
Universidad Libre- Seccional Pereira
TALLER ENZIMAS
S. ALZTE- C. CUARTAS- G. HERRERA

1. Resuma en 5 frases las características de las enzimas

 Son proteínas que poseen un efecto catalizador al reducir la barrera energética de ciertas
reacciones químicas.
 Influyen sólo en la velocidad de reacción sin alterar el estado de equilibrio.
 Forman un complejo reversible con el sustrato.
 No se consumen en la reacción, pudiendo actuar una y otra vez.
 Se clasifican según el tipo de reacción que catalizan (Actualmente son 7 clases:
Oxidorreductasas, transferasas, hidrolasas, liasas, isomerasas, ligasas y translocasas)
Fuente: (Hernan, G., 2001)

2. ¿Por qué los seres vivos necesitan que las enzimas catalicen sus reacciones químicas?

Es necesario que las enzimas se encarguen de reducir significativamente la cantidad de energía

para que se produzca una reacción, la cual debe ser concluida en el menor tiempo posible. Y, sin
ellas, algunas reacciones ni siquiera se llevarían a cabo.
Las enzimas tienen muchas funciones dentro de la célula: degradan azúcares, sintetizan grasas y
aminoácidos, copian la información genética, participan en el reconocimiento y transmisión de
señales del exterior y se encargan de degradar productos tóxicos para la célula, entre muchas otras
funciones vitales. (Gildberg, 2004)
Porque sin la intervención de estás la mayoría de las reacciones bioquímicas no se podrían llevar
a cabo, podrían llegar a tardar miles de años, las enzimas aumentan la velocidad de las reacciones
106 veces o muchas veces más. (Plou, F. J., 2016. Las enzimas.)

3. ¿Cómo consiguen las enzimas acelerar las reacciones químicas de un ser vivo?

Las enzimas pueden acelerar la velocidad de una reacción. Las enzimas son catalizadores
biológicos. Los catalizadores aceleran la velocidad de las reacciones rebajando la barrera de la
energía de activación entre los reactivos y los productos. (El proyecto biológico, the University of
Arizona)
Las enzimas disminuyen la energía de activación, es decir la energía que requiere una reacción
para iniciar (mientras mayor sea la energía de activación más lenta es la reacción), también
reducen la energía del estado de transición, un estado por el que deben de pasar los reactivos para
convertirse en productos.

4. ¿Que son enzimas endógenas y enzimas exógenas?

5. Existen 7 tipos de enzimas según su función, Cuales son y ¿Qué tipo de enzima cataliza las
siguientes reacciones?
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TIPO DE FUNCIÓN
ENZIMA
Oxido-reductasas Este tipo de enzimas catalizan la transferencia de electrones de un
compuesto a otro. Si una molécula se reduce hay otra que se oxida.
Transferasas La reacción que catalizan estas enzimas es la de transferir un grupo
funcional de un compuesto a otro.
Hidrolasas Como su nombre lo dice, estas enzimas catalizan reacciones de hidrólisis.
Liasas Las enzimas de este tipo agregan (o sustraen), grupos químicos a dobles
ligaduras. (Adición de dobles enlace).
Isomerasas Estas enzimas transforman un compuesto en alguno de sus isómeros.
Ligasas Estas enzimas forman uniones covalentes entre dos compuestos, la
reacción es endergónica y requieren de la ruptura de moléculas de ATP
que proporcionen energía. (Formación de enlaces, con aporte de energía)
Translocasas La translocasa transporta ATP y ADP a través de la membrana
mitocondrial interna. También se la conoce como translocador de
nucleótidos de adenina.
Información tomada de: libro electrónico de bioquímica UAA (mx), Martinez, J.

a) hidrólisis de la sacarosa. = sacarasa (Hidrolasas)

b) adición de oxígeno. = oxigenasas (Oxidorreductasas)
c) transformación de la glucosa (C6H12O6) en fructosa (C6H12O6). = glucosa-6-fosfato
isomerasa (Isomerasa)
d) transferencia de un grupo amino entre 2 moléculas. = transaminasas o aminotransferasas
(Transferasas)
6. Escribe una ecuación general que represente una reacción química catalizada por una
enzima.

https://i.ytimg.com/vi/gLu4thvvQSA/maxr
esdefault.jpg https://i.ytimg.com/vi/4CqilOetdrg/maxre
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7. Relaciona los términos enzima, sustrato y complejo enzima-sustrato, con la afirmación que
corresponda:
a) tiene una estructura terciaria capaz de reconocer un sustrato. = enzima
b) combinación de una enzima con su sustrato. = complejo enzima-sustrato
c) su estructura encaja en el sitio activo de una enzima. = sustrato

8. ¿En qué se diferencia el sitio activo del resto de la estructura de la enzima?

Es una pequeña porción de la enzima que debe su forma a ciertas características en su estructura
terciaria (proteína), difiere de el resto de estructura en que contiene aminoácidos específicos que
le otorgan propiedades, a su vez estos aminoácidos toman una posición en el espacio
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tridimensional dando así una forma, tamaño y comportamiento químico especifico lo cual va a
hacer que el sitio activo interactúe o sea apto para otra molécula, el sustrato.

9. En el siguiente gráfico se muestran las curvas de actividad de tres enzimas. Estime el pH

óptimo de cada una de ellas.

Enzima pH optimo
PEPSINA 2
SACARASA 6
TRIPSINA 8-8.3

10. ¿Que son los inhibidores competitivos y los no competitivos?, como afectan el
funcionamiento de la enzima?

Inhibidores competitivos: Este tipo de inhibidores poseen la característica de ser químicamente

semejantes al sustrato, de tal manera que pueden ocupar el sitio activo de la enzima, pero ésta no
los transforma, mientras el inhibidor esté dentro del sitio activo el verdadero sustrato no puede
entrar y por lo tanto no es posible que se forme ES y no hay formación de producto. (Martinez, J.,
libro electrónico)

Inhibidores no competitivos: A diferencia de los inhibidores competitivos, los no competitivos

se unen a la enzima en un sitio específico diferente al activo. De esta propiedad se deriva su
nombre, pues no compiten con el sustrato para ocupar el sitio activo. Este tipo de compuestos
puede tener una estructura química totalmente diferente a la del sustrato. Se piensa que al unir a la
enzima un inhibidor de este tipo, se produce un cambio en su estructura tridimensional que altera
la configuración del sitio activo, imposibilitando el reconocimiento del sustrato. Cuando EI se
rompe, la enzima adquiere su conformación activa. (Martinez, J., libro electrónico)

11. Indica si en los siguientes apartados se hace referencia a un inhibidor enzimático

competitivo o no competitivo:
a) El inhibidor tiene una estructura similar a la del sustrato. = inhibidor enzimático
competitivo
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b) El efecto del inhibidor no se puede revertir mediante la adición de más sustrato. =
inhibidor enzimático no competitivo
c) El inhibidor compite con el sustrato por el sitio activo. = inhibidor enzimático competitivo
d) La estructura del inhibidor es distinta a la del sustrato. = inhibidor enzimático no
competitivo
e) La adición de más sustrato revierte la inhibición. = inhibidor enzimático competitivo

12. El oxalacetato es un inhibidor de la enzima succinato deshidrogenasa:

a) ¿Crees que el oxalacetato será un inhibidor competitivo o no competitivo? ¿Por qué?

Oxaloacetato (inhibidor competitivo)

b) El oxalacetato, ¿se unirá con el sitio activo de la enzima o se unirá a otro lugar?

El oxaloacetato, que poseen dos grupos carboxilos ionizados a pH 7, pueden ocupar el sitio
activo de la enzima, impidiéndole actuar sobre el sustrato normal. Los inhibidores
competitivos se caracterizan por guardar cierta similitud estructural con el sustrato de la
enzima a la cual inhiben, y por tal motivo es que pueden combinarse a nivel del sitio activo

c) ¿Cómo se podría revertir el efecto del inhibidor?

Agregando más cantidad de sustrato

Información de esta pregunta fue obtenida de: (FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y

FORESTALES UNLP., 2011)

13. ¿Qué es la especificidad absoluta? Diferencie entre el modelo llave cerradura y el modelo de
conformación inducida

 Cuando la enzima actúa solo sobre un tipo de sustrato se dice que la enzima muestra
especificidad absoluta.
 La principal diferencia entre ambos modelos es que mientras el primero supone que el
sitio activo de la enzima y el sustrato encajan perfectamente tal como una cerradura con
una llave, el modelo de encaje inducido plantea que el sitio activo es mucho más flexible
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que una cerradura y por lo tanto la interacción enzima-sustrato deforma las superficies o
la forma del centro activo.

14. El antibiótico amoxicilina (un tipo de penicilina) se usa en los humanos para el tratamiento
de ciertas infecciones bacterianas.
a) ¿La amoxicilina inhibe las enzimas humanas?

No, la amoxicilina inhibe a menudo referidos como proteínas fijadoras de penicilinas PBP
presentes en bacterias.

b) ¿Por qué este antibiótico destruye las bacterias, pero no es perjudicial para los
humanos?

La amoxicilina es un antibiótico penicilínico con la capacidad de interferir en la síntesis de

la pared bacteriana, inhibe la acción de dos enzimas en particular: peptidasas y
carboxipeptidasas.
Como nosotros no tenemos pared celular, este antibiótico no nos perjudicará.

c) Que debería producir una bacteria para volverse resistente a la amoxicilina?

15. Indica si las siguientes enzimas son activas como tales o requieren un cofactor:
a) un polipéptido que necesita Mg2+ para su acción catalítica. = requieren un cofactor (ion de
Magnesio).
b) una enzima activa formada por una sola cadena polipeptídica. = activa.
c) una enzima que consiste en una estructura cuaternaria unida a vitamina B6. = requiere
cofactor (piridoxina).

16. Según el artículo de Arroyo (1998), ¿qué es la inmovilización enzimática, ¿cuáles son sus
ventajas y desventajas y qué métodos de inmovilización de enzimas existen?

¿Qué es la inmovilización enzimática?

La inmovilización de enzimas es un proceso en el que se confina o localiza a la enzima en una

región definida del espacio, para dar lugar a formas insolubles que retienen su actividad catalítica
y que pueden ser reutilizadas repetidamente que pueden ser reutilizadas repetidamente.
Posteriormente esta definición se ha ampliado a aquel proceso por el cual se restringen, completa
o parcialmente, los grados de libertad de movimiento de enzimas, orgánulos, células, etc. por su
unión a un soporte.
Ventajas
Como ventajas del empleo de enzimas inmovilizadas podemos destacar:
1. El aumento de la estabilidad de la enzima;
2. La posible reutilización del derivado, por lo que disminuyen los costes del proceso.
3. La posibilidad de diseñar un reactor enzimático de fácil manejo y control, adaptado a la
aplicación de la enzima inmovilizada.
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Desventajas
Los principales inconvenientes del proceso de inmovilización son:
1. La alteración de la conformación de la enzima respecto de su estado nativo.
2. La gran heterogeneidad del sistema enzima-soporte donde pueden existir distintas fracciones
de proteínas inmovilizadas con un diferente número de uniones al soporte.
3. Siempre suele haber una pérdida de actividad de la enzima durante la movilización.
4. El biocatalizador es más caro que la enzima nativa.

Métodos de inmovilización de enzimas

1. Atrapamiento
Consiste en la retención física de la enzima en las cavidades interiores de una matriz sólida
porosa constituida generalmente por polímeros del tipo poliacrilamida, colágeno, alginato,
carraginato o resinas de poliuretano. El proceso de inmovilización se lleva a cabo mediante la
suspensión de la enzima en una solución del monómero. Seguidamente se inicia la polimerización
por un cambio de temperatura o mediante la adición de un reactivo quim ́ ico. El atrapamiento
puede ser en geles, cabe destacar que la enzima no sufre ninguna alteración en su estructura.

2. Inclusión en membranas: Dividida en dos tipos:

a) Microencapsulación: En esta técnica, las enzimas están rodeadas de membranas
semipermeables que permiten el paso de moléculas de sustrato y producto, pero no de enzima.
Estas membranas semipermeables pueden ser permanentes o no permanentes.
b) Reactores de membrana: Estos reactores emplean membranas permeables al producto final,
permeables o no al sustrato inicial y obviamente impermeables a la enzima. Mediante una bomba
se establece un flujo liq́ uido de sustrato que atraviesa el reactor.
Se procede inicialmente a la adsorción de la enzima sobre la membrana que formará el reactor.
Esta adsorción se puede realizar de dos formas:
1. mediante el paso de una solución tamponada de enzima a través de la membrana;
2. por contacto continuo de una solución de enzima con la membrana.

MÉ TODOS DE INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS POR UNIÓN QUÍMICA

1. Unión a soportes
Se debe procurar que la inmovilización incremente la afinidad por el sustrato, disminuya la
inhibición, amplie el intervalo de pH óptimo y reduzca las posibles contamina- ciones
microbianas. Además el soporte debe tener resistencia mecánica adecuada a las condiciones de
operación del reactor y ser fácilmente separable del medio líquido para que pueda ser reutilizado.
a) Soportes inórganicos
b) Soportes órganicos. Se pueden clasificar en: Polímeros naturales y Polímeros sintéticos

1.1. Adsorción
En la adsorción, la enzima se une a un soporte sin funcionalizar mediante interacciones iónicas,
fuerzas de Van der Waals y por puentes de hidrógeno. Los principales factores que influyen en la
adsorción, son:
1. El pH del medio
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2. La fuerza iónica
3. El diámetro de poro: debe ser aproximadamente dos veces el tamaño del eje mayor de la
enzima;
4. la presencia de iones que actúen como cofactores de la enzima, ya que pueden incrementar la
carga enzimática del derivado.

1.2. Unión covalente se basa en la activación de grupos químicos del soporte para que reaccionen
con nucleófilos de las proteínas, se basa en la activación de grupos químicos del soporte para
que reaccionen con nucleófilos de las proteínas.
2. Reticulado
El aumento de estabilidad se basa en la obtención de un entramado cristalino, donde las
moléculas de enzima están rodeadas exclusivamente por otras moléculas de proteiń a. De esta
manera la propia enzima actúa como soporte, y su estructura terciaria está estabilizada por las
uniones covalentes intermoleculare.
consiste en uso de reactivos bifuncionales que originan uniones intermoleculares entre las
moléculas de enzima. Como reactivos bifuncionales se pueden emplear dialdehídos,
diiminoésteres, diisocianatos, sales de bisdiazonio e, incluso, diaminas si están activadas con
carbodiimida. El resultado del reticulado son enzimas con enlaces intermoleculares irreversibles
capaces de resistir condiciones extremas de pH y temperatura. El co-reticulado, permite eliminar
las pérdidas de actividad enzimática debidas a efectos difusionales, mediante el entrecruzamiento
de las enzimas con una proteína sin actividad enzimática y rica en residuos de lisina

17. ¿Cómo podemos aprovechar las propiedades de las enzimas? Artículo de Franco Vera
(2007).

La atención se concentra sobre la especificidad de sustrato. Ningún reactivo químico posee una
especificidad comparable a la de las enzimas.
Esta especificidad es un atractivo desde el punto de vista analítico, ya que permite determinar
cualitativa y cuantitativamente un analito en mezclas complejas, sin necesidad de separación
previa. Para seguir fácilmente el curso de la reacción, es conveniente que en la misma se
produzca un cambio en las propiedades físicas de los sustratos o productos que permita la
determinación cuantitativa del progreso de la reacción.
Una reacción acoplada es la que utiliza como sustrato uno de los productos de la primera y que, a
su vez, conduce a un producto de fácil detección. Hay numerosas las posibilidades de empleo de
reacciones acopladas, por lo que actualmente es posible la utilización de ensayos enzimáticos
para la determinación de una amplísima variedad de analitos de interés químico, clínico o
industrial.
Su especificidad y su enorme eficacia catalítica han atraído la atención desde hace mucho tiempo
con el fin de emplearlas como catalizadores en reacciones de interés industrial. De hecho, se
emplean profusamente en la industria farmacéutica, en la alimentaria, etc.
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Referencias

Hernan, G. (2001). CARACTERÍSTICAS DE LAS ENZIMAS - LA HOMEOPATÍA, LAS ENZIMAS Y LA

INFORMACIÓN. - Dr. Gabriel Hernán Gebauer.. Recuperado 24 septiembre, 2019, de
http://www.homeoint.org/books3/enzimas/caracter.htm

Plou, F. J. (2016). Las enzimas. Retrieved from https://ebookcentral.proquest.com

Gildberg, A. (2004). Enzymes And Bioactive Peptides From Fish Waste Related To Fish Silage, Fish Feed And Fish
Sauce Production. Journal Of Aquatic Food Product Technology. Https://Doi.Org/10.1300/J030v13n02_02

The University of Arizona, & Universidad de Alcalá de Henares. (1996, octubre). Problemas de Energía, Enzimas y
Catálisis. Recuperado 23 septiembre, 2019, de
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Facultad De Ciencias Agrarias Y Forestales Unlp. (2011). Factores Que Inciden En La Actividad
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