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1106393298.TP #1 Metabolismo de H de C - Fluoruro Como Inhibidor de La Glucólisis PDF
1106393298.TP #1 Metabolismo de H de C - Fluoruro Como Inhibidor de La Glucólisis PDF
QUUIIM
MIIC
CAAB
BIIO
OLLO
OGGIIC
CAA IIII
Laboratorio Nº 1
Tema: EVALUACIÓN DEL EFECTO DEL FLUORURO COMO
INHIBIDOR DE LA GLUCÓLISIS ANAERÓBICA
Objetivos:
Adquirir destreza en venipunturas.
Verificar el efecto del inhibidor F– en la vía glucolítica.
Química Biológica II Laboratorio Nº 1
FACENA, UNNE 2013
Fundamentos Teóricos
El uso de inhibidores enzimáticos ha posibilitado el estudio de secuencias
específicas y de metabolitos intermedios. Cuando una enzima es inhibida, se
establece un bloqueo o interrupción de una vía metabólica, se acumula el sustrato
correspondiente de esa enzima, y eventualmente otros intermediarios que preceden a
la reacción bloqueada. Además, puede ocurrir con frecuencia la falta de síntesis final
de compuestos vitales para las células (Ej. ATP), lo que en última instancia conduce a
la muerte celular.
MECANISMO DE
ENZIMA INHIBIDOR
INHIBICIÓN
Compuestos sulfhidrilos,
Hexoquinasa (HK) fenilalanina
EDTA, citrato, oxalato Complejación
Glucoquinasa (GK) EDTA, citrato, oxalato Complejación
ATP, ácidos grasos de Condiciones energéticas
Fosfofructoquinasa I (PFK I) cadena larga, fenilalanina elevadas
Citrato Complejación
PK muscular Fenilalanina
Piruvato en altas
Lactato deshidrogenasa (LDH)
concentraciones
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Química Biológica II Laboratorio Nº 1
FACENA, UNNE 2013
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Química Biológica II Laboratorio Nº 1
FACENA, UNNE 2013
Precauciones:
Las muestras se tomarán siguiendo las normas de bioseguridad; con guantes,
jeringas y agujas descartables bajo la supervisión de los docentes.
Las muestras de sangre se recogerán con anticoagulante heparina, EDTA-F–
comercial y sin anticoagulante. Esta se colocará en baño a 37° C hasta
retracción del coágulo; luego se centrifugará 5 minutos a 1000 rpm, y por último
se separará la mitad del suero en otro tubo, dejando el resto con el paquete
globular.
A. Tubo 1: Suero
B. Tubo 2: Suero + Paquete globular
C. Tubo 3: Plasma con Heparina + Paquete globular. Proporción: 50 l de
Heparina para un máximo de 5 ml de sangre
D. Tubo 4: Plasma con EDTA-F– + Paquete globular. Proporción: 20 l de
EDTA-F- para un máximo de 2,5 ml de sangre, o 50 l de EDTA-F- para
un máximo de 7 ml de sangre.
Cada comisión realizará los pipeteos utilizando la misma micropipeta, con el
mismo tipo de tip (punta de pipeta), y si es posible debe ser llevada a cabo por
el mismo operador.
Cada comisión realizará las diferentes incubaciones en el mismo baño de
agua.
Cada comisión llevará a cabo las lecturas en el mismo espectrofotómetro y
utilizando la misma celda.
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Química Biológica II Laboratorio Nº 1
FACENA, UNNE 2013
Método
Determinación de glucemia (método enzimático)
Fundamento:
GOD
Glucosa + O2 + H2O ác. glucónico + H2O2
POD
2 H2O2 + 4-AF + fenol quinonimina roja + 4 H2O
Procedimiento:
B S D
Estándar - 10 ul -
Muestra - - 10 ul
Reactivo 1 ml 1 ml 1 ml
Experiencia:
Determinar glucemia basal en todas las muestras.
Determinar glucemia a la hora y 2 horas de realizada la extracción en todas las
muestras.
Informe
Basal (Hora: : ) 1hora (Hora: : ) 2 horas (Hora: : )
Absorbancia Concentración Absorbancia Concentración Absorbancia Concentración
S
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3
4
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Química Biológica II Laboratorio Nº 1
FACENA, UNNE 2013
Conclusiones:
1) ¿Qué diferencia espera de la absorbancia entre las muestras con y sin agregado del
inhibidor?
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2) ¿Se confirman los resultados esperados? Analice las posibles causas de error.
Tubo 1: .............................................................................................................................
Tubo 2: .............................................................................................................................
Tubo 3:..............................................................................................................................
Tubo 4:..............................................................................................................................
Bibliografía: