INFORME

LABORATORIO No 3

INTEGRANTES: Karla Bejarano y Victoria Díaz

FECHA DE ENTREGA: 14 de septiembre de 2022
TEMA: Determinación de Fosfatasa Alcalina y GGT

Objetivos:
● Comprender la importancia de las funciones del hígado.
● Diferenciar qué pruebas bioquímicas se utilizan para evaluar la función hepática y
cómo son aplicadas para el diagnóstico de enfermedades agudas y crónicas.

1.1 Principio de la reacción

Determinación de la actividad de ALP:

En presencia de Mg2+ y aminometilpropanol (AMP) como aceptor de

fosfato, la fosfatasa alcalina (ALP) cataliza la hidrólisis de
p-nitrofenilfosfato en fosfato y p-nitrofenol. La cantidad de p-nitrofenol
liberada es directamente proporcional a la actividad catalítica de la ALP.

Determinación de la actividad de GGT:

La gamma-glutamil transferasa (γ-GT) cataliza la transferencia de un

grupo γ- glutamilo de la γ-glutamil-p-nitroanilida al dipéptido aceptor
glicilglicina, según la siguiente reacción:

La velocidad de formación del ácido 5-amino-2-nitrobenzoato, determinado

fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de γ-GT en la muestra
ensayada.
 2. MATERIAL NECESARIO
2.1 Equipos
- Baño termostatizado a 37ºC.
- Espectrofotómetro .
2.2 Material
- Pipeta automática (vol 20 ul – 100 ul).
- Rotulador para vidrio.
- Tubos de ensayo nuevos (6 x 50 mm).
- Puntas nuevas para pipetas automáticas.
- Cronómetro.
2.3 Reactivos

GGT ALP
gamma-glutamil transferasa Fosfatasa alcalina

REF: 12013 REF: 12117

BUF: 10 x 8 mL
SUB: 2 x 10 mL BUF: 10 x 8 mL buffer
2-amino-2-metil-1-propanol (AMP) (pH
10.4).......................................435 mmol/L
BUF: Buffer Acetato de magnesio………..2,5 mmol/L
Buffer tris (pH 8,30)...........125 mmol/l Sulfato de zinc………………1,2 mmol/L
Glicilglicina………………150 mmol/l Azida de sodio………………0,095%

SUB: Substrato SUB: 2 x 10 ml substrato

L- γ- glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida: p-Nitrofenil fosfato…………60 mmol/L
Azida de sodio……………...0,095%
20 mol/l.

3. Muestra:

GGT Suero o plasma con EDTA. Evitar la hemólisis

ALP Suero o plasma heparinizado

4. ESTABILIDAD DE MUESTRA

GGT: No disminuye la actividad en suero después de 7 días a + 4°C ni de 20…25°C

ALP: Pérdida de actividad después de 7 días, a 4°C = 0% y a 20…25°C = 10%; no
hay interferencia de triglicéridos hasta 2000 mg/dL, hemoglobina hasta 250 mg/dL y
bilirrubina hasta 40 mg/dL.
5. ENSAYO
Para GGT y ALP :
Longitud de onda: Hg 405 nm ( 400 - 420 nm)
Paso de luz: 1 cm
Temperatura: 25°C, 30°C, o 37°C / Para ALP: 30°C, 37°C
Medición: Contra el aire (incrementa la absorbancia)

Llevar los reactivos y cubetas a la temperatura deseada. La temperatura debe

permanecer constante (± 0,5 °C) durante la prueba.

5.1 Actividades Prácticas:

GGT y ALT: Se usó el procedimiento 2 con muestra por separado

Procedimiento 2 con muestra por separado (Reactivo de trabajo GGT):

REF: 12013
Pipetear 2 mL del frasco SUB en un frasco BUF respectiva, mezclar cuidadosamente.
El reactivo de trabajo es estable 6 semanas 2…8°C y 5 días de 15…25°C

Procedimiento 2 para GGT:

Pipetear en cubetas 20°C, 30 °C, 37°C

Muestra 100 μL

Mezcla de reactivo 1000 μL

Mezclar, incubar por 5 minutos a 37°C

Mezclar, leer la absorbancia después de 1 minuto y al mismo tiempo activar el

cronómetro. Leer de nuevo la absorbancia exactamente después de 1,2 y 3 minutos.
Procedimiento 2 con muestra por separado (Reactivo de trabajo ALP):
REF: 12117

Pipetear 2 mL del frasco SUB en un frasco BUF, mezclar cuidadosamente.

El reactivo de trabajo se mantiene estable por 2 semanas entre 2…8°C y 5 días de
15…25°C. El reactivo de trabajo se debe mantener protegido de la luz.

Procedimiento 2 para ALP:

Pipetear en cubetas 30 °C, 37°C

Muestra 20 μL

Reactivo de trabajo 1000 μL

Mezclar, incubar por 5 minutos a 37°C

Mezclar, leer la absorbancia después de 1 minuto y al mismo tiempo activar el

cronómetro. Lea la absorbancia nuevamente después de 1,2 y 3 minutos exactos.
 6. Cálculos y Resultados:

Resultados de Laboratorio

Química

EXAMEN RESULTADO UNIDAD VALOR DE REFERENCIA

ALP 338 U/L 35 - 104

GGT 306 U/L 9 - 39

Método de análisis: Método cinético Validado por: Victoria Díaz y Karla

Bejarano

Fecha y hora de validación:

14/09/2022

10:00 AM

Firma

Firma
Cálculos:
En el caso de GGT se tuvo que hacer en una dilución en donde se indicaba que se coloque 0,1
mL de muestra y 0,5 mL de solución salina 0,9%, lo cual nos indica que es una dilución 1:6
Se colocó 100 μL de muestra y 500 μL de solución salina
El último resultado del equipo fue 51 U/L: 51 x 6= 306 U/L siendo este el verdadero
resultado.

Para la ALP no se requirió ningún cálculo debido a que se trabajó en K/60, además se colocó
en equipo 2757 por lo que el resultado en U/L fue ya proporcionado directamente por el
mismo, específicamente en la última lectura.

7. Linealidad del Método:

GGT: Si el cambio de absorbancia por minuto (△A/min) excede 0,200 a Hg 405 mm o si es

que supera los 250 U/L, diluir la muestra 0,1 mL con 0,5 mL de solución salina fisiológica
0,9% y repetir la prueba usando esta dilución. Multiplicar el resultado por 6.

ALP: Si el cambio de absorbancia por minuto (△A/min) supera los 0,250 ó si la actividad es
mayor de 700 U/L, diluya 0,1 mL de muestra con 0,5 mL de solución salina (0,9%) y repita la
prueba. Multiplique el resultado por 6.

8. Valores de Referencia:

GGT: Se usaron los valores de referencia a 37°C

Temperatura 25°C 30°C 37°C IFCC

6
IFCC
7

Hombre 6 -28 U/L 8- 46 U/L 11- 61 U/L <55 <66

Mujer 4- 18 U/L 7- 29 U/L 9- 39 U/L <38 <39

ALP: se usaron los valores de referencia de IFCC

Valores de suero [U/L]

Temperatura de prueba 30°C 37°C IFCC

Mujeres 28 - 78 42 - 98 35 - 104

Hombres 38 - 94 53 - 128 40 - 129

9. Cuestionario
9.1 ¿Cuáles son las condiciones o variables preanalíticas en torno al
paciente y a las muestras, que deben tomarse en cuenta al momento de
realizar una determinación de actividad de ALP Y GGT?

Una de las razones para que los resultados salgan alterados, es porque el
paciente no se encuentra en las condiciones adecuadas, para esta prueba se
recomienda estar en ayuno de máximo 12 horas, no haber consumido bebidas
alcohólicas alrededor de 72 horas antes (Pasteur Laboratorio Clínico, 2020).
Además, se debe tomar en cuenta que tratamiento antiepilépticos como
fenitoína o fenobarbital elevan el resultado debido a que afectan a los
microsomas y provocan la síntesis enzimática. Asimismo, en la fosfatasa
alcalina se debe tomar en cuenta la edad del paciente, ya que los niños y
adolescentes presentarán actividad entre 2 y 5 veces superior a los valores
normales en adultos, esto debido al remodelado óseo que se produce durante el
crecimiento.

En cuanto a las condiciones preanalíticas de la muestra en el caso de la

fosfatasa alcalina debe usarse suero o plasma heparinizado. No se recomienda
el uso de anticoagulantes tipo quelante del calcio como EDTA, citrato u
oxalato, debido a que al formar complejos de magnesio e inhiben la actividad
de la enzima. Por otro lado un suero hemolizados, debido a que los glóbulos
rojos contienen 6 veces la actividad sérica; el suero lipémico ocasiona un
incremento en la determinación fotométrica (se debe actuar de acuerdo a la
linealidad del método). (Labtest, s.f). Por otro lado, las condiciones
preanalíticas de la muestra para gamma-glutamil transferasa se debe usar suero
o plasma con EDTA. El uso de citratos, oxalato o fluoruro inhiben la actividad
de esta enzima. Así mismo, se debe observar si el suero se encuentra
hemolizado, ictérico (bilirrubina elevada) o lipémico (gran cantidad de TG) ya
que interfieren dando un resultado falsamente elevado. (MONLAB, 2019).
Tanto para la GGT como para la ALP se debe evitar someter las muestras a
cambios bruscos de temperatura.

10. Conclusiones y Recomendaciones

Como se sabe la GGT es una enzima que se va a encontrar en diferentes órganos

como en el riñón, hígado, páncreas y bazo, mientras que la ALP puede estar en el
hígado, huesos, riñón, placenta e intestino. La GGT no es muy específica para poder
reconocer la causa de una lesión hepática, porque también se va a encontrar elevada
en otras enfermedades hepáticas, y de igual manera la ALP, por eso es que se las mide
en conjunto ya que van encontrarse situadas en mayormente en los conductos biliares
(Lab Tests, 2021).
Como podemos ver los resultados de la paciente, se encuentran elevados tanto para
ALP y GGT estos resultados nos están guiando de que el problema está asociado con
una enfermedad del tracto biliar.

Al ser un problema relacionado con el árbol biliar, se debe tomar en cuenta que va a
existir cierta dificultad para que pueda llegar la bilis desde las células hepáticas al
intestino, produciendo así la colestasis (Moreira, 2015). Una de las recomendaciones
en cuanto al estado de la paciente es que se realicen más exámenes para poder
confirmar las causas de los resultados.

Y en cuánto a la práctica siempre verificar y leer los insertos, ya que muchas veces los
valores que se obtiene son elevados y se debe hacer diluciones para poder confirmar
el verdadero resultado, y si no sabemos que debemos hacerlo, el reporte de resultados
va a ser erróneo. Además, se debe tomar en cuenta la analítica de la muestra, siendo
estos el tipo de aditivo a utilizar, estado de muestra y el tipo de transporte que se le
proporcionó, ya que la conservación y la temperatura afectan de manera directa la
actividad enzimática.

Bibliografía:
González A. (2014). Capítulo 17: enzimas. Principios de bioquímica clínica y
patología molecular. Elsevier. 2da edición.
Lab test. (s.f). Fosfatasa alcalina.
https://labtest.com.br/wp-content/uploads/2016/12/Fosfatasa_Alcalina
_40_Esp.pdf

Lab Tests. (2021, September 3). Gamma-glutamil transferasa (GGT).

https://labtestsonline.es/tests/ggt

MONLAB. (2019, diciembre). GGT MonlabTest® Substrato carboxilado.

Cinético. Líquido.
https://www.monlab.es/document/Bioquimica/Bioquimica%20rutina/En
zimas/IFU%20GGT%20monlabtest.pdf
Moreira, V. (2015). Pruebas de función hepática: B, AST, ALT, FA y GG.
Revista Española De Enfermedades Digestivas.
https://scielo.isciii.es/pdf/diges/v107n10/infopaciente.pdf
Pasteur Laboratorio Clínico. (2020, February 4). Perfil Hepático: preparación
para la toma de muestra [Video]. YouTube.
https://www.youtube.com/watch?v=vozzok3wNjc