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CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA


DE CRECIMIENTO

Chapter January 2007

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2 authors:

Bertha Olivia Arredondo-Vega Domenico Voltolina


Centro de Investigaciones Biolgicas del Noroe Centro de Investigaciones Biolgicas del Noroe
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CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR
Mtodos yYHerramientas
TASA DEAnalticas
CRECIMIENTO 21
en la Evaluacin de la Biomasa Microalgal

CAPTULO 2
CONCENTRACIN, RECUENTO
CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO
BERTHA OLIVIA ARREDONDO VEGA
Centro de Investigaciones Biolgicas del Noroeste, S. C. (CIBNOR). Laboratorio de
Biotecnologa de Microalgas. La Paz, Baja California Sur. Mxico. kitty04@cibnor.mx

DOMENICO VOLTOLINA
Centro de Investigaciones Biolgicas del Noroeste, S.C. (CIBNOR). Laboratorio de Estudios
Ambientales UAS-CIBNOR. Mazatln, Sinaloa, Mxico. voltolina@mzt.megared.net.mx

unidades arbitrarias de fluorescencia, volumen de


CONTENIDO las clulas o carbono celular total, calculado para
un perodo de tiempo o una fase de crecimiento
1. INTRODUCCIN especfica (Arredondo-Vega et al., 1997).
2. RECUENTO CELULAR Este incremento puede ser estimado por
2.1 CMARAS DE RECUENTO diferentes mtodos, entre los cuales los ms
2.2 CLCULOS DE RECUENTO CELULAR utilizados en los laboratorios son el recuento
2.3 PROTOCOLO PARA EL RECUENTO celular a travs del microscopio o mediante
CELULAR CON CMARA DE 0.1 mm contadores de partculas (aunque stos son
(NEUBAUER) generalmente costosos, por lo cual su uso estar
3. DENSIDAD PTICA supeditado a la posibilidad de adquirirlos), la
3.1 PROTOCOLO PARA DETERMINAR LA determinacin de los cambios de densidad
DENSIDAD PTICA ptica del cultivo por espectrofotometra o
4. CURVA DE CRECIMIENTO finalmente la cuantificacin de la biomasa en peso
4.1 ECUACIONES QUE DEFINEN EL seco, total u orgnico, o de sus componentes
CRECIMIENTO bioqumicos que son de inters para los fines de
4.2 FASES DE CRECIMIENTO un cultivo en particular (protenas, pigmentos o
4.3 PARMETROS POBLACIONALES cidos grasos, entre otros).
4.4 NMERO TOTAL DE DIVISIONES De estos mtodos, el recuento celular es el
CELULARES ( ) ms utilizado por ser un mtodo sencillo y poco
5. REFERENCIAS costoso, el cual permite adems un mejor
seguimiento del cultivo mediante su inspeccin
Palabras clave: recuento celular, curva de visual. Es necesario remarcar que la
crecimiento, nmero total de divisiones celulares correspondencia entre la concentracin celular y
la informacin proporcionada por los otros
mtodos (como la cantidad de pigmentos o de
1. INTRODUCCIN otros componentes celulares, que son ms
laboriosos y requieren de tiempo, material y
El crecimiento de un cultivo de microalgas se equipamiento ms costoso) no es constante, ya
expresa como el incremento de biomasa ya sea que stos dependen del estado fisiolgico de las
en forma de nmero de clulas (cl/mL), en peso clulas, de la fase de crecimiento y de las
seco (total y/o orgnico), cantidad de protena, condiciones ambientales a las cuales est
de pigmentos, medidos directamente o en sometido el cultivo (Alfonso y Leal, 1998).

21
22 CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO

Para obtener resultados confiables, es microalgas es el hematocitmetro de 0.1 mm de


recomendable aplicar algunos mtodos profundidad con reglilla de Neubauer, que se re-
simultneamente, incluyendo observaciones produce en la Figura 1.
microscpicas cualitativas para evitar errores Para microalgas de mayores dimensiones,
debido a la contaminacin de los cultivos. En esta como muchos dinoflagelados, los tipos de cmara
primera seccin se describen las tcnicas de que se utilizan ms comnmente son: de
recuento celular y de determinacin de la Sedgwick-Rafter o el hematocitmetro de 0.2 mm
densidad ptica. de profundidad con reglilla de Fuchs-Rosenthal.
En la Tabla 1 se dan las principales
caractersticas de las cmaras ms comunes y
2. RECUENTO CELULAR posteriormente se especifican los clculos para
obtener la concentracin celular.
1.1 Cmaras de recuento En la mayora de los laboratorios, la cmara
de recuento que se utiliza es el hematocitmetro
Una de las dificultades para el recuento al de 0.1 mm de profundidad con reglilla de
microscopio es obtener una buena Neubauer, la cual consta de 9 cuadrados con
reproducibilidad, por lo cual es importante saber lados de 1 mm (rea total de recuento = 0.9 mm2),
seleccionar el tamao de la muestra, la dilucin, cada uno de los cuales corresponde a un volumen
el tipo de cmara de recuento, el objetivo del de 0.1 L. Los cuatro extremos estn subdivididos
microscopio y la tcnica de llenado de la cmara. en 16 cuadros pequeos. El cuadro central
En algunos casos, puede ser necesario corroborar contiene 25 cuadros, cada uno con un rea de
el volumen de la cmara que se est utilizando. 0.04 mm2 (0.2 mm x 0.2 mm), a su vez divididos
Para realizar el recuento celular se han en 16 cuadros ms pequeos (Fig. 1).
diseado diferentes cmaras que contienen un Para clulas ms grandes de 6 m y con
volumen determinado de muestra entre una cultivos relativamente poco concentrados, se
lmina y una laminilla rgida (cubreobjeto espe- aconseja que el recuento se haga en los cuatro
cial) colocada sobre plataformas laterales a una cuadros marcados como A, B, C y D, aunque en
altura establecida (Alfonso y Leal, 1998). La que varios laboratorios se prefiere contar por lo menos
se usa con mayor frecuencia para cultivos de un cuadro adicional, seleccionado cada vez al

Figura 1. Reglilla de Neubauer de 9 mm2.


CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO 23
Tabla 1. Nombre comercial, volumen til de recuento, profundidad, objetivos usados ms
frecuentemente, tamao de las clulas en la muestra e intervalo de concentraciones aconsejadas
para las cmaras ms comunes utilizadas para el recuento celular de microorganismos (Guillard
y Sierracki, 2005).

Nombre Volumen Profundidad Area Objetivos Tamao celular cl/mL


(L) (mm) (mm2) (m)
Petroff Hauser 0.2 0.02 10 40 -100 0.5 - 5 106 108
Speirs Levy 0.4 0.2 2 10 - 20 5 - 75 104 - 106
Hematocitmetro 0.9 0.1 9 20 - 40 2 - 30 104 - 107
(Neubauer)
Hematocitmetro 3.2 0.2 16 10 - 20 5 - 75 104 106
(Fuchs-Rosenthal)
Palmer Maloney 100 0.4 250 10 - 45 5 - 150 102 105
Sedgwick-Rafter 1000 1 1000 2.5 - 10 50 - 500 30 104

azar. Cuando las clulas son pequeas y la menores del cuadro central marcado con X, la
concentracin de los cultivos es muy alta, es concentracin celular se calcula de acuerdo a la
preferible utilizar cinco cuadros menores del siguiente frmula:
cuadro central marcado con X.
C = [ (N / 4) / 10-6 ] dil.
1.2 Clculos de recuento celular En donde:
C = cl/mL
Si se contaron todas las clulas presentes en N = promedio de clulas presentes en los 5
los 4 cuadros de 1 mm2 marcados como A, B, C y cuadros pequeos del cuadro central
D, la concentracin celular se calcula de acuerdo 4 x 10 -6 = corresponde al volumen de la
a la frmula: muestra expresado en cm3 (mL) sobre el rea de
los cuadros pequeos la cual equivale a 0.004
C = N 104 dil mm3 (0.004 L) (0.2 x 0.2 x 0.1)
En donde: dil = factor de dilucin
C = cl/mL
N = promedio de clulas presentes en 1 mm2 Para el caso del hematocitmetro de 0.2 mm
(0.1 L) de profundidad, los clculos son los mismos pero,
dil = factor de dilucin (cuando se consider considerando que la profundidad es doble, es
necesario diluir la muestra. Es importante aclarar decir, 1 mm2 corresponde a un volumen contado
que si se us 1 mL de muestra y 9 mL de agua de 0.2 L y el factor de conversin de L a mL es
sin clulas, el volumen total es 10 mL y el factor 5 103.
de dilucin es = 10. Esta dilucin se define como La cmara Sedgwick-Rafter consta de un
uno en diez -1:10-. NOTA: Esta aclaracin se debe portaobjetos con un marco rectangular de 50 x
a nuestra observacin que frecuentemente se 20 mm y 1 mm de profundidad. Con el fin de
agregan 10 mL de agua a 1 mL de muestra y se facilitar el recuento, los modelos actuales tienen
usa 10 como factor de dilucin lo que esto no es una reglilla con 20 columnas y 50 lneas. Para un
correcto). cultivo muy concentrado de una especie unicelular
104 = factor de conversin de 0.1 L a 1 mL se sugiere diluir, como por ejemplo 1:1000 y contar
toda la cmara. En este caso, los clculos para
Si las clulas se contaron en el cuadro cen- determinar la concentracin celular (cl/mL) es:
tral (25 cuadros) considerando solo los 5 cuadros
24 CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO

C = N dil d) El tubo se agita y se succiona una muestra


En donde: con una pipeta Pasteur.
C = cl/mL e) Se llena la cmara con el cubreobjeto ya
N = clulas contadas en toda la cmara puesto, colocando la punta de la pipeta Pas-
dil = factor de dilucin teur en la muesca en forma de V que tiene la
cmara, cuidando que el volumen depositado
Es necesario recordar que independien- sea suficiente para que una parte llegue hasta
temente del tipo de cmara, la precisin de los los canales laterales, pero sin inundarlos
recuentos depende de la distribucin al azar de completamente. Si esto sucede, se seca y
las partculas (clulas) sedimentadas. Por este limpia la parte inferior de la cmara y se
motivo, en el caso de especies que forman observa al microscopio para verificar que las
cadenas se deben contar las cadenas (que son clulas tengan una distribucin adecuada (no
las que se distribuyen al azar) y posteriormente agrupada). Para los modelos que no tienen
determinar el promedio del nmero de clulas por muesca, colocar la gota cerca del margen del
cadena, con el cual se puede calcular el nmero cubreobjetos, procurando que no se expanda
total de clulas de esa especie presente en la a la parte superior del mismo. Una alternativa
muestra. aceptable es colocar la gota en uno de los
canales laterales, verificando que el exceso
1.3 Protocolo para el recuento celular con llegue hasta el otro canal lateral.
cmara de 0.1 mm (Neubauer) f) Generalmente se enfoca la cmara con el
objetivo 10X aunque en ocasiones cuando se
a) Agitar el cultivo para permitir que las clulas trata de clulas pequeas se utiliza el de 40X.
tengan una distribucin homognea. Esto facilita la identificacin de las clulas,
b) Tomar una muestra de 1 mL y colocarla en un discriminando los residuos y dems objetos
tubo previamente lavado y seco. Agregar una con tamao similar a la especie que se est
gota de lugol para fijar las clulas. (Solucin cultivando.
A: pesar 10 g de KI y disolver en 100 mL de g) El registro se hace contando las clulas que
agua destilada. Solucin B: pesar 5 g de I2 quedan dentro de cada una de las cuadrculas
cristalino y disolver en 10 mL de CH3COOH. marcadas como A, B, C y D indicadas en la
Mezclar ambas soluciones (A+B), agitar bien Figura 1. En el caso de las clulas que tocan
y mantener en frasco mbar). las lneas de demarcacin entre cuadros, se
c) Cuando el cultivo est muy concentrado (>106 cuentan solamente las que tocan dos de los
cl/mL) se diluye la muestra con agua de mar cuatro lados, seleccionados al azar.
o destilada (segn sea el caso). NOTA: h) Para tener un recuento ms preciso, se usan
Generalmente una dilucin 1:10 es suficiente, tres o ms submuestras de cada muestra y
pero es necesario verificar que la con stas se calcula la concentracin media.
concentracin resultante sea suficiente para Para calcular la concentracin celular (cl/mL)
obtener una precisin adecuada, la cual se utiliza la frmula indicada anteriormente.
depende del nmero de clulas presentes en i) Con los datos de concentracin celular (cl/
promedio en 1 mm2, de acuerdo con la frmula mL) de cada recuento en tiempos sucesivos
= x 2 x en la cual es la media (generalmente a intervalos de 24 h) se obtiene
poblacional, calculada a partir del estimador la curva de crecimiento graficando en el eje
x el cual es el promedio de clulas contadas de las Y los valores de concentracin y en
en 1 mm2 (Lund et al., 1958). Por lo anterior, el eje de las X el tiempo (en das). Tambin
si se cuentan en promedio 25 clulas en 1 es importante determinar la tasa de
mm2, la precisin de ese recuento es 25 crecimiento (), el tiempo de generacin (tg) y
2 25 = 25 10. el nmero de duplicaciones (n) (Schoen,
1998).
CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO 25
espectrofotmetro, usando la longitud de onda
3. DENSIDAD PTICA seleccionada. Previamente, el equipo se
calibra con agua destilada o de mar (aunque
La concentracin celular puede ser estimada en general hay diferencias mnimas entre los
indirectamente usando la densidad ptica del dos tipos de agua), dependiendo si la
cultivo, que es una tcnica menos precisa del microalga es de agua dulce y/o marina.
recuento directo, pero permite una evaluacin 3) Con los datos de densidad ptica se obtiene
rpida de la concentracin microalgal, en espe- la curva de crecimiento graficando los valores
cial si se cuenta con una curva de calibracin entre de densidad ptica (DO) en el eje de las Y
la concentracin celular de una especie con el tiempo en el eje de las X, recordando
determinada, evaluada directamente, y las que cuando se usa la transmitancia (T = % de
lecturas de densidad ptica de uno o ms cultivos la luz incidente recibida por el fotodetector),
de esa especie. Uno de sus inconvenientes es es necesario utilizar la transformacin: DO =
que la contaminacin bacteriana y/o de otro tipo 100 - T
(basura, residuos), dar lecturas errneas, por lo
que hay una tendencia a evitarla.
La mencionamos en este captulo, ya que
4. CURVA DE CRECIMIENTO
todava se usa en algunos laboratorios para
reconocer rpidamente las fases de crecimiento
De la misma manera que bacterias y
de los cultivos, por lo cual permite tomar
levaduras, las microalgas se reproducen
decisiones inmediatas sobre los tiempos de
principalmente por divisin celular, que es binaria
cosecha o de dilucin. Algunos autores proponen
en la mayora de los casos, por lo cual presentan
el uso de una longitud cercana al pico de
un crecimiento rpido cuando se inoculan en un
absorcin de la clorofila (675 nm), lo cual
medio de cultivo no limitante y se mantienen en
permite obtener una lectura an cuando la
condiciones adecuadas.
concentracin celular es baja, mientras que para
En general, las condiciones ambientales
otros sta se debe acercar al mnimo de
cambian con la edad del cultivo, por lo cual cam-
absorcin. Esto se debe al hecho de que el
bia tambin la velocidad de crecimiento
contenido celular de clorofila puede variar de
poblacional. Esto permite reconocer diferentes
acuerdo a la cantidad de luz disponible, la cual
fases de crecimiento, que sirven para describir la
cambia de acuerdo a las condiciones
forma en la cual cambia la concentracin celular
experimentales y a la edad del cultivo por lo cual,
o de biomasa.
como nosotros, sugieren leer a 550 nm.
Para esto se utilizan principalmente los
parmetros poblaciones definidos como velocidad
3.1 Protocolo para determinar la densidad
especfica de crecimiento, tambin conocida como
ptica
tasa de crecimiento () y el tiempo de duplicacin
o de generacin (tg).
1) Agitar el cultivo ya sea recin inoculado y/o
en la fase de crecimiento que se haya
4.1 Ecuaciones que definen el crecimiento
seleccionado, para permitir que las clulas se
(Guillard, 1973)
distribuyan homogneamente.
2) Colocar el volumen necesario de muestra (en
La velocidad especfica de crecimiento o tasa
el caso que el cultivo est muy concentrado,
de crecimiento () est definida por la siguiente
hacer una dilucin) en una celda de volumen
ecuacin:
y camino ptico apropiados, dependiendo del
= dx / dt 1/x
tipo de instrumento del cual se disponga en
el laboratorio, agitar nuevamente y medir
En donde:
rpidamente la transmitancia o la absorbancia
x = concentracin de la biomasa (nmero de
(densidad ptica) en el colormetro o
cl/mL)
26 CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO

t = tiempo en das 3. Fase exponencial: durante este periodo


la velocidad de crecimiento adquiere su valor
En una curva de crecimiento como la que se mximo y, en vista de la falta de factores
presenta en la Figura 2 se pueden reconocer las limitantes, permanece aproximadamente
diferentes fases (Vonshak y Maske, 1982), las constante. Por este motivo, la concentracin
cuales se definen a continuacin: celular aumenta rpidamente, aunque en general
no se alcanzan valores muy elevados.
4.2 Fases de crecimiento
4. Fase de desaceleracin: en esta fase se
1. Fase lag: o fase de adaptacin: el empieza a notar el efecto de una menor
comportamiento inicial depende de las disponibilidad de uno de los factores que regulan
condiciones de las clulas del inculo, de las el crecimiento, por lo cual las condiciones de
cuales depende tambin el xito del nuevo cultivo. cultivo son sub-ptimas. En consecuencia, la tasa
Cuando las clulas del inculo no se encuentran de divisin celular disminuye aunque, en vista del
en condiciones metablicas adecuadas se alto nmero de clulas, la concentracin celular
presenta una fase de retardo del crecimiento, por alcanza su mximo valor. En este periodo la
lo cual el cultivo no ser exitoso. Los cambios de composicin bioqumica de la biomasa cambia de
las condiciones ambientales como temperatura, manera opuesta a la mencionada para la fase de
iluminacin y pH tambin pueden causar un aceleracin.
retardo del crecimiento en la fase inicial de un
cultivo. 5. Fase estacionaria: durante esta fase las
condiciones de cultivo son limitantes y la natalidad
2. Fase de aceleramiento: en esta fase, es igual a la mortalidad, por lo cual la
diferentes componentes estructurales se concentracin celular y los componentes de la
incrementan secuencialmente, iniciando con el biomasa permanecen sin cambios relevantes.
RNA (por sus iniciales en ingls cido Este comportamiento se debe a la baja
ribonucleico), seguido de las protenas y del peso concentracin de algn nutriente esencial o al alto
individual. La concentracin celular es valor del pH, con consiguiente poca disponibilidad
generalmente la ltima que muestra este incre- de sustrato fotosinttico, o a una excesiva
mento. concentracin de oxgeno, aunque con frecuencia
el motivo ms importante es la pobre penetracin
de la luz causada por la alta concentracin celular
(efecto de autosombreado). Otro factor que
puede limitar el crecimiento es la excrecin de
productos catablicos al medio de cultivo.

6. Fase de muerte: la tasa de mortalidad es


superior a la de natalidad, por lo cual la
concentracin disminuye. Adems se registra una
disminucin de la biomasa unitaria como resultado
de un incremento en la proporcin entre
respiracin y fotosntesis y a la ausencia de
nutrientes, que conlleva a la muerte o lisis celular.

Figura 2. Curva de crecimiento tpica, en la cual se 4.3 Parmetros poblacionales


muestran las diferentes fases, marcadas como: 1 fase
lag; 2 fase de aceleramiento; 3 fase exponencial; 4
fase de desaceleracin del crecimiento; 5 fase Independientemente de la fase de crecimiento
estacionaria; 6 fase de muerte. en la cual se pueda encontrar, los cambios de
CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO 27
concentracin celular o de biomasa de un cultivo O si se usaron logaritmos en base 2:
son una funcin del valor registrado en la
evaluacin anterior (es decir, se trata de una vari- tg = 1 / 2
able concentracin-dependiente), por lo cual su
crecimiento poblacional puede ser descrito Como se mencion, cuando se experimenta
mediante la ecuacin: con cultivos de microalgas, es importante conocer
su curva de crecimiento en las condiciones en
Nt1 = Nt0 K [(N-M) t] las cuales se est trabajando, ya que este dato
En donde: podr ser utilizado para establecer los tiempos
Nt0 y Nt1 = son los valores de concentracin en los cuales es necesario cosechar la biomasa,
celular registrados al inicio y al final del intervalo lo cual permite comparar organismos en fases
de tiempo que pas entre dos tiempos sucesivos de crecimiento conocidas. Por lo tanto, diferencias
de evaluacin de la velocidad de crecimiento (t = en su composicin o en sus caractersticas de
t1 - t0) calidad pueden ser atribuidas al tipo de
N y M = son las tasas de natalidad y de tratamiento que se utiliz en ese experimento en
mortalidad, cuya diferencia describe globalmente particular.
la tasa de crecimiento poblacional (N M = ) Un ejemplo de una curva de crecimiento
K = base de los logaritmos usados para re- obtenida en nuestro laboratorio en condiciones
solver la ecuacin la cual, utilizando logaritmos controladas, se muestra en la Figura 3 y una forma
naturales (base e), se despeja como sigue: sencilla y rpida de reconocer las fases de
crecimiento de un cultivo se ilustra en la Tabla 2.
e = (ln X2 ln X1) / (t2 t1)
En donde: 4.4 Nmero total de divisiones celulares
X2 y X1 = concentracin determinada en los ( )
tiempos t2 y t1
Uno de los objetivos principales en
De acuerdo a las propiedades de los experimentos de crecimiento de cultivos de
logaritmos, la ecuacin anterior se puede escribir: microalgas es demostrar que un determinado
tratamiento rendir mayor concentracin que el
e = ln (X2 / X1) / (t2 t1) procedimiento estndar, lo cual implica
seleccionar el momento ms adecuado para la
En vista de que la mayora de las microalgas cosecha.
se reproduce mediante divisin binaria, la tasa
de crecimiento se puede obtener directamente en
nmero de divisiones celulares o de duplicaciones
diarias de biomasa, utilizando en la ecuacin an-
terior logaritmos en base 2 de acuerdo a la
frmula:

2 = [ln (X2 / X1) / ln2] / (t2 t1)

El tiempo de duplicacin y/o de generacin


(tg), es el tiempo necesario para que se duplique
la poblacin. Cuando se usan logaritmos natu-
rales, el tiempo de duplicacin puede ser
calculado como:
Figura 3. Curva de crecimiento de Prorocentrum lima
tg = ln 2 / e = 0.693 / e cultivada en medios diferentes: K ,S
f/2 (Heredia-Tapia, 2005).
28 CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO

Tabla 2. Recuento celular, ln de la concentracin celular,


tasa de crecimiento (2, calculada a partir de log2) y
tasa de crecimiento acumulada ( 2) de un cultivo de
Pavlova lutheri (Hernndez-Espinosa, 1999) cultivada
en un sistema batch (por lote) a 125 mol quanta m-2 s-
1
en medio f/2 (Guillard y Ryther, 1962).

Tiempo N Ln N 2 2
(das) (cl/mL)
0 16,670 9.721 --
1 75,000 11.225 2.1696 2.1696
2 320,000 12.676 2.0931 4.2627
3 1,321,650 14.094 2.0461 6.3088
4 3,625,806 15.104 1.4560 7.7648
5 4,480,622 15.315 0.3054 8.0702 Figura 4. Crecimiento de un cultivo de Pavlova lutheri
6 4,805,000 15.385 0.1008 8.1710 en cl/mL y como suma progresiva de duplicaciones
celulares (Hernndez-Espinosa 1999).

Para esto, es necesario determinar con Universidad de La Habana. Habana, Cuba.


seguridad el inicio y el final de cada fase de 21 pgs.
crecimiento, que no es fcil reconocer utilizando ARREDONDO VEGA, B.O., Cordero Esquivel, B.,
las curvas de dispersin de concentracin celular Herrero, C. y Abalde, J. (1997). Manual de
graficada contra el tiempo. Para facilitar esta Tcnicas Bioqumicas Aplicadas en Ficologa.
seleccin, sugerimos graficar contra el tiempo la Manual de Prcticas del Ier. Curso Terico
suma progresiva de las tasas de crecimiento diario Prctico: Aplicaciones Biotecnolgicas del
( ), ya que cualquier cambio de la pendiente de Cultivo de Microalgas. La Paz, Baja Califor-
esta nueva curva de dispersin indica una nia Sur, Mxico. Septiembre 1-5, 1997. 40
variacin de la velocidad de duplicacin. pgs.
Para ejemplificar lo anterior, en la Tabla 2 se GUILLARD, R.R.L. y Ryther, J.H. (1962). Studies
indican los datos correspondientes a un cultivo of marine planktonic diatoms. I. Cyclotella
de Pavlova lutheri, y en la Figura 4 se dan las nana Hustedt and Detonula confervacea
grficas de dispersin contra el tiempo de la (Cleve) Gran. Canadian Journal of Microbiol-
concentracin celular y de la suma progresiva de ogy 8: 229-239.
las tasas de divisin. La segunda indica que el GUILLARD, R.R.L. (1973). Division rates. En:
crecimiento exponencial termin a partir del da Handbook of Phycological Methods. Stein,
3, despus del cual la pendiente de la J.R. (ed.). Cambridge University Press, Cam-
disminuy, como consecuencia de la menor bridge, 289-312 pp.
velocidad de divisin celular (fase de GUILLARD, R.R.L. y Sieracki, M.S. (2005). Count-
desaceleracin), mientras que la falta de aumento ing cells in cultures with the light microscope.
del valor de la en los das siguientes indica En: Algal Culturing Techniques. Andersen,
que en esos das los cultivos ya se encontraban R.A. (ed.). Elsevier Academic Press, 239-252
en la fase estacionaria. pp.
HEREDIA-TAPIA, A. (2005). Aislamiento, cultivo
y caracterizacin parcial del dinoflagelado
5. REFERENCIAS marino Prorocentrum lima (Ehrenberg) Dodge
de la isla El Pardito, Baja California Sur,
Mxico. Tesis de Licenciatura. Universidad
ALFONSO, E. y Leal, S. (1998). Creacin y Autnoma de Baja California Sur (UABCS).
Mantenimiento de un Cepario de Microalgas. La Paz, Baja California Sur. 78 pgs.
Centro de Investigaciones Marinas,
CONCENTRACIN, RECUENTO CELULAR Y TASA DE CRECIMIENTO 29
HERNNDEZ-ESPINOSA, D. (1999). Variabilidad SCHOEN, S. (1988). Cell counting. En: Experi-
bioqumica de la microalga marina Pavlova mental Phycology. A Laboratory Manual.
lutheri en condiciones autotrficas y Lobban, C.S., Chapman, D.J. y Kremer B.P.
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Tesis de Licenciatura. Universidad Autnoma VONSHAK, A. y Maske, H. (1982). Algae: Growth
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