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ACTINOMICETOS

TINO
CETOS
UNIVERSIDAD NACIONAL JOSE FAUSTINO SANCHEZ
CARRION

INGENIERIA AGRARIA, INDUSTRIAS ALIMENTARIAS Y


AMBIENTAL
INGENIERIA AMBIENTAL

ACTINOMICETOS

CURSO: Microbiologa
PROFESOR: Blgo. Luis Alberto Huayna Dueas
ALUMNOS: Carhuapoma Nicho Alessio Bill
Mendoza Haro Valeria Naomy
Osorio Delgado Yomayra Sandra
Palacio Colan Danae Siare
Salinas Sarmiento Veraliz Mariana
Susanibar Espinoza Sonia

HUACHO PER
2017
DEDICATORIA:
Este trabajo va para nuestros padres que
sin su ayuda no podramos
desarrollarnos como futuros Ingenieros
Ambientales y al docente por sus
enseanzas brindadas ya que sin estos
trabajos no pondramos en prctica todo
lo aprendido en clase, espero sea de su
agrado este trabajo muchas gracias.
NDICE

INTRODUCCIN ... Pag. 4

1. Actinomicetos .. Pg. 5
2. Distribucin . Pg. 6
3. Caractersticas . Pg. 7
4. Clasificacin de los Actinomicetos . Pg. 10
5. Funciones Pg. 12
6. Importancia . Pg. 13
7. Habitat y poblacin Pg. 13
8. Poder antibitico . Pg. 15
9. Resistencia a los antibiticos .. Pg. 16
10. Funciones en el suelo .. Pg. 16
11. Aplicaciones .... Pg. 18
12. Trabajos basados en los actinomicetos Pg. 24

INTRODUCCIN
Los actinomicetos, son microorganismos del suelo caracterizados por ser organismos
intermedios entre los hongos y las bacterias. Tienen aspecto filamentoso y, al igual que
los hongos, la capacidad de segregar antibiticos (estreptomicina, aureomicina,
terramicina, cloromicetina y tetraciclina).

Por otro lado, como las bacterias, los actinomicetos realizan numerosas reacciones
bioqumicas y participan en el proceso de formacin de humus y en la alimentacin de
las plantas al mineralizar la materia orgnica. Algunas especies pueden fijar nitrgeno
atmosfrico en asociacin con algunas especies de rboles. Su nmero en el suelo
agrcola es elevado (un milln a cien millones por gramo de tierra). Su peso medio es de
una tonelada por hectrea.

Sin duda los actinomicetos son de gran importancia para la disolucin de la materia
orgnica del suelo y la liberacin de nutrientes de ella. Reducen a formas ms sencillas
los compuestos ms resistentes, como la lignina. La capacidad de los actinomicetos de
simplificar el humus es importante, especialmente respecto al nitrgeno. Considerables
cantidades de este elemento parecen estar relacionadas con formas hmicas complejas y
pueden quedar sin asimilar por las plantas superiores. Los actinomicetos tienen la
habilidad de volver a poner estas sustancias en circulacin, junto a los hongos y las
bacterias, como agentes fertilizantes en el suelo cultivable. Como antagonistas
microbianos los actinomicetos regulan la composicin de la comunidad en el ecosistema
del suelo, en parte porque excretan antibiticos y enzimas de lisis, lo que tiene utilidad
en el control biolgico de insectos, nematodos y otros patgenos vegetales.
1. ACTINOMICETOS

Los actinomicetos (Ac) son bacterias o procariotas, sensibles a la penicilina porque su


pared contiene peptidoglucano, base de la diferencia con los hongos filamentosos
eucariotas, aunque etimolgicamente significa hongo en forma de rayo de sol, este
grupo pertenece en el manual de Bergey al orden Actinomycetales pueden tener forma
bacilar, Gram Positivos, hasta filamentos delgados ramificados o micelio similar a los
hongos, pero de menor dimetro de entre 0.5-1.0, algunos tienen hifas de 2.0, como los
hongos producen esporas, conidias desnudas en cadenas, en esporangios, en la mayora
de los gneros del suelo excepto Actinomyces. Ciertos Ac tienen propiedades
fisiolgicas semejantes a los hongos como: la clase y forma del micelio que se
fragmenta, producen colonias derivadas de hifas que se introducen en el agar, stas
pueden ser pigmentadas y harinosas de 3-6 mm de dimetro, cuando se siembran en
medio de cultivo lquido no generan turbidez, porque en su pared celular contienen
ceras que los hacen insolubles, por ello forman grumos y esferas que en consecuencia
no se mezclan con el medio de cultivo, otros Ac no forman hifas y son similares a las
bacterias tpicas como: Bacillus, Escherichia, Pseudomonas, incluso Staphylococus, etc.

Los actinomicetos no son fotosintetizadores y la mayor parte son saprofitos


(que se alimenta de materia orgnica en descomposicin), desarrollndose en esa misma
materia orgnica en descomposicin. Aunque cabe destacar que hay actinomicetos
patgenos de plantas, animales o humanos (como el causante de la lepra o la
tuberculosis), la mayora de estos microorganismos son inofensivos para el suelo y
ayudan en la descomposicin de la materia orgnica, e incluso los hay beneficiosos
como es el caso del gnero Frankia, que forma asociaciones con arbustos y rboles
fijando nitrgeno.

Puesto que son saprofitos, a medida que aumenta la materia orgnica aumenta la
poblacin de actinomicetos, sin embargo estos proliferan en las fases finales de
descomposicin de la materia. Degradan principalmente sustratos complejos a base de
celulosa, hemicelulosa, lignina, parafina y sobretodo quitina, siendo psimos
competidores a la hora de consumir sustratos fcilmente degradables (azcares simples,
protenas y cidos orgnicos), aunque tambin los degradan. Debido a que degradan
sustratos complejos, resultan ser organismos importantes en el proceso de
transformacin de la materia orgnica en humus, considerndose tambin muy buenos
agregadores del suelo, ya que son muy eficientes produciendo sustancias hmicas y, tal
y como sucede tambin con los hongos, con sus micelios unen partculas de suelo.

2. DISTRIBUCIN

Los Ac son abundantes y cosmopolitas en el ambiente: lagos, ros, suelo y estircol


de animales y aves; son aerobios en el suelo se ubican en la superficie, aunque tambin
viven en los horizontes inferiores, al igual que gneros comunes de bacterias
verdaderas Bacillus, Pseudomonas, Agrobacterium, en especial en suelo alcalino, la
mayora de los Ac son saprobios, mineralizan materia orgnica vegetal, animal, existen
ciertos gneros fitopatgenos: Streptomyces scabies al igual aquellos que
causan enfermedades en humanos: Nocardia, y animales como Actynomyces.
Los Ac en el suelo se estudian por mtodos microscpicos, por cuenta viable en placa
(CVP) en medios de cultivo para bacterias heterotrficas como el agar nutritivo, es
preferible en selectivos que contienen quitina como nica fuente de carbono y
antibiticos que inhiben hongos, ya que tienen tiempo de generacin mayor al de
bacterias nativas del suelo o la rizosfera de plantas como: Achromobacter, Rhizobium,
Burkholderia, etc., es recomendable usar medios de cultivos especficos para su
aislamiento.
En la naturaleza los Ac como el suelo se observan en hifas y conidias, al inicio de la
esporulacin generan poblaciones abundantes, donde el tamao de
la comunidad depende de la clase del suelo, de sus propiedades fisicoqumicas como el
contenido en materia orgnica, del pH en consecuencia la estimacin por CVP
seala valores que varan desde 1000 a 10,000,000/g de suelo seco de una zona
templada, en la mayora de los suelos el porcentaje de Ac de la microbiota total se
reduce con la profundidad, lo que asociado con la concentracin diferencial
de oxgeno y dixido de carbono entre bacterias y Ac, en el horizonte C la densidad
vara de 1000 a 1,000,000 UFC/g de suelo seco, sin embargo esto son valores relativos
pues no es posible diferenciar si esas colonias provenan de una conidia o una hifa.
La abundancia de las conidias de los Ac, es un respuesta a cualquier condicin
ambiental adversa del suelo, as que algunos generan esporas resistentes a la desecacin,
las conidias son viables en suelo seco por aos cuando el ambiente es desfavorable para
la vida vegetativa, las conidias tienen mayor tolerancia el calor que las hifas, resisten
temperaturas que inhiben la reproduccin del micelio, la conidia es menos tolerante al
calor que la espora bacteriana, normalmente la hifa muere pocos grados arriba de
la temperatura de crecimiento o causa la inactivacin de las conidias.

3. CARACTERSTICAS
Los rasgos morfolgicos que presentan las bacterias unicelulares y los hongos
filamentosos han permitido diferenciarlos y separarlos claramente en dos grandes
grupos. Sin embargo, un grupo de transicin, los actinomicetos, puede ser
considerado como la excepcin a la regla. Los rasgos distintivos por los cuales durante
algn tiempo se les consider como miembros del grupo de los hongos filamentosos
fueron: a) la similitud en su forma de crecer y desarrollarse, b) formacin de un
filamento denominado hifas con extensas ramificaciones (micelio), c) muchos de ellos
forman micelio areo y esporas, y d) su crecimiento en cultivo l- quido raramente
presenta la turbidez asociada con las bacterias unicelulares, sino que durante el
crecimiento se forman filamentos, grumos o esferas de micelio. No obstante, lo anterior,
los filamentos de los actinomicetos son mucho ms delgados que aquellos formados por
los hongos. Cabe mencionar que no todos los actinomicetos comparten estas
caractersticas, por ejemplo, algunos gneros como Mycobacterium y Corynebacterium
no producen micelio areo. La forma y ornamentacin de las esporas es diversa, as
como la manera en que se agrupan, siendo este criterio empleado para subdividir e
identificar algunos grupos de actinomicetos. Un aspecto relacionado con el desarrollo de
las esporas es la produccin y excrecin de metabolitos secundarios bioactivos que
pueden ser de varios colores y que se observan como pequeas secreciones en forma de
gotitas sobre la colonia microbiana. Del filo Actinobacteria, los actinomicetos son el
grupo con ms especies descritas, adems de ser un grupo de importancia para el
hombre debido a las aplicaciones biotecnolgicas que representa. Histricamente los
actinomicetos han sido descritos como microorganismos que habitan en el suelo, pero
actualmente se conoce que estn ampliamente distribuidos en ambientes acuticos como
ocanos, ros y lagos, donde tambin se encuentran asociados a los sedimentos, sobre
todo en el material orgnico que est en proceso de descomposicin. En el suelo, el
tamao y nmero de la comunidad de actinomicetos depende de diversos factores,
principalmente de las caractersticas fsicas y qumicas como pueden ser la textura,
humedad, pH y contenido de materia orgnica. Cuando se aslan actinomicetos del suelo
mediante medios de cultivo slidos, el gnero predominante suele ser Streptomyces, con
el 70 al 90% de las colonias, seguido por Nocardia con 10 a 30%, y el tercero puede ser
Micromonospora que constituye del 1 al 15% de actinomicetos.

Con relacin a sus hbitos de vida se puede mencionar que estos microorganismos son
generalmente saprfitos y participan activamente en la mineralizacin de la materia
orgnica. Aunque se conocen pocas especies patgenas, existen algunas que afectan
plantas, animales y humanos. Por ejemplo, Streptomyces scabies, que causa la roa de
la papa (Alexander, 1980). Diversas especies del gnero Streptomyces son
comercialmente muy atractivas porque producen una amplia gama de productos
naturales con actividad biolgica. Muchos de los antibiticos empleados en la
actualidad provienen de los actinomicetos; el trmino antibitico fue acuado por el
microbilogo del suelo Selman Waksman (1888-1973) quien trabajando con una cepa
de Streptomyces griseus descubri la estreptomicina, con actividad antimicrobiana
contra el bacilo de Koch, causante de la tuberculosis. Esto le vali a Waksman el Premio
Nobel en Fisiologa o Medicina en 1952. Actualmente la estreptomicina tambin es
empleada para combatir bacterias que afectan diversos cultivos de importancia agrcola,
por ejemplo, para tratar el tizn del fuego en el manzano, causado por la bacteria
Erwinia amylovora (Manulis y cols., 1998).
El agregar restos de plantas en el suelo eleva la temperatura, tanto la biota fngica como
la bacteriana inicialmente proliferan, mientras que los Ac no se estimulan hasta el final
de la mineralizacin de la materia orgnica, lo que indica que este proceso depende de
la accin conjunta de bacterias y hongos, mientras que los Ac aparecen cuando los
compuestos fciles de degradar desaparecieron y ya no existe competencia:

Los Ac no toleran el pH cido, su densidad es inversa a la concentracin del


in hidrgeno; especies del gnero Streptomyces no proliferan a pH menor 5.9, en suelo
cido la proporcin de Ac es menor al 1% del total de la poblacin microbiana, existen
gneros resistentes a la acidez, crecen mejor en microambientes donde el valor flucta
entre 7 y 8 derivados de los productos orgnicos alcalinos excretados por la actividad de
la micro biota hetertrofa acompaante, el pH lmite de crecimiento de los Ac es de 5.0
ello tiene aplicacin prctica en el control de ciertas enfermedades vegetales causadas
por ste grupo, el uso intensivo del fertilizante nitrogenado con base en el amonio que
se oxida biolgicamente a cido ntrico, mientras el encalamiento tiene un efecto
benfico sobre los Ac, una condicin neutra o alcalina estimula su crecimiento, mientras
que el contenido de humedad de 85-100% o inundacin los inhibe porque son
aerbicos, no son afectados por la condicin de semisequedad como las bacterias
verdaderas, en contraste una baja humedad induce la formacin de conidias, la densidad
de Ac permanece alta cuando el suelo se seca, pero el nmero de bacterias comunes
disminuye porque carecen de tolerancia a un ambiente rido. En una sequa severa en
Kenya, Africa; los Ac inicialmente representaban menos del 30% de colonias, pero con
el tiempo alcanzaron ms del 90% del total viable, en general en suelo del desierto
dominan la vida microscpica, la humedad est asociado con la formacin y
persistencia de sus conidias, las hifas requieren un por ciento de humedad superior al
60% para mantenerse viables, este hecho demuestra que las esporas
o estructuras relacionadas de los Ac son ms resistentes a la desecacin y persisten por
periodos mayores de tiempo que otros grupos microbianos del suelo.
El anlisis de la densidad de las hifas de Ac en portaobjetos de vidrio enterrado en el
suelo indica que un alto porcentaje son mesfilicos, crecen poco a 5C y nada a 39C, al
aumentar la temperatura de 5 a 27C se favorece su crecimiento, el intervalo adecuado
para su multiplicacin esta entre 28 a 37C. En sntesis la humedad, la temperatura y la
cantidad de materia orgnica derivada de las races, los restos vegetales, la estacin del
ao influyen en la diversidad y densidad de Ac mayor en primavera y otoo.
4. CLASIFICACIN DE LOS ACTINOMICETOS
5. FUNCIONES

Las principales funciones que presentan los actinomicetos, segn Waksman, son las
siguientes:

Actan en la descomposicin de residuos animales y vegetales liberando


amonaco y cidos orgnicos. Estos ltimos son capaces de formar complejos
muy importantes en edafognesis (proceso de formacin y evolucin de un
suelo) y en la nutricin vegetal, ya que tienen una gran movilidad y capacidad
quelante para ceder a las races el nutriente que se requiera.
Mineralizacin del humus con la consiguiente liberacin de principios tiles
para la nutricin de las plantas.

Participan activamente en los procesos de humificacin, particularmente en


la formacin de sustancias melnicas.

Su micelio presenta una parte interesante de la materia prima para la sntesis


de compuestos hmicos, adems posee unas protenas (hidrofobinas) que tienen
capacidad para que el micelio resista a la falta de agua. Estas protenas han
adquirido una importancia ya que uno de sus componentes, rico en cistenas
(SC3), est relacionado con el Alzheimer.

Secrecin de sustancias antibiticas como la estreptomicina, tetraciclina, etc.,


con el fin de producir equilibrios genricos o antagnicos especficos hacia los
componentes de la microflora bacteriana. Incluso son capaces de producir una
accin fitopatognica ejercida por algunas especies sobre plantas de inters
agrcola.

Es interesante estudiar ms en detalle cmo se lleva a cabo la produccin de


antibiticos, como la estreptomicina, por parte de estas bacterias.

La estreptomicina es un antibitico aminoglucsido producido por Streptomyces


griseus. Este antibitico se transporta de forma activa a travs de la membrana
bacteriana, y una vez en el interior celular se une de forma irreversible a protenas
receptoras especficas de la subunidad 30S de los ribosomas bacterianos. As, interfieren
en el complejo de iniciacin de la traduccin dando lugar a la produccin de protenas
no funcionales. Todo esto genera un transporte acelerado de aminoglucsidos
aumentando la ruptura de las membranas citoplasmticas de las bacterias y por tanto su
muerte (por tanto, es bactericida).

El proceso de produccin industrial del antibitico comienza con un cultivo primario


(de pequeo volumen) donde se deja crecer el microorganismo, siempre con los
nutrientes necesarios y en las condiciones ptimas. Segn ste va creciendo, se va
aumentando el volumen del cultivo, para finalmente llegar al fermentador. Una vez en el
reactor, se le somete a una situacin de estrs (medio cido), para que comience a
producir la estreptomicina.
El antibitico obtenido se purifica. Para ello primero se neutraliza con una solucin
bsica y posteriormente, se filtra para eliminar impurezas. A continuacin, se evapora la
solucin para concentrar el producto. El elemento concentrado se lava y se le somete a
una hidrogenacin cataltica. Todo ello se vuelve a filtrar y se liofiliza (eliminacin del
agua) comprobando que est completamente estril. Por ltimo, el antibitico
esterilizado se encapsula (se hace un ensayo de esterilidad), se etiqueta, empaqueta y se
expide.

6. IMPORTANTES POR LA ABUNDANCIA


1. Streptomycetes: constituyen el 95% de los Actinomicetales. Tienen hifas no
fragmentadas, un micelio areo extenso, esporas o conidias en cadena. Los gneros
representativos son: Streptomyces, Microeliobosporia y Sporichthya.

2. Actinomycetes del tipo Nocardia: constituyen el 1,98% de los Actinomicetales.


Poseen hifas fragmentadas con pequeas estructuras redondeadas. Los gneros ms
representativos son: Pseudonocardia, Nocardioides y Terrabacter.

7. HBITAT Y POBLACIN
Este grupo de microorganismos constituye de un 10 a un 50% de la microbiota del suelo
(los segundos en abundancia, despus de las bacterias) con una densidad de poblacin
de 105 a 108 propgulos/gramo de suelo (siendo un propgulo cualquier parte de un
microorganismo capaz de crecer y reproducirse), pudiendo llegar a
1010propgulos/gramo en compost y en situaciones idneas. Los actinomicetos se suelen
encontrar en el compost y en sedimentos, y estn ms presentes en prados que en
campos cultivados. Visto que son saprofitos y requieren de materia orgnica para su
desarrollo, su poblacin mengua a mayor profundidad de suelo, aunque en menor
medida que otros grupos microbianos, probablemente debido a la resistencia de sus
esporas). As pues, los actinomicetos se pueden reproducir en la paja y los rastrojos
residuales del cultivo, por lo que se recomienda dejarlos en el suelo y no quemarlos (a
menos que estn contaminados, que entonces se recomienda sacarlos del cultivo y
quemarlos).
Los actinomicetos requieren de oxgeno para su crecimiento (son organismos aerobios),
aunque hay ciertas excepciones. As pues, en suelos hmedos no se desarrollan
adecuadamente, al igual que no toleran la sequa (sus esporas s que la toleran, lo que
puede reconstituir la poblacin de actinomicetos despus de una sequa).

Temperaturas bajas (sobre los 5C) producen un crecimiento escaso en la poblacin de


actinomicetos, que prefieren suelos clidos a los fros. Su crecimiento ptimo se sita
entre 28 y 37C, aunque algunos crecen a mayores temperaturas (hasta 65C) en
composteras). Gracias a esta tolerancia a temperaturas elevadas, en suelos semi-
desrticos los actinomicetos se desarrollan satisfactoriamente.

Los actinomicetos soportan bien las condiciones alcalinas, sin embargo, no aguantan las
condiciones cidas a excepcin de algunas especies. En un pH inferior a 5, estos
microorganismos conforman menos de un 1% de la poblacin total microbiana del
suelo. Esta intolerancia al medio cido puede servir en ciertos casos, como es el
patgeno de la patata Streptomyces scabies que puede controlarse acidificando el suelo.

Las esporas resultan ser resistentes a condiciones extremas de temperatura, acidez y


humedad, que les permite germinar cuando se establecen condiciones favorables para su
desarrollo.

Ciclo vital de Streptomyces sp.


8. PODER ANTIBITICO
El conocimiento actual en materia de actinomicetos se debe fundamentalmente a que
son la fuente natural de antibiticos ms conocida (los antibiticos son molculas
orgnicas que tienen propiedades antimicrobianas), aunque cabe destacar que la
mayora de los antibiticos no tienen uso en el ser humano, puesto que resultaran
extremadamente txicos.

Se han identificado ms de 5.000 antibiticos, siendo aislados de los actinomicetos un


75% aproximadamente, y de stos, aproximadamente un 75% proceden del
gnero Streptomyces (como la estreptomicina, cloranfenicol, aureomicina o tetraciclina).
En la siguiente tabla se presentan el nmero aproximada de antibiticos producidos por
distintos grupos microbianos:

Coyne, Microbiologa del suelo, un enfoque exploratorio [Extrado de Crueger y


Crueger (1982)].
Los actinomicetos no producen antibiticos constantemente (leer el apartado de ms
abajo acerca de la resistencia a los propios antibiticos), sino que la sntesis de estos
empieza cuando el crecimiento se ralentiza o cesa. De esta manera, cabe reprimir la
produccin de antibiticos mediante una fuente de carbono fcilmente disponible,
abundante nitrgeno o altos niveles de fsforo, que contribuyen a mantener un
crecimiento constante de los actinomicetos; es decir, que a mayor cantidad de nutrientes
disminuye la produccin de antibiticos. Tambin existe un vnculo entre esporulacin y
produccin de antibiticos.

Actividad antibitica de un actinomiceto sobre Staphylococcus aureus (bacteria).

Algunos actinomicetos producen antibiticos que inhiben las poblaciones de


organismos patgenos y regulan la actividad de estos en las plantas, por lo que se
pueden agregar en suelos colonizados con bacterias o hongos fitopatgenos.

9. RESISTENCIA A LOS ANTIBITICOS


Los actinomicetos se adaptan principalmente de dos maneras distintas a los antibiticos
que ellos mismos producen: mediante la separacin temporal de la produccin de
antibiticos y de su crecimiento, es decir que mientras crecen no producen antibiticos,
y mediante el desarrollo de mecanismos de resistencia (por ejemplo la resistencia puede
formar parte de la biosntesis, de modo que el antibitico no est activo hasta que no sea
excretado; o sencillamente volverse impermeable al antibitico y no absorberlo). Por
poner un ejemplo, los Streptomyces pueden producir actinomicina en concentraciones
de 120 mg/mL aun cuando su crecimiento se detiene a 50 mg/mL.
Y por poner otro ejemplo del uso y abuso indiscriminado de antibiticos en la sociedad
moderna, comentar que tiene una incidencia directa sobre el incremento de
microorganismos resistentes. Los antibiticos estn perdiendo propiedades frente a la
accin de microorganismos patgenos de los seres humanos, un evidente ejemplo del
cul es el microorganismo de la gonorrea, la bacteria Neisseria gonorrhoeae causante de
enfermedades de transmisin sexual, que en un porcentaje considerable (50%) han
desarrollado resistencias al antibitico de la cefalosporina, que es el constituyente
ampliamente usado para tratar la gonorrea.

10. FUNCIONES DE LOS ACTINOMICETOS EN EL SUELO:


Degradan compuestos complejos de carbono presente en la materia orgnica
(celulosa, hemicelulosa, lignina, parafina y, sobretodo, quitina).
Mejoran la acumulacin de materia orgnica.
Retienen nutrientes en su estructura, reduciendo la prdida de estos al subsuelo.
Fsicamente unen partculas de suelo para formar agregados, previniendo la
erosin.
Son fuente importante de alimento para otros organismos de la cadena
alimenticia.
Compiten con organismos patgenos (en gran parte gracias a la produccin de
antibiticos).
Degradan y reducen ciertos tipos de contaminantes, como residuos de pesticidas.
Algunas especies, como es el caso del gnero Frankia, forman asociaciones con
rboles y arbustos participando en la fijacin biolgica del nitrgeno.
Nocardiosis pulmonar Sntomas: Se presenta con sntomas de: fiebre, sensacin general
de enfermedad, sudores fros, nuseas, Mareo, Dolor de cabeza, Convulsiones o crisis
epilpticas, protuberancias o erupciones cutneas.
Nocardia brasiliensis Produce una enfermedad humana llamada actinomicetoma. La
infeccin penetra en los huspedes a travs de la piel, cuando sufren punciones con
espinas, astillas de madera u otros objetos que causan traumas cutneos.
Actinomyces israel (y A. bovis) Bacilos Gram+, adoptan formas filamentosas
ramificadas. En los tejidos dan lugar a la formacin de los llamados "grnulos de
azufre". Producen la activinomicosis, que es una infeccin granulamatosa crnica.
11. APLICACIONES:

EL PAPEL DE LOS ACTINOMICETOS EN LA AGRICULTURA

Los Ac se crecen lentamente en comparacin con las bacterias verdaderas, por


ello no son competidoras, su nmero disminuye al elevar la concentracin de
nutrientes orgnicos, por la presin de competencia biolgica con otros grupos y
cuando los nutrientes estn en baja concentracin al inici de la mineralizacin
de restos vegetales, dominan al limitarse la fuente de carbono y nitrgeno la
competencia disminuye, pues los Ac son hetertrofos, dependen de la
disponibilidad de compuestos orgnicos, de carbono sencillo y luego del restante
complejo; ejemplo los cidos orgnico, azcares simples y ciertos polisacridos
como: el almidn, la inulina, la quitina, los lpidos,
las protenas e hidrocarburos alifticos de cadena larga y los aromticos; los Ac
en cultivo puro mineralizan celulosa una lenta velocidad de la descomposicin,
tambin degradan protenas.
Las especies de Streptomyces hidrolizan la quitina, su adicin al suelo estimula
su proliferacin, las de Micromonospora tambin y otras la celulosa y las
hemicelulosas, las especies de Nocardia oxidan hidrocarburos del tipo de las
parafinas, fenoles, esteroides y pirimidinas como fuente de carbono y energa, lo
que se relaciona con la posibilidad de emplearlos en biorremediacin ambientes
contaminados con estos compuesto, adems existen Ac oligoscarboflicos que
crecen en ambientes o medio de cultivos pobres en carbono orgnico.

ACTINOMICETOS DEL SUELO PRODUCTORES ANTIBITICOS


CONTRA MICROORGANISMOS BLANCO
El orden Actinomycetales se reconoce en la industria farmaceutica porque
sintetizan metabolitos txicos, tres cuartas partes de gneros y especies que
viven en el suelo, los liberan al medio de cultivo inhiben el crecimiento de
bacterias, levaduras y hongos, el porcentaje de Ac que producen antibiticos
depende del tipo de suelo y de la estacin del ao, como se muestra en el cuadro
2.0, existen una amplio nmero que inhibe microorganismos blanco sensibles a
esos antibiticos (patgenas humanas, animales o vegetales), mientras que las
especies de Streptomyces liberan enzimas extracelulares que atacan bacterias
verdaderas, tales enzimas son consideradas claves en
el equilibrio microbiolgico del suelo.

Los Ac en su mayora son mesfolitos crecen a temperatura de entre 25-30C, un


tercio son termofilicos y/o l termfilos facultativos que se reproducen en el
intervalo 55-65C. Los termofilicos son comunes en el suelo, en el estircol, en
la paja, algunos tambin usan la quitina como nica fuente de carbono,
combinado con peptona, sales minerales a pH de 7.5 si se mantienen a elevada
temperatura, como en el abono caliente, la poblacin de Ac termofilicos es
numerosa entre 50-65C se reportan de 1000-100,000/g de suelo seco, los ms
comunes en procesos as son: Thermoactinomyces y Streptomyces.
El anlisis microscpico y microbiolgico del suelo y abono indica que los Ac
son de menor impacto que bacterias y hongos, pero participan en:

Mineralizan algunos polisacridos resistentes del tejido vegetal y animal,


aunque no responden inmediatamente al enriquecimiento carbono orgnico,
no compiten con las bacterias verdaderas ni con los hongos
por carbohidratos simples- pero si por los compuestos resistentes a la
mineralizacin.

Participan en la formacin de humus mediante la oxidacin de restos


vegetales y hojas de la porcin orgnica del suelo, algunos gneros de Ac al
crecer en medio de cultivo sintetizan molculas complejas que son bsicas
en la fraccin de humus en suelo.

Realizan la mineralizacin de abono verde, de paja y estircol a elevada


temperatura donde dominan los gneros
como: Thermoactinomyces, Streptomyces, la superficie de
estos materiales puede ser blanca o gris tipica por la actividad de ese grupo.

Patogenos vegetales: Streptomyces scabies y S. ipomoeae son


fitopatgenos, causan la roa de la papa, y la viruela del camote.

Nocardia asteroides y N. otitidis-caviarum causan infecciones en humanos y


animales.

Existen los que en asocian con rboles fijan N2 en races vegetales


como Frankia para solucionar problemas de reforestacin y degradacin de
suelos, con acciones del tipo de las bacterias promotoras del crecimiento
vegetal y con el uso potencial como inoculantes biolgicos.

LOS ACTINOMICETOS EN LA INDUSTRIA FARMACUTICA


Un rasgo interesante de estos microorganismos es que durante determinadas
etapas de su ciclo de vida producen metabolitos secundarios y otras molculas
bioactivas de utilidad para la industria, tal es el caso de la produccin de algunos
antibiticos producidos por especies del gnero Streptomyces. Estos antibi-
ticos inhiben el crecimiento de bacterias, levaduras y hongos de diversas
categoras taxonmicas. Debido a la importancia econmica y mdica de los
antibiticos producidos por los estreptomicetos, estos microorganismos han sido
objeto de una variedad de estudios, y en la actualidad se contina la bsqueda de
nuevas molculas bioactivas en otros gneros de actinomicetos. Se ha
determinado, por ejemplo, que una sola especie puede producir ms de un
antibitico con estructuras qumicas diferentes. A pesar de contar con muchas
molculas con actividad antimicrobiana, solo a poco ms de cien se les da uso
comercialmente y de estas, 60 son antibiticos producidos por estreptomicetos,
entre los cuales estn la estreptomicina, espectinomicina, neomicina, tetraciclina,
eritromicina y nistatina, entre otros (Prescott y cols., 2004; Madigan y cols.,
2009). Con la prevalencia de cepas patgenas cada vez ms resistentes a
mltiples frmacos, incluso a agentes antimicrobianos de ltima lnea como la
vancomicina (antibitico sintetizado por un actinomiceto del gnero Nocardia),
la bsqueda de nuevas molculas con actividad antimicrobiana es muy relevante.
Los microorganismos que habitan ambientes extremos, nichos ecolgicos
inexplorados, ambientes marinos, aquellos que son endfitos, entre otros, estn
entre las prioridades de la exploracin biotecnolgica. Diversos informes
cientficos en salud pblica muestran que una gran variedad de bacterias
patgenas de humanos como Staphylococcus, Mycobacterium, Streptococcus,
Enterococcus han desarrollado resistencia a frmacos, fenmeno que ha
promovido la bsqueda de ms y mejores antibiticos, especialmente porque
estas bacterias son una clara amenaza a la salud mundial. Adems, los hongos y
levaduras se han convertido en una amenaza, puesto que algunos de ellos
provocan infecciones en pacientes inmunocomprometidos, principalmente
aquellas personas afectadas por VIH, o bien, pacientes con transplante de
rganos que deben consumir frmacos inmunosupresores.

LOS ACTINOMICETOS EN LA SOLUCIN DE PROBLEMAS DE


CONTAMINACIN Y SU EMPLEO COMO FERTILIZANTES
BIOLGICOS PARA LAS PLANTAS
Arthrobacter es un gnero de importancia ambiental debido a que sus especies
son empleadas en la biorremediacin. Las especies de este gnero son resistentes
a la desecacin y a la deficiencia de nutrimentos, por lo que se considera un
gnero de inusitada flexibilidad, adems de su capacidad para degradar
herbicidas, pesticidas y molculas orgnicas de excesiva complejidad.
Rhodococcus es otro gnero ampliamente distribuido en suelos y aguas; algunos
de sus miembros tambin son capaces de degradar diversas molculas como son
varios tipos de hidrocarburos del petrleo, detergentes, benceno, bifeniles
policlorados (PBC), etctera. Algunas especies del gnero Streptomyces son
importantes en la ecologa del suelo, ya que desempean un papel importante en
la mineralizacin de diversos materiales orgnicos e incluso pueden degradar
sustancias resistentes como la pectina, lignina, queratina, ltex y compuestos
aromticos. Un gnero de actinomicetos de importancia en microbiologa
agrcola es Frankia, debido a que se asocia de manera simbitica con varias
especies de plantas superiores proporcionndoles diversos beneficios al capturar
el nitrgeno (N) del aire y fijarlo para el uso de la planta. Las races de plantas
colonizadas por Frankia desarrollan ndulos que fijan N de forma tan eficiente
que un rbol puede crecer sin fertilizacin nitrogenada. Frankia coloniza
diversas plantas y tambin tiene la capacidad de fijar N en vida libre. Algunas de
las especies susceptibles de ser colonizadas por Frankia son utilizadas para la
restauracin de suelos contaminados por compuestos inorgnicos, como metales
pesados o elementos potencialmente txicos. Este gnero de actinomiceto se ha
encontrado colonizando suelos en proceso de formacin y es tolerante a altas
concentraciones de sales y niveles de pH, por lo que es apto para ser empleado
en sitios con problemas de contaminacin (Prescott y cols., 2004; Madigan y
cols., 2009). Otro gnero relevante es Micromonospora, cuyas especies, adems
de ser una fuente de diversos antibiticos, participan en el control biolgico de
enfermedades de plantas por medio de diversos mecanismos, como produccin
de enzimas hidrolticas y activacin en la planta de genes de defensa contra
enfermedades (resistencia sistmica); su actividad como promotores de
crecimiento tambin est documentada. Algunas especies producen
fitohormonas (cido indol actico y cido giberlico) y otras se asocian a la
bacteria simbitica Rhizobium en el interior de peque- as protuberancias en las
races, por lo que Rhizobium y Micromonospora pudieran estar interaccionando
positivamente para la planta en la fijacin de N y, por lo tanto, mejorando su
nutricin (Valds y cols., 2005; Trujillo y cols., 2010).
LOS ACTINOMICETOS COMO AGENTES DE CONTROL BIOLGICO
EN ENFERMEDADES DE PLANTAS
En el rea agrcola es importante contar con estrategias para enfrentar
enfermedades de las plantas causadas por agentes fitopatgenos, como bacterias
y hongos. Una de estas estrategias consiste en el empleo de molculas de origen
microbiano. La segunda estrategia est enfocada en buscar microorganismos
que, adems de antibiosis, puedan antagonizar el crecimienE to de fitopatgenos.
Estas dos estrategias podran serutilizadas solas o en combinacin. Los
microorganismos seleccionados por su actividad antimicrobiana pueden
utilizarse para la elaboracin de formulaciones que se apliquen directamente al
suelo y que puedan multiplicarse en l, siendo lo suficientemente selectivas para
afectar solamente a los patgenos, pero no as a las poblaciones nativas de la
zona. Estas formulaciones a base de microorganismos antagonistas tambin
pueden desarrollarse para ser aplicadas directamente al follaje de los cultivos. En
la actualidad existen en el mercado pocos productos a base de actinomicetos
antagonistas, como el Actinovate, por lo que la bsqueda de cepas con mayor
potencial siempre ser necesaria debido a los cambios que los fitopatgenos
pueden desarrollar de un ciclo de cultivo a otro. Inclusive, en algunos pases se
busca que los microorganismos antagonistas que se apliquen en sus campos sean
aquellos productos que contengan microorganismos nativos de la regin del
cultivo que se pretende proteger. Diversos ensayos se han realizado sobre el
efecto antagnico de actinomicetos, algunos han sido probados con xito in vitro
y otros in planta. Entre los gneros de microorganismos fitopatgenos que los
actinomicetos pueden antagonizar y controlar estn los Fusarium, Phytophthora,
Pythium, Alternaria, Botrytis, Plasmodiophora, Gibberella, Mucor, Fusicoccum,
Ustilaginoidea, Colletotrichum, Aspergillus, Penicillium, Pectobacterium,
Rhizoctonia, Sclerotium, Ralstonia, Clavibacter, Sclerotinia, etctera. Por
ejemplo, en el Centro de Investigacin y Asistencia en Tecnologa y Diseo del
Estado de Jalisco (CIATEJ), en Guadalajara y en Mrida, experimentos de
antagonismo entre cepas de actinomicetos aisladas de suelos agrcolas contra
Fusarium sp y Phytophthora sp, han sido exitosos en la inhibicin in vitro del
crecimiento de algunos de esos fitopatgenos (Figura 2); igualmente se
encontraron resultados positivos contra las bacterias fitopatgenas Dickeya sp y
Pseudomonas sp (Rincn y cols., 2014). Diversas especies de actinomicetos
muestran actividad como promotores de crecimiento vegetal, lo que los hace
candidatos para la elaboracin de biofertilizantes que, adems, protejan a las
plantas contra enfermedades. Algunos representantes del grupo tambin pueden
hacer frente a insectos plaga que afectan a las plantas, siendo importantes los
que presentan elevada actividad quitinoltica

12. TRABAJOS BASADOS EN ACTINOMICETOS


12.1 ) ACTINOMICETOS ANTAGNICOS CONTRA HONGOS
FITOPATGENOS DE IMPORTANCIA AGRCOLA

AUTOR: Miriam Desire Dvila Medina, Gabriel Gallegos Morales, Francisco


Daniel Hernndez Castillo, Yisa Mara Ochoa Fuente1 y Alberto Flores Olivas

El trabajo se realiz durante 2008 en Saltillo, Coahuila con el objetivo de aislar

actinomicetos en diferentes medios de cultivo y evaluar su efecto antagonista in

vitro contra hongos fitopatgenos de importancia econmica. Para el aislamiento

de los actinomicetos se realizaron muestreos de rizsfera de plantas, suelo,

larvas y adultos de hormiga; las muestras se trataron con agua fenolizada y se

sembraron por difusin en medios de cultivo artificial: Agar Dextrosa Papa


(PDA), Agar Casena Almidn (ACA),Agar de Actinomicetos (AA) y Agar

Czapek Dox (ACD). Los aislamientos obtenidos se evaluaron preliminarmente

por confrontacin y observacin. Se obtuvieron 70 aislamientos de

actinomicetos en su mayora de suelo; 25 presentaron efectos antagonistas,

cuatro de ellos APA2, AASH48, AAH53 y APC70 se seleccionaron por su

actividad inhibitoria y permanencia a travs del tiempo. En los bioensayos de

antibiosis in vitro contra hongos fitopatgenos

como Alternaria sp., Rhizoctonia sp., Fusarium sp. Y Colletotrichumsp. En los

medios PDA (Agar de Dextrosa y Papa) y ACD (Agar con citrato deoxicolato),

los efectos antagonistas (% -de inhibicin) fueron diferentes estadsticamente

(p= 0.05). Los mejores resultados de inhibicin se obtuvieron

con Streptomyces spp., APC70 contra Alternaria (57.6%); mientras

que Streptomyces spp., AAH5 3 lo fue para Rhizoctonia,

Fusarium y Colletotrichum en 53.08%, 49.36% y 61.57%, respectivamente. Los

actinomicetos saprofitos mostraron potencial antagnico y actividad inhibitoria

contra hongos fitopatgenos.

Actualmente, diversas investigaciones se han centrado en la bsqueda de nuevos

antimicrobianos, principalmente de origen en actinomicetos, por su prolfica

produccin de antibiticos naturales y metabolitos secundarios (Oskay et al.,

2004; Prashith et al, 2010).

Los productos de actinomicetos incluyen principalmente: antibiticos,

antifngicos, metabolitos, enzimas extracelulares (quitinasas, peroxidasas,

glucanasas), inhibidores enzimticos, neurotransmisores, terpenoides,

pigmentos, anticancergenos y pesticidas entre otros; presentan una alta

actividad metablica y son capaces de degradar la materia orgnica vegetal y


animal, producen siderforos, sustancias promotoras del crecimiento vegetal in

vitro, ayudan a la asimilacin del hierro en la fijacin de nitrgeno, lo cual

contribuye indirectamente a la promocin de crecimiento vegetal. El orden de

los Actinomycetales constituye 63 gneros, constituyendo aproximadamente de

20-60% de la poblacin microbiana del suelo (Crawford et al., 1993; Tokala et

al, 2002; Ezziyyani et al, 2004; Franco-Correa et al, 2010).

12.1.1 MATERIALES Y MTODOS

Aislamiento de actinomicetos: Se realiz un muestreo de suelo al azar

de diferentes hortalizas, frutales y plantas silvestres (Cuadro 1)

Recolectando 30 g de muestra de la rizsfera, a una profundidad de 10 a

20 cm; tambin se recolectaron muestras de suelo de hormigueros, as

como de adultos y larvas de hormigas, estas ltimas como una fuente de

actinomicetos antagnicos.

Las muestras de suelo se trataron con agua fenolizada por 30 min y

posteriormente se difundi 1 mL en placas de Petri con diferentes

medios de aislamiento como Agar Dextrosa Papa (PDA), Agar Casena

Almidn (ACA), Agar de Actinomicetos (AA) y Agar Czapek Dox

(ACD). En el caso de hormigas adultos y larvas se colocaron


directamente sobre los medios de cultivo. Las cajas se incubaron a 28

2 C durante 5 a 7 d. Se aislaron y purificaron actinomicetos en PDA

(Agar de Dextrosa y Papa) de acuerdo a sus caractersticas

morfolgicas macroscpicas, colonias polvosas, secas que presenten

halos de inhibicin y en cuya observacin microscpica mostraban

filamentos caractersticos (Hayakawa et al, 2004).

Hongos fitopatgenos: los hongos fitopatgenos seleccionados por su

importancia agrcola para los diferentes bioensayos de antibiosis fueron

Alternaria sp., Rhizoctonia sp., Fusarium sp., y Colletotrichum sp.,

obtenidos de la coleccin de hongos fitopatgenos del Laboratorio de

Parasitologa Agrcola de la Universidad Autnoma Antonio Narro; los

cuales fueron resembrados en PDA y conservados a 5 C.

Pruebas preliminares de antibiosis in vitro: se realizaron pruebas

preliminares de antibiosis de los actinomicetos contra dos hongos

fitopatgenos seleccionados al azar, Alternaria sp.,

y Colletotrichum sp., con el fin de elegir aquellos que mostraran

actividad antagnica. Para ello, una azada de cada actinomiceto se

sembr en los cuatro puntos cardinales de una placa de Petri con PDA,

colocando al centro un explante de 4mm de dimetro de crecimiento del

hongo fitopatgeno. Las placas fueron incubadas a 28 C durante 5-10

d. Las pruebas preliminares fueron cualitativas por observacin y

duplicado, descartando los actinomicetos sin presentar halos de

inhibicin.

Bioensayos de antibiosis: con base en los resultados preliminares se

seleccionaron cuatro actinomicetos que presentaron actividad


antagonista y permanencia antibitica a travs del tiempo;APA2

(aislado de aire), AASH48 (aislado de suelo de hormiguero),AAH5 3

(aislado de adulto de hormiga) y APC70 (aislado de caa de azcar).

stos aislamientos se evaluaron por confrontacin

contra Alternaria sp., Rhizoctonia sp., Fusarium sp.,

y Colletotrichumsp. en PDA y ACD. Se sembr una azada de cada

actinomiceto en los cuatro puntos cardinales de cada placa con cada

medio de cultivo, colocando al centro un explante de 4mm de dimetro

del hongo fitopatgeno para su ensayo de inhibicin. Las placas se

incubaron a 28 C durante 5-10 d. Cada actinomiceto se tom como un

tratamiento con seis repeticiones (placas de Petri), con un testigo

negativo para cada hongo. La antibiosis se cuantific midiendo el

dimetro del crecimiento fngico con un Vernier digital (PlasticCaliper

Modelo 700-130B) en los dos puntos cardinales referentes a la

inhibicin, reportndose el promedio por placa como una repeticin.

12.1.2. CARACTERIZACIN MORFOLGICA Y BIOQUMICA DE

ACTINOMICETOS:

Los aislamientos seleccionados se sembraron por triplicado en PDA y se

incubaron a 28 C por 8-15 d. Se identificaron teniendo en cuenta

caractersticas macroscpicas de la colonia, coloracin del micelio areo y

sustrato, superficie, forma, tamao, as como la produccin de pigmentos. Para

la identificacin microscpica de gnero segn Franco-Correa et al. (2009), se

colocaron cubre-objetos estriles con una inclinacin de 45 con respecto a la

superficie del agar. Las placas se incubaron a 28 C durante 8-15 d, al cabo de

los cuales se tomaron las laminillas y se colocaron en un porta objetos con


cristal violeta para la observacin al microscopio compuesto. Se tuvieron en

cuenta caractersticas observadas por tincin de Gram, como micelio areo y

vegetativo, fragmentacin del micelio en diferentes formas, agrupacin de

esporas, presencia de espirales, esporas terminales, en pares o grupos en el

micelio y se compararon con las descritas en el Manual de Determinacin

Bacteriolgica de Bergey (Bergey etal., 2000).

Para la caracterizacin bioqumica del metabolismo de los actinomicetos, se

realizaron pruebas de asimilacin y utilizacin de diversos tipos de sustratos

(Cuadro 4)

Con el fin de determinar el gnero de los actinomicetos utilizando la

metodologa convencional y comparando con las caractersticas descritas para

este gnero (Bergey et al, 2000; Koneman et al, 2008).

Anlisis de datos: se utiliz un diseo estadstico completamente al azar con

arreglo bifactorial y seis repeticiones, con un nivel de significancia de 95%. La

unidad experimental consisti en una placa de Petri y la variable fue el


dimetro de crecimiento del hongo, el factor A fue el aislamiento de

actinomiceto en diferente medio de cultivo y el factor B fueron los hongos

fitopatgenos. Para estratificar los resultados se realiz un anlisis de varianza

(ANVA) y una prueba de separacin de medias segn Tukey (p= 0.05).

12.1.3 RESULTADOS Y DISCUSIN

Aislamiento de actinomicetos: se recuperaron 150 aislamientos con

caractersticas morfolgicas semejantes a actinomicetos que presentaron

inhibicin contra hongos. De stas 70 se confirmaron como actinomicetos de

acuerdo a su morfologa microscpica (Figura 1). La mayora de los

actinomicetos fueron obtenidos en su mayora de suelo de plantas y

hormigueros, recuperados en los medios PDA (49%), seguido de ACD (26%),

ACA (14%), as como medio comercial para aislamiento de actinomicetos

(11%) (Cuadro 2).


El mtodo utilizado para el pre tratamiento de muestras, elimina en gran

cantidad bacterias y hongos contaminantes; sin embargo, sobrevivieron

especies de Bacillus filamentosos semejantes a los actinomicetos resistentes

al fenol, tal como lo reportan Hayakawa et al. (2004). Se observ que el

mejor medio de cultivo para el aislamiento de actinomicetos de suelo fue el

PDA seguido del ACD, debido a las diferencias nutricionales entre los medios

de cultivo.

Pruebas preliminares de antibiosis in vitro: de los 70 actinomicetos

aislados, 25 fueron antagonistas

para Alternaria sp., Rhizoctonia sp., Fusarium sp., y Colletotrichum sp., y

slo los actinomicetos APA2, AASH48, AAH53 y APC70 mantuvieron

actividad antagnica hasta por 15 d del ensayo, por observacin cualitativa en

placa.

Bioensayos de antibiosis: los cuatro actinomicetos seleccionados

presentaron altos niveles de inhibicin contra los hongos fitopatgenos

evaluados (Cuadro 3)
Siendo los mejores APC70 para Alternaria sp., con 57.6% de inhibicin en

ACD; AAH53 para Rhizoctonia sp. Con 53.08% en ACD; AAH53

para Fusarium sp., con 49.36% en PDA y AAH53 para Colletotrichum sp.,

61.57% en ACD (Figura 2).

Colletotrichum sp., fue el fitopatgeno que present los niveles ms altos de

inhibicin, siendo el aislamiento AAH53 el ms eficiente para el control de

ste hongo; sin embargo, la mayora de los actinomicetos mostraron niveles

de antagonismo para este Deuteromiceto (= 50%). Gomes et al. (2000) en

estudios previos reafirman que Streptomyces sp. Presenta actividad

antagonista contra Fusarium sp., F. solani, F. oxysporum, F. graminearum,

Aspergillus parasiticus y Colletotrichum gloeosporioides. Al respecto

Iznaga et al. (2003), reportaron cepas de actinomicetos aisladas de suelo, que


producen componentes con actividad antifngica, resultados similares al de

este estudio. Whipps (2001) encontr que el medio de crecimiento artificial

empleado genera efectos significativos en la morfologa y en el desarrollo de

los patgenos; asimismo, en la produccin de antibiticos voltiles y no

voltiles por los agentes antagonista sin respuesta a los agentes patgenos.

Ezziyyani et al. (2004) demostraron que el grado de inhibicin vara por

factores como: la temperatura, el pH y el medio de cultivo empleado,

demostrando que el medio PDA intensifica la inhibicin. Esto puede explicar

el motivo por el cual no concuerdan los resultados de antagonismo obtenidos

contra Fusarium sp., comparado con otros estudios en donde se presentaron

altos porcentajes de inhibicin contra este hongo. Los fenmenos de

antagonismo en hongos pueden ser explicados por diversos mecanismos

incluyendo antibiosis y parasitismo, la inhibicin en el crecimiento diametral

del hongo y puede ser atribuido a la presencia de algunas sustancias

inhibitorias excretadas por los actinomicetos.

Identificacin morfolgica y bioqumica: las colonias de las cepas

seleccionadas presentaron bordes irregulares, consistencia dura y compacta,

con diferentes pigmentos como gris, caf y amarillo principalmente. Se

observ una apariencia pulverulenta como consecuencia de la formacin de

largas cadenas de esporas originada por la subdivisin de la hifa area

(Sylvia, 2005).

Respecto a la tincin de Gram, se obtuvieron bacterias filamentosas Gram

positivas, con micelio vegetativo areo, tortuoso no fragmentado formando

cadenas de esporas en espiral (adornos miceliales) y cadenas rectas largas de

esporas (Figura 1). Las caractersticas macroscpicas y microscpicas fueron


comparadas con las descritas por Bergey et al. (2000), encontrndose que los

actinomicetos seleccionados mostraron morfolgica y microscpicamente

caractersticas especficas del gnero Streptomyces sp., as como el

metabolismo bioqumico idntico al gnero (Cuadro 4) (Koneman et

al., 2008). (Bergey et al, 2000; Koneman et al, 2008).

A) antagonismo del aislamiento APA2 contra Alternaria sp.en ACD;

B) antagonismo del aislamiento AASH48 contra Alternaria sp., en PDA;

C) antagonismo del aislamiento AAH53 contra Rhizoctonia sp., en PDA;

D) antagonismo del aislamiento AAH53 contra Alternaria sp., en ACD;

E) antagonismo del aislamiento AASH48 contra Colletotrichumsp. En ACD;

y F) antagonismo del aislamiento AAH53 contra Fusarium sp., en PDA.

12.2) DETERMINACIN DE LA CAPACIDAD BIOFERTILIZANTE DE


ACTINOMICETOSEN PRESENCIA DE METALES PESADOS
AUTOR: SARA LIZ PACHECO HUERTA

12.2.1 PROBLEMTICA:
Incorporacin de metales pesados nocivos en los ecosistemas, particularmente en el rea

agrcola, que ocasionan la infertilidad del suelo y la inhibicin de la germinacin, crecimiento y

desarrollo de los cultivos. Cuando los metales pesados estn en los suelos en concentraciones

que rebasan los lmites permisibles afectan los procesos biolgicos de las plantas debido a que

estos poseen gran capacidad de unirse a las molculas orgnicas alterando protenas,

sustituyendo a otros elementos esenciales en su metabolismo estndar y finalmente produciendo

estrs oxidativo.
12.2.2 RESULTADO:
12.2.2.1 CARACTERIZACION MACROSCOPICA
La caracterizacin macroscpica de las 24 cepas se evalu a los 14 das en medios Agar

Glicerol Extracto de Levadura (XGAL), Agar Nutritivo (AN) y Medio Agar Almidn de

Sales Inorgnicas (AAI), hasta los 7 das algunas cepas todava no haban presentado un

desarrollo completo. Algunas cepas de actinomicetos presentaron un aspecto

pulverulento, mientras que otras fueron costrosas. Los actinomicetos tuvieron un

crecimiento lento y por tal requirieron 4 das para empezar a presentar estas

caractersticas, antes de ese tiempo eran ligeramente hmedas y brillosas. La mayora de

las cepas fueron capaces de esporular en los tres medios de cultivo, produciendo un

micelio areo pulverulento, mientras que el porcentaje fue muy bajo para las cepas que

presentaron un aspecto costrosa. Todas las colonias de las cepas presentaron una

consistencia firme y una adherencia fuerte al sustrato.

El medio XGAL y AAI fueron empleados debido a que permite una buena esporulacin,

facilitando la caracterizacin morfologa exacta de los 56 actinomicetos. Se incubaron a


28C de 7 a 14 das en microaerofilia. Se observaron las caractersticas macroscpicas

de cada una de las cepas crecidas en un estereoscopio. Se tuvo en cuenta la produccin

de pigmentos difusibles en los medios, el aspecto de la colonia y el color de micelio

areo (superficie) y de micelio del sustrato (anverso). Los resultados fueron comparados

con las establecidas en el Manual de Determinacin Bacteriolgico de Bergey y el

Manual de Mtodos para Caracterizacin de Especies de Streptomyces.

12.2.2.2 CARACTERIZACION MICROSCOPICA


Esta prueba permiti identificar las caractersticas morfolgicas a nivel

microscpico de las cepas de actinomicetos de acuerdo Manual de Determinacin

Bacteriolgico de Bergey y en el Manual de Mtodos para Caracterizacin de

Especies de Streptomyces. Todas fueron identificadas como bacterias Gram

positivas y presentaron estructuras miceliales con hifas ampliamente ramificadas no

fragmentadas con un gran nmero de bacterias circundantes en forma de bacilos

ovalados en los tres medio de cultivo.

12.2.2.3 COLORACION DE GRAM


La caracterizacin microscpica de las cepas de actinomicetos se realiz mediante

la coloracin Gram para determinar a qu clase de Gram corresponde y si estos

actinomicetos presentan una forma filamentosa, esporulada o filamentosa

fragmentada en bacilos, cocos y cocobacilos. Se observ con un aumento de 100X.

Los resultados fueron comparados con las establecidas en el Manual de

Determinacin Bacteriolgica de Bergeys y el Manual de Mtodos para

Caracterizacin de Especies de Streptomyces.

12.2.2.4 RESISTENCIA A LOS METALES PESADOS:


Todas las cepas de los dos gneros presentaron un crecimiento normal a 10 ppm de

los 6 metales trabajados, sin embargo a medida que las concentraciones de los

metales aumentaban la proporcin de cepas disminua, es decir, a mayor

concentracin de metal, el crecimiento de las cepas de ambos gneros se hizo ms

dbil. Con respecto a cada metal, se observ que la mayora de las cepas crecieron

de manera normal hasta 200 ppm de plomo, debido a esto se prob a

concentraciones ms elevadas, 400 y 800 ppm, demostrando crecimiento algunas de

las cepas, es decir, su capacidad de resistencia ante este metal fue alta. Por el

contrario, el cadmio limito el crecimiento de algunas cepas, ya que a partir de 50


ppm la cantidad de cepas tendi a decrecer, indicando su susceptibilidad a este

metal.

12.2.3 DISCUSIN:

Los actinomicetos son bacterias que constituyen un conjunto de microrganismos

que se encuentran distribuidos abundantemente en una variedad de ecosistemas

naturales, representando una pieza clave para la descomposicin de la materia

orgnica. En el presente estudio se emplearon 24 cepas de actinomicetos, 6 de los

cuales figuran en trabajos previos. Todas las cepas se sometieron a una variedad de

pruebas para determinar sus caractersticas e identificacin y luego pasar al estudio

de inters, la biofertilizacin. Las pruebas involucradas en la caracterizacin micro

y macroscpica, bioqumica y molecular representan herramientas de suma

importancia para el anlisis morfolgico de los actinomicetos. La caracterizacin

macroscpica de las cepas analizadas mostr morfologas diversas en aspecto y

colores desarrollados en medios de cultivo Agar Nutritivo (AN), Glicerol Extracto

de Levadura (XGAL) y Agar Almidn de Sales Inorgnicas (AAI). Esta diversidad

morfolgica puede atribuirse a las condiciones selectivas presentes en el medio de

cultivo. Wendisch & Kutzner (1986) indicaron que la coloracin del micelio areo

est fuertemente influenciado por la composicin del medio a causa de la difusin

dentro de las hifas areas del pigmento producido por el micelio de sustrato, el cual

permite la modificacin de su coloracin verdadera. Por otro lado, se ha indicado

que 127 estos microorganismos no son especficos para una sola fuente de carbono

ni de nitrgeno, pero que cada nutriente tiene un efecto variable sobre la

esporulacin, el cual puede estimularse por el uso de medios de cultivos orgnicos

que contengan extracto de levadura, extracto de avena, almidn, entre otros y la

desecacin estimula la formacin del micelio areo y posterior esporulacin.


Asimismo Magarvey et al. (2004) y Kalakoutskii et al. (1976) mencionan que un

compuesto orgnico como el extracto de carne podra retardar la formacin del

micelio areo y la esporulacin en algunos actinomicetos por los efectos

inhibitorios de las poliaminas y protenas presentes en el extracto de carne. En

estudios realizados por Kontro et al. (2007) se determin que el extracto de

levadura, la glucosa, triptona y el almidn casena son compuestos muy eficaces

para inducir la esporulacin. En los resultados, tambin se observ que algunas

cepas presentaron bordes con anillos concntricos, lo que indica que es una

respuesta quimiotrfica inducida por el gradiente de nutrientes en el medio,

caracterstica tambin observada por Magarvey et al (2004) en miembros de la

familia Micromonosporaceae.

Las caractersticas morfolgicas a nivel microscpico permitieron identificar las

estructuras de estas cepas de actinomicetos y completar las caractersticas culturales

para su identificacin. Considerando las caractersticas micro y macroscpicas

obtenidas y comparadas con las reportadas en el Manual de Determinacin

Bacteriolgico de Bergey y el Manual de Mtodos para Caracterizacin de Especies

de Streptomyces, se determin que las cepas presentaron una similitud con el

gnero Streptomyces.

Los actinomicetos han sido caracterizados e identificados mediante tcnicas

tradicionales como los ensayos morfolgicos y fisiolgicos, pero estos no han sido

suficientes para lograr una completa y definida clasificacin e identificacin, por tal

se requiere de tcnicas ms avanzadas y mejoradas para lograr este propsito. Ente

ellas se encuentran la microscopa de luz y el anlisis a nivel molecular, que son

tcnicas sofisticadas que permiten un precisa caracterizacin e identificacin de

estos microorganismos, logrando determinar el gnero y la especie a la cual


pertenecen. Especialmente la tcnica molecular permite analizar la presencia en su

material gentico del contenido de guanina y citosina, adems, actualmente

constituyen un aporte esencial para la clasificacin bacteriana.

A partir de estas pruebas de resistencia de las 24 cepas de los gneros Streptomyces

y Actinomadura a metales pesados se seleccionaron las cepas con mejor tolerancia a

estos, lo que significa alta proporcin de cepas sobrevivientes. Estas cepas fueron

Streptomyces heilongjiangensis (C2), Streptomyces variabilis (AB5), Streptomyces

sp. (E1), Streptomyces sp. (K2) y Streptomyces variabilis (X) trabajadas a

diferentes concentraciones de Cu, Zn, Fe, Cd, Pb y Hg a 10, 50, 100, 200 ppm.

Luego con estas cepas seleccionadas se procedi a las pruebas de germinacin y

crecimiento vegetal de semillas.

De los resultados obtenidos, se dedujo que las semillas de los dos tipos de plantas

tenan un potencial de germinacin normal, debido a que el rendimiento fue del

100%, es decir, que todas las semillas haban dejado el estado de latencia,

manifestando un desarrollo normal de la raz. El proceso de la germinacin inicia

con un brote por parte del embrin, el cual es llamado radcula, convirtindose

posteriormente en la raz primaria. Despus de emerger la radcula, el siguiente

rgano en aparecer en el hipoctilo y a partir de la expansin y desarrollo de este se

forma el tallo (298). Estos resultados permitieron confiar en la metodologa

aplicada para continuar con el proceso de estudio

Los actinomicetos, tambin han demostrado su capacidad generadora de

fitohormonas (auxinas, giberelinas y citoquinas) que favorecen la germinacin de

semillas, el engrosamiento, la densidad y longitud de la raz, los que le confieren

una mayor absorcin de agua y nutrientes


Respecto a la fijacin de nitrgeno, los actinomicetos son microorganismos

importantes en la fijacin de nitrgeno atmosfrico para las plantas. Este proceso es

bsicamente enzimtico que consiste en transformar el nitrgeno del aire en

amoniaco y amonio mediante la enzima nitrogenasa, las cuales son integradas

posteriormente a las protenas y cido nucleicos de las plantas.

Los actinomicetos promueven el desarrollo vegetal en tres formas:

Por fertilizacin directa,


Por inhibicin del efecto perjudicial del metal
Por la accin contrarestante de la enzima ACC desaminasa.

En el caso de fertilizacin directa, los actinomicetos, catalogadas como PGPR,

cumplen diversas actividades biofisicoquimicas beneficiosas para las plantas que ya

han sido descritas en detalle anteriormente, los cuales son la produccin de

siderforos, la produccin de fitohormonas como el AIA, la produccin de

metabolitos antifngicos, produccin de enzimas extracelulares, la fijacin de

nitrgeno y la solubilizacin de fosfato. Por otro lado, la inhibicin del efecto

perjudicial del metal, sucede por la accin de estas bacterias de adherir iones

metlicos en su pared celular, acumular metales intracelularmente por medio de un

sistema de transporte, la produccin de agentes quelantes, y la biotransformacin.

Por ltimo, actinomiceto produce la enzima ACC desaminasa, que contrarresta las

concentraciones de etileno, el que es una manifestacin de la planta en respuesta a

la presencia de metales pesados que conlleva la reduccin del crecimiento de la raz

hasta causar a su muerte. Esta enzima acta desaminando ACC, el cual es el

precursor del etileno, y lo convierte en 2-oxobutanoato y NH3, incrementando la

disponibilidad de este ltimo en las rizosfera.


A partir de los resultados obtenidos se determin la capacidad biofertilizante que

ejercen los actinomicetos en las plantas cuando se encuentran frente a factores

adversos (presencia de metales pesados) ejerciendo un efecto protector a la planta

por la disminucin de la toxicidad de estos metales, permitiendo mejorar la

fertilidad de los suelos y el rendimiento en la germinacin y crecimiento vegetal.

Este estudio resulta siendo as un aporte en el tema remediacin de suelos

contaminados y propiciar el desarrollo de especies vegetales.

12.3) UTILIZACIN DE LOS ACTINOMICETOS EN PROCESOS DE


BIOFERTILIZACIN

AUTOR: Marcela Franco-Correa

El mal uso agrcola de los suelos, que desafortunadamente ocurre en diferentes

zonas cultivables, ha ido intensificando los problemas de fertilidad en los mismos.

Particularmente, el uso intensivo de los fertilizantes y productos fitosanitarios

qumicos ha conllevado a elevar los costos de produccin de muchos alimentos y

otros derivados de la agricultura hacindolos poco competitivos en el mercado. Los

manejos agrcolas ms sostenibles preconizan la disminucin de agroqumicos,

como alternativa al uso de estos compuestos, estrategias que cada da cobran ms

inters. En relacin con los manejos sostenibles en agricultura, la posibilidad de

usar tcnicas basadas en el manejo de microorganismos que usualmente viven

asociados a las plantas, ocurre en virtud de las acciones positivas que se sabe

realizan. En efecto, determinados microorganismos que se desarrollan en

asociacin con las races de las plantas, en la llamada rizosfera, estn involucrados

en la promocin de crecimiento vegetal mediante un amplio rango de actividades.

Estas acciones incluyen la estimulacin de los ciclos biogeoqumicos de los


nutrientes, mejora de la salud de la planta y la calidad estructural del suelo, factores

claves de la fertilidad del mismo. Como consecuencia de lo anterior se hace

necesario entender los diferentes factores que regulan la actividad microbiana

relacionada con el mantenimiento de la fertilidad del suelo y la nutricin vegetal. Es

as que muchas investigaciones han intentado enfocarse en la bsqueda de

microorganismos con habilidad para mejorar el enraizamiento, disolver el fsforo

mineral no asimilable por la planta, fijar nitrgeno de la atmsfera, producir

siderforos, interactuar con otros microorganismos, entre otras actividades. En este

contexto, es de resear los pocos estudios publicados sobre los actinomicetos,

bacterias conocidas por desarrollar diversas actividades en el ecosistema, tales

como el mejoramiento de la estructura del suelo y produccin de compuestos

bioactivos con actividad antagonista contra microorganismos patgenos, siendo los

principales productores de antibiticos. Particularmente, se han descrito actividades

que pueden catalogar a los actinomicetos como rizobacterias promotoras del

crecimiento vegetal: PGPR (del ingls Plant Growth Promoting Rhizobacteria). Es

as que cabe resaltar como la lnea de investigacin titulada: Microorganismos con

Potencial Agroindustrial, ha sido pionera en el avance de este tema (Franco-Correa

1999; Franco-Correa 2001; Orjuela et al. 2003; Martnez et al. 2003; Mrquez et al.

2003; Franco-Correa 2008). Dado que en investigaciones de ecologa microbiana

en la rizosfera es importante considerar la interaccin entre los diferentes

microorganismos, especialmente entre aquellos que benefician a las plantas y

pueden mejorar la productividad agrcola, se debe incluir a los hongos formadores

de micorrizas arbusculares. La mayora de las especies de plantas silvestres y

cultivadas forman micorrizas, siendo las llamadas micorrizas arbusculares (MA) las

ms comunes y, concretamente, las que forman las plantas de inters agronmico,


entre ellas cereales, leguminosas, hortcolas y frutales. Debido a los efectos de las

MA, enfocados hacia la biofertilizacin, fitoestimulacin y bioproteccin de los

cultivos, se acepta que el manejo apropiado de esta simbiosis puede permitir una

reduccin significativa de fertilizantes y fungicidas qumicos, aspectos claves en

una produccin sostenible en agricultura, con los consiguientes beneficios

ecolgicos y econmicos. Teniendo en cuenta los antecedentes citados se han

realizado dentro del grupo de Biotecnologa Ambiental e Industrial, una gran

cantidad de investigaciones para incrementar los conocimientos sobre

actinomicetos, bacterias comunes en el suelo y que ayudan a mantener el equilibrio

ecolgico en zonas con una alta explotacin agrcola. La finalidad ha sido estudiar

la posibilidad su posible utilizacin como biofertilizante, de ah el inters de

caracterizar estas bacterias como PGPR dilucidando su comportamiento en cuanto a

sus interacciones con las MA para llegar a concluir la presencia de relaciones

sinrgicas benficas entre estos dos grupos microbiolgicos (Franco-Correa 2008).

Para poder reunir varios aspectos relacionados con la promocin de crecimiento e

interaccin con hongos MA se han trabajado algunas plantas como trbol, frijol y

clavel, para luego continuar en un futuro, las pruebas en cultivos de alto inters

agrcola, particularmente en Colombia. El estudio de la diversidad gentica en

microorganismos como los actinomicetos tiene gran importancia en la

sostenibilidad de los suelos colombianos, para poder en un futuro cercano

presentarlos como un recurso clave a nivel de biotecnologa agrcola, y as mismo,

poder determinar los diferentes patrones que presentan estos microorganismos y su

interaccin con los hongos MA y las plantas que permitan utilizarlos para el

seguimiento de los efectos del cambio ambiental global. A inicios del siglo XX,

Hiltner introdujo el trmino rizosfera para describir la zona del suelo afectada por el
desarrollo de las races, las cuales inducen la proliferacin de los microorganismos.

Las actividades metablicas de tales poblaciones estimuladas, tanto desde el punto

de vista cualitativo como cuantitativo, en la rizosfera son de vital importancia para

el desarrollo de las plantas (Azcn-Aguilar et al. 2002). El incremento de la

actividad microbiana en la rizosfera, es ejercido por el suministro de compuestos

orgnicos (solubles o insolubles) que aportan los exudados radicales y otros

materiales, en general, residuos vegetales o microbianos, recibe el nombre de efecto

rizosfrico. El trmino rizobacteria refiere a la capacidad de dichos

microorganismos para colonizar preferencialmente las interfases suelo-raz, donde

mantienen poblaciones de individuos a un nivel que permite su efectividad

(Kloepper et al. 1991; Barea et al. 2005). Los hongos micorrizgenos y las bacterias

fijadoras de N2 son los componentes ms destacados entre los simbiontes

mutualistas. Los hongos de la micorriza, una vez que colonizan de forma biotrfica

la raz, desarrollan un micelio externo que la conecta con los microhbitats del

suelo tanto rizosfrico como, fundamentalmente, el no-rizosfrico, lo que les

permite desarrollar actividades tales como el ciclado de nutrientes (P y N

fundamentalmente), proteccin frente a estreses biticos y abiticos, conservacin

del suelo (formacin de agregados), establecimiento de las plntulas, reguladores de

la sucesin vegetal, entre otros. Las bacterias simbiticas fijadoras de N2

(Rhizobium, Frankia y cianobacterias) efectan su relevante funcin en la rizosfera

de plantas de inters tanto en agrosistemas como en ecosistemas naturales (Barea y

Olivares 1998). Los actinomicetos representan un grupo ubicuo de

microorganismos ampliamente distribuido en ecosistemas naturales y tienen gran

importancia en la participacin de la degradacin de materia orgnica, adems de

ciertas propiedades fisiolgicas que los hacen particulares (Ghanem et al. 2000). En
un principio los actinomicetos se incluyeron entre los hongos porque su morfologa

y desarrollo presentaban gran similitud, dotados de un micelio verdadero; debido a

esto se les denomin hongos radiados. Sin embargo, hoy en da, y dado su

carcter procaritico, se sustenta muy bien su clasificacin como bacterias

(Koneman 2001; Prescott 2002). Estos microorganismos resultan ser abundantes en

suelos, tanto o ms que las mixobacterias (Ben-Omar et al. 1997), sin embargo,

tambin se encuentran en ambientes acuticos, dulces y marinos (Leiva et al. 2004).

Dentro de sus caractersticas particulares presentan un olor tpico a suelo hmedo

por la produccin de un metabolito llamado geosmina, adicionalmente presentan

una actividad metablica alta, producen terpenoides, pigmentos y enzimas

extracelulares con las que son capaces de degradar la materia orgnica de origen

vegetal y animal (Ezziyyani et al. 2004). Como la gran mayora de bacterias que

son abundantes en suelo, presentan un importante papel ecolgico en el mismo

(Ben-Omar et al. 1997). En el suelo se encuentran en casi todos los tipos y bajo

condiciones extremas disminuyen levemente la concentracin de la poblacin. Su

nmero vara en gran proporcin segn el caso, pero es comn encontrarlos en

suelos frtiles con concentraciones de 106 UFCg1 de suelo seco. Por lo general se

aslan cepas de actinomicetos en la superficie del suelo y en profundidades entre 2 y

15 cm, ms all de esta profundidad disminuye la cantidad de stos. El tamao de la

comunidad depende del tipo del suelo, particularmente de algunas de las

caractersticas fsicas, del contenido de materia orgnica y del pH del medio

ambiente (Tate 2000). Los principales gneros que se aslan a partir de suelos son

Nocardia, Streptomyces y Micromonospora, que pueden estar presentes como

conidias o como hifas vegetativas (Martin 1981). Sin embargo, los mtodos de

aislamiento convencionales muestran que el 95% de los actinomicetos aislados a


partir de suelo pertenecen al gnero Streptomyces (Lacey 1973). El uso de tcnicas

moleculares para la deteccin de estas bacterias en diferentes ambientes ha

mostrado la presencia de organismos de la clase Actinobacteria que no han podido

ser aislados por tcnicas tradicionales de cultivo. Ciertos de estos organismos no

han sido identificados especficamente, y la posicin filogentica de algunos

subgrupos muestra que su divergencia corresponde con la de los gneros

tradicionales de actinomicetos, indicando una estructura rica en organismos de esta

clase y no cultivable en suelos (Rheims et al. 1999). Algunos gneros han sido

reportados como fijadores de nitrgeno atmosfrico, como Frankia y algunas cepas

pertenecientes a las familias Thermomonosporaceae y Micromonosporaceae

(Valds et al. 2005; Franco-Correa 2008). Los actinomicetos tambin han sido

descritos como agentes de biocontrol por la capacidad de producir enzimas

biodegradativas como quitinasas, glucanasas, peroxidasas y otras, involucradas en

el papel del micoparasitismo que llevan a cabo estos microorganismos (Franco-

Correa 1999; Tokala et al. 2002; Mrquez et al. 2003). El gnero Streptomyces ha

sido descrito como colonizador de la rizosfera, capaz de ejercer biocontrol sobre

hongos fitopatgenos, producir siderforos, sustancias promotoras del crecimiento

vegetal in vitro, promover la nodulacin y ayudar a los bacteriodes de Rhizobium a

la asimilacin del hierro en la fijacin de nitrgeno en leguminosas, lo cual

contribuye indirectamente a la promocin de crecimiento vegetal (Tokala et al.

2002). El concepto de mycorrhiza helper bacteria (MHB) fue introducido en un

Tansley Review: Helper Bacteria: una nueva dimensin de la simbiosis micorrcica

(Garbaye 1994), que ha conllevado a nuevas investigaciones en el sistema modelo

planta-hongo, en cuanto al significado de estas bacterias que promocionan la

formacin de las micorrizas y ocasionan muchos efectos fisiolgicos de la


interaccin mutualista. El concepto de MHB es genrico, este depende del tipo de

simbiosis micorrcica pero no de la posicin taxonmica de la bacteria.

En relacin con las MA, han sido descritos muchos ejemplos (Abdel-Fattal y

Mohamedin 2000; Barea et al. 2005; Artusson et al. 2006). Ciertos actinomicetos

(Rhodococcus, Streptomyces y Arthrobacter) han sido identificados como bacterias

que se asocian al micelio de hongos ectomicorrcicos (Burke et al. 2006), y solo hay

una referencia de Streptomyces coelicolor asociado a Glomus intraradices en

cultivos de sorgo (Abdel-Fatah y Mohamedin 2000). Aunque hay numerosos

estudios referentes a las interacciones de los hongos MA y rizobacterias,

asociaciones entre MA y actinomicetos se conocen escasamente, por lo que se

requieren investigaciones que permitan la confirmacin experimental adicional

sobre actividades y mecanismos relacionados.

Las investigaciones en micorrizas deben por lo tanto esforzarse hacia una

comprensin mejorada de los mecanismos funcionales involucradas en las

interacciones en la micorrizosfera, para poder desarrollar la biotecnologa ad hoc

que permita aplicar las combinaciones optimizadas de microorganismos como

inoculadores eficaces dentro de sistemas sostenibles de la produccin vegetal

(Andrade et al. 1997; Artursson et al. 2006). Los resultados encontrados en la

investigacin realizada dentro del grupo, apoyan, por tanto, interacciones tanto

entre planta-microorganismo, ya sean actinomicetos u hongos MA, (rizosfera),

como MA-actinomicetos (micosfera), para desarrollar una autentica micorrizosfera

(Barea et al. 2005) que promueve el crecimiento y nutricin de las plantas (Franco-

Correa 2008). Con base en la resea elaborada y en las investigaciones realizadas

en el grupo, se puede concluir que los actinomicetos han demostrado ser unos

microorganismos promisorios en la biofertilizacin sin afectar los otros


microorganismos rizosfricos, manteniendo el equilibrio rizosfrico, uno de los

principales objetivos en los cuales se basa la investigacin en Microbiologa de

Suelos y la Interaccin Microorganismo-Planta.

12.4) AISLAMIENTO Y SELECCIN DE ACTINOMICETOS RIZOSFRICOS


CON POTENCIAL APLICACIN COMO BIOINOCULANTE EN EL CULTIVO
DE SOLANUM TUBEROSUM SP. ANDIGENA (PAPA)

El cultivo de Solanum tuberosum L. es originario de los Andes y fue la base de la dieta


alimenticia de las culturas prehispnicas; en la actualidad ocupa el cuarto lugar como
principal producto alimenticio a nivel mundial, siendo Per el pas que posee la mayor
cantidad de especies de papa. Sin embargo, la produccin y rentabilidad del cultivo de
Solanum tuberosum (papa) se ha visto reducida por algunas limitaciones como la baja
calidad del suelo, el uso indiscriminado de agroqumicos, as como la presencia de
fitopatgenos; es por eso, que se buscan nuevas alternativas biotecnolgicas utilizando
microorganismos benficos propios de la planta. El presente trabajo tiene como objetivo
evaluar la capacidad promotora de crecimiento vegetal (PGPR) de actinomicetos
aislados de la rizsfera de plantaciones de papa colectadas en el distrito de San
Jernimo -Andahuaylas. Para ello, se evaluaron 4 caractersticas relacionadas a las
bacterias consideradas como PGPR (Solubilizacin de fosfatos, fijacin de nitrgeno,
produccin de AIA y siderforos). De las 49 cepas de actinomicetos rizosfricos
aisladas y evaluadas, la cepa AND 13 present mejor rendimiento en las pruebas como
PGPR, as como, gran capacidad de adaptacin y crecimiento a diferentes temperaturas
y pH; siendo identificada mediante pruebas bioqumicas y moleculares como
Streptomyces sampsonii.
En conclusin, estos resultados indican que la cepa AND 13 podra ser utilizada a futuro
como una solucin alterna ante el uso excesivo de agroqumicos.
12.4.1. OBJETIVO GENERAL:

Contar con un banco de germoplasma de actinomicetos como potenciales Promotores de


Crecimiento Vegetal (PGPR) a partir de muestras de rizsfera de cultivos de papa
(Solanum tuberosum).
12.4.2. MATERIALES:

Material biolgico.
Muestras de rizsfera de cultivos de Solanum tuberosum sp. andigena papade
la provincia de Andahuaylas Apurmac, Per.

12.4.3. METODOS

Toma de muestra del suelo rizosfrico:


Se realizaron dos muestreos en los meses de enero y abril del 2014 de
reas de cultivo de la papa (Solanum tuberosum) ubicadas en el
distrito de San Jernimo (13396.25S, 732135.24O) en la
provincia de Andahuaylas, departamento de Apurmac.
Se muestrearon en total 2 campos de los cuales se tomaron dos plantas
al azar de cada uno. Las muestras obtenidas estaban conformadas por
la raz y el suelo alrededor de esta, recolectando 200g de cada
muestra. Las cuales fueron colocadas en bolsas de polietileno de
primer uso, con cierre hermtico, trasladndose rpidamente al
laboratorio en condiciones aspticas.
Aislamiento y purificacin de los actinomicetos:
Para el aislamiento de actinomicetos, se sigui el procedimiento
propuesto por Hayakawa et al. (2004) muestras de tierra fueron
secadas en una estufa (Memmert UNB300) a 50C por 1 hora,
transcurrido el tiempo se pes 10 g de la muestra seca y se le agreg
90 mL de solucin salina (SS) al 0,85% con 1,5% de fenol, colocando
la mezcla en la incubadora (Memmert BE400) por 30 minutos a
30C.Al finalizar el tiempo de incubacin, se hicieron diluciones en
SS al 0,85% (p/v)hasta 10-4 y se sembr 0,1 mL de cada dilucin por
diseminacin en AgarAlmidn Casena pH 7,2 (Anexo) segn Gurung
et al. (2009) suplementado conNistatina (Merck) (50 g/mL) y
Cicloheximide (Merck) (50 g/mL), para ser posteriormente
incubadas a 28C por 15 das.Los actinomicetos aislados se
conservaron en ceparios de Agar AlmidnCasena con glicerol al 20%
(v/v) a -20C, para su uso en estudios posteriores.
Evaluacin in vitro de las actividades de los actinomicetos
relacionadas al PGPR.
Capacidad para la solubilizacin de fosfatos:
Las cepas aisladas anteriormente y la cepa Azotobacter sp., utilizada
como patrn, fueron reactivadas en Caldo Tripticasa Soya (Anexo)
por 5 y 2 das respectivamente, hasta llegar a una poblacin de 108
ufc/mL.
Posteriormente, se sembraron 15 L de cada cepa en placas con
medio Picovskaya suplementado con fosfato triclcico, evaluando la
formacin de un halo transparente alrededor de la colonia, el cual
indicara que el fosfato presente en el medio fue solubilizado; y con
medio SRSM-1 (Gunmarsson etal., 2004), evaluando la presencia de
cidos orgnicos por la variacin de Ph del medio, lo que podra
determinar que la solubilizacin de fosfatos estara relacionada con la
produccin de estos cidos. Las placas fueron incubadas por 20 das a
30C.
Capacidad para fijar nitrgeno:
Se realiz en un medio slido libre de nitrgeno segn Valds et al.
(2005). Las cepas de los actinomicetos y la cepa patrn (Azotobacter
sp.) fueron sembradas por agotamiento en Agar NFB (Anexo),
determinando la capacidad de estos microorganismos para utilizar el
N2 como la nica fuente nitrogenada, evalundose su crecimiento en
la superficie del medio. Las placas fueron incubadas a 30C por 15
das, Produccin de cido indol actico (AIA).
Para determinar AIA se aplic el mtodo de Celis & Gallardo (2007).
La prueba se hizo inoculando las cepas de los actinomicetos en
estudio, previamente sembradas en el medio Agar Almidn Casena
(Anexo), en el medio Caldo B suplementado con triptona (Anexo),
estos cultivos fueron incubados a 22C con agitacin de 125 rpm por
15 das. Transcurrido este tiempo se procedi a centrifugar 5 ml del
cultivo a 3 000 rpm por 15min; del sobrenadante se coloc 100 L en
pocillos de placas de ELISA por duplicado, agregando a cada pocillo
200 L del reactivo de Salkowsky, colocndose posteriormente en
oscuridad durante 15 minutos.
Para la lectura se tom en cuenta el viraje de color, de cada pocillo,
de amarillo a diversas tonalidades de fucsia como resultado positivo
para la presencia de AIA; Posteriormente, realizndose la lectura en
el espectrofotmetro (UNICO UV2102C) mediante la absorbancia a
530nm de las cepas positivas.

Produccin de siderforos:
De las cepas que crecieron en el medio Agar Almidn Casena se
inocularon por triplicado en el medio descrito por Simon & Tessman
(1963) y se incubaron a 22C con agitacin a 250 rpm por 15 das.
Se centrifug 5 ml del cultivo a 4 000 rpm por 6min, colocando 100
L del sobrenadante de cada cultivo con 100 L de la solucin de
5mM de percloratofrrico (SIGMA-ALDRICH) en 0.14 M de cido
sulfrico, la lectura cualitativa se determin por el cambio de color de
la mezcla anterior a un caf rojizo. Con las cepas positivas se realiz
la evaluacin cuantitativa con el espectrofotmetro (UNICO
UV2102C) mediante la absorbancia a 480 nm segn la metodologa
recomendada por Atkin (1970). El blanco de la lectura se prepar con
medio de cultivo estril y el control positivo de reaccin se realiz
con una solucin patrn de siderforos.
CARACTERIZACIN FENOTPICA DE LAS CEPAS AISLADAS
Crecimiento a diferentes temperaturas
En placas de Agar Tripticasa Soya (TSA) (Anexo) y Agar Nutritivo
(AN) se sembraron 15 L (106 ufc/mL) de un cultivo de 5 das de las
cepas AND 13 y AND 16 (previamente seleccionadas), por
duplicado, incubndose a diferentes temperaturas: 5, 20, 30, 37 C,
tomando como control la cepa incubada a 28 C. La evaluacin se
realiz cada 48 horas durante 5 das comprobando as el crecimiento
y la adaptabilidad de cada aislamiento a las diferentes temperaturas a
las que se enfrenta el cultivo de papa en el Per (Calvo, 2008).
Crecimiento a diferentes pH
En placas con TSA y AN regulado a diferentes gradientes de pH se
sembraron 15 L (106 ufc/mL) de cultivo de 5 das de las cepas AND
13 y AND 16 por duplicado. Ambos medios fueron regulados a pH 5,
6, 7 (control) y 8. El crecimiento de las bacterias se evalu
diariamente por 8 das con el objetivo de determinar su capacidad
adaptativa a suelos de pH bajo que se presentan en algunas zonas alto
andinas (Calvo, 2008).
Confirmacin del gnero de las cepas PGPR por medio de
Caracterizacin Bioqumica
La identificacin del gnero de las cepas PGPR se llev a cabo a
travs de pruebas bioqumicas convencionales comparando los
resultados con caractersticas bioqumicas de actinomicetos
anteriormente reportados(MacFaddin, 2000).
Las pruebas utilizadas fueron las siguientes.
Prueba de la Oxidasa
Esta prueba permite saber si los actinomicetos en estudio presentan el
complejo citocromo oxidasa. Por lo que con un asa de siembra se
coloc una colonia de los actinomicetos en estudio en tiras de
Bactident Oxidasa. Si la zona de reaccin se coloreaba de azul o
violeta azulado el resultado se consideraba positivo.
Prueba de la Catalasa
Se utiliz para determinar la presencia de la enzima catalasa, que se
encuentra en la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias que
contienen citocromo.
Para ello, las colonias de los actinomicetos fueron colocadas en una
gota de Perxido de Hidrgeno al 30% (v/v). Si como resultado de la
reaccin se producan pequeas burbujas, esta se consideraba positiva
(Bailn, 2003).
Reduccin de Nitratos
Algunos Actinomicetos tienen la capacidad de reducir nitratos a
nitritos. Esta es una caracterstica utilizada para la identificacin y
diferenciacin de muchas especies (Bailn, 2003). Para poner en
manifiesto esta capacidad, los actinomicetos en evaluacin fueron
inoculados en Caldo Nitrato y se incubaron a 28C durante 7 das.
Transcurrido este tiempo se evalu la capacidad reductora de Nitratos
con la adicin de 3 gotas de -naftilamina y 3 gotas de cido
sulfanlico observando como resultado positivo una coloracin roja a
los 30 segundos (MacFaddin, 2000).

Hidrlisis de Urea
Se realiz para evidenciar la actividad de la enzima ureasa que
poseen ciertos microorganismos, que permite degradar la urea en dos
molculas de amoniaco. Por lo que, las colonias de actinomicetos se
inocularon en Caldo Urea y se incubaron a 28C durante 7 das. Si el
medio se tornaba rosa fucsia, el resultado era considerado positivo
(Bailn, 2003).
Prueba de la Casena
Esta prueba se utiliz para comprobar la actividad proteoltica de los
actinomicetos. Para ello, se sembraron las colonias por puncin en
Agar Casena (Anexo), incubndose a 28C durante 7 das. Al
transcurrir los das de incubacin, la presencia de un halo
transparente alrededor de la colonia fue considerado positivo.
Hidrlisis de Gelatina
La hidrlisis de gelatina determina la capacidad de un organismo de
producir la enzima gelatinasa. El catabolismo de las protenas por las
gelatinasas se da en dos etapas la primera origina polipptido y
posteriormente estos se desdoblan en aminocidos individuales,
(Bailn, 2003). Para evidenciar esta capacidad las colonias fueron
inoculadas por puncin en el Medio Gelatina, incubndose a 28C
durante 10 das. Transcurrido el tiempo, se llevaron los tubos a
refrigeracin durante 15 min, para luego observar la consistencia del
medio, si este se mantiene lquido indica la presencia de enzimas
proteolticas.
Identificacin molecular de los actinomicetos PGPR
La identificacin de la cepa AND 13, con resultados positivos para
todas las pruebas como PGPR, se llev a cabo de acuerdo a la
metodologa propuesta por Cook & Meyer (2003).

12.4.5. RESULTADOS
Aislamiento y purificacin de los actinomicetos.
Se logr aislar un total de 49 cepas de Actinomicetos. El aislamiento se obtuvo
luego de 2 a 3 siembras sucesivas de las colonias en Agar Almidn Casena (AC)
hasta obtener colonias puras, tomndose en cuenta para la caracterizacin
morfolgica la presencia de micelio base y micelio areo corto as como la
pigmentacin de ambos; la textura seca tpica y el olor a tierra hmeda,
caractersticas de estas colonias de actinomicetos.
Todos los actinomicetos aislados presentaron micelio areo con variada
pigmentacin que va desde blanco, crema hasta marrn y morado. Evaluacin in
vitro de las actividades de los actinomicetos relacionadas al PGPR.
Solubilizacin de fosfatos.
De las 49 cepas evaluadas de actinomicetos, el 63,27% present halos de
solubilizacin en el medio Picovskaya cuyos valores se muestran entre 0,02 y
0,06 cm2, siendo la cepa AND 27 la que present mayor rea de solubilizacin
Fijacin de nitrgeno
El 85,72% del total de 49 cepas crecieron satisfactoriamente en este medio, por
lo que se puede presumir que las posibles fuentes de nitrgeno alternativo
utilizados por los actinomicetos en estudio, se obtendran a partir de la captacin
de nitrgeno atmosfrico debido a que poseen actividad nitrogenasica.
Produccin de cido indol actico (AIA)
La produccin de AIA se determin por reacciones colorimtricas utilizando el
reactivo de Salkowsky, el cual es especfico para la deteccin de compuestos
derivados del indol. Esta capacidad fue evaluada primero mediante una prueba
de carcter cualitativo para todas las cepas, para posteriormente cuantificar las
cepas seleccionadas; basndose en una curva de calibracin que se elabor a
partir de patrones de AIA comercial (SIGMA-ALDRICH) diluidos en agua
destilada a diferentes concentraciones.

12.4.6. DISCUSION
En los ltimos aos, el estudio de la interaccin de los actinomicetos a nivel
rizosfrico ha generado gran inters en los investigadores, para caracterizarlos
como PGPR (El Tarabily & Sivasithamparam, 2006). Los actinomicetos tienen
la capacidad de sobrevivir a ambientes extremos, hecho que no es comn para la
mayora de las bacterias. Adems, muchos microorganismos utilizados como
biofertilizantes presentan una inestabilidad en cuanto a viabilidad e
infectabilidad generados por el estrs medioambiental, mientras que los
actinomicetos se propagan mejor bajo condiciones de estrs.
Los metabolitos microbianos son fundamentales en las relaciones ecolgicas
entre microorganismos, siendo muy importante en el caso de los actinomicetos
segn Lehr et al. (2008), es por ello que se realiz la evaluacin de la capacidad
promotora del crecimiento vegetal (PGPR) a travs de diversas pruebas
fundamentales para determinar actinomicetos rizosfricos que posean estas
caractersticas tal y como lo realizan Husen (2003) y Joseph et al. (2007) en sus
investigaciones.
La capacidad que poseen algunas rizobacterias para solubilizar fosfatos, les
permite ser consideradas como bacterias promotoras de crecimiento vegetal,
especialmente aquellas que encontramos en suelos con grandes cantidades de
fosfato precipitado. Los mecanismos que utilizan estos microorganismos para la
solubilizacin de fosfatos son la produccin de cidos orgnicos y de fosfatasas,
sin embargo, esto depender de la naturaleza del fsforo en el suelo de acuerdo
con Whitelaw (2000), Gyaneshwar et al. (2002) y Tiesen (2008).
Al evaluar esta caracterstica, se obtuvo que ms del 60% de las cepas en estudio
presentaron halos de solubilizacin, sin embargo, estos eran muy pequeos en
comparacin con los de la cepa patrn, Azotobacter sp. Franco (2008) obtuvo
resultados similares, teniendo una gran cantidad de actinomicetos
solubilizadores de fosfatos con un rendimiento por debajo que el de las bacterias
del gnero Azotobacter.
Los actinomicetos AND 13 y AND 16 presentaron un mayor rendimiento en las
caractersticas analizadas, siendo los resultados de la cepa AND 13 los ms
alentadores. Pudindose emplear estas cepas, a futuro, en el campo como una
solucin alterna ante el uso excesivo de productos qumicos.
Existen tres factores que influyen en la distribucin y en la actividad de muchos
actinomicetos en el suelo: el pH, la temperatura y el tipo de suelo. Es por eso
que en este estudio se evalu tambin la capacidad de crecimiento de las cepas
AND 13 y AND 16 (cepas seleccionadas como PGPR) a diferentes temperaturas
y pH. Los resultados obtenidos coinciden con Stanley (1994), que indica que los
actinomicetos no pueden crecer a pH por debajo de 5,0, teniendo en cuenta que
el gnero Streptomyces no puede crecer a pH menor a 5,9. Siendo su rango de
pH ptimo entre 6,8 - 8,0.
Los actinomicetos al ser mesfilos, crecen mejor a temperaturas entre 25 a 30C,
pero a temperaturas inferiores a 5C su crecimiento es nulo segn Stanley
(1994), coincidiendo con los resultados de la evaluacin de crecimiento a
diferentes temperaturas. Sin embargo, a pesar de las condiciones de crecimiento
establecidas, los actinomicetos son microorganismos que se adaptan a otro tipo
de condiciones. Segn estudios se afirma que estos microorganismos han sido
aislados de diferentes ambientes como praderas, arenas de la playa, cuevas
subterrneas, arrozales y subhielo glacial de la Antrtida, adems Ibrahim et al.
(2006), Terkina et al. (2006) y Jayasinghe & Parkinson (2008) reportaron el
crecimiento de dichos microorganismos a temperaturas entre 10,2C y 2,5C.
Con la caracterizacin bioqumica se pudo concluir que la cepa AND13
pertenece al gnero Streptomyces, considerando que ste es uno de los ms
reconocidos del orden Actinomycetales debido a su amplia distribucin en la
naturaleza, especialmente en el suelo y porque alberga a un gran nmero de los
productores ms importantes de antibiticos y otros metabolitos secundarios
segn Ramrez et al. (2008). Para confirmar los resultados de esta
caracterizacin, se realiz la identificacin molecular de la cepa, a travs del
secuenciamiento de los fragmentos amplificados del gen RNAr 16S ,
comparndola con las secuencias depositadas en el GenBank a travs del
programa Clustal 2.1, obtenindose porcentajes de similitud mayores a 99% con
la especie Streptomyces samposii.

12.5) ACTINOCIMETOS EN LA FERTILIDAD Y PRODUCCION AGRICOLA

AUTOR: Juan Manuel Snchez-Yez, Javier Villegas Moreno, Liliana Marquez.

12.5.1. RESUMEN

Los actinomicetos (Ac) son bacterias o procariotes, sensibles a la penicilina


porque su pared contiene peptidoglucano, base de la diferencia con los hongos
filamentosos eucariotes, aunque etimolgicamente significa hongo en forma de
rayo de sol, este grupo pertenece en el manual de Bergey al orden
Actinomycetales pueden tener forma bacilar, Gram Positivos, hasta filamentos
delgados ramificados o micelio similar a los hongos, pero de menor dimetro de
entre 0.5-1.0, algunos tienen hifas de 2.0, como los hongos producen esporas,
conidias desnudas en cadenas, en esporangios, en la mayora de los gneros del
suelo excepto Actinomyces (1,5,8). Ciertos Ac tienen propiedades fisiolgicas
semejantes a los hongos como: la clase y forma del micelio que se fragmenta,
producen colonias derivadas de hifas que se introducen en el agar, stas pueden
ser pigmentadas y harinosas de 3-6 mm de dimetro, cuando se siembran en
medio de cultivo lquido no generan turbidez, porque en su pared celular
contienen ceras que los hacen insolubles, por ello forman grumos y esferas que
en consecuencia no se mezclan con el medio de cultivo, otros Ac no forman
hifas y son similares a las bacterias tpicas como: Bacillus, Escherichia,
Pseudomonas, incluso Staphylococus.

12.5.2. ANTECEDENTES

12.5.2.1. Distribucin y densidad en el suelo.

Los Ac son abundantes y cosmopolitas en el ambiente: lagos, ros, suelo y


estircol de animales y aves; son aerobios en el suelo se ubican en la superficie,
aunque tambin viven en los horizontes inferiores, al igual que gneros comunes
de bacterias verdaderas Bacillus, Pseudomonas, Agrobacterium, en especial en
suelo alcalino, la mayora de los Ac son saprobios, mineralizan materia orgnica
vegetal, animal, existen ciertos gneros Fito patgenos: Streptomyces scabies al
igual aquellos que causan enfermedades en humanos: Nocardia, y animales
como Actynomyces.

Los Ac en el suelo se estudian por mtodos microscpicos, por cuenta viable en


placa (CVP) en medios de cultivo para bacterias heterotrficas como el agar
nutritivo, es preferible en selectivos que contienen quitina como nica fuente de
carbono y antibiticos que inhiben hongos, ya que tienen tiempo de generacin
mayor al de bacterias nativas del suelo o la rizosfera de plantas como:
Achromobacter, Rhizobium, Burkholderia, etc., es recomendable usar medios de
cultivos especficos para su aislamiento.

En la naturaleza los Ac como el suelo se observan en hifas y conidias, al inicio


de la esporulacin generan poblaciones abundantes, donde el tamao de la
comunidad depende de la clase del suelo, de sus propiedades fisicoqumicas
como el contenido en materia orgnica

La abundancia de las conidias de los Ac, es un respuesta a cualquier condicin


ambiental adversa del suelo, as que algunos generan esporas resistentes a la
desecacin, las conidias son viables en suelo seco por aos cuando el ambiente
es desfavorable para la vida vegetativa, las conidias tienen mayor tolerancia el
calor que las hifas, resisten temperaturas que inhiben la reproduccin del
micelio, la conidia es menos tolerante al calor que la espora bacteriana,
normalmente la hifa muere pocos grados arriba de la temperatura de crecimiento
o causa la inactivacin de las conidias.

12.5.2.2. Influencias ambientales sobre los actinomicetos

En trminos cualitativos y cuantitativos la poblacin de Ac al igual que su


actividad mineralizante, dependen de la concentracin de la materia orgnica,
del pH, de la humedad, de la temperatura y el cultivo vegetal sembrada en un
suelo especfico.
La mineralizacin de los Ac en el suelo, est relacionada con la concentracin de
carbono disponible en especial con los que contienen altos niveles de materia
orgnica como el humus, lo anterior es posible medirlo directamente por CVP o
indirectamente con parmetros del metabolismo como: la produccin de dixido
de carbono, u amonio derivado de compuestos proteicos, cidos nucleicos en el
estircol animal, o en los restos de cultivos agrcolas.

El agregar restos de plantas en el suelo eleva la temperatura, tanto la biota


fngica como la bacteriana inicialmente proliferan, mientras que los Ac no se
estimulan hasta el final de la mineralizacin de la materia orgnica, lo que indica
que este proceso depende de la accin conjunta de bacterias y hongos, mientras
que los Ac aparecen cuando los compuestos fciles de degradar desaparecieron y
ya no existe competencia.

12.5.3. CLASIFICACIN DE LOS ACTINOMICETOS

Actualmente en el suelo existe una alta densidad de Ac mayor de los que se


conocan antes, los que se dividen en las siguientes familias de acuerdo con el
Manual de Bergey 2000:

Streptomycetes tiene hifas no fragmentadas, un micelio areo extenso,


esporas en cadenas con 5 a 50 o conidias en cadena, los gneros
representativos son: Streptomyces, Microeliobosporia, Sporichthya.
Actinomycetes del tipo Nocardia, poseen hifas fragmentadas con
pequeas estructuras redondeadas o alongadas; el subgrupo 1 que
contiene cido mcolico; el subgrupo 2 est representado por el gnero:
Pseudonocardia; el subgrupo 3 por los gneros: Nocardioides y
Terrabacter; el subgrupo 4 por: Promicronospora.
Actinoplanetes, tiene esporas en esporangios, el dimetro de las hifas es
de 0.2 a 2.0; los gneros tpicos son: Streptosporagium, Actinoplanes,
Planobispora, Dactylosporangium forman hifas no fragmentadas; con
conidias aisladas, o de cadena corta los gneros como: Micromonospora,
Microbispora, Micropolyspora, Thermomonospora, Thermoactnomices,
Actinobifida.

Gneros con esporangios diversos, los fragmentos de hifas se dividen para dar
estructuras redondas, mviles, el tpico es Geodermatophilus. Mientras Frankia
es un simbiote que fija nitrgeno molecular en rboles no leguminosas del
gnero Alnus, cuando forma ndulos en sus races por ello se fabrican
inoculantes con base en ese gnero que se cultiva en el laboratorio.

Madurromycetes tienen filamentos estables con una espora o de cadena


corta, los gneros representativos son: Microtetraspora, Actinomadura,
otros producen esporas mviles como: Planobispora, Planomonospora,
Spirillospora o bien aquel que tiene esporas inmviles:
Streptosporangium.
Thermomonospora, tienen filamentos estables producen esporas sencillas
como el gnero Thermomonospora, o en cadena como: Actinosynnema,
Nocardipsis, o aquel con una estructura parecida a un esporangio
representado por el gnero Streptoalloteichus.
Thermoactinomycetes, forman filamentos estables con una espora, todas
las especies son termfilas como: Thermoactinomyces.

12.5.4. CONCLUSIN

Los Ac son fundamentales en la mineralizacin de materia orgnica que hongos


y bacterias no usan, como antagonistas microbianos regulan la composicin de
la comunidad en el ecosistema del suelo, en parte porque excretan antibiticos y
enzimas de la lisis, lo que tiene utilidad en el control biolgico de insectos plaga,
nematodos y otros fitopatgenos vegetales. Adems se asocian con races
vegetales para fijacin del N2; es necesario realizar ms investigacin sobre ese
grupo slo conocido por su capacidad de producir antibiticos para aprovechar
su potencial en agricultura y mayor en la industria.
CONCLUSIN

En cierto modo, constituyen un grupo mal definido de microorganismos que, aunque


son unnimemente clasificados dentro de los Esquizomicetos formando el orden
Actinomicetales, en general son estudiados separadamente por sus caractersticas
especiales. La nota peculiar ms destacable es su capacidad para formar agregados
filiformes, parecidos a las hifas fngicas y que tienen aproximadamente una micra de
espesor, formando un micelio ramificado que puede subdividirse en clulas bacterianas
aisladas. Su cultivo en un medio lquido no produce una turbidez uniforme como en el
caso de las bacterias, sino que forman apelotonamientos y su crecimiento no sigue el
modelo exponencial de las bacterias sino el cbico propio de los hongos. Entre los
gneros que tienen mayor inters para el estudio de la microbiologa del suelo cabe citar
al Nocardia, que alterna una fase vegetativa con micelio con otra representada en forma
de elementos bacilares y el Streptomyces y Micromonospora, que presentan un micelio
indivisible y productor de esporas.

La importancia de sus fermentaciones con formacin de antibiticos ha obligado a dar


un gran paso encaminado al mejor conocimiento de su fisiologa, pero su papel en el
suelo es an muy poco conocido. Son poco competitivos en la adquisicin de sustancias
nutritivas, fundamentalmente cidos orgnicos, azcares, polisacridos, lpidos,
protenas e hidrocarburos alifticos. La celulosa es atacada muy lentamente y lo mismo
el almidn, inulina y quitina, cuya hidrlisis es especialmente caracterstica de los
actinomicetos. Existen algunos oligocarboflicos por desarrollarse en medios deficientes
en carbono.
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Los actinomicetos en la fertilidad y produccin agrcola Juan Manuel


Snchez-Yez, Javier Villegas Moreno y Liliana Marquez B. Laboratorio de
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