Revisin de la toxicocintica y la toxicodinamia del cido

cianhdrico y los cianuros*

Resumen: El cianuro es uno de los txicos ms peligrosos por su rpida y potente accin,
muchas veces letal. Los diferentes tratamientos de la intoxicacin tienen su base o explicacin
en el conocimiento de la toxicocintica y la toxicodinamia. La revisin de la toxicocintica del
cianuro muestra que, si bien la va de la tiosulfato-cianuro sulfotransferasa (rodanasa) es la
principal va metablica, el complejo con albmina srica sera el primer proceso de
detoxificacin del cianuro en el metabolismo normal. El efecto protector de formadores de
cianhidrinas en casos de intoxicacin sigue siendo evaluado a nivel experimental. Los estudios
actuales sobre la toxicodinamia del cianuro se enfocan en la afinidad de la unin del cianuro al
centro binuclear hemo a3-CuB de la citocromo oxidasa en sus diferentes estados redox y en el
mecanismo de inhibicin de enzimas antioxidantes. Un mayor y mejor entendimiento de la
detoxificacin del cianuro as como de los mecanismos de accin txica podran llevar al
desarrollo de potenciales antdotos.

INTRODUCCIN

El cido cianhdrico es un lquido incoloro a 20C, con ligero olor a

almendras amargas. Tiene un punto de ebullicin de 26C lo cual permite
muy fcilmente su pasaje al estado gaseoso. Los cianuros alcalinos como el
cianuro de sodio y de potasio son slidos blancos muy solubles en agua.
El hombre puede estar expuesto a cianuro a travs de una gran variedad de
compuestos, los cuales pueden ser de origen natural y antropognico.
Ejemplos de compuestos de origen natural son los glucsidos
cianogenticos, sustancias complejas formadas por una aglicona, un azcar
y una molcula de cido cianhdrico. Alrededor de 1000 especies de plantas
contienen estos glucsidos (1), que son capaces de liberar la molcula de
cianhdrico en determinadas condiciones de temperatura, tiempo y/o accin
de enzimas vegetales o bacterianas (1). Se conocen aproximadamente 25
glucsidos cianogenticos diferentes, de los cules la amigdalina, la durrina,
la linamarina, la lotaustralina, la prunasina y la taxifilina son los de mayor
importancia en plantas comestibles (2). Estos compuestos estn
naturalmente presentes en alimentos como las almendras, las habas, la
mandioca, la soja, el sorgo y la espinaca (3,4); en las semillas de manzana, los
carozos de duraznos, cerezas y ciruelas (5). Aunque est descripto que el pH
gstrico no es capaz de hidrolizarlos, existe evidencia que la flora intestinal
de los mamferos s puede hacerlo (1,2).
Las principales fuentes de contaminacin de origen antropognico son las
descargas (desechos) de las industrias mineras de extraccin de metales
preciosos, de las industrias metalrgicas del hierro y el acero y de las
industrias qumicas que producen distintos compuestos de cianuro tales
como ferro y ferricianuros (3). Algunas industrias utilizan compuestos de
cianuro en procesos de sntesis para la fabricacin de plsticos, papel, telas,
gomas, fotografa, plaguicidas (5). Otras fuentes de cido cianhdrico son las
emisiones vehiculares, el humo de cigarrillo y las emanaciones en la quema
de basura y en los incendios.
La administracin teraputica de nitroprusiato de sodio como agente
hipotensor puede ocasionar intoxicacin por cianuro (6-10).
La etiologa de la intoxicacin con cido cianhdrico y cianuros puede ser
intencional (suicida u homicida), accidental, iatrognica, alimentaria,
ambiental y profesional.
La exposicin al txico puede ser aguda o crnica. Las etiologas intencional
y accidental estn ms frecuentemente asociadas a exposicin aguda (11-15) y
las etiologas profesional, ambiental y alimentaria estn ms
frecuentemente asociadas a exposicin crnica (16-19). La toxicidad de los
cianuros se manifiesta por accin general, es decir, se pueden distinguir las
etapas de absorcin, distribucin, metabolismo y eliminacin del txico (7).
En el caso de cianuro de sodio, la accin custica al entrar en contacto con
las mucosas (20), puede considerarse una accin local.
La principal caracterstica del perfil toxicolgico del cianuro es su rpida y
potente toxicidad aguda, y los diferentes tratamientos de la intoxicacin
tienen su base o explicacin en el conocimiento de la toxicocintica y la
toxicodinamia.
El objetivo de este trabajo fue realizar una revisin de la toxicocintica y
toxicodinamia del cido cianhdrico y los cianuros, sus relaciones con los
antdotos utilizados en la actualidad, y una actualizacin del tema con vistas
a potenciales mecanismos de accin para nuevos antdotos.

ABSORCIN

El cido cianhdrico es una molcula pequea y tiene un pKa de 9,21 (21) que
hace que no est ionizada al pH fisiolgico. En el estado gaseoso es un
compuesto de elevada difusibilidad. Atraviesa rpidamente membranas por
un mecanismo de difusin simple.
El cido cianhdrico se absorbe por piel y mucosas y puede ingresar al
organismo por va inhalatoria, oral, conjuntival y drmica (22,23).
Los factores que modifican la velocidad de absorcin pueden ser: a) propios
del compuesto, como la liposolubilidad, la constante de disociacin (24), la
concentracin en el sitio de absorcin (directamente relacionada con la
concentracin o dosis de exposicin); y b) propios del sitio de absorcin,
como la superficie de contacto, la irrigacin o perfusin y el pH en el sitio de
absorcin.
La absorcin gastrointestinal de sales de cianuro es ms lenta que la
absorcin inhalatoria del gas cianhdrico y se ve afectada por la presencia
de alimentos (22). El tiempo transcurrido entre la exposicin y la aparicin de
los sntomas depende del tipo de compuesto involucrado (gas cianhdrico,
cianuros hidrosolubles, cianuros insolubles en agua y compuestos
cianogenticos), la va de ingreso y la dosis. Por ejemplo, la hiperpnea
puede aparecer 15 segundos despus de la exposicin a gas
cianhdrico (25) o los sntomas pueden demorarse hasta 12 horas luego de la
ingestin de glucsidos cianogenticos (22).

DISTRIBUCIN

Si la absorcin fue por va oral, una importante porcin es detoxificada en

hgado por el proceso de primer pasaje (5,22,26).
La distribucin del cianuro absorbido es rpida (minutos a horas) y
uniforme, se lo encuentra en prcticamente todos los tejidos (27), sin
embargo, los mayores niveles suelen encontrarse en hgado, pulmones,
sangre y cerebro (22,28).
Se une a muchas metaloenzimas, inactivndolas, entre las cuales
encontramos enzimas que contienen hierro, cobre y cobalto (29).
En sangre, la mayor proporcin de cianuro se halla dentro del eritrocito. La
relacin concentracin de cianuro en glbulo rojo/concentracin de cianuro
en plasma vara de acuerdo a distintos autores: 2/1 (29), 100/1 (30) y 199/1 (22).
La alta afinidad de los eritrocitos por el cianuro podra ser interpretada como
un mecanismo de detoxificacin (5,31).
El cianuro puede atravesar la barrera placentaria (32). Esta afirmacin se
basa en que se encontraron mayores niveles de tiocianato (principal
metabolito del cianuro) en sangre de cordn umbilical de fetos de madres
fumadoras comparados con los niveles hallados en sangre de cordn de
fetos de madres no fumadoras, lo que sugiere que el tiocianato y
posiblemente el cianuro atraviesen placenta (23).
No se ha descripto acumulacin del cianuro en sangre o tejidos luego de
exposicin crnica al txico (22).

METABOLISMO Y ELIMINACIN

El proceso de detoxificacin de cianuro involucra una va metablica

principal en la que participan enzimas intracelulares (sulfotransferasas) y
vas metablicas alternativas menores conformadas por procesos de
oxidacin y unin a cistina, entre otros.
Las sulfotransferasas catalizan la adicin de azufre al cianuro de modo
irreversible formando tiocianato (33,34), de menor toxicidad que el cianuro,
que posteriormente es eliminado en la orina. El metabolismo a travs de las
sulfotransferasas es crtico en el proceso de detoxificacin. Varias enzimas
han sido caracterizadas que favorecen la transferencia de sulfuros
bivalentes a aceptores nucleoflicos como el cianuro: tiosulfato -cianuro
sulfotransferasa (rodanasa) EC 2.8.1.1, -mercaptopiruvato-cianuro
sulfotransferasa (MPST) EC 2.8.1.2, tiosulfato reductasa (tiosulfato tiol
sulfotransferasa) EC 2.8.1.3 y cistationasa -liasa EC 4.4.1.1 (7).
La rodanasa (EC 2.8.1.1) es una enzima mitocondrial, ubicua, presente en
diferentes organismos vivos, desde bacterias al hombre (35-42). Convierte el
cianuro en tiocianato al transferirle un tomo de azufre desde el tiosulfato u
otro dador de azufre (Ecuacin 1).

Por esta va se detoxifica el 80% de la dosis absorbida de cianuro (43).

El sulfito producido en esta reaccin es convertido a sulfato por la enzima
sulfito oxidasa (EC 1.8.3.1) (44). En tejido humano se ha descripto la
presencia de isoenzimas de la rodanasa (45) y una actividad de rodanasa
elevada en rin seguida por hgado, cerebro, pulmn, msculo y
estmago (40).
La MPST (EC 2.8.1.2) cataliza la transferencia de azufre slo desde el 3-
mercaptopiruvato, que se forma durante el catabolismo de la cistena, a un
aceptor de azufre como el cianuro (Ecuacin 2).
El 3-mercaptopiruvato es el nico sustrato de la MPST. Este hecho estara
relacionado con la presencia del grupo -ceto y la posicin del grupo
sulfuro (46). Esta enzima se halla tanto en clulas eucariotas como
procariotas. Presenta segn la especie diferencias en su disposicin, as, en
rata se encuentra en mayor proporcin en rin e hgado localizndose en
citoplasma y mitocondria (47). En pollo y paloma la actividad de MPST ms
alta se exhibe en hgado seguido por rin. En pato y murcilago de la fruta
los niveles ms elevados se localizan en rin (48).
La distribucin subcelular de la MPST pone en evidencia que primero
detoxifica el cianuro en el citoplasma y luego en la mitocondria en
cooperacin con la rodanasa (49). La MPST y la rodanasa son miembros de la
misma familia y estn evolutivamente relacionadas (50).
En la MPST humana se identificaron 3 polimorfismos genticos, de los cuales
la mutacin sin sentido Tyr85Stop, que da lugar a la sntesis de una protena
inactiva, podra estar relacionada con un mayor riesgo de desarrollar
neurotoxicidad tras la exposicin a cianuro (51).
La tiosulfato reductasa (EC 2.8.1.3) cataliza la desulfuracin de tiosulfatos
oxidando GSH a GSSG. Durante esta reaccin se forma glutation persulfito
(GSS-), compuesto altamente reactivo, que reacciona con el cianuro si ste
est presente (52). Esta enzima se encuentra en hgado, rin, corazn,
cerebro, intestino y testculo (53). Se localiza a nivel subcelular en citoplasma
y mitocondria (36).
La cistationasa -liasa (EC 4.4.1.1) es la cuarta enzima que participa en la
detoxificacin endgena del cianuro (54). Esta enzima cataliza la formacin
de tiocistina, un dador de azufre sustrato de la rodanasa, a partir de
cistina (55).
Entre las vas metablicas alternativas menores se encuentran: 1) formacin
del cido 2- aminotiazolidn-4-carboxlico, por reaccin del cianuro con
cistina, que se elimina por orina (56,57). Esta va corresponde a un 20% del
metabolismo, el cual se incrementa con dosis txicas de cianuro (25,56); 2)
oxidacin enzimtica y no enzimtica del cianuro a cianato, que se elimina
como dixido de carbono por va respiratoria (58); 3) combinacin del cianuro
con hidroxicobalamina para formar cianocobalamina (vitamina B12), que se
elimina por va renal (33,59); 4) incorporacin en el pool metablico de
compuestos mono carbonados (58). Los pasos metablicos planteados se
muestran en la figura 1.

Figura 1. Esquema de los pasos metablicos de cianuro (tomado de ATSDR,

2006 (33) con modificaciones).

El cianuro tambin puede ser removido por otros procesos importantes

como la formacin de cianmetahemoglobina en glbulos rojos por su
reaccin con el hierro en estado frrico de la metahemoglobina (25,31) y por la
interaccin con la albmina del suero a travs de los grupos azufre -
sulfona, la que exhibe un comportamiento anlogo a una enzima en el
proceso de detoxificacin de cianuro (53,60-65). Las reacciones de cianuro con
las sales o los steres de algunos aminocidos (piruvato, -cetoglutarato,
oxalacetato) conducen a la formacin de intermediarios cianhidrinas y a su
incorporacin en el metabolismo intermediario (33,53).
La combinacin de las rutas metablicas en el humano genera una
capacidad de detoxificacin de 0,017mg de cianuro por kilo de peso por
minuto (25,66).
En humanos de ambos sexos tratados con nitroprusiato de sodio se observ
una detoxificacin espontnea de cianuro de aproximadamente 1g/kg de
peso por minuto (22,67).
El metabolismo enzimtico, principal ruta de metabolizacin del cianuro, es
eficiente, pero no tiene suficiente capacidad de detoxificacin en
intoxicaciones agudas por falta de dadores de azufre endgenos; y la
proteccin conferida por la formacin de cianatos derivados es limitada,
porque las clulas no pueden utilizar el oxgeno (22,25).
Existe escasa y muy variada informacin sobre datos toxicocinticos del
cianuro y sus compuestos en el hombre. Las dosis letales medias para
humano estimadas en base a estudios de reporte de casos son: para
exposicin por va inhalatoria CL 50 524 ppm por 10 minutos, por va oral
DL50 1,52 mg/kg y por va drmica DL50 100mg/kg (33). Algunos datos
provenientes de reportes de casos se presentan en la tabla 1 junto a datos
toxicocinticos provenientes de estudios en diferentes especies animales.
En esta tabla se observan variaciones de la vida media relacionadas con la
especie, el tipo de exposicin, la dosis, el compuesto, la va de
administracin y el tiempo de exposicin. Adems, se distingue que, de las
tres especies (monogstrica: rata y cerdo, no monogstrica: cabra)
evaluadas en las mismas condiciones experimentales con dosis subletales,
en la cabra el cianuro presenta una vida media mayor con una constante de
eliminacin (Kel) menor. Este hecho permitira asumir que el cianuro
permanece ms tiempo en esa especie no monogstrica, posiblemente
prolongando la exposicin a tiocianato, su principal metabolito.

Tabla 1. Datos toxicocinticos en diferentes especies

El cianuro absorbido es excretado principalmente como tiocianato en orina.

Trazas de cianuro de hidrgeno tambin pueden ser excretadas, sin cambio,
a travs de pulmn, saliva, sudor u orina, como dixido de carbono en el
aire expirado o como tiocianoalanina en saliva y sudor (26). Algunos autores
han comunicado la existencia de dos fases de eliminacin para el cianuro,
una fase rpida o a y una terminal o en un modelo bicompartamental (68,73).

MECANISMO DE ACCIN

Se conoce que el cianuro se une e inactiva aproximadamente 40

enzimas (22), entre las cuales se pueden mencionar las siguientes: catalasa,
cido ascrbico oxidasa, peroxidasa, tirosinasa, fosfatasa, xantino oxidasa,
succnico deshidrogenasa, superxido dismutasa, carboxilasa vitamina K
dependiente y anhidrasa carbnica (7,22,33,74). Adems, se une a la
metahemoglobina y a la hidroxicobalamina (33). Pero, la accin ms
importante desde el punto de vista toxicolgico es la unin a la citocromo c
oxidasa (22,25,33).
La citocromo oxidasa es una superfamilia de protenas las cuales actan
como enzimas terminales en las cadenas respiratorias celulares. Como
consecuencia de la unin del cianuro a la enzima, se impide la utilizacin del
oxgeno a nivel celular y se manifiesta un estado de anoxia histotxica.
La estructura de la enzima y el mecanismo de unin del cianuro han sido
estudiados en numerosos trabajos (75-78) y an continan siendo
investigados. La unin del cianuro a la citocromo c oxidasa es compleja y
depende del estado redox de la enzima. Jones y
(75)
colaboradores propusieron la existencia de dos formas o estados de la
enzima citocromo c oxidasa y las denominaron formas unibles y no unibles
al cianuro. Consideraron forma unible a la enzima en su estado parcialmente
reducido y formas no unibles a todos los otros estados redox de la enzima.
Los mismos autores tambin demostraron que el cianuro se une a la forma
parcialmente reducida de la enzima (75).
Varios estudios indican que el cianuro se une al centro binuclear hemo a 3-
CuB (77,79-81). El centro binuclear puede existir en tres estados: reducido,
oxidado o parcialmente reducido (82). El oxgeno slo puede unirse en el
estado totalmente reducido (Fe 2+a3-Cu+B). El cianuro puede unirse al centro
binuclear en los tres estados, pero tendra una mayor afinidad de unin por
el estado parcialmente reducido (Fe3+a3-Cu+B) (77).
Al ser un nuclefilo fuerte, el cido cianhdrico tiene mltiples efectos en
varios sistemas del organismo. En el sistema nervioso central, puede llevar
a la acumulacin de calcio intracelular en las neuronas (83). Puede provocar
la liberacin de neurotransmisores excitatorios en cerebro y la liberacin de
catecolaminas desde las glndulas adrenales y terminales nerviosas
adrenrgicas (83).
A dosis subletales, se han descripto secuelas como sndrome smil
Parkinson (19), relacionados con la muerte de clulas nerviosas
dopaminrgicas inducida por cianuro (84,85).
Tambin se ha descripto que el cianuro induce peroxidacin lipdica,
principalmente en el cerebro (7)debido, probablemente, a la inhibicin de
enzimas antioxidantes superxido dismutasa, catalasa y glutation
peroxidasa (33,83).
Adicionalmente, el cianuro estimula directamente los quimiorreceptores del
cuerpo carotdeo y de los cuerpos articos, produciendo hiperpnea (86). Esta
estimulacin sera consecuencia de la hipoxia provocada por el cianuro a
nivel de las clulas tipo I (clulas glomus) del cuerpo carotdeo (87). As, el
cianuro afecta la respiracin en dos niveles, el nivel celular en la cadena
respiratoria y el nivel fisiolgico a travs de los quimiorreceptores.
Todos estos mecanismos explicaran la predominancia de afecciones
neurolgicas en los intoxicados con dosis subletales de cianuro (88-90) ya que
el sistema nervioso central es ms vulnerable debido a su alta demanda
metablica de oxgeno (33).
El cianuro tambin tiene una accin sobre la tiroides atribuida a su principal
metabolito, el tiocianato. El in tiocianato es un compuesto bocigeno que
compite con el in ioduro por el ingreso a la tiroides y, como consecuencia,
altera la sntesis de las hormonas tiroideas: triiodo tironina y tiroxina (T3 y
T4) (22,26,33).
TRATAMIENTO

El paradigma de tratamiento clsico en toxicologa clnica incluye: 1)

tratamiento de soporte; 2) prevencin de la absorcin de los compuestos
txicos; 3) fortalecimiento de su eliminacin; 4) tratamientos especficos,
incluidos los antdotos (7,30,86,91). El tratamiento con antdoto, sobre una base
toxicocintica, implica una disminucin de la concentracin del txico a
nivel del blanco celular y, sobre una base toxicodinamica, conduce a una
modificacin de la sintomatologa clnica sin afectar la concentracin del
compuesto en el blanco celular (92).
En la intoxicacin por cianuro cuyas acciones son complejas y no pueden
atribuirse exclusivamente a la inhibicin de la utilizacin del oxgeno, se
produce un rpido inicio de la toxicidad que debe tener un tratamiento
eficaz e inmediato para evitar el sndrome txico (89,93-95).
Los compuestos utilizados como antdotos en la intoxicacin con cianuro
pueden ser clasificados en cuatro grupos basados en su mecanismo de
accin (96,97).

Secuestrante. Son compuestos que inactivan al cianuro por unin a

l, por ejemplo: hidroxicobalamina o hidroxocobalamina (93,98,99), EDTA
di Co (100,101), otras sales de cobalto(102,103), compuestos formadores de
cianhidrinas como el a cetoglutarato cuyo efecto protector continua
siendo estudiado a nivel experimental (104-108); o compuestos que
generan la formacin de metahemoglobina, a la que a su vez, se une
el cianuro, por ejemplo: nitritos (68,93,109), 4- dimetilaminofenol (97).

Detoxificante. Son compuestos donantes de azufre como el tiosulfato,

que favorecen la metabolizacin enzimtica del cianuro y su
conversin a tiocianato, relativamente no txico, que se elimina
rpidamente del organismo (68,71,110).

Fisiolgico. El oxgeno parece ser un antagonista fisiolgico que puede

facilitar la disociacin del cianuro de la citocromo oxidasa (96).

Bioqumico. Son compuestos que disponen de mecanismos en gran

medida sin explicacin y sus acciones pueden estar relacionadas con
dianas intracelulares de cianuro que no sean la citocromo oxidasa (96).

En el tratamiento especfico de la intoxicacin con cianuro se hace uso de

diferentes clases de antdotos que se presentan en la tabla 2.
Tabla 2. Antdotos usados en la intoxicacin con cianuro

Todos los antdotos actualmente disponibles para tratar la intoxicacin por

cianuro, excepto el oxgeno, ejercen su accin sobre una base
toxicocintica, especficamente por reduccin del cianuro libre a nivel de los
tejidos (92,109).

CONCLUSIONES

Aunque pareciera ser que el cianuro no es un txico "moderno", tanto su

toxicodinamia como su toxicocintica y sus vas de detoxificacin continan
siendo motivo de estudio e investigacin. Cada vez que se propone un
mecanismo de unin del cianuro a un sitio de accin txica, cada vez que se
esclarece una va de detoxificacin (enzimtica o no enzimtica) del cianuro,
se est abriendo un camino a un potencial antdoto.

Influencia del consumo moderado de cerveza sobre la

toxicocintica del aluminio: estudio agudo

Influence of moderate beer consumption on aluminium

toxico-kynetics: acute study

A. Pea, I. Meseguer y M. J. Gonzlez-Muoz*

Departamento de Nutricin, Bromatologa y Toxicologa. Facultad de Farmacia.

Universidad de Alcal de Henares. Madrid. Espaa.

Direccin para correspondencia

RESUMEN

Objetivo: El aluminio constituye uno de los factores de riesgo descritos para la

enfermedad de Alzheimer y otros desrdenes neurodegenerativos, debido a su
accin oxidativa sobre el cerebro. Segn distintas investigaciones, parece ser que el
silicio es capaz de interferir en la cintica de este metal. De ah que, en el presente
trabajo se pretenda estudiar el efecto del consumo de la cerveza, como fuente de
cido silcico, sobre la biodisponibilidad del aluminio, as como su posible relacin en
la prevencin de la neurotoxicidad de este metal.
Material y mtodos: Para ello se ha analizado la influencia de la cerveza en la
cintica de absorcin y eliminacin del aluminio administrado a ratones machos, en
un tratamiento agudo de 3 das de duracin. Se utilizaron dos tipos de cerveza: con
y sin alcohol, y a dos dosis diferentes, una equivalente a un consumo moderado-
bajo en el hombre (0,5 L/da; 27,5 g alcohol/da), y otra a moderado-alto (1 L/da;
55 g alcohol/da). El aluminio se determin por espectrometra de masas de plasma
acoplado inductivamente y el silicio mediante espectrometra de emisin atmica de
plasma acoplado inductivamente.
Resultados: La suplementacin con cerveza, especialmente la cerveza con alcohol
y a dosis moderada alta, parece tener influencia sobre la toxicocintica del
aluminio, debido a su contenido en silicio: ste podra limitar la absorcin del
aluminio en el tracto gastrointestinal, incrementando su excrecin por va fecal.
Adems, se apunta una posible interaccin de ambos elementos a nivel de
distribucin y de excrecin va renal.
Conclusiones: El consumo moderado de cerveza podra ejercer un papel protector
frente al efecto txico del aluminio, metal considerado como uno de los factores
ambientales determinantes de la enfermedad de Alzheimer.

Palabras clave: Cerveza. Silicio. Aluminio. Toxicocintica. Estudio agudo.

ABSTRACT

Objective: Aluminium has lately been implicated as one of the possible causal
factors contributing to Alzheimer's disease and other neurodegenerative disorders
due to this metal is conducive to oxidative stress in the brain. According to different
researches, it has been suggested that silicon may interfere in the toxicokinetic of
this metal. The present study has examined the effect of beer consumption as a
source of silicon on the bioavailability of aluminium and the possible role of beer
consumption in averting aluminium's neurotoxicity.
Material and methods: In a three-day study, male rats were subjected to acute
exposure to aluminium while being given two types of beer, i.e., alcoholic and non-
alcoholic beer, to drink at two intake levels, one equivalent to moderate to low
consumption in humans (0.5 l/d; 27.5 g alcohol/d) and another equivalent to
moderate to high consumption in humans (1 l/d; 55 g alcohol/day). Aluminium and
silicon were determined by ICP-MS and ICPOES, respectively.
Results: The results obtained seem indicate that at moderately high levels of
alcoholic beer intake the silicon present in the beer was able to reduce aluminium
uptake in the digestive tract, increasing its excretion by faecal route. In addition, a
possible interaction of both elements at level of distribution and renal excretion is
suggested.
Conclusion: In consequence, moderate beer consumption, possibly affording a
protective factor for the toxic effect of aluminium, one of the environmental factors
for Alzheimer's disease.
Key words: Beer. Silicon. Aluminium. Toxicokinetic. Acute study.

Introduccin

La enfermedad de Alzheimer (EA) es un trastorno neurodegenerativo que constituye

la causa ms comn de demencia entre la poblacin de edad avanzada, siendo la
cuarta causa de muerte en pases desarrollados1,2. Se espera que en el ao 2047 la
prevalencia de esta enfermedad se cuadruplique en el mundo3,4.

Aunque la etiopatognesis de la EA es desconocida, los factores ambientales,

sumados a la predisposicin gentica, parecen participar en el desarrollo de esta
enfermedad. El aluminio (Al) puede ser uno de stos factores5,6, ya que este metal
favorece el estrs oxidativo en el cerebro, y ste se considera el factor de riesgo
mayoritario para EA y otros desrdenes neurodegenerativos7.

La toxicidad en el ser humano del Al est bien establecida5,8, siendo muy txico
incluso a bajos niveles de exposicin9. El rgano diana es el cerebro, por lo que es
fundamentalmente neurotxico, aunque afecta tambin al hueso y a los
eritrocitos10,11.

Debido a que la cintica de absorcin a nivel gastrointestinal del Al en individuos

sanos es lenta, y que la cintica de eliminacin a travs de la orina, va de
excrecin fundamental11,12, es rpida, los efectos adversos que sobre la salud tienen
niveles normales de exposicin van a ser mnimos, aunque inevitables13,14.

Por otra parte, se ha sugerido que el cido silcico o silicio (Si), limitara la
biodisponibilidad del Al, al prevenir su absorcin a nivel gastrointestinal15, y limitar
su reabsorcin a nivel renal16.

El Si biodisponible, es decir, en forma de cido silcico u orto-silcico, se encuentra

fundamentalmente en alimentos ricos en fibra y cereales con cscara, siendo la
cerveza una de las fuentes ms importantes en la dieta de este elemento17-19.

En el presente trabajo se pretende estudiar el efecto del consumo de la cerveza,

como fuente de Si, sobre la biodisponibilidad del Al, as como su posible relacin en
la prevencin de la neurotoxicidad de este metal.

Para ello, se ha realizado un estudio de intoxicacin aguda con Al de tres das de

duracin, evaluando el posible efecto protector de la cerveza. En esta primera etapa
se ha analizado la influencia de la cerveza en la cintica de absorcin y eliminacin
del aluminio en ratones machos, utilizando dos tipos de cerveza: con y sin alcohol;
y a dos dosis diferentes, una equivalente a un consumo moderado-bajo en el
hombre (0,5 L/da), y otra a moderado-alto (1 L/da).

Materiales y mtodos:

Materiales

Animales y protocolo experimental

El estudio fue llevado a cabo con ratones de la cepa NMRI, en el Centro de
Experimentacin Animal de la Universidad de Alcal de Henares.

Se utilizaron ratones machos de seis semanas de vida, distribuidos en diferentes

grupos de forma aleatoria. Las condiciones de estabulacin son las estndar en
experimentacin animal: temperatura ambiente de 21 C 1 C, humedad relativa
del 55% 10%, y con un ciclo diario de doce horas de luz (8:00-20:00) y doce
horas de oscuridad; y con acceso libre al agua y a la comida.

Se establecieron once grupos de animales, de 12 ratones cada uno, a los que se les
administr el ratamiento y/o intoxicacin aguda durante tres das mediante una
cnula esofgica. El tercer da, se introdujeron en jaulas metablicas para la
recogida de heces y orinas (24 horas). Despus se sacrificaron por exanguinacin
mediante pinchazo intracardaco, previamente narcotizados con halotano. Tanto el
mantenimiento como el sacrificio de los animales se llev a cabo segn la Directiva
86/609/EEC del 24 de noviembre de 198620.

Los diferentes grupos de animales, establecidos en funcin del tratamiento recibido,

han sido los siguientes:

- Grupo "control negativo": Agua desionizada.

- Grupo "control positivo": Aluminio, en forma de nitrato de aluminio
[Al(NO3)39H2O], a una concentracin de 450 mg/kg/da en agua desionizada.
- Grupo "cerveza dosis moderada-alta": 0,5 mL/da de cerveza con o sin alcohol,
equivalente a1 L/da en humano, previamente desgasificada.
- Grupo "cerveza dosis moderada-baja": 0,25 mL/da de cerveza con o sin,
equivalente a 0,5 L/da en humano, previamente desgasificada.
- Grupo "aluminio y cerveza dosis moderada-alta": 0,5 mL/da de cerveza con o sin
alcohol desgasificada y 450 mg/kg/da de nitrato de aluminio.
- Grupo "aluminio y cerveza dosis moderada-baja": 0,25 mL/da de cerveza con o
sin alcohol desgasificada y 450 mg/kg/da de nitrato de aluminio.
- Grupo "aluminio y cido silcico": 50 mg/L decido silcico, Si(OH)4, a razn de
0,5 mL/da y 450 mg/kg/da de nitrato de aluminio.

Cerveza

Las muestras de cerveza embotelladas utilizadas, cerveza con alcohol (5,5% Vol.) y
sin alcohol (< 1% Vol.), han sido suministradas por la compaa cervecera Mahou,
S. A.

Mtodos

Metodologa para el anlisis de elementos

El contenido de Al se determin mediante espectrometra de masas de plasma

acoplado inductivamente (ICP-MS) y, el contenido en Si, por espectrometra de
emisin atmica de plasma coplado inductivamente (ICP-OES), previa
mineralizacin por va hmeda de la materia orgnica, segn el protocolo propuesto
por Llobet y cols.21.

Tratamiento estadstico
Los resultados obtenidos se analizaron mediante el programa estadstico
Statgraphics 5.0. Los datos fueron sometidos a un anlisis de la varianza de una va
(one-way ANOVA), y las diferencias entre las diferentes medias fueron evaluadas
con los tests de comparaciones mltiples de LSD, con un intervalo de confianza del
95%.

Resultados y discusin

Determinacin de aluminio y silicio en muestras de cerveza

Los niveles de Al y Si encontrados en las cervezas empleadas en el estudio se

recogen en la tabla I. El contenido en Al determinado fue muy similar tanto para la
cerveza con como para la sin alcohol (0,40 y 0,39 g/g, respectivamente).

Estos resultados se encuentran dentro del rango aportado por Lpez y cols.22 de
0,037-0,795 g Al/mL, y son concordantes con los obtenidos por otros autores para
cervezas embotelladas: 0,49 0,11g Al/mL23 y 0,56 0,1 g Al/mL24.

Segn la Agencia para las Sustancias Txicas y el Registro de la Enfermedad,

ATSDR, de los EE.UU., el mnimo nivel de riesgo (MRL) para el Al es de 2,0
mg/kg/da25. Por tanto, el consumo diario de 1 L de cerveza para un individuo de 70
kg aportara el 0,29% de este MRL, no representando riesgo alguno para la salud.

En relacin al contenido en Si, la concentracin media de la cerveza con alcohol ha

sido de 24,56 2,45 g/g y 18,21 2,48 g/g en la de sin alcohol, valores que
resultaron ser significativamente diferentes (p < 0,001).

Aunque ambas concentraciones son inferiores a los datos previamente publicados

por Granero y cols.23 y Sendra y Carbonell26 (36,8 y 36,0 g/mL respectivamente),
se encuentra dentro del rango de valores aportados por Sripanyakorn y cols.19,
10,1-35,0 mg Si/mL para cervezas embotelladas.

Efecto de la administracin de cerveza y silicio sobre la toxicocintica del

aluminio

Niveles de Al en heces

La suplementacin de cerveza parece influir sobre la toxicocintica del Al presente

en la dieta. As, al comparar los animales control negativo con los que han recibido
los diferentes tipos y dosis de cerveza, puede observarse un incremento en los
niveles fecales de Al, si bien las diferencias encontradas no han resultado ser
significativas (tabla II). Por otra parte, los ratones que han recibido cerveza con
alcohol, a ambas dosis, excretan ms Al (276,98 y 201,66 g/g) que los
suplementados con cerveza sin alcohol (198,27 y 145,41 g/g).

Estos efectos podran ser atribuidos al Si contenido en esta bebida, ya que este
elemento es capaz de limitar la absorcin del Al diettico en el tracto
gastrointestinal, incrementando su excrecin por va fecal27. De los dos tipos de
cerveza estudiados, la que parece ejercer un efecto ms acentuado es la cerveza
con alcohol, a la dosis moderada-alta, aunque sin alcanzar significancia. Hay que
indicar que la cerveza con alcohol presenta niveles de Si ligeramente superiores a la
sin alcohol (tabla I), por lo que hipotticamente este resultado sera esperado.

Cuando los animales son intoxicados con Al y tratados con cido silcico, los niveles
fecales de Al aumentan de forma significativa (p < 0,001) respecto a los ratones
intoxicados control positivo (2.878,94 vs 1.633,94 g/g). Ello indicara una posible
interaccin del Si con el Al, dificultando la absorcin de este ltimo a nivel
gastrointestinal.

Estos resultados concuerdan con los obtenidos por otros autores 27,28. El posible
mecanismo de esta interaccin sera la formacin de especies de aluminosilicatos,
como los hidroxi-luminosilicatos (HAS)9,15. Estos compuestos son una fase crtica
secundaria mineral del ciclo biogeoqumico del Al, y se ha sugerido que se forman a
pH fisiolgico de 4,5 aproximadamente9.

Un efecto similar se observa cuando el cido silcico es administrado a travs de la

cerveza en los animales intoxicados con Al. As, todos los grupos tratados con
cerveza presentaron niveles fecales de Al superiores a los ratones intoxicados
control positivo, aunque slo se encontraron diferencias significativas (p < 0,001)
para el grupo de los ratones tratados con cerveza con alcohol, a dosis moderada-
alta. Por tanto, el Si contenido en la cerveza parece ejercer una interaccin en el
mismo sentido que la observada tras la administracin de cido silcico.

Asimismo, la posible interaccin de Al y Si a nivel gastrointestinal parece ser

dependiente de la dosis de Si presente en el lumen, ya que la cerveza con alcohol
es la que contiene mayor concentracin de cido silcico, como se ha comentado
anteriormente. De hecho, Birchall y cols.29, sugieren que la interaccin Al/Si tiene
lugar cuando las concentraciones de cido silcico alcanzan un umbral determinado.

A la vista de estos resultados podramos sugerir que la cerveza podra ejercer un

papel protector frente a la intoxicacin por Al a travs de la dieta, al dificultar la
absorcin de ste en el tracto gastrointestinal.

Niveles de Si en heces

El Si contenido en la cerveza, cido silcico en forma monomrica o cido

ortosiclico18,30, es rpidamente absorbido y excretado a travs de la orina12,19, de
ah que no se hayan detectado niveles de Si en las heces de los animales
estudiados (tabla II). Estudios de cintica realizados con cido silcico en humanos,
muestran tambin que la cintica de absorcin/excrecin es rpida para este
elemento14.

Niveles de Al en orina

A pesar de que el Al es poco biodisponible, una pequea, pero suficiente cantidad,

se absorbe en el tracto gastrointestinal28,31, de ah que la excrecin de Al en orina
sea significativamente mayor (p < 0,001) en el grupo de ratones intoxicados con
este metal, respecto al control negativo (1,03 vs 0,73 g/g) (tabla III).

Los niveles urinarios de Al de los ratones suplementados con los diferentes tipos de
cerveza han resultado ser inferiores a los del grupo control negativo. Esto podra
atribuirse a que la absorcin a nivel gastrointestinal del Al diettico estara
dificultada en estos grupos, como se ha comentado anteriormente.

Por otro lado, se puede observar que los niveles urinarios de Al de estos grupos son
mayores conforme los niveles de Si aportados aumentan. Es decir, los grupos a los
que se les aportaron mayores niveles de Si, que fueron los suplementados con
cerveza con y sin alcohol a dosis moderada-alta, excretan ms Al por orina (0,67 y
0,49 g/g), que los suplementados con menos Si, cerveza con y sin alcohol a dosis
moderada-baja (0,44 y 0,47 g/g).
Este hecho indicara que el cido silcico tambin podra actuar sobre el Al a nivel
renal, impidiendo la reabsorcin del Al, lo cual facilitara su excrecin por orina27,
siendo en nuestro caso dosis-dependiente. Bellia y cols.27 sugieren que existir una
interaccin en el tbulo contorneado proximal de las nefronas entre el Si y Al, lo
que permitira su co-deposicin. Sin embargo, para Reffitt y cols.16 esta hiptesis no
est clara.

Respecto a los grupos de ratones que fueron intoxicados con Al, la suplementacin
con Si en forma decido silcico o a travs de la cerveza, tambin produce una
disminucin (p < 0,001) de los niveles de Al en orina al compararlos con los
animales control positivo. Adems, se observa de igual modo que, en funcin de la
dosis administrada de Si, los niveles urinarios de Al mantienen tambin un
comportamiento dosis-dependiente.

As, el grupo tratado con cido silcico y Al y, por tanto, el que recibi la mayor
concentracin de Si, present niveles de Al urinario superiores a todos los grupos
de ratones suplementados con cerveza y Al, siendo significativa la diferencia (p <
0,001) con los suplementados con menores concentraciones de Si (cerveza con y
sin alcohol a dosis moderada-baja).

Estos resultados podran avalar la hiptesis del posible efecto protector del cido
ortosilcico sobre el Al, que funcionara, por tanto, a nivel gastrointestinal,
dificultando la absorcin del l15,27,28 y a nivel renal, posiblemente disminuyendo
la reabsorcin del Al27, de forma dosis-dependiente.

Niveles de Si en orina

Al comparar los niveles urinarios de Si del grupo control positivo con los del control
negativo (15,20 vs 19,74 g/g) se observa una disminucin significativa (p <
0,001) de los niveles de ste en los ratones intoxicados con Al (tabla III). Ello
reforzara la hiptesis de una interaccin de ambos elementos a nivel del tracto
gastrointestinal.

Este efecto tambin puede observarse al comparar los niveles urinarios de Si de los
grupos control suplementados con cerveza con alcohol a ambas dosis (16,86 y 9,44
g/g) con los correspondientes intoxicados con Al (12,82 y 4,72 g/g), siendo la
diferencia significativa (p < 0,001). Sin embargo, no ocurre lo mismo en los
animales tratados con cerveza sin alcohol, cuyos niveles de Si fueron similares a los
de los respectivos controles. La presencia de alcohol parece ser el factor
discriminante. As, Reffitt y cols.16 apuntan la posibilidad de que el alcohol ejerce un
efecto sinrgico con el Si en la excrecin urinaria de Al, por lo que, al eliminarse
conjuntamente14, el sinergismo sera recproco.

Por otra parte, los niveles urinarios de Si de los animales control suplementados
con cerveza resultaron ser menores a los del control negativo. Reffitt y
cols.16 atribuyen este hecho a la existencia de algn componente de la cerveza que,
de alguna manera, favorezca la distribucin del Si en el organismo.

Niveles de Al en Sangre

No se encontraron diferencias significativas al comparar los niveles sanguneos de

Al de los ratones control positivo con los de los ratones control negativo (1,09 vs
0,95 g/g) (tabla IV). Este dato sera indicativo de la escasa absorcin del Al, y de
su rpida distribucin una vez que ha penetrado en el organismo11,12,32.
Los niveles sanguneos de Al de los grupos suplementados con los diferentes tipos
de cerveza fueron menores en todos los casos que los del control negativo, siendo
la diferencia significativa (p < 0,001) en los que se les administr la dosis de
cerveza moderadabaja. Este hecho pondra tambin de manifiesto la interaccin del
cido silcico contenido en la cerveza sobre la absorcin del Al diettico, como se ha
comentado anteriormente.

Respecto a los diferentes grupos de ratones intoxicados con Al, se observa tambin
que los niveles de Al en sangre son menores en todos los grupos que han tenido un
aporte de cido silcico, respecto al control positivo, siendo esta diferencia
significativa (p < 0,001) en todos los grupos tratados con cerveza.

Al comparar estos ltimos resultados, se observa de nuevo, que existira una

relacin entre los niveles sanguneos de Al y la concentracin de Si administrada. Es
decir, a mayor concentracin de Si aportado, mayor presencia de Al en sangre. As,
entre todos los grupos tratados con Si y Al, los animales que presentaron mayores
niveles de Al plasmticos son aquellos suplementados con cido silcico (0,90 g/g),
luego los tratados con cerveza con alcohol a dosis moderada- alta (0,73 g/g), y as
sucesivamente, conforme el aporte de Si disminuye.

Esto podra ser debido posiblemente a que el cido silcico aportado favorece de
alguna forma la presencia del Al en sangre, para su posterior excrecin a travs de
la orina, hecho que se observara en los niveles urinarios de aluminio, que
aumentaran con la dosis aportada de Si (tabla III), y/o a que el Si dificultara de
algn modo la distribucin tisular del Al, aumentando, por tanto, la presencia de
ste en sangre27 aunque en este punto existen discrepancias, ya que otros
investigadores ofrecen resultados contrarios16.

Niveles de Si en Sangre

Hay que indicar que los niveles de Si en sangre no se han detectado, debido,
posiblemente, a la cintica de absorcin/eliminacin rpida del cido silcico14. Esto
sera debido al elevado aclaramiento renal de este elemento mineral, lo que sugiere
que el Si presente en suero es filtrable por el rin existiendo una baja reabsorcin
en la nefrona16.
Conclusiones

El cido silcico aportado en la dieta tras un tratamiento agudo, parece interaccionar

con el Al a tres niveles: a) disminuyendo su biodisponibilidad a nivel del tracto
gastrointestinal, dificultando su absorcin y facilitando su excrecin fecal,
posiblemente por la formacin de HAS; b) limitando su reabsorcin en los tbulos
renales, y por tanto, facilitando su excrecin urinaria, y c) reduciendo la cintica de
distribucin tisular rpida de este mineral una vez en el interior del organismo.

La cerveza, debido a su contenido en Si, podra ejercer un papel protector frente a

la toxicocintica del Al, siendo la cerveza con alcohol y a una dosis moderada- alta,
la que parece disminuir la biodisponibilidad del Al de forma ms eficaz.

Por tanto, un aporte moderado de cerveza podra ser considerado en los hbitos
dietticos de la poblacin como un posible factor protector frente a la
neurotoxicidad del Al. Sin embargo, es necesaria la realizacin de un estudio
crnico, ms exhaustivo, con el fin de confirmar estos efectos.