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Lowry PDF
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Lowry-2 (Farmacia)
Materiales
.- Tubos de ensayo
-.- Tubos Falcon (50 mL)
.- Pipetas
.- Colormetro
.- Cubetas de colormetro
.- Agitadores de tubos
Reactivos
- Reactivo A: Na2CO3 al 2%, NaOH 0,1 M
- Reactivo B1: CuSO4 5H2O al 1%
- Reactivo B2: tartrato sdico-potsico al 2%
- Reactivo C: Se prepara, mezclando los reactivos: A, B1 y B2, en proporciones 50:0,5:0,5 (en volumen)
- Reactivo Folin-Ciocalteau: reactivo comercial diluido a 1/4
- Solucin patrn de albmina de suero bovino (BSA) (2 mg/mL)
- Muestra problema
3.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Para determinar la concentracin de protenas de la muestra problema se construye una curva
patrn o de calibrado a partir de una solucin patrn (BSA) (2 mg/mL). La concentracin que tienen
las muestras problema se determina por interpolacin de los valores de absorbancia en la curva patrn.
El tubo 0, que slo contiene agua destilada y los reactivos, sirve de blanco para el ajuste del
colormetro a cero de absorbancia.
Pasos a seguir:
a) Numerar del 0 al 6, tubos de plstico de 10 mL
b) Pipetear las cantidades de agua, solucin patrn de albmina y solucin problema sealadas en la
tabla.
c) Preparar el reactivo C, a partir de A, B1 y B2
d) Pipetear a todos los tubos el reactivo C. Mezclar el contenido de cada tubo y dejarlo reposar 15
minutos en oscuridad (dentro de la taquilla).
e) A continuacin aadir a todos los tubos el reactivo de Folin (diluido 1/4), mezclando bien por
agitacin. Dejar reposar 30 minutos en la oscuridad para que as se desarrolle completamente la
reaccin coloreada.
f) Leer las absorbancias en el colormetro a 580 nm. Previamente el aparato se ajusta a
Absorbancia=0 con el blanco (tubo n 0); de esa forma slo se mide el color producido por las
protenas, puesto que se resta el color debido a los reactivos. Anotar la medida de absorbancia en la
tabla.
problema
Reactivo C
Folin diluido
--
5 mL
0,5 mL
0,1 mL
--
5 mL
0,5 mL
0,8 mL
0,2 mL
--
5 mL
0,5 mL
0,7 mL
0,3 mL
--
5 mL
0,5 mL
0,6 mL
0,4 mL
--
5 mL
0,5 mL
0,7 mL
--
0,3 mL
5 mL
0,5 mL
0,5 mL
--
0,5 mL
5 mL
0,5 mL
Tubo
Agua
1,0 mL
0,9 mL
Patrn
(2
mg/mL)
--
Abs.580nm
[protenas]
mg/mL
Lowry-3 (Farmacia)
5.- CUESTIONES
5.1.- Cmo debera ser la concentracin de protenas de los tubos 5 y 6?. Igual o diferente?
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