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Explique la tcnica de ELISA (Enzyme-Linked Inmuno Sorbent Assay)

indirecto y sus aplicaciones en medicina.
ELISA son las siglas por las que se conoce al ensayo por inmunoabsorcin
ligado a enzimas (en ingls enzyme-linked immunosorbent assay). Se trata de
una tcnica de laboratorio que fue diseada por cientficos suecos y
holandeses en 1971, que permite detectar pequeas partculas
llamadas antgenos, que habitualmente son fragmentos de protenas. La
identificacin es especfica, es decir, consigue que pequeos segmentos de
protenas destaquen y no puedan ser confundidas con otras.
Para poder identificar los antgenos se utilizan molculas con dos componentes
acoplados: un anticuerpo (que se une al antgeno de forma especfica) y
una enzima (que se activa y seala la unin al antgeno). Antes del
descubrimiento del ELISA se utilizaban molculas radioactivas en vez de
enzimas, lo que supona un riesgo aadido innecesario en el laboratorio y un
mayor coste.
Gracias a esta tcnica se han podido realizar estudios cientficos en campos
como la biologa, la bioqumica y la medicina. En el hospital se utiliza
principalmente para identificar grmenes agresores que se encuentran en
la sangre, orina, esputos, etctera. La tcnica pronto se generaliz con el
empleo de equipos simples y muy baratos que se utilizan todava hoy en
muchos centros diagnsticos de todo el mundo.
ELISA indirecto: se realiza de forma similar al ELISA directo, pero en este
caso se aade primero un anticuerpo sin enzima y despus uno con enzima.
De esa forma, la seal que emite el enzima es mucho ms potente y la prueba
es ms sensible.

ELISA indirecto. Las placas ELISA se preparan de la misma forma a la

anterior. Los controles positivos y negativos son los mismos. El sistema de
deteccin emplea dos anticuerpos: uno primario contra el antgeno y uno
secundario marcado contra el primario. La deteccin tiene mayor
sensibilidad por presentar una amplificacin de seal debida a la unin de
dos o ms anticuerpos secundarios por cada primario. Es el ensayo ms
popular, como lo es la inmunofluorescencia indirecta, pues un mismo
secundario marcado y un mismo sistema enzimtico permiten cuantificar
una gran variedad de antgenos; por eso es un mtodo ms polivalente y
barato, aunque se pierda algo de precisin por tener un eslabn ms con
respecto al mtodo directo. La dilucin de la solucin que contiene el
anticuerpo primario por ejemplo, suero sanguneo es un factor muy
importante a tener en cuenta para evitar la aparicin de falsos negativos, ya
que si la muestra est muy diluida, no saldr positiva si la titulacin de
anticuerpos es muy baja. (Es decir, aunque los anticuerpos estn
presentes, la prueba no da positivo porque la concentracin de anticuerpos

especficos contra el antgeno que est pegado en el fondo del pocillo no es

suficiente como para dar una seal detectable.).
El ELISA indirecto es el mtodo de eleccin para detectar la presencia de
anticuerpos sricos contra el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH),
agente causante del sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Segn
esta tcnica, protenas recombinantes de la envoltura y el ncleo del VIH se
absorben como antgenos en fase slida a los pocillos. Las personas afectadas
de VIH producen anticuerpos sricos contra eptopos en estas protenas
vricas. En general, el ELISA indirecto permite detectar anticuepos sricos
contra VIH desde las primeras seis semanas de una infeccin.