1) Indique el fundamento de las pruebas rápidas para hepatitis B y VIH

Fundamento de prueba rápida para hepatitis B y VIH

Existen en el mercado multitud de pruebas “rápidas” (la mayoría de ellas

basadas en ensayos de inmunoadherencia por inmunocromatografía) para la
detección de HBsAg (Antígeno de superficie del virus de la hepatitis B), que se
caracterizan por realizarse con suero, plasma o sangre total en unos pocos
minutos

1.1 Prueba rápida para hepatitis B

La prueba rápida OnSite HBsAg Combo es un inmunoensayo de cromatografía

lateral para la detección cualitativa del antígeno de superficie de la Hepatitis B
(HBsAg) en plasma, suero o sangre total humana. Este método es usado como
tamizaje y ayuda diagnóstica de infección con el virus de la Hepatitis B (VHB),
esta consiste en:
1) una membrana con conjugado coloreado de borgoña que contiene
anticuerpos anti-HBsAg conjugados con oro coloidal (conjugado HBsAg Ab) y
un control de anticuerpo conjugado con oro coloidal,

2) una membrana de nitrocelulosa que contiene la banda de prueba (banda T) y

una banda de control (banda C).

3)La banda T está pre-recubierta con otro anticuerpos antiHBsAg, y la banda C

está pre-recubierta con un control de anticuerpo.

FUNDAMENTO
Paso 1: Lleve las muestras y componentes del ensayo a temperatura ambiente
si es refrigerada o congelada. Mezcle bien la muestra antes del ensayo una vez
descongelado.
Paso 2: Cuando esté preparado para realizar la prueba, abra el empaque y
saque el dispositivo. Colóquelo sobre una superficie limpia y plana.
Paso 3: Asegúrese de marcar el dispositivo con la identificación del paciente.
Paso 4: Llene el gotero con la muestra ya con el gotero en posición vertical,
dispensar 1 gota (40-50 µl- microlitro) de suero/plasma o 1 gota (45- 55
µL-microlitro) de sangre total en el pozo de muestra (pozo S) asegurándose de
que no hayan burbujas. Inmediatamente agregue 1 gota (aprox. 30-40 µL) de
Diluyente de muestra en el pozo de muestra (pozo S) con la botella en posición
vertical.
Paso 5: Contabilice el tiempo.
Paso 6: Los resultados deben ser leídos a los 15 minutos. Los resultados
positivos o reactivos se hacen visibles transcurrido 1 minuto.
No lea los resultados después de 20 minutos. Para evitar confusiones descarte
el casete después de leer el resultado.
 1.2 Pruebas de VIH

Hay tres tipos de pruebas disponibles: pruebas de ácido nucleico (NAT, por
sus siglas en inglés), pruebas de antígenos y anticuerpos, y pruebas de
anticuerpos. Por lo general, las pruebas del VIH se hacen con muestras de
sangre o de secreción bucal. También se pueden hacer con muestras de orina.

1.2.1. Las pruebas de ácido nucleico (NAT) buscan el virus mismo en la sangre
e implican extraer sangre de una vena. La prueba puede indicar si la persona
tiene el VIH o la cantidad de virus presente en la sangre (se conoce como
prueba de carga viral de VIH). Aunque las pruebas de ácido nucleico pueden
detectar el VIH antes que los otros tipos de prueba, son muy caras y no se
usan rutinariamente como pruebas de detección a menos que la persona haya
tenido recientemente una exposición de alto riesgo o una posible exposición y
presente síntomas tempranos de infección por el VIH.

1.2.2. Las pruebas de antígenos y anticuerpos buscan tanto los antígenos del
VIH como los anticuerpos contra el virus. El sistema inmunitario produce
anticuerpos cuando se expone a un virus, como el del VIH. Los antígenos son
sustancias extrañas al cuerpo que provocan la activación del sistema
inmunitario. En las personas con infección por el VIH, se produce un tipo de
antígeno llamado p24 incluso antes de que se produzcan anticuerpos. Las
pruebas de antígenos y anticuerpos se recomiendan cuando los análisis se
hacen en un laboratorio y ya son comunes en los Estados Unidos. Esta prueba
de laboratorio implica extraer sangre de una vena. También hay una prueba
rápida de antígenos y anticuerpos disponibles que se hace mediante una
punción del dedo.

1.2.3Las pruebas de anticuerpos solo buscan los anticuerpos contra el VIH en

la sangre o en secreciones bucales. En general, después de la infección, las
pruebas de anticuerpos que se hacen con la sangre extraída de una vena
pueden detectar el VIH antes que las que se hacen con la sangre de una
punción del dedo o con secreciones bucales. La mayoría de las pruebas
rápidas del VIH y la única prueba aprobada en la actualidad para hacerse uno
mismo son pruebas de anticuerpos.

2) ¿Cuántos tipos de técnicas de ELISA existen?. Fundamente cada una de ellas.

https://www.medigraphic.com/pdfs/cosmetica/dcm-2012/dcm123j.pdf
https://www.e-allscience.com/blogs/articulos/elisa-que-es-en-que-consiste-cual
es-son-los-distintos-tipos-de-este-ensayo-y-en-que-se-diferencian
● En todos los ELISA se utiliza una enzima unida covalentemente a un
antígeno o a un anticuerpo.
● ELISA permite la detección de anticuerpos cuando la enzima está unida a un
anticuerpo antiinmunoglobulina humana, y de antígenos cuando la enzima
está unida a un anticuerpo contra un antígeno específico.
● TIPOS:
★ ELISA DIRECTO: Es un método rápido y sencillo porque la unión de
la enzima va directamente unido al anticuerpo. La placa de
 poliestireno la cubrimos con la solución del antígeno y utilizamos el
anticuerpo para detectar el antígeno, normalmente los anticuerpos
van a ir unidos a unas enzimas porque es una reacción enzimática y
posteriormente le vamos a añadir un sustrato que tiene un color
cuando la enzima reacciona con el sustrato el color cambia y nos da
un color diferente que puede ser detectado mediante una
determinada longitud de onda por un aparato que es el
espectrofotómetro.
★ ELISA INDIRECTO: Este método tiene la ventaja de que es más
sensible que el método directo. En la placa utilizaremos la solución
para cubrir en los distintos pocillos con nuestra mezcla de antígenos y
utilizaremos un primer anticuerpo que va a detectar el antígeno de
manera específica y un segundo anticuerpo que es el que lleva la
enzima este segundo anticuerpo se unirá al primer anticuerpo va a
reconocer al primer anticuerpo posteriormente añadiremos el sustrato
y la enzima del segundo anticuerpo desarrollará un color la intensidad
de color será directamente proporcional a la cantidad de antígeno que
teníamos en la muestra
★ ELISA SÁNDWICH: Lo que se hace aqui es tapizar la placa con un
primer anticuerpo después de realizar los lavados utilizamos la
mezcla de la solución en la que queremos detectar el antígeno con lo
cual el antígeno va a quedar inmovilizado a través de la unión el
primer anticuerpo que a su vez se encuentra unido a la placa, también
después de lavar el exceso de solución de antígeno que no se ha
pegado utilizaremos un segundo anticuerpo que se va a unir
directamente al antígeno de tal manera que tendríamos el antígeno
unido por un lado por el primer anticuerpo que está pegado a la placa
y por el segundo anticuerpo es el que tiene la enzima y cuando
añadimos el sustrato es el que va a desarrollar el color
★ ELISA COMPETITIVO: Aqui la placa se cubre con una cantidad
conocida de antígeno y utilizamos la solución con nuestro antígeno
problema cuando añadimos el primer anticuerpo se va a poder unir al
antígeno que está en la placa, como posteriormente vamos a lavar
todo el antígeno que se une a todo el anticuerpo que está en solución
será eliminado de la placa, es una ELISA inverso a mayor cantidad de
color menor concentración del antígeno en nuestro problema.

3) Importancia de la técnica de Western Blot.

4) Explique la diferencia entre una prueba rápida y técnica de ELISA
● Una de las principales diferencias entre ambos tipos de técnicas es la
capacidad de cuantificar los niveles de anticuerpos, ya que las pruebas
rápidas son pruebas cualitativas (positivo o negativo) y no permiten
 cuantificarlos como lo hace el Test de Elisa. Además, las pruebas
rápidas disponibles en la actualidad reportan bajos niveles de
sensibilidad, los que bordean el 50%.
● Mientras que los test rápidos se aplican de un modo que se podría asemejar a
una prueba rápida de embarazo (pero con una muestra de sangre en lugar de
orina), con resultados binarios (es decir, sí o no) disponibles en cosa de
minutos, el test de Elisa es más completo.
● Por lo tanto, el Test de Elisa es cuantitativo permitiendo medir niveles
de anticuerpos, es decir de inmunidad. Hay disponibles para medir
IgM(inmunoglobulina M), IgA e IgG, y la sensibilidad reportada en
promedio es de un 60-70%, considerando la toma de muestra después
del 6º a 7ºdía de síntomas.
● Del mismo modo, conocer este valor cuantitativo es relevante ya que, a
medida que una persona tenga más anticuerpos en su organismo, es más
probable que desarrolle inmunidad a la enfermedad.
● La metodología que se utiliza para una prueba de Elisa se podría resumir en
pocas palabras así: hay que colocar una muestra de sangre, suero o plasma en
una placa cubierta con una proteína viral. Si la persona tiene anticuerpos
contra el virus, estos se unirán a la proteína. "Para identificar estos complejos
de proteínas y anticuerpos virales, los científicos deben introducir una
molécula que se volverá fluorescente en presencia de las moléculas unidas"
● Eso sí, los tiempos aquí varían, ya que los exámenes de laboratorio
necesitan horas de procesamiento para entregar sus resultados.

https://seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/seimc-proc
edimientomicrobiologia50.pdf

https://www3.paho.org/relacsis/index.php/es/areas-de-trabajo/grupo-red-fci/61-foros/consult
as-becker/1141-deteccion-de-vih-mediante-la-prueba-rapida

http://www.cerovihencanarias.com/pruebas-rapidas/pruebas-rapidas-de-vih/
https://www.savyondiagnostics.com/wp-content/uploads/2017/07/QuickStripe_Hepatitis_B_4
1104S_V01-09.2014.pdf

https://www.empireo.es/enfermedadestransmisionsexual/hepatitis-b/#:~:text=Prueba%20r%
C3%A1pida%20de%20hepatitis%20B,sea%20un%20buen%20marcador%20precoz.