REACCIONES QUIMICAS DE LOS AMINOACIDOS

CHEMICAL REACTIONS OF AMINO ACIDS

Wilson Javier Martnez (Facultad de ciencias agropecuarias, Ing. Agronmica, UPTC, estudiante, cd.: 201520669, wilson.martinez02@uptc.edu.co)
Camilo Rojas Cuta (Facultad de ciencias bsicas, Lic. Biologa, UPTC, estudiante, cd.: 201322329, camilorojas02@uptc.edu.co)
RESUMEN
En esta prctica se realiz una de las tcnicas ms sencillas para identificacin de aminocidos que fue la
combinacin de la cromatografa en capa fina con la reaccin de la ninhidrina, con la cual se pueden identificar los
aminocidos por la tincin color morado o magenta que se presenta en ellos, excepto con la prolina, la cual, da un
tono amarillo al reaccionar con la ninhidrina debido a que no produce amonio al reaccionar con ella, lo que indica
que los dems aminocidos si presentaron esta reaccin.
En la segunda parte, en el desarrollo de la prctica se realizaron diferentes ensayos (ninhidrina, Adamkiewis,
Xantoproteico, reaccin de los Tiogrupos) con el objetivo de identificar aminocidos presentes en muestras
conocidas como la que preparamos de Tecoma Stan al 15%, tambin de Albumina de huevo, gelatina, triptfano y
formaldehido; debido a la especificidad de cada una de estas pruebas y a las caractersticas estructurales de cada
aminocido se consigui reconocer la presencia o ausencia de ellos en las muestras analizadas.

PALABRAS CLAVE: Ninhidrina, Adamkiewis, Xantoproteico, reaccin de los Tiogrupos, Acetona, Prueba
calorimtrica, cromatografa.

ABSTRACT
In practice one of the simplest techniques for identification of amino acids was the combination of thin layer
chromatography with ninhydrin reaction, with which one can identify the amino acids by the colored stain purple or
magenta presented performed in them, except proline, which gives a yellow tone to react with ninhydrin because not
produce ammonium react with it, indicating that the other amino acids if this reaction presented.
In the second part, in developing practical different tests (ninhydrin Adamkiewis, xanthoproteic, reaction Tiogrupos)
were performed in order to identify amino acids in samples known as the one we prepared Tecoma Stan 15%, also
egg albumen, gelatin, tryptophan and formaldehyde; due to the specificity of each of these tests and structural
characteristics of each amino acid was achieved recognize the presence or absence of them in the samples analyzed.

KEYWORDS: Ninhydrin Adamkiewis, xanthoproteic, reaction Tiogrupos, Acetone, calorimeter testing,

chromatography.

1. INTRODUCCION
Los aminocidos que constituyen alas
protenas, son substancias que tienen como
caracterstica general el hecho de poseer un
carboxilo libre y un grupo amino, situado en
el carbono alfa con respecto al carboxilo. En
todos los aminocidos alfa que forman a las
protenas, el grupo amino alfa es un
grupoprimario, es decir que no tiene
sustituyentes. La nica excepcin ocurre con
la prolina, que es un aminocido, ya que su
grupo es secundario. Los aminocidos
difieren entre s nicamente por las
caractersticas del resto de su molcula o
cadena lateral (R), de manera que su frmula
general es:

Imagen 1: Composicin de un aminocido.

Image 1: Composition of an amino acid.
Las propiedades de cada aminocido dependen
tanto de su grupo carboxlico como de su grupo
amino alfa, y de su cadena lateral (R). En un
polmero lineal de aminocidos o poli pptido,

de todos los grupos carboxilo alfa y amino de los

aminocidos que intervienen, solo quedan libres
un grupo amino alfa, el grupo terminal y un
grupo carboxilo alfa, el grupo carboxilo
terminal. As pues, en una protena las cadenas
laterales de los aminocidos que la constituyen,
son las que influyen de manera directa en las
propiedades de cada zona a lo largo de la cadena
polipeptdica y, en consecuencia, determinan
tambin en gran medida su comportamiento. Una
de las propiedades ms importantes de las
cadenas laterales de los aminocidos, es su
capacidad de interaccin con los solventes
acuosos o con los reactivos que permiten su
identificacin, es decir su grado de polaridad o
no polaridad.
2. OBJETIVOS
Realizar pruebas calorimtricas que permiten el
reconocimiento de aminocidos.
Familiarizarse con las tcnicas de cromatografa
en papel filtro.
Separar varios aminocidos por cromatografa.
3. PROCEDIMIENTO
EXPERIMENTAL
Parte I
Tomamos un papel filtro, lo doblamos en
cuatro partes, sealamos el punto medio y un
punto de referencia en cada cuadrante que se
form en el papel, en cada uno de esos
puntos, con ayuda de un capilar, colocamos
una pequea muestra de (Prolina, Solucin
al 15% de Tecoma Stans, albumina de huevo
y Felilalanina) respectivamente; luego
impregnamos el papel con Acetona y luego
lo secamos por medio de calor hasta que
reaccionara y se identificara la presencia o
ausencia de aminocidos. (Colores morado o
fucsia).
Parte II
Reaccin con la Nihidrina

Imagen 2: Estructura qumica de la Nihidrina

Image 2: Chemical structure of ninhydrin

Todas la aminas primarias (y por lo tanto

tambin los alfa-aminocidos) reaccionan con la
nihidrina en presencia de calor dando dixido de
carbono, amoniaco y un aldehdo que contiene
un tomo de carbono menos que el compuesto
original.
En cuatro tubos de ensayo, aadimos un vol de
0,5 de (Albumina de huevo, una solucin de
aminocidos, sacarosa y el extracto de las hojas
de Tecoma Stans al 15%) respectivamente; a
cada tubo de ensayo le agregamos 0,5ml de
Hihidrina, agitamos calentamos a bao de mara
y esperamos la coloracin en cada tuvo.
Reaccin de Adamkiewics
En cuatro tubos de ensayo, aadimos un vol de
2ml de (Albumina de huevo, gelatina, triptfano
y la solucin al 15% de Tecoma Stans)
respectivamente; luego aadimos 1ml de cido
sulfrico; agitamos con cuidado, calentamos a
bao de baria y esperamos la reaccin.
Reaccin Xantoproteica

Imagen 3: Estructura qumica de la Fenilalanina

Image 3: Chemical structure of Phenylalanine

En 4 tubos de ensayo agregamos 1ml de

(Albumina de huevo, fenilalanina, sacarosa y el
extracto de la planta al 15%) respectivamente,
despus adicionamos 0,5ml de cido ntrico
concentrado a cada tubo; agitamos, calentamos
en bao de mara y esperamos la reaccin.
Reaccin de los Tiogrupos

Imagen 4: Estructura qumica de la Cisteina

Image 4: Chemical structure of Cysteine

En cuatro tubos de ensayo agregamos un

volumen de 1ml de (Albumina de huevo,
Cisteina, Hidroxido de potasio y el extracto de la
planta al 15%) respectivamente, a cada tubo de
ensayo le agregamos 3 gotas de acetato de
plomo, agitamos, calentamos en bao de mara y
esperamos la reaccin.
4. RESULTADOS Y ANALISIS
Parte I

Imagen 5: Montaje identificacin de aminocidos por

cromatografa.
Image 5: Mounting amino acid identification by
chromatography.

NIHIDRINA:
La
ninhidrina
reacciona
especficamente con el grupo de a-amino de los
aminocidos, ya sean libres o bien unidos
mediante enlaces peptdicos.
La ninhidrina a Ph entre 4 y 8 es un oxidante
muy fuerte y siempre reacciona con los grupos
de a-amino libreando amonio, el cual se
condensa con la ninhidrina reducida y con otra
molcula de ninhidrina formando un compuesto
coloreado que vara de azul a violeta prpura. [1]
La primera reaccin que se hizo evidente fue en
la Fenilalanina y posteriormente en la albumina
de huevo, dando una tonalidad fucsia indicando
la presencia de aminocidos, como se ve en las
imgenes anteriores.
En el caso de la prolina, no se manifest con un
color purpura, ya que su grupo es secundario y
reacciono dando un color amarillo.
En la solucin de Tecoma Stans al 15% n o
tuvimos ningn tipo de reaccin, eso pudo
deberse a que la solucin la habamos preparado
varios das atrs y a pesar de que estaba en
refrigeracin pudo haberse daando o pasado; en
este caso por sugerencia de la docente,
tendremos que hacer de nuevo la solucin y
realizar el mismo proceso, solo para esta
sustancia.

CALCULO DEL Rf

CALCULOS DE Rf. (Cuantitativo)

El Rf que es la distancia recorrida por el soluto, desde

un punto de partida, dividido por la distancia
recorrida por el frente del solvente; se calcula de la
siguiente manera:
Se deben tomar dos medida, la primera es de el punto
de referencia inicial (en nuestro caso el papel es
circular punto centro) al punto donde colocamos la
muestra con el capilar (fase acuosa o estacionaria; la
segunda medida se toma desde donde se coloc la
muestra estacionaria con el capilar, hasta donde se
desplaz o se identifica la mancha fucsia.
Podemos determinarlo Mediante la formula

RF=

Distancia
Distancia del solvente .

menor a 1.
Ecuacin 1: Cuantificacin del Rf
Equation 1: quantification of Rf

Siempre

Rf (prolina)= (2cm)/(3,8cm)
Rf (prolina)= 0,52
Rf(fenilalanina)= (1,8cm)/(4,8cm)
Rf(fenilalanina)= 0,375
Rf(Extracto)= (1,9cm)/(5cm)
Rf(Extracto)= 0,38
Rf(A. huevo)= (1,8cm)/(3,9cm)
Rf(A. huevo)= 0,46
PARTE II
Reaccin con la ninhidrina
Los grupos amino libres de los aminocidos, de
los pptidos y las protenas reaccionan con la
ninhidrina a un pH entre 4 y 8, para dar un
compuesto de intenso color azul prpura. La
prueba tambin es positiva con aminas primarias
y amonaco pero sin desprendimiento de CO2.
Los aminocidos prolina e hidroxiprolina dan un
color amarillo en lugar del color prpura con la
ninhidrina. [2]
El amoniaco reacciona con otra molcula de
nihidrina formando un compuesto azul casi
violeta
denominado
PURPURA
DE
RUTHEMMANS

Imagen 6: Ejemplo de cmo calcular el Rf

Figure 6: Example of how to calculate the Rf

Imagen 8: Ensayo con Nihidrina.

Figure 8: Test with ninhydrin.

Como se observa en la figura, los resultados

obtenidos en este ensayo, concuerdan con los
tericos y arrojaron los siguientes resultados:

Imagen 7: Rf en el laboratorio
Figure 7: Rf laboratory

Extracto: (--) Negativo para nihidrina,

probablemente por lo mencionado respecto a la
solucin.

Sisteina: (+++) Positivo para nihidrina, violeta

fuerte

mientras que la gelatina, aunque tambin hirvi,

no tuvo gran cambio a simple vista.
En todas las soluciones, hubo una reaccin
exotrmica.

Albumina de huevo: (++) Positiva para

Nihidrina, violeta que se evidenciaba a contra
luz.

Alumina de huevo: (+) nos arroj positivo para

Triptfano, color amarillo

Sacarosa: (--) Negativo para nihidrina, no

presento ningn cambio en su coloracin.

Extracto de T. Stans: (++) positivo para

Triptfano, color naranja claro.

Reaccin de Adamkiewics

Es una reaccin colorimtrica cuantitativa para

detectar protenas basada en que el triptfano de las
mismas forma un complejo coloreado como el cido
glixico, dando un color naranja/amarillo. El grupo
indolo del aminocido Triptfano se condensa con el
cido glioxilico del reactivo, formando compuestos
coloreados. El agregado de una pequea cantidad de
cido sulfrico, aumenta la sensibilidad de la
reaccin.

Imagen 9: Ensayo Reaccion de Adamkiewics

Figure 9: Reaction test Adamkiewics

En este ensayo pudimos observar reacciones

muy interesantes; al adicionar el cido sulfrico
en cada uno de los tubos de ensayo, la Albumina
de huevo, casi de inmediato comenz a hacer
efervescencia y lleno completamente el tubo de
ensayo con espuma hasta rebosarlo.
Por otro lado, el extracto de Tecoma Stans al
igual que el Triptfano comenz a hervir y
presentaron un cambio de coloracin evidente;

Triptfano: (++++) Positivo para Triptfano, nos

present un color naranja intenso, casi rojizo.
Gelatina: (--) Negativo para triptfano, no tuvo
ningn cambio en su coloracin.
Reaccin Xantoproteica
Los aminocidos, que contienen un ncleo
aromtico forman nitro derivados de color
amarillo cuando se calientan con cido ntrico
concentrado. Las sales de estos derivados son
de color naranja intenso en medio alcalino. La
fenilalanina, la tirosina y en cierto grado el
Triptfano, as como todas las protenas que los
contienen, dan positiva la prueba.
Se evidenci que inicialmente la coloracin fue
la esperada para dicha prueba y de igual forma
para la confirmacin con el NaOH. [3]
Los resultados de aadir cido ntrico a las
muestras de albmina de huevo, fenol y
triptfano solo dio positiva en la albmina de
huevo, Por lo tanto concluimos que hay
presencia de protenas solubles en la solucin
esto hace que se torna la solucin de un color
amarillo oscuro.

muestra a una hidrolisis alcalina con hidrxido

de sodio segn la siguiente ecuacin:

De esta manera el sulfuro de sodio se encuentra

libre para reaccionar con el acetato de plomo del
reactivo de Courtone.

[5]

Ilustracin 1 reaccin xantoproteica

Ilustracin 1 xanthoproteic reaction

Reaccin de los Tiogrupos

5. CONCLUSIONES
Realizamos la separacin de aminocidos
mediante la cromatografa; es de las tcnicas ms
simples, nos permiti observar la reaccin
producida por medio de la ninhidrina, que
permite identificar aminocidos, ya que la
reaccin de los aminocidos con ninhidrina se
debe a la presencia del grupo NH2 en los
mismos observndose as una coloracin morada
o magenta.
Calculamos el Rf de cada muestra con ayuda de
la tcnica de la cromatografa en aminocidos.
Indicamos la presencia de protenas en diferentes
muestras, del mismo modo identificamos
algunos de los aminocidos presentes en ellas
por medio de las reacciones que ocurrieron en
cada caso de acuerdo al radical o al grupo que
caracteriza al aminocido.
6. REFERENCIAS

Imagen 10: Prueba de Tiogrupos

Figure 10: Test Tiogrupos

El S de un grupo tiol de un aminocido ms

acetato de plomo, produce precipitado negro
(PbS2).
Esta reaccin dar positiva con aquellos
aminocidos que presentan azufre en su
estructura, como son la cistina, la cistena, y la
metionina. La reaccin consiste en someter la

[1]http://bioquimicatm2.blogspot.com.co/2015/0
2/aminoacidos-y-proteinas_3.html
[2]http://angelabioqumica.blogspot.com.co/2011
/09/objetivos-1.html
[3]https://es.scribd.com/doc/27312502/INFORM
E-LABORATORIO-RECONOCIMIENTO-DEAMINOACIDOS-EN-ALIMENTOS
[5]https://es.scribd.com/doc/42093275/Aminoaci
dos-Peptidos-y-Proteinas

[6] Campbell Mary K & Farrell ShawnO. (2003).

Bioqumica Cuarta Edicin.Mxico: editorial
THOMSON.

[7] Guas suministradas por la docente