Departamento de Bioqumica, Facultad Farmacia, Universidad de Valparaso

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Cuestionario
1. Explique Por qu se tie de amarillo la piel al contacto con el HNO3? (mximo 3 lneas).
R: Porque en la piel existe una protena llamada queratina, la que contiene un -aminocido,
llamado Cistena, ste al contacto con cido ntrico, produce coloracin amarilla de la piel.
2. S reemplazar seroalbmina por albmina de huevo qu resultado esperara en la reaccin de
ninhidrina Por qu? Investigue.
R: Probablemente un cambio en la tonalidad del complejo azul-violeta, ya que ambas, tanto la
seroalbmina como la albmina de huevo presentan aminocidos, pero en diferentes
concentraciones, lo que dara diferente tonalidades para cada tipo de albmina.
3. Investigue la composicin de la albmina de huevo Tiene aminocidos libres?
R: S posee, y su composicin se resume en el siguiente cuadro comparativo (donde egg albumin
corresponde a la albmina del huevo).




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4. Respecto a las 4 tcnicas que va a realizar en el prctico (ninhidrina, adamkiewics,
xantoproteica y aminocidos azufrados) identifique: fundamento de la reaccin (cmo
ocurre?), qu reconoce y cul es el color de la reaccin positiva.
R:
Reaccin Fundamento de la
reaccin
Reconocimiento de
la reaccin
Color de la reaccin
positiva
Ninhidrina Reaccin de ninhidrina
con el grupo amino de
un aminocido, se
produce una
condensacin que
origina una base de
Schiff, sta sufre
resonancia, se
descarboxila y se
descompone en aldehdo
y
aminodiacetohidrindeno,
ste ltimo sufre
nuevamente otra
condensacin con una
molcula de ninhidrina
obteniendo como
resultado el color azul-
violeta.
Aminocidos con
presencia de
amoniaco, beta
alaninas y muchas
aminas primarias.
Adems de Prolina.
Azul-violeta. Para la
prolina el color
positivo es amarillo.
Adamkiewics Basado en la reactividad
de los grupos ndoles
con aldehdos y
formaldehido,
produciendo una
condensacin que es
mediada por agentes
deshidratantes como el
acido sulfrico, dando
como resultado un
compuesto coloreado.
Triptfano. Coloreado de
violeta.
Xantoproteica Se fundamenta en la
nitracin del grupo
fenilo por la accin del
cido ntrico,
posteriormente la
reaccin se debe llevar a
un cambio de pH.
Aminocidos con
fenilos sustituidos.
Amarillo.
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Aminocidos
azufrados
Consiste en someter una
muestra a hidrlisis
alcalina con hidrxido
de sodio produciendo
sulfuro de sodio, ste
ltimo es favorable para
reaccionar con acetato
de plomo, generando
una coloracin
reconocible
Aminocidos
azufrados, como
cistena y cistina. La
metionina, si bien,
es azufrado no es
reconocible
mediante este
mtodo.
Negro o gris.

5. Qu funcin cumple el acido sulfrico en a reaccin de Adamkiewics al reaccionar con
triptfano y con algunas protenas?
R: Es un agente deshidratante que produce la desnaturalizacin de las protenas dejando
expuestos los grupos ndoles para reaccionar con el aldehdo y as producir la reaccin.
6. Qu funcin cumple el amoniaco en la reaccin xantoproteica?
R: Tanto como el amoniaco y el hidroxilo de sodio poseen caractersticas alcalinas, por lo tanto
tienen la funcin de modificar el pH del medio y dar como resultado la coloracin esperada de la
reaccin xantoproteica.


Resultados
Muestra 5 Muestra 41 Muestra 52 Muestra 63 Muestra 84
Xantoproteica - - + + ++
Ninhidrina - ++ +++ ++ +
Adamkiewics - - +++ ++ -
Aminocidos
azufrados
- - - +++ -
Tabla 1. Resultados del anlisis experimental de las muestras. (-) No hay reaccin. (+) Reaccin positiva y escasa
coloracin. (++) Reaccin positiva y media coloracin. (+++) Reaccin positiva e intensa coloracin.




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Discusin
La muestra 5, result negativa para la reaccin xantoproteica generando un color transparente y
descartando la posibilidad de tener un aminocido con fenilos sustituidos. En la reaccin de
Ninhidrina no hay color en el papel filtro, por lo que tambin es negativa, y de sta se plantea la
hiptesis de que no sea un aminocido, ya que la ninhidrina se utiliza, por lo general, para detectar si
es un aminocido o no. Para la reaccin de aminocidos azufrados, si bien la muestra se tie de
amarillo, es negativa, ya que el color requerido es el negro o gris, por lo tanto no posee compuestos
azufrados tampoco la muestra. Finalmente la reaccin de Adamkiewics se obtiene negativa, pero la
muestra se torna de color amarillo, lo que quiere decir que presenta reactividad con algn aldehdo el
grupo indol

Apodado como el seor de los anillos, la prolina, es un aminocido que se diferencia del resto porque
presenta una amina secundaria en vez de una amina primaria, lo que hara reaccionar diferente frente
al resto de los dems aminocidos. La muestra 41 resulta negativo para xantoproteica, por lo tanto no
se tratara de triptfano, tirosina o fenilalanina. En Adamkiewics, la muestra es transparente, por
tanto tambin resulta negativo, lo que significa que no presenta triptfano la muestra. Para
aminocidos azufrados la muestra tambin es transparente, lo que resulta que la reaccin es negativa
por el color obtenido, de esta forma se descarta la presencia de aminocidos azufrados. Sin embargo,
la muestra al reaccionar frente a ninhidrina se torna de color amarillo y no azul-violeta que es el
positivo de esta reaccin, por tanto se hace pensar que estamos en presencia de prolina, puesto que es
una excepcin para la reaccin de ninhidrina debido a la amina secundaria que presenta en su
estructura, permite que vire a color amarillo, sta es una caracterstica exclusiva que tiene la reaccin
de ninhidrina frente al aminocido prolina, por lo tanto, la muestra 41 corresponde a prolina.
En la reaccin xantoproteica la muestra 52 presenta una leve tonalidad amarilla, por lo tanto, se
sospecha que estamos en presencia de aminocidos que contienen en su estructura fenilos sustituidos,
la leve tonalidad amarilla se debe probablemente a la concentracin de stos aminocidos con fenilos
sustituidos en la muestra, o bien a la falta de cantidad de algn tipo de reactivos para virar a un color
ms intenso. Para la ninhidrina, se obtiene un color intenso de azul-violeta, lo que permite deducir
que se trata de un aminocido. En tanto para Adamkiewics, la reaccin resulta positiva, la muestra
posee un color coloreado-violeta, que es caracterstico para triptfano, lo que hace plantear la idea
que se trate de ste aminocido la muestra. No hay presencia de compuestos azufrados ya que la
tincin positiva para esta reaccin es la tonalidad gris o negra, la muestra resultante es transparente.
Como conclusin, la muestra corresponde a triptfano, puesto que las reacciones de ninhidrina,
xantoproteica y adamkiewics apoyan dicha hiptesis, adems de la negatividad de la reaccin de
aminocidos azufrados.

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La albmina de huevo es una protena que contiene varios aminocidos en diferentes concentraciones
a la seroalbmina, que la hacen diferente y especial. La reaccin de ninhidrina es positiva para
muestra 63, por lo tanto, se tratara de una protena con presencia por su puesto de aminocidos
detectables ya que la muestra presenta una tincin azul-violeta. La tonalidad amarilla leve que
presenta la muestra en la reaccin xantoproteica, permite sostener la presencia de aminocidos con
estructuras de fenilos sustituidos. En tanto la reaccin de Adamkiewics, resulta positiva igualmente
para la muestra, pese a que esta result bastante concentrada por el tono ms violeta obtenido, se
valida la posibilidad de encontrar triptfano en dicha muestra. En la muestra se encuentran
aminocidos azufrados, puesto que vira a negro, marcando como positiva. Por lo tanto todas las
reacciones ejercidas experimentalmente resultaron positivas para la muestra, se plantea que la
muestra 63 corresponde a albmina de huevo puesto que contiene dentro de su composicin qumica
aminocidos azufrados, triptfano, aminocidos con fenilos sustituidos; como tirosina, fenilalanina y
triptfano. Adems de que la ninhidrina marca como positiva para aminocidos y protena.
Finalmente la muestra 84 corresponde a la gelatina, puesto que sta es una protena que deriva del
colgeno y que no contiene triptfano en su estructura. Debido a esto, la reaccin de Adamkiewics
resulta negativa, aunque se ti levemente amarilla, no corresponde a la tincin esperada. En
aminocidos azufrados resulta tambin negativa la muestra puesto que no hay presencia de
aminocidos que contengan en su estructura compuestos azufrados, como la cistena, cabe destacar
que la metionina no se puede detectar por este mtodo, ya que presenta impedimento estrico por un
grupo metilo que obstruye al grupo tiol. La reactividad de la ninhidrina con la muestra se torna
violeta, por lo tanto se obtiene informacin que se tratara de una protena con presencia de
aminocidos. La reaccin xantoproteica es positiva, se tratara de aminocidos con fenilos
sustituidos, excepto por triptfano que no tendra, como se observa en la siguiente tabla:
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Conclusin

De la muestra 5 se concluye que no contiene aminocidos ya que dio negativa a la reaccin clave que
distingue si las muestras analizadas son aminocidos o no. Como se tena conocimientos previos de
que una de las muestras a analizar era glucosa, se puede sealar que sta es la muestra de glucosa, un
carbohidrato que no contiene grupos aminos.
De la muestra 41, que solo dio positivo para la reaccin de Ninhidrina y una coloracin amarilla leve,
se puede decir mediante el uso de la informacin con la que se dispona, esta muestra era la del
aminocido prolina.
La muestra 52 dio positivo a tres de las reacciones, tomando mayor inters la reaccin de
Adamkiewics ya que esta reaccin hace que se torne especificidad al reconocimiento de la muestra,
puesto que esta reaccin se utiliza para reconocer al aminocido Triptfano, se concluye que la
muestra 52 es el aminocido Triptfano.
La muestra 63 dio positivo para todas las reacciones con variaciones de intensidad de la coloracin,
lo que supone de manera general la presencia de tipos diferentes de aminocidos. La muestra da
positivo con una intensidad bastante fuerte de coloracin para la reaccin de los aminocidos
azufrados, por lo que se concluye, dentro de las opciones de muestras que se tenan, que es Albmina
de huevo.
Las reacciones que se emplean para el reconocimiento de aminocidos tienen su fundamento
principal en la composicin qumica de cada aminocido en particular, sin olvidar a su vez la
reaccin general de todos los aminocidos (reaccin de Ninhidrina). Otras reacciones apuntan
especficamente al reconocimiento de un aminocido o grupo de aminocidos en particular que
presenten caractersticas de composicin qumica similares, lo que resulta de gran ayuda para las
investigaciones en las que se trata de analizar protenas que contengan aminocidos con
caractersticas reconocibles mediante las reacciones que se utilizan.






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Bibliografa
Joane H. Bowes, R.H. Kentern. 1948. The Amino-acid composition and titration curve of collugen.
Biochem ; 43 (3) :358-65.
J.C. Lewis, N.S. Snell, D.J. Hirschmann, Heinz Fraenkel-Conrat. 1950. Amino acid composition of
egg proteins. J. Biol. Chem, 186:23-35.