ANALISIS CUALITATIVO DE

AMINOACIDOS
Laboratorio de Bioquímica

Universidad Nacional Autónoma de Honduras en el Valle de Sula

Departamento de Química

Omar David Mejía

davidqimejia@gmail.com
 Análisis cualitativo de aminoácidos
Aminoácido

Es una biomolécula que como su nombre indica, contiene un grupo amino y un grupo acido
carboxílico. Son la unidad fundamental de las proteínas.

Cuando dos aminoácidos se combinan a través de una reacción de condensación entre el

grupo amino de uno y el grupo carboxilo del otros se libera una molécula de agua. El enlace
generado se llama enlace peptídico.

Existen un total de 20 aminoácidos diferentes.

La secuencia de aminoácidos que se encuentran en una proteína recibe el nombre de
estructura primaria, y determinara las propiedades sucesivas de la proteína. Las
interacciones generadas a través de puentes de hidrogeno entre los átomos que generan el
enlace peptídico determinara la estructura secundaria de la proteína.
La estructura terciara de una proteína hace referencia al modo en la cadena polipeptídica
se pliega en el espacio, esta estructura está determinada por la estabilización de las
interacciones hidrofóbicas de los átomos constituyentes de los aminoácidos. La estructura
cuaternaria consiste en la unión de varias cadenas peptídicas asociadas que generan un
ente, llamado multímero, con propiedades distintas a las proteínas simples que lo
constituyen.
El análisis cualitativo de proteínas implica generalmente la digestión de la muestra para
liberar los aminoácidos presentes en la proteína, y el uso de una reacción química que
genera un cambio apreciable que indica la presencia o no de uno o más aminoácidos.

Ensayo de la Ninhidrina
La ninhidrina es un oxidante que reacciona con el grupo amino de aminoácidos y proteínas
a través de una descarboxilación oxidativa en presencia de calor.

La ninhidrina se reduce a hidridantina al reaccionar con el amino acido, que es convertido

en aldehído, amoniaco y dióxido de carbono. La hidridantina reacciona con el amoniaco
liberado y otra molécula de ninhidrina, generando un complejo purpura/violeta.

Con el aminoácido prolina genera un complejo amarillo característico que sirve de ensayo
específico para este aminoácido.
Ensayo del ácido xantoproteico
Algunos compuestos aromáticos reaccionan con ácido nítrico, generándose compuestos
nitro y nitroso de color amarillo. Estos compuestos en medio básico generan un color
amarillo- naranja intenso.

Los aminoácidos tirosina y triptófano dan resultados positivos a este ensayo, mientras la
fenilalanina no reacciona a pesar de tener un anillo bencénico en su estructura.
Ensayo de diazo de Pauly o de Ehrlich
La presencia de anillos aromáticos fenólicos o nitrogenados en la cadena lateral de los
aminoácidos se puede identificar mediante la reacción con ácido sulfanílico y nitrito de
Sodio por formación de sales de diazonio fuertemente coloreadas permitiendo así detectar
la presencia de Tirosina e Histidina libres o formando péptidos y proteínas.
Ensayo de Millon
El ensayo de Millon detecta la presencia del grupo hidroxifenil en las proteínas, aunque es
sensible a cualquier compuesto fenólico sin sustituir en las posiciones 3,5. Se considera
ensayo positivo para la presencia de tirosina en las proteínas

La reacción se debe a la formación de un compuesto nitro que a su vez genera un complejo

de color rojo al reaccionar con un ion mercurio (II). Si se adiciona una gran cantidad de
reactivo, puede generarse una coloración amarilla que no es indicativa de reacción positiva.
Ensayo de Hopkins-Cole
El ensayo de Hopkins-Cole, también conocida como la reacción de Adamkiewicz o ensayo
del ácido glioxílico, es un ensayo para la detección de triptófano en proteínas.

El ácido sulfúrico concentrado causa la deshidratación del triptófano, que reacciona con el
reactivo de Hopkins – Cole, generando un anillo violeta/rojo en la interfase de las dos capas.
Prueba de sulfuro de plomo
Para la detección de aminoácidos que contienen azufre en su estructura como lo son
metionina y la cisteina se libera el azufre del aminoácido en medio básico generando un
sulfuro. Posteriormente dicho sulfuro reacciona con acetato de plomo para generar un
precipitado de sulfuro de plomo, fácilmente identificable por su color negro.
Prueba de Sakaguchi
El ensayo de Sakaguchi es una prueba específica para la detección del aminoácido arginina
en proteínas. También detecta la presencia de derivados de la guanidina.

La arginina reacciona en medio básico con α- naftol en presencia del ion hipobromito
generando un complejo de color rojo.