La ninhidrina es un poderoso agente reactivo común para visualizar las bandas de

separación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis, también es utilizada

con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos2 Reacciona con todos
los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloración que
varía de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado púrpura de
Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloración producida por la ninhidrina
es independiente de la coloración original del aminoácido.3

Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para aminoácidos. En aquellos
casos donde no da positiva la prueba de Biuret, da positiva la de ninhidrina, e
indica que no hay proteínas pero sí hay aminoácidos libres.de un ph 4 y 8.4

Reactividad
El átomo de carbono de un carbonilo tiene una carga positiva parcial, por lo que el
C central de un 1,2,3-tricarbonilo es menos estable y más electrofílico que una
cetona simple. En la mayoría de los compuestos, un carbonilo es más estable que la
forma dihidroxi (hidrato). Sin embargo, la ninhidrina es un hidrato de carbono
estable del C central porque esta forma no tiene el efecto desestabilizador de los
centros adyacentes de carbonilo parciales positivos. El indano-1 ,2,3 -triona
reacciona rápidamente con nucleófilos.

Tenga en cuenta que con el fin de generar la ninhidrina cromóforo, la amina se

condensa con una molécula de ninhidrina para dar una base de Schiff. Así pues, solo
amonia y aminas primarias proceden más allá de este paso. En este paso, debe haber
también un protón alfa (* H en el diagrama) para la transferencia de base de
Schiff, por lo que una amina adyacente a un carbono terciario no puede ser
detectada por la prueba de ninhidrina. La reacción de ninhidrina con aminas
secundarias da una sal de iminio, que es también de color, y esto es generalmente
de color amarillo-anaranjado en color.

Mecanismo de reacción de la Ninhidrina.

Es una de las reacciones más sensibles para identificar aminoácidos en general, ya
que detecta una parte de aminoácido en 1 500 000 partes de agua. Aminoácidos y
muchas aminas primarias dan un color violeta característico. La prolina da
coloración amarilla. Por su sensibilidad esta reacción se emplea para valoración
cuantitativa de amonoacidos por colorimetria. La valoración de aminoácidos en
orina, por ejemplo, tiene importancia en medicina ya que en algunas enfermedades
como hepatopatías, infecciones agudas o diabetes mellitus en las que se presente
hiperaminoacidemia, estas se ven acompañadas por aminoaciduria paralela. Algunas
enfermedades metabólicas congénitas dan lugar a la eliminación anormal de algunos
aminoácidos en la orina (p ej fenilcetonuria).