UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN SIMN

FACULTAD DE BIOQUMICA Y FARMACIA

NORMAS DE
BIOSEGURIDAD Y MANEJO DE RESIDUOS EN
LABORATORIO DE BIOLOGA MOLECULAR

Responsable:

Dra. Zulema Bustamante

2005

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La presente gua de bioseguridad, establece las
condiciones y recomendaciones necesarias para
la realizacin del trabajo en un laboratorio de
BIOLOGA MOLECULAR.

1. ASPECTOS GENERALES
1.1 ASUNTO: DESCRIPCIN DEL LABORATORIO DE
BIOLOGA MOLECULAR
El Laboratorio de Biologa molecular es una unidad de Investigacin y servicios, donde se realizan
anlisis con cidos nuclicos (ADN y ARN ) y protenas. Estas molculas pueden ser extradas de
diferentes clulas, animales, vegetales, bacterias,
parsitos y de virus.

1.2 ASUNTO:ORGANIZACIN DEL LABORATORIO EN

AREAS DE TRABAJO
El laboratorio se divide en diferentes reas de trabajo:
A: Zona de Preparacin de reactivos
B: Zona de preamplificacin
C: Zona de amplificacin

Fig. 1. Juego de Micropipetas y microcentrifugadora.

En esta rea, normalmente primero se extraen las
molculas con las que se trabajar que son: el
ADN, ARN y las protenas.
Posteriormente se procede a la preparacin de la
mezcla reactiva para el ensayo de amplificacin o
de otro tipo.
En la preparacin de los premix, se debe utilizar
siempre puntas estriles y con filtro. De esta preparacin depender los resultados
C)Zona de amplificacin
En esta zona se encuentra el equipo ms importante que es el termociclador, que de preferencia
debe estar aislado del lugar de preparacin de la
mezcla reactiva.

D: Zona de electroforesis
a) Zona de preparacin de reactivos ( no ADN, en este lugar
no llegan las muestras)
En esta zona se preparan todos los reactivos necesarios para los ensayos en el laboratorio, debe evitarse cualquier contacto con las muestras
b) Zona de preamplificacin
Para identificar los instrumentos y materiales
pertenecientes a esta zona, es recomendable, marcar con una cinta adhesiva de color (en algunos
laboratorios se utiliza el color verde).

Fig. 2. Termociclador

Los equipos que normalmente se encuentran en

esta zona son:
Microcentrifuga,
vortex,
juego de Micropipetas
Heladeras, freezer.

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D) zona de electroforesis (post amplificacin)
Para identificar los instrumentos, materiales y
bata de trabajo de esta zona, se puede utilizar una
cinta de color rojo.
Los equipos que se encuentran en esta zona son:
cubas de electroforesis
Fuentes de poder
Bao Maria
Transiluminador
Sistema de tincin de geles

Fig.4. Secuenciador de ADN

Es necesario resaltar que las micropipetas para el
proceso de electroforesis deben ser nicas y no
pueden utilizarse sino para colocar los productos
de PCR en la agarosa.
Estas micropipetas de ninguna manera se utilizaran para la preparacin de mezclas reactivas.

1.3 ASUNTO: PERSONAL DE LABORATORIO

Fig.3. Geles de separacin electrofortica de cidos nucleicos

En esta zona se realiza
Cuantificacin de ADN en geles

Bata de trabajo
Guantes

Digestin con enzimas

Pantalla de proteccin facial en presencia de

transiluminador

Electroforesis de ADN

Ausencia de relojes, anillos

Electroforesis de protenas
Tinciones
Visualizacin de productos.
Cuantificacin de ADN

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Los equipos y materiales de proteccin en este

laboratorio son :

Todas las actividades que involucran un mayor

riesgo ya sea por la concentracin del agente infecciosos o bien por el tipo de manipulacin se
deben realizar en cmara de flujo laminar

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2. ASUNTO: SMBOLOS Y ETIQUETADO DE
PRODUCTOS QUMICOS EN EL LABORATORIO
2.1. Los smbolos que deben estar presentes en el
laboratorio son los siguientes:

indicaciones, sobre los riesgos y sobre las

medidas de prevencin a adoptar
1.Identificacin del producto (nombre qumico
de la sustancia o nombre comercial del preparado).
2 Composicin (para los preparados relacin de
sustancias peligrosas presentes, segn concentracin y toxicidad).
3 Responsable de la comercializacin (Nombre,
direccin y telfono).
4 Identificacin de peligros.
5 Descripcin del riesgo (Frases R*).
6 Medidas preventivas (Frases S*).

3. ASUNTO: ALMACENAMIENTO DE SUSTANCIAS

TERATOGNAS, MUTGENICAS Y CANCERGENAS.
Las sustancias que estn clasificadas como
cancergenas
o
mutagnicas
deben
almacenarse en lugares especiales.
Es necesario que estas sustancias se almacenen
separadas de otros reactivos.
2.1 ASUNTO: ETIQUETA DE PRODUCTOS
QUMICOS
Durante el trabajo es necesario considerar el etiquetado de las sustancias qumicas, que informan sobre los peligros relacionados a su utilizacin.
Cuando los productos son trasvasados a otros
envases la etiqueta debe ser idnticamente
reproducida.
La etiqueta debe llevar uno o varios smbolos
del peligro as como un nmero restringido de

El lugar donde se almacenan estas sustancias,

debe estar explicado en el croquis del
laboratorio.
Se debe mantener un inventario especial de
estas sustancias.
El personal femenino en estado de gestacin
no debe estar en contacto con el rea donde
se utilicen estas sustancias.

4. ASUNTO: NORMAS DE SEGURIDAD EN LA

UTILIZACIN DE EQUIPOS
4.1. Normas Generales
Los equipos deben estar ordenados de acuerdo a
la distribucin por reas en el laboratorio.
Todos los equipos del laboratorio debern contar
con manual especfico sobre su utilizacin segura.

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Las fuentes de calor (calentadores, termobloques, etc.), sobre todo si alcanzan temperaturas
elevadas, debern estar debidamente sealizadas
para evitar quemaduras accidentales.

Una vez terminada la amplificacin de

preferencia el producto debe retirarse
inmediatamente.
Centrifugadora y microcentrifugadora.

Freezer =-4oC
Se utiliza para almacenar microorganismos y
algunos reactivo s, estos tambin deben
almacenarse en reas separadas.
Sin embargo es importante considerar las siguientes recomendaciones
No deben almacenarse cultivos de
microorganismos patgenos por inhalacin
en recipientes que no estn convenientemente
cerrados, especialmente si la cmara tiene un
sistema de circulacin de aire.
No deben almacenarse reactivos que
contengan compuestos voltiles inflamables
(ter etlico, por ejemplo) en neveras que no
posean un sistema de proteccin
Heladera 20oC
En esta heladera se guardan reactivo s
especficos as como ADN aislados de
productos biolgicos.
En la heladera normalmente se guardan un
gran nmero de sustancias en recipientes muy
p e q u e o s, por lo que
es importante
considerar:
Ficheros y listas con el contenido de cada
uno de los gabeteros de la heladera, para
evitar riesgos.
El material infeccioso, debe almacenarse en
recipientes especiales y si es posible con
doble envase.
Siempre se debe utilizar guantes para
manipular el contenido de esta heladera.
Termociclador

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Los mayores riesgos derivan, sobre todo, de la

contaminacin por los aerosoles generados
durante la centrifugacin de materiales biolgicos
y, en menor medida, de los traumatismos accidentales. Se recomienda:
Cuando se centrifugue material biolgico
potencialmente infeccioso deben utilizarse
tubos cerrados; la centrfuga debe disponer de
rotores o cestillos de seguridad que protejan al
operador de los posibles aerosoles.
La rotura accidental de un tubo y su vertido en
la cubeta representa una incidencia
importante que debe ser comunicada
inmediatamente al responsable, para que se
proceda a la desinfeccin segura del aparato.

5. ASUNTO: MEDIDAS DE SEGURIDAD PARA EL

MANEJO DE MUESTRAS.
Las muestras deben transportarse en recipientes
rgidos y cerrados.
Se debe evitar roturas durante el transporte.
Antes de guardarse, se debe examinar el envase y si
se encuentra manchadas con lquidos fisiolgicos
se debe limpiar el exterior de los mismos con
hipoclorito de sodio al 5%.
Las muestras de suero se deben guardar a 20 oC
en tubos tapados en posicin vertical.

6. ASUNTO: ELIMINACIN DE MATERIAL

CONTAMINADO
Es necesario descontaminar todo material biolgico potencialmente peligroso antes de ser descartado.

El termociclador debe ser utilizado de acuerdo

a su manual de procedimiento.

Los desechos no contaminados pueden ser descartados en la basura corriente.

Debe manipularse con guantes.

Los objetos punzantes (agujas, tubos rotos, punte-

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ros de pipetas) se descartan en recipientes rgidos
de cartn, se autoclavan por 30 minutos a 121 oC
y se descartan en recipientes cerrados rgidos, en
bolsas de color rojo que corresponde a residuos
infecciosos.
Los medios de cultivo deben autoclavarse por 30
minutos a 121 oC
El material contaminado que nuevamente ser
utilizado debe ser autoclavado, limpiado y acondicionado para su reutilizacin.
Los tubos de reaccin y las placas ELISA con las
muestran se recogen en un recipiente de boca
ancha con hipoclorito de sodio al 5%. Una vez
autoclavados por 60 minutos a 121 oC.
Se descartan en bolsas de basura tras escurrir el
lquido

Se agrega luego un volumen de 0,5 M de

Permanganato de potasio, se mezcla y agrega 1
volumen de HCl 2,5 M. Se mezcla cuidadosamente y se deja a temperatura ambiente por 6 horas.
Finalmente se agrega 1 volumen de NaOH 2,5 N.
Se mezcla cuidadosamente y se descarta la solucin.
DESCONTAMINACION DE SOLUCIONES DILUIDAS
Se adiciona 100mg de carbn activado por cada
100 ml de solucin
Se agita la solucin durante 1 hora
Se filtra la solucin a travs de papel filtro
Whatman N 1 y se descarta el filtrado

Las Batas y barbijos se envuelven y autoclavan

por 30 minutos a 121 oC

El filtro y el carbn activado se descartan en una

bolsa de plstico sellada y se deposita en un recipiente
para
recoleccin
de
residuos
txicos(Residuos Especiales).

Los guantes se descartan en una caja descartable

debidamente rotulada y autoclavada antes de ser
eliminada

8. ASUNTO: RECOMENDACIONES ANTES DE

ABANDONAR EL LABORATORIO

La bolsa de basura debe contener una etiqueta

que diga

Todos los materiales biolgicos y reactivos deben

dejarse en su lugar correspondiente.

Material contaminado.

Se deben cerrar todas las llaves de gas.

7. ASUNTO: DESCONTAMINACION DE SOLUCIONES

DE BROMURO DE ETIDIO
Reducir la concentracin de la solucin por debajo de 0,5 mg/ml por adicin de agua

Se deben desenchufar los aparatos elctricos.

Es necesario limpiar y descontaminar el lugar
donde se trabaj.
Se debe quitar la ropa de trabajo y lavarse muy
bien las manos.

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