UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

"Ao de la Promocin de la Industria Responsable y del Compromiso

Climtico"

INGENIERIA AMBIENTAL

TTULO: NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO. MATERIAL DE
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA AMBIENTAL. LIMPIEZA, DESINFECCIN Y
ESTERILIZACIN DE MATERIAL. PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
.
INFORME DE LABORATORIO N1


CURSO: MICROBILOGIA AMBIENTAL BO112

PROFESOR: MARTINEZ VILA, ALVARO MARTIN

ALUMNO: OPE CADILLO, VLADIMIR ALCIDES 20131381B





11 DE ABRIL DEL 2014
LIMA PER


Normas de Seguridad En El Laboratorio. Material De Laboratorio De
Microbiologa Ambiental. Limpieza, Desinfeccin Y Esterilizacin De
Material.

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OBJETIVO

A) Conocer las normas de seguridad del laboratorio
B) Conocer los principales instrumentos, equipos y material de vidrio usado en un
laboratorio de microbiologa para el diagnstico de enfermedades infecciosas.

C) Familiarizar al estudiante con el manejo y uso adecuado de instrumentos,
materiales y reactivos en la prctica microbiolgica.

D) Tratamiento de los materiales antes de un apractica en el laboratorio.

E) Familiarizar con los distintos metodos de desinfeccion y esterilizacin de
material.
















FUNDAMENTO TORICO

Normas de Seguridad En El Laboratorio. Material De Laboratorio De
Microbiologa Ambiental. Limpieza, Desinfeccin Y Esterilizacin De
Material.

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NORMAS DE SEGURIDAD
El laboratorio debe ser un lugar seguro para trabajar donde no se deben permitir descuidos o
bromas. Para ello se tendrn siempre presente los posibles peligros asociados al trabajo con
materiales peligrosos. Nunca hay excusa para los accidentes en un laboratorio bien equipado
en el cual trabaja personal bien informado. A continuacin se exponen una serie de normas
que deben conocerse y seguirse en el laboratorio:
A) Durante la estancia en el laboratorio el alumno debe ir provisto del guardapolvo que
deber emplearse durante toda la estancia en el laboratorio. las gafas de seguridad
siempre que se manejen productos peligrosos y durante el calentamiento de
disoluciones. los guantes deben utilizarse obligatoriamente en la manipulacin de
productos.
B) Qutese todos los accesorios personales que puedan comprender riesgos de accidentes
mecnicos, qumicos o por fuego, como son anillos, pulseras, collares y sombreros.
C) Est prohibido fumar, beber o comer en el laboratorio, as como dejar encima de la
mesa del laboratorio ningn tipo de prenda.
D) Como regla general no se debe pipetear nunca con la boca.
E) El mechero debe cerrarse, una vez utilizado, tanto de la llave del propio mechero como
la toma del gas de la mesa.
F) Las heridas y quemaduras deben ser tratadas inmediatamente

NORMAS DE TRABAJO

1) Cada equipo de trabajo es responsable del material que se le asigne, adems del
equipo especial en caso de prdida o dao, deber responder de ello.
2) Al finalizar cada sesin de prcticas el material y la mesa de laboratorio deben dejarse
perfectamente limpios y ordenados.
3) El material asignado a cada prctica debe permanecer en el lugar asignado a dicha
prctica.

EQUIPOS DE LABORATORIO

En el laboratorio existen materiales que son tiles para cada experimento y que necesitan
adecuado tratamiento para su utilizacin en cada experimento.
Es importante elegir el equipo adecuado para el trabajo microbiolgico. Los proveedores de
equipos cientficos proporcionan una amplia gama de aparatos, materiales de vidrio y tiles de
plsticos, pero por desgracia, no todos son adecuados para el uso microbiolgico.




MATERIAL DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGA AMBIENTAL
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Material.

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1) MICROSCOPIO
Los microscopios ms usados son el ptico de campo claro (hasta 2000 aumentos) y el
electrnico (hasta 100 000 aumentos), adems existen otros con fines ms especficos
como los microscopios pticos de inmunofluorescencia, el de campo oscuro, el de
contraste de fases y el de luz ultravioleta.

Microscopio ptico:

1. Partes:
1. Mecnica.
2. ptica.
3. Sistema de Iluminacin.

2. Mecnica:

a) Pie.
b) Platina (Circular o rectangular fija o mvil, el vernier y el sistema de
movimiento o tren).
c) Tubo ptico, revlver.
d) Sistema de enfoque: tornillos micromtricos y macromtricos (cremallera).

3. Sistema ptico:

a) Oculares: 05-10-20X.
b) Objetivos: 05-10-40-100X.

4. Sistema de iluminacin:

Fuentes de iluminacin: natural y artificial.
Espejo: Plano y Cncavo.
Diafragma, filtros.
Condensador.

i) USO ADECUADO

Para determinar el aumento del microscopio se multiplica la cifra del ocular con la
del objetivo; ambas representan el aumento proporcionado por cada lente. (Utilice
los objetivos secos para pequeos aumentos).
A menor aumento se requiere menor iluminacin, lo cual se consigue bajando el
condensador y cerrando parcialmente el diafragma.
La observacin de las muestras hmedas, es decir en fresco, se hace con lentes de
menor aumento o sea sin inmersin; este queda para las muestras coloreadas y en
general para aquellos casos en que se requiere la mxima cantidad de luz.

a. Para la observacin microscpica proceda segn el siguiente orden:

i. Ilumine empleando el espejo cncavo o plano; la eleccin depende de la
fuente de luz, aumentos empleados y otros factores.
ii. Enfoque de preferencia con la lente de menor aumento que por lo comn
tiene un tope inferior que impide la ruptura de las lminas la observar.
iii. Una vez enfocado el objeto, haga rotar el revlver y utilice el objetivo
deseado. Para el enfoque preciso, use tornillo micromtrico.
iv. Mantenerlos ojos abiertos, aunque el microscopio sea monocular.



v. Al terminar la observacin limpie el objetivo con un papel especial para
lente o con algodn o un lienzo fino. Si hay impregnacin de aceite utilice
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alcohol isoproplico en pequea cantidad y seque bien. Las lminas una
vez observadas se depositarn en un recipiente apropiado, el que
contiene mezcla sulfocrmica.

2) AUTOCLAVE
Una autoclave es un recipiente de presin metlico de paredes gruesas con un cierre
hermtico que permite trabajar a alta presin para una esterilizacin con vapor de agua

Destinado a la esterilizacin con calor hmedo y presin (121C x 15' a 15 Lbs/pulg
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),
se esteriliza: materiales de desecho, medios de cultivo, ropa de sala de operaciones,
agua destilada, etc.

Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generacin de vapor de agua pero
restringiendo su salida, hasta obtener una presin interna de 103 kPa, lo cual provoca
que el vapor alcance una temperatura de 121 grados Celsius. Un tiempo tpico de
esterilizacin a esta temperatura y presin es de 15-20 minutos.

3) HORNO


Destinado a la esterilizacin con calor seco (se llama tambin horno de Pasteur o
Poupinel). La temperatura usual es de 180 -160C por 1-2 horas. Se esteriliza material
de vidrio e instrumentos metlicos.

Posee un termostato que controla la temperatura mediante un control digital.
Su aislamiento trmico es de doble pared para mantener el calor y ahorrar energa: la
capa interna posee una conductividad trmica baja, y su capa exterior es metlica.
Tambin hay un espacio lleno de aire entre ambas capas como refuerzo del
aislamiento.

A diferencia de un autoclave, estos hornos no necesitan agua y tampoco deben
resistir presiones elevadas, hacindolos ms seguros para trabajar. Esto tambin los
hace ms aptos para ser utilizados en un entorno de laboratorio. Son mucho ms
pequeos que las autoclaves, pero su eficacia puede ser similar. Generalmente
funcionan con temperaturas ms altas, en comparacin con otros medios. El calor
seco no permite eliminar algunas sustancias como los priones, que s pueden eliminarse
con calor hmedo.

Un ciclo completo de uso consiste en calentar el horno a la temperatura requerida, mantener
esta temperatura durante el intervalo de tiempo adecuado, apagar la mquina y dejar el
horno cerrado hasta que los objetos se enfren y alcancen la temperatura ambiente. Los
modos estndar de funcionamiento de un horno de aire caliente son:

1,5 a 2 horas a 160 C (320 F)
45 min a 1 hora minutos a 190 C (374 F)
30 min a 250 C.

A los tiempos anteriores hay que aadir el tiempo necesario para calentar la cmara
antes de comenzar el ciclo de esterilizacin. Si la puerta se abre antes de tiempo, se
escapa el calor y el proceso se queda incompleto.






4) ESTUFA O INCUBADORA

Es un dispositivo que sirve para mantener y hacer crecer cultivos microbiolgicos o cultivos
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celulares. La incubadora mantiene la temperatura, la humedad y otras condiciones en grado
ptimo, tales como el contenido de dixido (CO
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) y de oxgeno en su atmsfera interior. Las
incubadoras son esenciales para una gran cantidad de trabajos experimentales en biologa
celular, la microbiologa y en biologa molecular y se utilizan para cultivos celulares, tanto
bacterianos como de clulas eucariotas.

Proporciona una temperatura que se mantiene fija mediante un termostato; esta
temperatura se elige segn el requerimiento del microorganismo a cultivar.
Generalmente es de 37C por 24 a 48 horas.



5) REFRIGERADOR O NEVERA

Consiste en un armario aislado trmicamente, con un compartimento principal en el que se
mantiene una temperatura de entre 2 y 6 C y tambin, frecuentemente, un compartimento
extra utilizado para congelacin a 18 C y llamado, apropiadamente, congelador.

Permite conseguir bajas temperaturas y se utiliza con fines de conservacin de
grmenes, de medios de cultivos, muestras, reactivos, etc. Por lo general se usa a
temperatura de O a 4C.


6) CENTRIFUGA
El centrifugado es una sedimentacin acelerada, ya que la aceleracin de
la gravedad se sustituye por la aceleracin centrfuga.
Aparato de muy diversa capacidad que permite separar una sustancia slida en
suspensin del lquido respectivo.
Por ejemplo para centrifugar orina o sangre, para obtener el "sedimento urinario o el
suero" respectivamente.


7) LA BALANZA
Se usa en el laboratorio para pesar colorantes, componentes de medios de
cultivos,reactivos, etc. Las hay de diferentes tipos segn su aplicacin y sensibilidad.


8) BAO MARA


El bao de Mara es un equipo que se utiliza en el laboratorio para realizar pruebas
serolgicas y procedimientos de incubacin, aglutinacin, inactivacin, biomdicos,
farmacuticos y hasta industriales. Por lo general, se utilizan con agua, pero tambin
permiten trabajar con aceite. Los rangos de temperatura en los cuales normalmente son
utilizados estn entre la temperatura ambiente y los 60 C. Tambin se pueden
seleccionar temperaturas de 100 C, utilizando una tapa de caractersticas especiales.
Los baos de Mara son fabricados con cmaras cuya capacidad puede seleccionarse
entre los 2 y los 30 litros.
Permite la transmisin indirecta y atenuada de calor, de un lquido sobre una sustancia
a travs de un recipiente.Evita el calor directo.



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9) AGITADOR MECNICO

Es un equipo de diversos diseos y con frecuencia variable por el nmero de veces que
oscilan por minuto. Se utilizan para agitar tubos, frascos, pipetas y lminas excavadas.

Agitador magntico (con o sin calefactor): Es una placa metlica sobre la que
se coloca un vaso de precipitados o recipiente de fondo plano que contiene
el lquido o la disolucin que debe ser agitada. En ella se introduce el imn del
agitador, una pequea barra imantada cubierta de plstico inerte. Un motor
elctrico bajo la placa produce fuerzas magnticas que ponen en rotacin el
imn, provocando el movimiento circular del lquido. La velocidad de rotacin
puede ser controlada.

Agitador de bandeja: La bandeja posee un movimiento circular mediante un
motor que lo controla. Tambin pueden tener movimientos de balanceo o
vibraciones. Se emplean para mover cultivos celulares. A veces tienen un
control termosttico adicional. El movimiento puede ser orbital o de balanceo.


10) POTENCIMETRO
Aparato destinado a determinar la concentracin de iones H (pH en una solucin). El de
mayor aplicacin es el de Beckman.

11) BOMBA DE VACO
Produce presin negativa y se utiliza de preferencia para filtrar muestras de agua
potable, a travs de una membrana filtrante donde se retienen las bacterias
contaminantes.

12) CONTADOR DE COLONIAS

Un contador de colonias es un instrumento utilizado para contar colonias de bacterias o
de otros microorganismos que crecen en una placa de agar.
Se utiliza para el recuento de colonias en una placa de cultivo; de una manera ms
exacta y con mayor facilidad.

Modo de conteo
Estos contadores se utilizan para estimar la densidad de microorganismos en un cultivo
lquido. Una dilucin adecuada, o varias diluciones en serie dentro del rango estimado
apropiado, se propaga utilizando una tcnica estril en la placa de agar, que
se incubaen las condiciones adecuadas para el crecimiento hasta que aparecen las
colonias individuales. Cada colonia marca el lugar donde se coloc un solo organismo
originalmente, con lo que el nmero de colonias en la placa es igual al nmero de
organismos en el volumen de lquido existente en la placa. Esta concentracin se
extrapola a partir de la dilucin practicada sobre el cultivo original, para estimar la
concentracin de organismos existentes en ese cultivo inicial.

13) MATERIALES DE VIDRIO:

Tubos de ensayo, balones, matraces, kitasatos, vasos, probetas, buretas, pipetas, placa
Petri, placas de Roux, placas de Brewer, tubos de centrfuga, tubos de vidrio de
diversos calibres, pipetas Pasteur, jeringas, frascos, goteros, perlas de vidrio, embudos,
micropipeta, etc.

14) OTROS MATERIALES: EN VIDRIO CORRIENTE, MADERA Y PORCELANA
Lminas excavadas de vidrio, lminas portaobjetos y cubreobjetos, termmetros,
mechero de alcohol, gradillas, ASA DE KOLLE o asa Bacteriolgica, pinzas de madera,
piln y mortero de porcelana.

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DESINFECCIN Y ESTERILIZACIN DE MATERIAL
Durante las secciones del laboratorio, se van manipulan diferentes tipos de muestras, los
cuales pueden contener agentes infecciosos importantes, que requieren ser eliminados antes
de descartar los envases respectivos.
Por otro lado, existen materiales de laboratorio reusables que requieren posterior a su
utilizacin, de una limpieza y esterilizacin apropiada, tal que puedan ser utilizados
posteriormente.
Es importante recordar que al realizar cualquier procedimiento de limpieza y desinfeccin, se
deben tener presente las precauciones universales, los equipos de bioseguridad requeridos y
considerar todas las muestras como de alto riesgo.
DEFINICION
o Esterilizacin: Proceso que destruye toda forma de vida microbiana. Un objeto
estril (en sentido microbiolgico) est libre de microorganismos vivos.
o Desinfeccin: Es la destruccin, inactivacin o remocin de aquellos
microorganismos que pueden causar infeccin u ocasionar otros efectos
indeseables; la desinfeccin no implica necesariamente esterilizacin.
o Desinfectante: Agente usualmente qumico, que mata las formas en crecimiento
de los microorganismos, pero no necesariamente las esporas. El trmino se
refiere a sustancias utilizadas sobre objetos inanimados.

LA ESTERILIZACIN

La esterilizacin es un proceso a travs del que se puede lograr la destruccin total de los
microorganismos viables presentes en un determinando material. Este procedimiento es de
gran utilidad en todo los campos de microbiologa.

- El acondicionamiento del material (pipetas, tubos, placas de Petri, pinzas, etc.)
que va a ser utilizado en los laboratorios de microbiologa.
- La preparacin de medios de culti vo que sern empleados con
diferentes propsitos (culti vo de microorganismos, control de ambiente,
equipos o personal, anlisis microbiolgico de medicamentos, cosmticos,
alimentos, etc.). Existen diversos mtodos de esterilizacin. La seleccin del
mtodo es dependiendo de cada caso o tipo de material.

Clasificacin de los mtodos de esterilizacin:

Principales mtodos de esterilizacin, clasificados de acuerdo al tipo de agente que acta.

1) Agentes fsicos
El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor hmedo el
cual destruye a los microorganismos por desnaturalizacin de las protenas y el calor
seco que destruye a los microorganismos por oxidacin de su componente celulares.
El calor seco que destruye a los microorganismos es considerado en mtodo
esterilizacin por excelencia siempre y cuando el material esterilizarle soporte altas
temperaturas sin sufrir ningn tipo de dao.



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1. Esterilizacin por calor
El calor es el mtodo de eleccin para esterilizar el material de laboratorio resistente a
las altas temperaturas. La temperatura y el tiempo requeridos para esterilizar un
material dependen de que se est utilizando calor seco o calor hmedo. En ausencia
de humedad se necesita una temperatura ms alta, ya que en esta forma los microbios
son destruidos al absorber el calor. Pueden ser dos tipos:

Directa: flameado o incineracin ms utilizada en la boratorios .
Indirecto: aire caliente u horno de Pasteur con temperatura de 160C a 180C por 1 a 2
horas siendo el ms eficaz y seguro el elctrico.

Esterilizacin con calor hmedo:
El calor hmedo es la forma de vapor saturado a presin es eficaz para la destruccin
de todas las formas microbianas, incluso espora. La muerte de las bacterias es causada
por la desnaturalizacin y coagulacin de su protena o su sistema intercelular enzima-
protena. Estas reacciones son catolizadas por medio del agua.

Vapor a presin: conocido como autoclave, que posee todos los
requisitos indispensables como grados de temperatura y tiempo de
exposicin, que junto con el tamao del autoclave y el flujo del
vapor, la densidad y el tamao de la carga en la cmara aumentan
la tasa se muerte de los microorganismos, en una temperatura de
121C 132C durante 15 minutos o ms.

2. Esterilizacin por radiacin:
La ionizacin por radiacin genera iones al liberar electrones de los tomos, estos se
desprenden violentamente con tomos adyacentes y se une a ellos, o bien sedes
prenden del segundo tomo. La energa liberada se transforma en energa trmica o
qumica la cual causa la muerte de los microorganismos al romper la molcula del ADN
e impide la divisin molecular y la propagacin de la vida. Las principales fuentes de
radiacin ionizante son las partculas Beta y rayos gamma.

3. Agentes qumicos
Algunas sustancias qumicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes porque
tienen la capacidad de promover una o ms reacciones qumicas capaces de daar los
componentes celulares de los microorganismos (protenas, membranas, etc.)

CONTROL DEL PROCESO DE ESTERILIZACIN:
Todos los procesos de esterilizacin se deben controlar para poder asegurar que han sido
efectivos. Para ello se pueden utilizar indicadores fsicos, qumicos y/o biolgicos, los cuales
deben ser colocados encada carga de esterilizacin.
- Indicadores fsicos
Entre los principales indicadores fsicos se encuentran los medidores de presin y los
termmetros los cuales permiten constatar las condiciones fsicas dentro de la cmara
de esterilizacin. Tambin existen los termgrafos los cuales, adems de registrar la
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Material.

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temperatura alcanzada en el proceso, permiten conocer durante cunto tiempo sta se
mantuvo.

- Indicadores qumicos
La mayora de estos indicadores son cintas adhesivas que se adhieren al material a esterilizar.
Estas cintas estn impregnadas con una sustancia qumica que cambia de color cuando el
material ha sido sometido al proceso de esterilizacin. Este tipo de cintas no
son completamente confiables debido a que muchas veces slo indican que se lleg a la
temperatura deseada, pero no indican por cuanto tiempo sta se mantuvo. Tambin existen
cintas diseadas de manera que el cambio de color es progresivo, estas cintas son un poco ms
seguras porque permiten estimar si el tiempo de esterilizacin fue el adecuado.

- Indicadores biolgicos
Son preparaciones de una poblacin especfica de esporas de microorganismos, las cuales son
altamente resistentes a un proceso de esterilizacin en particular. Estos indicadores se deben
colocar junto con la carga de esterilizacin, en el sitio que se considera que es ms difcil que
llegue el vapor y despus del proceso, se deben incubar durante 24 horas en condiciones
adecuadas. Si despus de este periodo hay evidencia de crecimiento microbiano (por ejemplo
cambio de color del medio de cultivo), el proceso de esterilizacin no fue satisfactorio. Cuando
se utilizan indicadores biolgicos se debe verificar:
Tipo de microorganismo
Tipo de proceso de esterilizacin
Nmero de lote
Fecha de expiracin
Medio de cultivo utilizado
Condiciones de incubacin del indicador despus de aplicado el proceso
de esterilizacin
Controlar la temperatura y la humedad de las reas de almacenamiento.
Utilizar, preferiblemente, estantes cerrados para colocar el material.











AUTOCLAVE
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MICROSCOPIO









HORNO ESTUFA O INCUBADORA








ACENTRIFUGA











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AGITADOR MAGNETICO CONTADOR DE COLONIAS