Enzimas en los seres vivos, su especificidad y lo efectos segn la

concentracin de sustrato ,temperatura y actividad enzimtica

Esta investigacin estudi la presencia de enzimas en seres vivos, la especificidad y
los efectos de la concentracin del sustrato, la temperatura y la actividad enzimtica.
Se evalu la presencia de enzimas en seres vivos utilizando tubos con papa e
hgado e hirviendo 2 muestras de cada una para valorar el efecto de perxido de
hidrgeno sobre ellas, asimismo, se evalu la especificidad por medio de 2 grupos
de seis tubos de ensayo con clara de huevo y una solucin de almidn, cada grupo
con distintas sustancias (bromelina, amilasa, agua), aadindoles dos reactivos
diferentes (lugol y reactivo de Biuret). Para determinar el efecto de la concentracin
del sustrato se utilizaron tubos de ensayo con una solucin de almidn a diferente
concentracin cada uno (0%,1%,3% y 5%), a cada tubo se le agreg amilasa y
posteriormente lugol y se realizaron observaciones durante los 30 minutos
siguientes. El efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica se evalu con 4
tubos con solucin de almidn al 5%, los cuales fueron sometidos a diferentes
temperaturas. De los resultados se obtuvo que los seres vivos contienen diferentes
tipos de enzimas que actan sobre sustancias especficas, adems, que hay
diversos factores que pueden afectar su funcionamiento y desempeo, como lo es la
concentracin del sustrato y la temperatura.

Palabras clave: enzima, catalasa, perxido de hidrgeno, bromelina, reactivo de
Biuret, lugol, amilasa.


Se conoce que los seres vivos
realizan una serie de reacciones para
poder generar los nutrientes
necesarios para su supervivencia. La
produccin de energa, la sntesis de
macromolculas, la fijacin de los
rayos ultravioleta en las hojas de las
plantas, el funcionamiento de ciertas
estructuras y el del metabolismo
interno de los organismos estn
regidas por la actividad que realizan
las enzimas bajo ciertas condiciones
(Zamorano, 2009). Todas las
reacciones se llevan a cabo
requiriendo cantidades de energa
elevadas en un lapso extenso. Por ello
la funcin cataltica que las enzimas
desempean en los seres vivos es de
suma importancia ya que al disminuir
la energa de activacin de las
reacciones aumentan su eficacia y
rapidez (Brown, LeMay, Bursten,
Murphy; 2009).
La actividad de una enzima
depende de diversos factores; los ms
importantes son la temperatura, el pH,
la concentracin del sustrato y la
presencia o la ausencia de inhibidores
(Tortora, G. Funke, B. Case, C. 2007).
No todas la enzimas catalizan las
mismas reacciones, por el contrario
son muy especficas al actuar; incluso
solamente son capaces de actuar en
presencia del sustrato indicado, por
ejemplo, las enzimas que actan en el
proceso de la respiracin no pueden
hacerlo como enzimas digestivas, y
entre stas unas actan en protenas
(carnes) y otras catalizan
carbohidratos (pan, tortillas, harinas,
etctera); adems cada enzima realiza
una nica transformacin en el
sustrato. (Gama, 2007)
El objetivo de la presente
investigacin fue demostrar y
comprender la presencia de las
enzimas en los seres vivos, as como
estudiar su especificidad y los factores
que la pueden afectar.


MATERIAL Y MTODOS

La presente investigacin se
llev a cabo en el laboratorio de
Biologa General de la Escuela de
Biologa del Instituto Tecnolgico de
Costa Rica.
Se realizaron 4 pruebas,
llamadas en este artculo segn su
nmero, la prueba 1 para determinar
la presencia de enzimas en los tejidos
vivos, la prueba 2 para mostrar la
especificidad de las enzimas, la
prueba 3 para evaluar el efecto de la
concentracin del sustrato y la prueba
4 para observar el efecto de la
temperatura sobre la actividad
enzimtica.
Para comprobar la presencia de
enzimas en los tejidos vivos se
prepararon dos grupos de cuatro tubos
de ensayo, uno con trozos de papa y
uno con hgado de res; los tubos de
ensayo de cada grupo fueron
rotulados del 1 al 4. Se agreg 5 cc de
H
2
O a todos los tubos; los tubos 1 y 2
de cada grupo fueron hervidos y
posteriormente se dejaron enfriar. Se
aadi 1 cc de H
2
O
2
(perxido de
hidrgeno) al 15% a los tubos 1 y 3 de
cada grupo y a los tubos 2 y 4 se les
adicion 1 cc de agua como testigo.
Para determinar la especificidad
de las enzimas se prepararon 2
grupos de tubos de ensayo con
diferentes sustratos, seis con clara de
huevo (2 cc) y 6 con una solucin de
almidn (2 cc) al 5%. Cada grupo de 6
se rotul del 1 al 6. Se aadi a los
tubos 1 y 4 de cada grupo 2 cc de jugo
de pia; a los tubos 2 y 5, 2 cc de
amilasa; y a los tubos 3 y 6, 2 cc de
agua. Adems se agreg a los tubos
de cada grupo del 1 al 3 reactivo de
Biuret y a los tubos del 4 al 6 reactivo
de Lugol.
Para determinar la concentracin
del sustrato se colocaron en cuatro
tubos de ensayo, previamente
rotulados del 1 al 4, 2 cc de solucin
de almidn al 0%, 1%, 3% y 5%
respectivamente. A cada uno de ellos
se le agreg 1 cc de amilasa; se dej
reaccionar por 10 minutos,
seguidamente se aadi a cada tubo
cuatro gotas de reactivo de lugol para
luego colocarlos en bao Mara a 37C
haciendo observaciones peridicas
cada 10 minutos durante 30 minutos.
El efecto de la temperatura sobre
la actividad enzimtica se investig
con 4 tubos de ensayo con 8 cc de
solucin de almidn al 5%, se rotul
cada uno del 1 al 4. A todos los tubo
se les agreg dos gotas de reactivo de
lugol y se sometieron cada uno a
distintos tratamientos; el tubo 1 se
hirvi con un quemador Bunsen y se
dej enfriar, luego se le agreg ms
lugol; el tubo 2 se coloc en bao
Mara a 37 C por 30 minutos, el tubo
3 se coloc a bajas temperaturas en
un vaso con agua fra y trozos de hielo
por 30 minutos, el ltimo tubo se dej
a temperatura ambiente.


RESULTADOS

En la prueba de presencia de
enzimas en los tejidos vivos, se obtuvo
que en el tubo 1 con hgado y papa
(los cuales fueron previamente
hervidos), no presentaron cambios
visibles al agregar el H
2
O
2
al 15%, sin
embargo, al agregar H
2
O
2
a los tubos
3 con hgado y papa se produjo una
reaccin, en el tubo con hgado se
originaron burbujas y en el tubo con
papa, esta ascendi y de igual
manera que el hgado, se produjeron
burbujas en el tubo. Al aadir H
2
O a
los tubos 2 y 4 con hgado y papa no
se observaron cambios.
En la prueba de especificidad de
enzimas se obtuvieron diferentes
resultados al aadir el reactivo de
Biuret a los tubos con clara de huevo,
en el tubo 1 ( con jugo de pia), la
sustancia no sufri ningn cambio, sin
embargo, al agregar el reactivo de
Biuret al tubo 2 ( con amilasa) y al
tubo 3 ( con agua), las sustancias
cambiaron su color a violeta. Al
adicionar el lugol al tubo 4 (jugo de
pia), al tubo 5 (con amilasa) y al tubo
6 (con agua) no se observaron
cambios.
Para los tubos con almidn
(todos al 5% de concentracin) se
obtuvo que al agregar el reactivo de
Biuret al tubo 1 (con bromelina), al
tubo 2 (con amilasa) y al tubo 3(con
agua), las sustancias no sufrieron
ningn cambio y al agregar el lugol
tanto al tubo 4 (con bromelina) como
al tubo 6 (con agua) la sustancia se
colore de un tono azul fuerte, sin
embargo el tubo 5 (con amilasa) no
present cambios.
En la prueba de efecto de
concentracin del sustrato las
concentraciones de almidn al 0%,1%,
3% y 5%, desde el primer momento en
que se les agreg el lugol presentaron
una coloracin diferente, siendo la
muestra de almidn al 0% la que
present un grado de coloracin
sumamente claro (amarillo) en
comparacin a las dems muestras al
1%, 3% y 5% las cuales mostraron un
color ascendente en intensidad de
morados siendo el de 5 % el tono
ms oscuro y con una apariencia ms
densa. A los 10 minutos transcurridos
la muestra de almidn al 0% present
una coloracin amarillo claro, en la
muestra al 1% se logr apreciar un
pequeo grado de precipitacin,
mostrando un color azul oscuro en la
parte inferior del tubo de ensayo y en
su superficie un color morado; en las
muestras de almidn al 3% y 5% su
grado de coloracin se diferenci al
presenciar un nivel de aclaracin del
color morado por parte de la muestra
de almidn al 3% mientras que la
muestra de almidn al 5% permaneci
con su color morado intenso. En los
siguientes 20 minutos la muestra de
almidn al 0% mostr un color amarillo
claro muy similar al de los 10 minutos,
la muestra al 1% disminuy un poco
su intensidad de morado pero no tanto
como la muestra de almidn al 3% la
cual perdi por completo su coloracin
morada y en la muestra al 5% su
intensidad de morado permaneci. Al
finalizar los 30 minutos la muestra de
almidn al 0% se mantuvo con su
coloracin clara al igual que la
muestra de almidn al 3%, la muestra
de almidn al 3% fue la nica en
cambiar su coloracin por completo,
de un morado oscuro a uno blanco.
Las muestras de almidn al 1% y al
5% fueron las nicas en las cuales se
presenci un grado de coloracin
hasta finalizar la prueba, la muestra de
1% con una coloracin violeta y la
muestra de 5% con su color morado
intenso.
El efecto de la temperatura en
cada tubo de ensayo con almidn al
5% y lugol vari segn el tratamiento
recibido. En todos los tubos se agreg
lugol, lo que provoc un cambio de
color del almidn de gris a morado. El
primer tubo de ensayo al hervirse con
el quemador Bunsen provoc que la
coloracin que el almidn presentaba
cambiara a un color gris claro, luego
se le agreg ms lugol pero en esta
ocasin la coloracin morada no se
apreci. El segundo tubo de ensayo se
puso en Bao Mara a 37C por 30
minutos provocando que la coloracin
morada se tornara gris conforme
pasaba el tiempo. Al colocar el tercer
tubo de ensayo en un envase con
agua fra y trozos de hielo este no
present cambios en su coloracin
morada. Finalmente al mantener el
cuarto tubo de ensayo a temperatura
ambiente la coloracin morada se
degrad lentamente.

DISCUSIN

Los resultados de la prueba 1,
presencia de enzimas en los seres
vivos, mostraron que al agregar H
2
O
2

al 15% al tubo 1 con hgado y papa,
no se obtuvieron cambios, esto debido
que al haber hervido previamente
dicho instrumento, las catalasas se
degradaron, ya que como seala Starr
(2008): En las enzimas los enlaces
dbiles se deshacen por arriba del
lmite de temperatura que pueda
tolerar; la forma de la enzima cambia y
por lo tanto los sustratos pierden la
capacidad de enlazarse al sitio activo.
Al adicionar H
2
O
2
al 15% al tubo 3
con hgado y papa, se produjeron
burbujas, esto debido a que las
enzimas presentes en el hgado y
papa degradaron dicha sustancia,
Hernandez (2010) afirma que la
catalasa es una hemoprotena que
cataliza la reduccin del H
2
O
2
a H
2
O y
O
2
, por lo que se comprob que las
reacciones producidas en el hgado y
papa, como lo fue la produccin de
burbujas, se debi a que las catalasas
presentes en la papa y el hgado
descompusieron el perxido de
hidrgeno que les fue agregado y
liberaron oxgeno y agua.
Los resultados de la prueba 2,
especificidad de enzimas, y utilizando
clara de huevo, mostraron que la
sustancia en el tubo 1 (clara de huevo
con jugo de pia) no experiment
ningn cambio al serle agregado el
reactivo de Biuret, el cual es usado
para la deteccin de protenas
(Battaner, 1993).
Carson, Alverson y Boyd (2002)
para comprender las adaptaciones de
alimentacin del insecto Deraeocoris
nebulosus (Uhler), estudiaron las
glndulas salivales del insecto, y
descubrieron la presencia de las
enzimas beta-glucosidasa, pectinasa y
tripsina que le permite al insecto
acceder a los compuestos de las
protenas consumidas mediante la
ruptura de los enlaces de las mismas.
Si la bromelina acta de una manera
similar a las enzimas descubiertas en
el insecto, entonces el reactivo de
Biuret no ti la sustancia
probablemente debido a que la
bromelina ya haba realizado la
ruptura de los enlaces de las protenas
en la clara del huevo.
Tanto la sustancia en el tubo 2 (clara
de huevo con amilasa) como en el 3,
se ti de violeta cuando se le aadi
el reactivo de Biuret. La amilasa es
una enzima que provoca la hidrlisis
de los almidones (Daz, Fernndez,
Paredes, 1996), entonces el reactivo
pudo detectar las protenas del huevo,
ya que tanto la amilasa como el agua
no provocaron ninguna reaccin en
ellas.
Las sustancias de los tubos 4, 5,
y 6 que contenan bromelina, amilasa
y agua respectivamente, no
reaccionaron al aadirles el lugol, esto
debido a que el lugol tie
especficamente almidones (Barrio,
1992).
En la prueba de la especificidad
de enzimas utilizando almidn, las
sustancias de los tubos 1, 2 y 3, todos
con almidn al 5%, y con bromelina,
amilasa y agua respectivamente, no
reaccionaron al agregar el reactivo
Biuret, el cual determina protenas en
alimentos, (Jurado, 2005); lo que
confirma el porque al agregar el
reactivo de Biuret no realiz una
tincin en dicho tubo, este no
reacciona con el almidn.
La sustancia de almidn en el
tubo 4, as como la sustancia del tubo
6 se colorearon de un tono azul fuerte
cuando se les agreg lugol, esto
debido a que el lugol detect los
almidones y los ti, as como lo
afirma Sandoval(2005) : El lugol o
reactivo yodo-yoduro, tie
especficamente el almidn en azul
violeta. A los tubos 4 y 6 se les haba
aadido bromelina antes de
agregarles lugol, lo que significa que
sta no provoc cambios en los
almidones ya que el lugol los detect y
tio. Gil, Otero, Contreras, Petit y
Joshi (1997) sealan que la bromelina
cataliza el rompimiento hidroltico de
protenas en sus enlaces peptdicos, lo
que concuerda con los resultados
obtenidos del tubo 4, ya que la
bromelina no acto con los almidones
y por consiguiente, el lugol los pudo
detectar.
El almidn en el tubo 5 no sufri
ningn cambio al agregar lugol, esto
se debi a que al agregar antes la
enzima amilasa, esta cataliz los
almidones presentes en el tubo, ya
que como Calavera (2004) afirma:
Cada tipo de enzima solo puede
transformar un sustrato, por ejemplo,
las amilasas slo pueden desdoblar
almidn y las proteasas solo pueden
hidrolizar protenas. Pea (2004)
tambin seala que la amilasa es una
enzima fundamental en la digestin de
los almidones presente en la saliva de
los animales superiores. Por lo tanto
se confirma que el lugol no detect los
almidones porque la enzima amilasa
ya haba desdoblado el almidn.
En la prueba 3, efecto de la
concentracin del sustrato, las
diversas muestras de concentraciones
de almidn tanto al 0%, 1%, 3% y 5%
mostraron diferentes coloraciones.
Esto nos indica que segn la ley de
accin de masas, la velocidad de la
reaccin ser proporcional a la
concentracin (ES), la cual a su vez
depende de (E) Y (S). (Pea , 2004).
La velocidad de transformacin
de una reaccin catalizada por una
enzima aumenta con la concentracin
de sustrato hasta determinado valor
(Castieiras, Compao, 1998); como
ocurri con los experimentos donde a
mayor concentracin de almidn,
mayor velocidad de reaccin
enzimtica.
La temperatura a la que fueron
sometidas las muestras fue la ptima
(37 C), ya que si la temperatura
hubiese sido superior a la indicada las
enzimas se hubiesen tornado
inestables y luego de un corto
intervalo a esa temperatura su
actividad empezara a decrecer por
desnaturalizacin hasta perderse
totalmente, como sealan Koolman y
Rhm (2005).
En la prueba 4,efecto de la
temperatura sobre la actividad
enzimtica, se obtuvo que al agregar
lugol a todos los tubos con almidn
estos se tieron de morado, sin
embargo al agregar la enzima amilasa,
el color de cada tubo cambi de forma
distinta dependiendo de la prueba a la
que haba sido sometido. El color
morado del primer tubo al hervirse con
el quemador bunsen cambi
inmediatamente a color gris, esto
debido a que los almidones se
desnaturalizaron debido al calor (Yang
et al, 2011) y por lo tanto el lugol no
detect ningn almidn; el tubo
adems contena amilasa, una enzima
que cataliza la hidrlisis del almidn
en glucosa y maltosa (BioSystems,
2005), lo que significa que si no se
hubiera aplicado calor, el color del
tubo igual se hubiera perdido, solo que
posiblemente de una forma ms lenta,
ya que la amilasa hubiera provocado
la desnaturalizacin de los almidones.
El segundo tubo se someti a un
tratamiento de bao mara y conforme
pasaba el tiempo el color se iba
aclarando, sin embargo al alcanzar
los 37 C el color desapareci por
completo, esto debido a que la enzima
amilasa alcanz su temperatura
ptima. (Barreiro, Sandoval, 2006 )
El tercer tubo se coloc en un
vaso con hielo y se obtuvo que el color
de la sustancia no cambi. Ross y
Nichols (1999) sealan que las
temperaturas fras pueden afectar los
enlaces de las enzimas provocando
que stas no sean catalticamente
activas, por lo que el resultado
concuerda con lo propuesto, el fro
desactiv a las enzimas, por lo que el
lugol an pudo detectar los almidones
en la sustancia, estas no haban sido
catalizadas.
En el cuarto tubo no se observ
ningn cambio, esto debido a que no
que no se produjeron cambios de
temperatura en su entorno que
alterarn el funcionamiento de las
amilasas.

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