||UNIVERSIDAD

NACIONAL MAYOR
DE SAN MARCOS

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Facultad de Ing. Geológica, Minera, Metalúrgica, Geográfica y Civil
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE METALUGICA

Informe Biometalurgia N°6

CURVA DE CRECIMIENTO BACTERIANO

Profesor del curso:

ARIAS ARCE VLADIMIR ALEJANDRO

Alumno:
SARASI SANCHEZ PATRICK RICARDO

Código: 13160243

2019

Lima, Ciudad Universitaria

 CURVA DE CRECIMIENTO BACTERIANO
Objetivos

Conocer las fases de una curva de crecimiento en un cultivo de bacterias.

Aprender a calcular parámetros cinéticos (u, t&) característicos de las especies

bacterianas.

Introducción

En un sistema biológico se define al crecimiento como el aumento ordenado de las estructuras

y los constituyentes celulares de un organismo. Según ello, el aumento de la masa celular
producido por acumulación de productos de reserva (glucógeno, poliβhidroxibutirato) no
constituyen crecimiento. Se puede considerar como crecimiento al incremento de células
individuales por un lado, y por otro lado se puede considerar al crecimiento del número de
células (proliferación de la población). En lo que se refiere al crecimiento de células individuales,
este consiste en el aumento del tamaño y peso de las células que precede a la división celular.
Esta división trae aparejada un aumento en el número de células (proliferación de la población).
Las bacterias se dividen por fisión binaria, a través de la una cual célula madre al alcanzar un
determinado volumen se divide dando dos células hijas. El proceso de fisión binaria consiste en
la autoduplicación del material hereditario seguido de la repartición en las dos células hijas, las
que se separan por estrangulamiento de la membrana celular y formación de la pared celular
Ciclo normal del crecimiento Las poblaciones microbianas raramente mantienen un
crecimiento exponencial prolongado. Si ello ocurriera en poco tiempo la tierra estaría tapada
de una masa microbiana mayor que la de la tierra misma. El crecimiento está normalmente
limitado por el agotamiento de nutrientes o por la acumulación de productos del mismo
metabolismo microbiano, que les son tóxicos a la población. La consecuencia es que el
crecimiento al cabo de un cierto tiempo llega a disminuir hasta detenerse. En la figura 4 se
presenta la gráfica de una curva típica de crecimiento bacteriana. Como se puede observar, en
la gráfica se ha relacionado el tiempo transcurrido con el logaritmo del número de células
bacterianas. Cuando se realiza este tipo de gráficas se obtiene una línea recta, sin embargo en
esta sólo un sector (fase exponencial) corresponde a una recta.
Es posible distinguir cuatro fases: 1) fase de latencia o de retardo 2) fase exponencial 3) fase
estacionaria 4) fase de muerte En la fase de latencia existe un aparente reposo en el que las
células sintetizan las enzimas necesarias para la actividad metabólica que deben llevar adelante.
Cuando se hacen mediciones del número de células en distintos tiempos dentro de esta fase,
el valor no cambia sustancialmente. En cambio, interiormente las células trabajan activamente
adaptando el equipo enzimático al medio de cultivo. La bacteria se prepara para hacer uso de
los nutrientes que este medio le aporta, por lo tanto es la fase de adaptación al medio, con
aumento de la masa celular pero no del número de células. La edad del inóculo va a influir en
el tiempo de latencia en el medio fresco debido a la acumulación de materiales tóxicos y a la
falta de nutrientes esenciales dentro de la célula durante el crecimiento anterior. En general,
inóculos viejos alargan la fase de latencia.
Pasado este período, el cultivo entra en la denominada fase de crecimiento exponencial, donde
la velocidad de crecimiento es máxima. La velocidad de crecimiento que alcanza un cultivo,
depende del tipo de microorganismo que se trate y diversos factores ambientales como son la
temperatura, el pH, oxigenación, etc. La velocidad de crecimiento comenzará a disminuir hasta
hacerse nula cuando alcance la fase estacionaria, ya que cambios en la composición y
concentración de nutrientes entre el cultivo del inóculo y el medio fresco pueden desencadenar
el control y la regulación de la actividad enzimática. Esta fase se presenta por agotamiento del
suministro de algún nutriente esencial o por acumulación de productos metabólicos que sean
tóxicos. También puede ser por la disminución de la oxigenación o cambios en las condiciones
de pH del medio de cultivo (acidificación o alcalinización): En esta fase se equilibran el número
de células nuevas con el número de células que mueren. Por último, el cultivo entra en la fase
de muerte, en la que el número de células que mueren se va haciendo mayor. Cátedra
La pendiente de esta fase puede ser más o menos pronunciada de acuerdo al tipo de
microorganismo de que se trate. Suelen presentarse pendientes menos bruscas cuando el
microorganismo presenta alguna forma de resistencia (esporas, glicocalix).

El crecimiento y la viabilidad de los microorganismos está determinada por factores

nutricionales y ambientales, y en condiciones de laboratorio óptimas, es posible predecir una
curva de crecimiento característica de cada especia microbiana.
Cuando una bacteria es inoculada a un medio de cultivo líquido fresco, experimentará un
período de adaptación al medio y condiciones de cultivo y posteriormente se dividirá en
forma exponencial, dando lugar a una curva de tipo sigmoidal que se acostumbra dividir en
4 partes:
A) Fase de retardo, de adaptación o fase lag.
B) Fase de crecimiento exponencial o fase log,
C) Fase estacionaria y
D) Fase de declinación o muerte.

FIGURA 9. Ciclo de evolución de las bacterias.

Durante la fase de adaptación no hay división celular, la célula está sintetizando nuevos
componentes, durante la fase exponencial los microorganismos que se dividen por fisión
binaria lo hace a intervalos regulares, finalmente el crecimiento de la población disminuye y
la curva se vuelve horizontal debido al agotamiento de nutrimentos o la acumulación de
productos residuales tóxicos hasta que la población disminuye.

La forma de cada porción de la curva y el tiempo de duración de cada fase dependerá de:

La especie de microorganismos,
La preparación del inóculo,
La composición química del medio de cultivo y
Las condiciones ambientales de incubación.
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FACULTAD DE INGENIERÍA GEOLÓGICA, MINERA, METALÚRGICA Y GEOGRÁFICA
Laboratorio de Biometalúrgia

En general las bacterias crecen con mayor rapidez que los microorganismos eucarióticos y
los eucarióticos pequeños se desarrolla más rápidamente que los grandes. El metabolismo
energético también influye sobre la velocidad de crecimiento, debido a la ganancia
energética que se obtiene de cada vía catabólica de obtención de energía. Así, los
microorganismos fermentadores crecerán más lentamente que los respiradores.

Materiales:

1 Matriz Erlenmeyer de 250 ml. con 100 ml. de medio líquido (Anexo 2.15)
2 Matraces Erlenmeyer de 125 mt. con 99 ml. de solución salina Isotónica estéril
6 Pipetas de 1 ml. estériles
1 Mechero Fisher
1 Espectrofotómetro y celdas
16 Tubos con 9 ml de solución salina isotónica estéril
1 Varilla doblada en “L”
12 Cajas de Petri con Agar Nutritivo (Anexo 2.2)

Procedimiento:

El profesor inoculará una en un matraz Erlenmeyer con medio líquido complejo 12 horas
antes de iniciar la práctica, que se utilizará como inóculo para los cultivos en matraces
Erlenmeyer con diferente concentración de glucosa.

Los estudiantes cuantificarán el crecimiento periódicamente durante 6 horas de incubación.

Se aplicarán los métodos turbidimétrico y el de diluciones y siembra en placa (práctica N.
5) para cuantificar el crecimiento bacteriano.

Inoculación e incubación del cultivo

1. Inocular en condiciones estériles un matraz Erlenmeyer de 250 ml. con 100 ml. de
medio de cultivo complejo con 10 ml. de un cultivo bacteriano.

2. Homogenizar agitando el matriz e inmediatamente tomar una muestra de 5 ml. con una
pipeta estéril y vaciarla en una celda de espectrofotómetro. Esta muestra corresponderá
al tiempo cero (t =0). De la misma manera se tomarán muestras a las 0.5, 1, 2, 3 y 4 horas.
Para el tiempo de 6 horas de incubación se tomarán 6 ml.
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3. Colocar el cultivo en incubadora con agitación (150 rpm) a 35° C

Figura 10. Tratamiento de muestras para medición del crecimiento microbiano y la

elaboración de una curva de crecimiento.

Tratamiento de las muestras

1. Determinar la turbidez de las muestras en un espectrofotómetro a 560 nm. Leer el

valor de la densidad óptica.

2. En la muestra de 6 horas además de evaluar la turbidez, se deberá poner 1 ml. del cultivo
en una matraz con 99 ml. de solución. Del matraz con la muestra diluida, hacer

una serie de diluciones en tubos con 9 ml. de sol estéril, hasta 10-8, homogenizando las
muestras cada vez que se haga una nueva dilución.

3. Enseguida inocular 0.1ml. de las últimas tres diluciones en dos cajas de Petrí con agar
nutritivo y distribuir la muestra con una varilla de vidrio doblada en “L”.
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4. Dejar que se absorba el líquido en las cajas y posteriormente incubarlas en forma
invertida durante 24-48 horas.

5. Cuantificar el número de UFC/ml. de la bacteria estudiada.

Cuestionario
1. ¿Cómo se define el crecimiento en Microbiología y cuáles son los eventos a nivel celular
que ocurren en cada una de las etapas de crecimiento?

El crecimiento bacteriano es la división de una bacteria en dos células hijas en

un proceso llamado fisión binaria. Suponiendo que no se produzca ningún caso
de mutación las células hijas resultantes serán genéticamente idénticas a la
célula original. De este modo tiene lugar la "duplicación local" de la población
bacteriana. Las dos células hijas creadas tras la división no sobreviven
necesariamente. Sin embargo, si el número de supervivientes supera la unidad,
en promedio, la población bacteriana experimenta un crecimiento exponencial.
La medición de una curva del crecimiento exponencial de las bacterias en un
cultivo ha sido tradicionalmente una parte de la formación de todos
los microbiólogos.

2. ¿Qué condiciones ambientales y nutrimentales causarán una disminución o

eliminación de la fase lag. ¿Qué condiciones la incrementaría?
Si el inóculo procede de células en fase estacionaria de un cultivo anterior, la
fase lag es larga. Ello se debe a que los contenidos en coenzimas y otros
constituyentes de las células son bajos, y las células deben reponerlos en el
medio fresco.
Necesidad de neutralizar sustancias tóxicas en el medio fresco.
Porque se produce dilución de ciertos metabolitos intracelulares al inocular las
bacterias en el medio nuevo; por lo tanto, hasta que no se vuelva a alcanzar una
concentración de esos metabolitos adecuada para el crecimiento, éste no
“arranca”.