Tcnicas

de colecta
y tincin
de
parsitos

4 de marzo

2010

Principales tcnicas de colecta de parsitos encontrados en animales

domsticos y fauna silvestre, estudio, preparacin y conservacin.

Practica III

Tcnicas de colecta y tincin de parsitos 2010

Tcnicas de colecta y tincin de parsitos

Prctica 3
Universidad Nacional Autnoma de Mxico.
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza.
Laboratorio de Microbiologa
ROJAS MORALES ALBERTO-MONROY VILLANUEVA ADAIR-; EQUIPO6 2752

RESULTADOS

FIGURA 1.- Protozoarios flagelados

encontrados en el intestino de un hmster.

FIGURA 2.- MICROFILARIA OBSERVADA EN

LA SANGRE DE SAPO, A GOTA GRUESA.

FIGURA 3.- filaria encontrada en los

pulmones del sapo

Figura 4.- quistes encontrados en materia

fecal de gato, sacados directamente del
intestino

Figura 5.- alguna especie de paracito con

forma de cilindro, se encontraron en el rin
de rata

Figura 6.- Microfilaria encontrada en tejido

de rata
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Anlisis de resultados:
Fig. 1: debido a sus caractersticas se le
clasifico como giardia:
El gnero giardia comnmente comprende
seis especies: giardia agilis, Giardia lamblia,
giardia duodenalis, giardia microti, giardia
muris y guardia Psittaci, los cuales son
distinguidos basndose en la morfologa y
estructura de Sus trofozoitos.
Se eligi en especial guardia muris por ser
especfica para hmster adems de que se
encontraba parasitando el intestino de este
roedor y su gran parecido a la forma de una
giardia.

Fig. 2: debido a sus caractersticas se le

clasifico como Microfilaria:
Las filariasis son producidas por nematodos
filiformes, generalmente largos. Los adultos
tienen localizacin tisular y las formas
embrionarias o Microfilarias, se encuentran
en los tejidos o en la sangre, donde son
tomados por los artrpodos vectores. No se
pudo determinar ms sobre la especie.

Fig. 3: debido a sus caractersticas se le

clasifico como filaria:
Filaria, nombre comn de un nematodo
parsito de los vertebrados. Muchas
filarias causan enfermedades conocidas
conjuntamente como filariasis. El ciclo vital
de las filarias depende de dos huspedes,
un vertebrado y un artrpodo que suele
ser un insecto. Los gusanos adultos son

delgados y transparentes. No se pudo

determinar ms sobre su especie.

Fig. 4: debido a sus caractersticas se le

clasifico como quiste (posiblemente tambin
ooquiste) de toxoplasma:
La toxoplasmosis es una enfermedad
infecciosa ocasionada por un protozoo
parsito que se llama Toxoplasma gondii, un
parsito
intracelular
obligado.
La
enfermedad es considerada una zoonosis,
siendo los hospedadores definitivos el gato y
otras 6 especies de felinos.

Fig. 5: no se encontr informacin acerca de

este parasito por lo que solo se mencionaran
algunos parsitos q habitan en los riones:
Stephanurus dentatus Los adultos pueden
llegar a medir 0.5 centmetros de longitud, se
encuentran en los riones, las paredes de los
urteres y la grasa peritoneal.
Capillaria plica (el gusano de la vejiga del
perro) es un nematodo parsito, el ms a
menudo encontrado en la vejiga urinaria, y
de vez en cuando en los riones, de perros y
de zorros. Tambin ha sido encontrado en el
gato domstico, y varios mamferos salvajes.

Fig. 6: ya se describi con anterioridad este

parasito (ver fig2) este fue encontrado en
rata.

Conclusin:
En base a esta prctica concluimos que las
enfermedades
parasitarias
estn
ampliamente distribuidas en todos los
organismos, siendo de particular inters para
nuestro campo de estudio las zoonosis ya
que aquejan al ser humano, y ponen en
grave riesgo su salud y aun mas su vida. Por
lo que es de gran importancia su estudio y
comprensin no solo las tcnicas de
recoleccin y tincin; si no muy en particular
los ciclos de vida de los parsitos, ya que
estos nos permiten tener un arma eficaz para
la erradicacin de estas enfermedades

reproduce hasta que el contenido intestinal

inicia el proceso de deshidratacin,
momento en el que comienza el
enquistamiento del trofozoitos. Pierde los
flagelos, adquiere una morfologa ovalada, se
rodea de una pared qustica y madurez. Los
quistes expulsados junto a las heces ya son
infectantes. Cuando dichos quistes son
ingeridos por un nuevo hospedador, llegan al
duodeno, donde se disuelve la pared
qustica, dando as lugar a un individuo
tetranucleado que se divide inmediatamente
en dos trofozoitos binucleados que se anclan
al epitelio intestinal, cerrando as su ciclo
vital.

Cuestionario:
1. Desarrolle el ciclo biolgico de o los
parsitos que encontr en la prctica. De
no haber encontrado ningn parsito, el
asesor le asignar el o los parsitos que
desarrolle.

Giardia lamblia
Giardia lamblia vive en forma de trofozoitos
en la luz del
intestino delgado
(principalmente en el duodeno) adherido a
las vellosidades intestinales por medio de los
discos bilobulados. Se alimenta y se

Filarias
El ciclo vital de las filarias depende de dos
huspedes, un vertebrado y un artrpodo
que suele ser un insecto. Los gusanos
adultos son delgados y transparentes. El
macho suele ser la mitad de largo que la
hembra. Un canal alimentario sencillo se
abre cerca del extremo anal del cuerpo; la
hembra presenta dos tubos, que se abren a
una vagina anterior, y forman el tero. Los
huevos se desarrollan mientras avanzan
por el tero. Cuando son liberados,
contienen ya Microfilarias, o gusanos
juveniles de alrededor de 0,008 cm de
longitud, envueltos individualmente por
una membrana. Cuando se incorporan a la
circulacin perifrica del husped, estas
Microfilarias son absorbidas por un insecto
hematfago, casi siempre alguna especie
de mosquito. Las Microfilarias se
desprenden de sus envueltas en el

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estmago del insecto y penetran en su
trax. Tras una ulterior fase de desarrollo
en l, los gusanos jvenes se abren camino
hasta la probscide del insecto. Cuando
ste vuelve a alimentarse de la sangre de
un vertebrado, las Microfilarias penetran
bajo la piel del segundo husped y se
incorporan a su torrente sanguneo a
travs de la perforacin realizada por el
insecto o bien penetran en los tejidos
subcutneos. Muchas Microfilarias no van
ms all, pero algunas acaban encontrando
capilares y, a travs del sistema
circulatorio, acaban llegando al sistema
linftico, donde se transforman en gusanos
adultos.

Toxoplasma gondii
El ciclo de vida del T. gondii tiene dos fases.
La fase sexual del ciclo de vida ocurre solo en
miembros de la familia Felidae (gatos
domsticos y salvajes), haciendo que estos
animales sean los hospedadores definitivos
del parsito. La fase asexual del ciclo de vida
puede ocurrir en cualquier animal de sangre
caliente, tales como otros mamferos y aves.
Por ello, la toxoplasmosis constituye una
zoonosis parasitaria.[

En el hospedador intermediario, incluyendo

los felinos, los parsitos invaden clulas,
formando un compartimento llamado
vacuola
parasitfora
que
contienen
bradizoitos. Las vacuolas forman quistes en
tejidos, en especial en los msculos y
cerebro. Debido a que el parsito est dentro
de las clulas, el sistema inmune del
hospedador no detecta estos quistes. La
resistencia a los antibiticos vara, pero los
quistes
son
difciles
de
erradicar
enteramente. T. gondii se propaga dentro de
estas vacuolas por una serie de divisiones
binarias hasta que la clula infestada
eventualmente se rompe, liberando a los
taquizoitos. Estos son motiles, y la forma de
reproduccin asexual del parsito. A
diferencia de los bradizoitos, los taquizoitos
libres son eficazmente eliminados por la
inmunidad del hospedador, a pesar de que
algunos logran infectar otras clulas
formando bradizoitos, manteniendo as el
ciclo de vida de este parsito.
Los quistes tisulares son ingeridos por el gato
(por ejemplo, al alimentarse de un ratn
infectado). Los quistes sobreviven el paso
por el estmago del gato y los parsitos
infectan las clulas epiteliales del intestino
delgado en donde pasan por la reproduccin
sexual y la formacin de ooquiste, que son
liberados con las heces. Otros animales,
incluyendo los humanos ingieren los
ooquiste (al comer vegetales no lavados
adecuadamente) o los quistes tisulares al
comer
carne
cruda
o
cocida
inapropiadamente. Los parsitos entran a los
macrfagos de la pared intestinal para luego
distribuirse por la circulacin sangunea y el
cuerpo entero.
2. Nombre y explique el fundamento de dos
tcnicas de fijacin, para protozoarios y
helmintos, aparte de las incluidas en el
anexo.

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FIJADORES:

TINCIONES

Formaldehido
Para preservar esporas de microsporidia, quistes
ooquiste de protozoarios se utiliza el
formaldehido al 5.0% y para huevos y larvas de
helmintos al 10%. Si la muestra de heces contiene
quistes y huevos se recomienda usar el fijador al
10%.
Formaldehido 0.5%
5.0mL
Solucin salina (NaCl 0.85%)
95.0mL

Hematoxilina frrica modificada

La hematoxilina es un colorante natural, cuyo
producto de oxidacin (la hematena) cumple la
funcin de colorante. La hematena por s sola
tiene poca afinidad por los tejidos por lo tanto
debe utilizarse con un mordiente. De acuerdo al
mordiente tendremos las distintas hematoxilinas,
entre ellas la frrica y la fosfotngstica.
Hematoxilina Frrica > Es una coloracin muy
estable, que resulta til para estudiar detalles
celulares finos pues brinda una tincin ntida y
bien diferenciada (ej. Extraccin muscular).
En este caso se usan como mordientes sales de
hierro, las que actan a la vez como agentes
oxidantes. La laca frrica que forman estas
hematoxilinas presenta color negro o azul negro.
Hematoxilina Fosfotngstica > Esta tcnica se
utiliza para el estudio del sistema nervioso central
y tejido conjuntivo, en particular estras
musculares y fibras. En este caso el mordiente
utilizado es el cido fosfotngstica. Resultados:
cromatina, eritrocitos y cilios se colorean azul
oscuro, las estriaciones musculares azul casi
negro y los citoplasmas se colorean rosa plido.

El formaldehido se diluye con solucin salina.

Para mantener la morfologa de los parsitos en
condiciones ptimas se recomienda el fijador
amortiguado. A 100mL del fijador se le adiciona
0.08g de una mezcla de sales y se homogeniza
(sales: se mezclan 6.10g de fosfato de sodio
monobsico y se almacena en un frasco
hermticamente cerrado). Cuando se utiliza el
fijador a temperatura ambiente, los huevos de
helmintos de pared gruesa pueden seguir su
desarrollo; para asegurar que los huevos no sigan
su desarrollo se recomienda usar el fijador a 60C
Schaudinn
Este fijador facilita la preservacin de quistes,
trofozoitos, huevos y larvas.
Solucin concentrada
Cloruro de mercurio
Agua destilada
Etanol 95%
Solucin de trabajo
Solucin concentrada
cido actico glacial

Para obtener buenas tinciones se recomienda

usar el fijador Schaudinn.
11.40g
200.0mL
100.0mL
47.0mL
3.0mL

Se mezcla el cloruro de mercurio y el agua

destilada con agitacin constante; despus se
aade el etanol, se homogeniza y se almacena en
frascos mbar a temperatura ambiente. Esta
solucin concentrada puede durar varios meses.
La solucin de trabajo se prepara en el momento
en que se va a preservar la muestra con las
estructuras parasitarias. La muestra con el
especmenes parasitarios se homogeniza con la
solucin de trabajo pero se mantiene una
relacin 1:3 (muestra: fijador).

Solucin concentrada A
Hematoxilina
Etanol absoluto
Solucin concentrada B
Sulfato ferroso de amonio
Sulfato frrico de amonio
cido clorhdrico
Agua destilada

10.0g
1000.0mL
10.0g
10.0g
10.0mL
1000.0mL

Las soluciones se almacenan a temperatura

ambiente y su vida media es de 6 meses.
Solucin de trabajo
Solucin concentrada A
Solucin concentrada B

15.0mL
15.0mL

PROCEDIMIENTO
Hacer un frotis en un portaobjetos y emulsionarlo
con solucin salina isotnica; es necesario que la
capa quede delgada. Antes de que las heces se
sequen, se fija con Schaudinn durante sesenta

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minutos. (Se puede dejar toda la noche en el
fijador).
Para eliminar los cristales del cloruro de mercurio
se colocan las preparaciones en una solucin de
etanol al 70%-yodo durante cinco minutos. (La
solucin alcohol yodo se prepara aadiendo unas
gotas de yodo a 3% al etanol a 70%).
Posteriormente, en etanol al 95% y en etanol al
70% (en ambos pasos durante cinco minutos).
Se lavan al chorro de agua, dejando que el agua
fluya durante 10 minutos.
Los portaobjetos se colocan en la solucin de
trabajo durante cinco minutos.
Se lavan al chorro de agua durante 10 minutos.
Se deshidratan en etanol al 70%, 95% y etanol
absoluto
(Cada paso ser de 5 minutos).
Se transfieren las laminillas a xileno durante 10
minutos. Se cubren las laminillas con blsamo de
Canad se coloca un cubreobjetos del nmero 1 y
se dejan secar.
Negro de Clorazol
Esta tincin se usa para teir el esqueleto
cuticular de los insectos, entero o en partes
aisladas. El negro de Clorazol en un colorante que
se fija extraordinariamente a la cutcula dando
diferentes tonos de coloracin que hacen
aparecer los ms finos detalles. Se recomienda
utilizarla con muestras de materia fecal sin
fijador.
Solucin A
Etanol 90%
Metanol 100%
cido actico glacial
Fenol lquido
cido fosfotngstica 1%
Agua destilada
Solucin B
Negro de Clorazol
Solucin A

PROCEDIMIENTO
Se hace un frotis con las heces, y se evita que se
seque. Se sumerge en el colorante durante 1-2
horas. Se coloca en etanol al 95%, durante 5
minutos. Despus en etanol al 100% por cinco
minutos (se repite este paso una vez ms).
Se pasa al tolueno o xileno durante cinco minutos
(Repetir una vez).
Se cubren las preparaciones con resina o blsamo
de Canad, se coloca un cubreobjetos del nmero
1 y se deja secar.
Resultados: la cutcula toma el color de azul a
negro segn el grosor de la cutcula y el tiempo
de exposicin al colorante (Fig. 2A, 2B). Si no se
quiere hacer el montaje definitivo en blsamo de
Canad, las piezas se pueden guardar
indefinidamente en lactofenol o en alcohol
benclico para observar directamente en el
microscopio, slo hay que evitar que el lactofenol
o el alcohol benclico se evaporen.

3. Nombre y desarrolle el ciclo biolgico de

dos nematodos hematfagos y parsitos
del humano.
NEMATODOS HEMATOFAGOS

170.0mL
160.0mL
20.0mL
20.0mL
12.0mL
618.0mL
5.0g
1000.0mL

Se tritura el colorante (negro de Clorazol) con

algunos mililitros de la solucin A, y se sigue
triturando hasta obtener una pasta sin grumos;
se aade ms solucin A, se muele, se deja
sedimentar y se vaca el sobrenadante en otro
recipiente. Se sigue moliendo y se vaca hasta que
todo el colorante est en solucin. El colorante se
almacena de 4-6 semanas antes de usarse.

Wuchereria bancrofti es un parsito nematodo,

causante de la parasitosis humana llamada
filariasis linftica y transmitida por varias especies
de mosquitos. Su nombre fue dado por razn de
los cientficos Otto Wucherer y Joseph Bancroft,
afecta a ms de 120 millones de personas,
principalmente en frica, Suramrica y otros
pases tropicales y subtropicales. De no tratarse la
infeccin, puede resultar en una enfermedad
denominada elefantiasis.
Ciclo de vida

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W. bancrofti completan su ciclo de vida en dos
hospedadores: los seres humanos sirven como el
hospedador definitivo y los mosquitos son los
hospedadores intermediarios. Los parsitos
adultos residen en el sistema linftico y son
vivparos, es decir, sus cras se desarrollan en el
vientre de la hembra.
Microfilaria
El primer estadio del parsito se denomina
Microfilaria y estn presentes el sistema
circulatorio. Las Microfilarias continuamente
migran de la circulacin profunda hasta
La circulacin perifrica. Durante el da estn
presentes en las venas profundas y durante la
noche migran a la circulacin perifrica, desde
donde el gusano es transferido al vector. Los
vectores artrpodos ms comunes son los
mosquitos de las especies Culex, Anopheles,
Aedes, y Mansonia. Dentro de su segundo
hospedador, la Microfilaria madura a la larva
motil. Un mosquito, del gnero Armigeres
ingiriendo sangre de un dedo humano.
Larva
Cuando el mosquito infestado se alimenta,
deposita en la sangre del hospedador humano, la
forma larval del gusano. La larva migra hacia los
ganglios linfticos, predominantemente a nivel de
las piernas (la ingle) y el rea genital, lugar donde
se desarrolla en la forma adulta del parsito en el
curso de aproximadamente un ao. Para
entonces, las hembras adultas pueden producir
nuevas Microfilarias. O vacunas preventivas.

Trichuris trichiura
A: Eliminacin por materia fecal de huevos
inmaduros.
B: En presencia de condiciones optimas (25 - 30
C y elevada humedad) el huevo se torna maduro
(larva desarrollada) e infectante en el lapso de 24 semanas.
C: Este huevo infectante es vehiculizado hasta el
hombre (nico hospedero) a travs de tierra y
alimentos contaminados con la misma.
D: El hombre ingiere los huevos maduros
producindose la liberacin de la larva en el
intestino delgado y su migracin hasta el ciego
donde se diferenciar a gusano adulto y luego de
que la hembra se encuentre fecundada
comenzar la liberacin de huevos al tubo
digestivo para que estos sean eliminados con la
materia fecal.
Referencias:

.
Onchocerca volvulus
La Oncorcercosis es un padecimiento producido
en el hombre por un nematodo: Onchocerca
volvulus

PARASITOLOGA MDICA. Jorge Tay

Zavala, Ramn Lara Aguilera et.al. 5
edicin. Editorial Mndez editores.
Mxico 1995.
Biagi Francisco. Enfermedades
parasitarias. Editorial el Manual
Moderno. 3ra ed. Mxico, 2004.
DPDx - Parasites and Health
[Internet]. [cited 2010 Mar
4];Available
from:
http://www.dpd.cdc.gov/DPDx/HT
ML/Para_Health.htm
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