1. Técnicas para la observación microscópica de hongos.
----Montaje húmedo, técnica fácil de realizar, rápida y económica, pero debido a la forma tan
directa de tomar la muestra, esta sufre algún traumatismo, en las estructuras microscópicas,
lo que dificulta el hecho de identificarlo correctamente.
Colocar una pequeña fracción de la colonia con cierta cantidad de agar en un porta con azul
de lactofenol.
• Separar la colonia con unas pinzas y cubrir con el cubreobjetos
• Presionar suavemente con unas pinzas o el extremo de un lápiz
• Examinar la preparación primero con 10X y después con 40X. Si se observan
estructuras sospechosas se puede observar con 100X (objetivo de inmersión)
Esta técnica a menudo rompe las débiles estructuras fructificantes de los hongos
filamentosos, haciendo difícil observar las características de esporulación.
----Técnica de cinta adhesiva, la cual es barata, rápida y fácil de realizar, sin embargo, si la
toma de la muestra no se hace correctamente la observación será mala.
Este método de preparación es útil ya que se conserva las características de
agrupamiento de las esporas de algunos hongos más delicados.
• Adherir una cinta adhesiva transparente (tipo Fixo) sobre la colonia para tomar
una porción del micelio aéreo
• Colocar una gota de azul de lactofenol sobre el portaobjetos
• Pegar un extremo de la cinta adhesiva cargada con el micelio en el extremo del
porta
• Presionar la cinta sobre el colorante para permitir que le micelio empape en la
solución y entonces cuidadosamente pegar el extremo de la cinta adhesiva al
porta con cuidado de que no se formen burbujas de aire
• Observar al microscopio de igual forma que en el método anterior excepto que
no se observa con inmersión
------La técnica idónea para identificar y clasificar un hongo filamentoso es el “Microcultivo “.
Esta técnica es más difícil de realizar, más cara, no es idónea para un diagnóstico rápido;
por otro lado esta técnica es inmejorable para observar las estructuras microscópicas de los
hongos filamentosos en forma casi intacta.
En los casos en los que las técnicas anteriores no den buenos resultados o cuando se
requiere mantener la preparación por algún tiempo para observaciones posteriores, se
recomienda la técnica de microcultivo en porta. Aunque es algo más laboriosa, se
consiguen preparaciones de alta calidad en las que se pueden observar perfectamente las
estructuras de diferenciación como esporas y sus agrupamientos.
• Poner un trozo de papel de filtro o algodón en el fondo de una placa Petri
• Colocar sobre ella dos pequeños palillos de vidrio o de otro material, que
servirán de soporte para el portaobjetos
• Colocar un cilindro de medio de agar como dextrosa, patata, etc., sobre el porta,
este se puede cortar con un sacabocados
• Inocular en tres o cuatro sitios diferentes del cilindro de agar con una pequeña porción de
la colonia del hongo
• Calentar ligeramente un cubre por paso a través del mechero e inmediatamente colocar
sobre la preparación, con lo que el agar es ligeramente fundido, lo que sella completamente
el cubre contra la preparación.
• Pipetear una pequeña cantidad de agua en el fondo de la placa para saturar el papel de
filtro.
• Colocar la tapa de la placa e incubar a temperatura ambiente o a 30ºC durante 3-5 días.
• Cuando aparezca un crecimiento visible, puede separarse el cubre suavemente de la
superficie del agar, con cuidado de no romper el micelio.
• Colocar el cubre sobre una gota de lactofenol en un segundo porta.
• Una vez retirado el cubre, se puede retirar también el bloque del agar y hacer con él una
segunda preparación con azul de lactofenol.
• Si no puede retirarse el cubre del agar, ya que se ha pegado firmemente a él y se
ha secado lo suficiente, se puede llevar a cabo la preparación añadiendo a los
bordes del cubre la solución del colorante de lactofenol. Éste entra en la
preparación por capilaridad y tiñe las estructuras.
2. Buscar (Técnica, utilidad, ventajas y desventajas, fundamento y factores que
influyen).
● Preparación por disgregación (montaje húmedo)
-Técnica
1. Extraer un pequeña porción de la colonia incluyendo parte del agar que está debajo
de la superficie
2. Colocarla en un portaobjetos con una gota de azul de lactofenol
3. Disgregar la colonia con un aguja de disección
4. Cubrir con un cubreobjetos
5. Examinar con el objetivo de 10x, 40x y por último con el de inmersión
Colocar sobre un portaobjetos una gota de solución de lactofenol no demasiado
grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparación quede demasiado
gruesa. Realizar la misma operación en otro portaobjetos que se usará para lavar la
muestra. 2. Tomar el material a observar en una mínima cantidad con agujas finas o
lancetas procurando arrancarlo desde la base y disponerlo con cuidado sobre la gota
de uno de los portaobjetos. Con esta especie de lavado se consigue desprender el
exceso de conidios que casi siempre llenan estas preparaciones y que impiden ver lo
que realmente interesa, los conidióforos. 3. Transportar el material con la lanceta a la
gota del segundo portaobjetos que será ya el definitivo. 4. Con agujas muy finas se
distribuye el material en la gota de manera que no quede amontonado. 5. Colocar el
portaobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar que se formen
burbujas entre los dos vidrios. 6. Observar con lente de 10x y 40 x
-Utilidad
Método más rápido para la detección de estructuras fúngicas
Puede aportar, en ocasiones, un diagnóstico definitivo y en otras, un diagnóstico de
sospecha previo a la confirmación definitiva por cultivo
-Ventajas y desventajas
Ventajas
● Método económico
● Rápido
● Fácil de realizar
Desventajas
● Pueden sufrir algún traumatismo las estructuras fúngicas
-Fundamento
En un montaje húmedo, la muestra se coloca en una gota de agua u otro líquido contenido
entre el portaobjetos y el cubreobjetos por la tensión superficial. Este método se utiliza
comúnmente para ver los organismos microscópicos que crecen en el agua del estanque o
de otros medios líquidos, especialmente cuando el estudio de su movimiento y el
comportamiento.
-Factores que influyen
● Tamaño de la gota de solución de lactofenol, no debe ser demasiado grande para
evitar que el cubreobjetos flote y la preparación quede demasiado gruesa.
● Tomar el material a observar en una mínima cantidad con agujas finas o lancetas
procurando arrancarlo desde la base y disponerlo con cuidado sobre la gota de uno
de los portaobjetos, con esta especie de lavado se consigue desprender el exceso
de conidios que casi siempre llenan estas preparaciones y que impiden ver lo que
realmente interesa, los conidióforos.
● Distribución del material con la aguja debe ser de manera que no quede
amontonado.
● Colocar el portaobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar que se
formen burbujas entre los dos vidrios.
● Preparado por cinta adhesiva de Scoth
-Técnica
1. Colocar una gota pequeña de colorante en el portaobjetos
2. Con un pedazo de cinta adhesiva, tomar una muestra de la colonia de los hongos
3. Pegar la cinta sobre la gota en el portaobjetos, eliminar el exceso del colorante
4. Observar a 10x y 40x
Adherir una cinta adhesiva transparente (tipo Fixo) sobre la colonia para tomar una porción
del micelio aéreo • Colocar una gota de azul de lactofenol sobre el portaobjetos • Pegar un
extremo de la cinta adhesiva cargada con el micelio en el extremo del porta • Presionar la
cinta sobre el colorante para permitir que le micelio empape en la solución y entonces
cuidadosamente pegar el extremo de la cinta adhesiva al porta con cuidado de que no se
formen burbujas de aire • Observar al microscopio de igual forma que en el método anterior
excepto que no se observa con inmersión
-Utilidad
Conserva las características de agrupamiento de las esporas de algunos hongos más
delicados
-Ventajas y desventajas
Ventajas
● Fácil de realiza
● Rápido
● Económica
● Mantiene la estructura del hongo
Desventajas
● El resultado depende completamente del operario
● Depende de la madurez del hongo
● Depende de la forma adecuada de aislamiento
-Fundamento
Este método de preparación es útil ya que se conserva las características de
agrupamiento de las esporas de algunos hongos más delicados.
-Factores que influyen
● Tamaño de la gota de la solución de lactofenol, no demasiado grande para evitar que
el cubreobjetos flote y la preparación quede demasiado gruesa.
● Tamaño de trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm.
● Manejo de la cinta adhesiva , tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la
fruta o el pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de un cultivo. En la
zona central de una colonia puede haber una excesiva concentración de esporas.
● Burbujas de aire al pegar el extremo de la cinta adhesiva al porta
Cortar un fragmento de cinta scotch y tocar con el lado adhesivo un área de la colonia, en la
periferia si la colonia está bien desarrollada, o bien, en el centro si se trata de una colonia
joven. c. Coloque la cinta con el lado adhesivo hacia abajo sobre la laminilla ya preparada,
coloque una gota adicional de colorante sobre la cinta, coloque un cubreobjetos y presione
suavemente para eliminar burbujas de aire. d. Examinar al microscopio con los objetivos
10x y 40x
https://avdiaz.files.wordpress.com/2010/02/practica-de-laboartorio-1.pdf
https://www.ugr.es/~cjl/hongos
Técnica de gota pendiente
-Técnica
Gota pendiente
1. Con un palillo colocar un poco de vaselina alrededor de la concavidad del
portaobjetos excavado.
2. Con una pipeta Pasteur tomar una gota de la muestra y colocarla en el centro del
cubreobjetos.
3. Invertir el portaobjetos excavado y colocar la excavación sobre el cubreobjetos que
tiene la muestra, procurando que ésta quede en el centro de la concavidad.
4. Oprimir suavemente la zona engrasada a fin de sellar y disminuir la evaporación.
5. Invertir la preparación y observar al microscopio con los objetivos de 10x y 40x.
6. Esquematizar la morfología y movimiento de los microorganismos observados.
-Utilidad
-Ventajas y desventajas
-Fundamento
-Factores que influyen
● Técnica de emparedado
-Técnica
-Utilidad
-Ventajas y desventajas
-Fundamento
-Factores que influyen
● Cultivo en lámina o microcultivo
El material necesario consta de portaobjetos, cajas de Petri, caballetes de vidrio en U (o en
V) dentro de estas últimas y agua, todo estéril. Se toma una caja de Petri con un caballete
(si no están estériles se pasan por la flama). Se depositan 5 ml de agua en la caja de Petri,
que evitan la desecación posterior. Se coloca un portaobjetos sobre el caballete y con una
pipeta estéril se pone una capa de gelosa en la superficie de la laminilla y se reaspira para
minimizar el espesor de la capa. Se siembra en el centro un fragmento del cultivo y se
incuba a la temperatura seleccionada.
Luego del desarrollo suficiente del cultivo, se retira el exceso de gelosa, se pone una gota
de azul de lactofenol, se cubre con una laminilla, se sella y se examina.
Hay dos variedades de esta técnica:
1. Lámina desecada. Tras retirar el exceso de gelosa, se seca el cultivo a 37 °C, se fija
con una gota de alcohol absoluto, se colorea con azul de algodón, se deshidrata con
alcohol, se enjuaga con tolueno y se monta con resina.
2. Cuadrado de gelosa. El cultivo se realiza en el punto medio de los cuatro lados de un
pequeño cuadrado de gelosa de Sabouraud (1.5 cm de lado y 2 mm de espesor) que se
coloca en el portaobjetos y se pone encima un cubreobjetos. Luego del crecimiento del
hongo se retiran el cubreobjetos y la gelosa. De este modo, los filamentos y los órganos
de reproducción quedan unidos al cubreobjetos y al portaobjetos. Ambas partes se
montan con azul de algodón, se sellan y examinan al microscopio.
-Utilidad
Es una técnica empleada en el laboratorio de micología, para favorecer la esporulación de
los hongos filamentosos. Consiste en colocar una pequeña porción de un medio de cultivo
sobre una lámina portaobjetos asegurando que el hongo filamentoso esté en condiciones
extremas, para facilitar así la esporulación o reproducción y lograr evidenciar todas las
estructuras morfológicas que nos permiten realizar la identificación del agente patógeno en
estudio.
-Ventajas y desventajas
● Permite observar las estructuras de los hongos filamentosos en forma casi intacta.
● Se puede mantener la preparación por algún tiempo para observaciones posteriores.
● No es idónea para un diagnóstico rápido.
-Fundamento
Procedimiento que permite la observación e identificación de las estructuras microscópicas
de hongos filamentosos que se distinguen con facilidad sin distorsión, alteración o
rompimiento de las mismas. Esto pasa cuando el hongo se desarrolla directamente bajo el
portaobjetos.
Forma parte de las pruebas para identificar el género y la especie de los hongos, permiten
hacer el seguimiento del desarrollo de los mismos.
-Factores que influyen
3. Hongos a los cuales no se les puede realizar un microcultivo y por qué.
En el caso de los hongos levaduriformes no es recomendable realizar un microcultivo es
más recomendable emplear cualquiera de lo siguientes criterios para su identificación:
● Morfológicos
● Bioquímicos
● Inmunológicos
● Genéticos
1. Arenas R. Micología médica ilustrada. 3a ed. México: Interamericana-
McGraw-Hill; 2008.
2. Andino F y Castillo J. Curso Microbiología de los alimentos: Un enfoque
práctico para la inocuidad alimentaria. Nicaragua: Universidad de Ingenieria;
2010.
