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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA


Anteproyecto para la determinación del porcentaje de humedad en una muestra
comercial de ampicilina en polvo inyectable del laboratorio, marca, con un
número de lote por Karl-Fisher.
Grupo: 2502 Laboratorio Fecha de
Página: 1 de 8
número L-402 emisión: 10/05/18

OBJETIVO
Determinar del porcentaje de humedad en una muestra comercial de ampicilina en polvo inyectable
del laboratorio , marca , con número de lote por el método de Karl-Fisher.
HIPÓTESIS
Contiene el equivalente a no menos de 90.0 % y no más de 115.0 % de la cantidad de ampicilina,
indicada en el marbete según la Farmacopea de los Estados Unido Mexicanos, undécima edición.
MARCO TEORICO
En la industria y en el comercio, uno de los métodos analíticos más ampliamente utilizados es el
procedimiento de valoración Karl Fisher para la determinación de agua en diversos tipos de sólidos y
líquidos orgánicos. Este importante método de valoración se basa en una oxidación/reducción que es
relativamente específica para el agua.
Las empresas farmacéuticas trabajan en un entorno muy regulado y las farmacopeas
gubernamentales establecen la determinación del contenido de humedad en excipientes
farmacéuticos, a través de diferentes métodos. Muchos materiales como ingredientes farmacéuticos
activos (API) o excipientes pueden ser hidratos o absorber agua. El contenido de agua en estos
materiales puede afectar la pureza, la vida útil debido a la desintegración química, estado físico del
producto y la integridad.
Para determinar el porcentaje de humedad el método se basa en la titulación volumétrica con yodo en
presencia de un exceso de base (piridina o imidazole), alcohol (metanol) y dióxido de azufre:

El SO2 reacciona con el alcohol primario para formar un alquilp, y esto a su vez reacciona con I2 y H2O
para formar el sufato de alquilp y I-. Se titula el contenido de agua adicionando yodo cuantitativamente.
El iodo reacciona con el agua y se reduce a I-.
El pH debe estar entre 5 y 8, es por ello que se utiliza la piridina.

Detección del punto final.

Realizó: Revisó: Revisó: Aprobó


Reyes Mendoza Marco Iván Galindo Farfán abril Domínguez López Karla Reyes Vallejo Natalia
Michelle Irene
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Se puede observar a simple vista un punto final en la valoración Karl Fisher tomando como base el
color marrón del reactivo en exceso. Sin embargo, es más común que los puntos finales se obtengan
a partir de medidas electroanalíticas. Diversos fabricantes de instrumentos ofrecen aparatos
automáticos o semiautomáticos para llevar a cabo la valoración Karl Fisher. Todos ellos se basan en
la detección electrométrica del punto final.
Propiedades de reactivos
El reactivo de Karl Fisher se descompone con el paso del tiempo. Puesto que la descomposición es
especialmente rápida inmediatamente después de la preparación, es una práctica común preparar el
reactivo uno o dos días antes de que se vaya a utilizar. En general, su fuerza debe establecerse
diariamente con una solución patrón de agua en metanol. Una firma comercial del reactivo Karl Fisher
ha conseguido actualmente disponer de un reactivo que requiere únicamente una renormalización
(revalorización) ocasional.
Es obvio que se debe tener gran precaución para evitar que la humedad atmosférica contamine el
reactivo de Karl Fisher y la muestra. Todo el material de vidrio se debe secar cuidadosamente antes
de utilizarlo y la solución patrón debe conservarse fuera del contacto con el aire. Además es necesario
minimizar el contacto entre la atmósfera y la solución durante la valoración
El aparato se basa en un recipiente de titulación a prueba de humedad, un sistema que dispensa
titulante a prueba de humedad (bureta), un sistema de detcción de punto final (electroquímico:
electrodos de platino), bombe y vacio automatizado para el vaciado y llenado del recipiente de
titulación, barra magnética, reactivo de Karl Fischer (Iodo, SO2, metanol y piridina) y desencante (para
evitar la humedad en los reactivos).

METODO OFICIAL
Fase móvil. Agua: acetonitrilo: solución de fosfato monobásico de potasio 1.0 M: solución de ácido
acético 1 N (909:80:10:1), filtrar y desgasificar, hacer los ajustes necesarios para obtener el sistema
cromatógrafico adecuado.
Solución diluyente. Pasar 10 mL de solución de fosfato monobásico de potasio 1.0 M Y 1.0 mL de
solución de ácido acético 1.0 N a un matraz volumétrico de 1 000 mL, llevar al aforo con agua y
mezclar.
Preparación de referencia. Pesar una cantidad de la SRef-FEUM de ampicilina equivalente a 25 mg
de ampicilina, pasar a un matraz volumétrico de 25 mL, disolver y llevar al aforo con la solución
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diluyente, si es necesario agitar y someter a la acción de un baño de ultrasonido hasta disolución


completa. Esta solución contiene 1.0 mg/mL de ampicilina. Usar esta solución inmediatamente
después de su preparación.
Solución de resolución. Pesar una cantidad de cafeína de pureza conocida equivalente a 12 mg de
cafeína, pasar a un matraz volumétrico de 10 mL, disolver y llevar al aforo con la preparación de
referencia. Pasar una alícuota de 1.0 mL de esta solución a un matraz volumétrico de 10 mL y llevar
al aforo con la preparación de referencia, mezclar. Esta solución contiene 120 g/mL de cafeína.
Preparación de la muestra. Pesar una cantidad de la muestra equivalente a 500 mg de ampicilina,
pasar a un matraz volumétrico de 50 mL, disolver y llevar al aforo con la solución diluyente y mezclar.
Pasar una alícuota de 5.0 mL de esta solución a un matraz volumétrico de 50 mL, llevar al aforo con
la solución diluyente y mezclar. Usar esta solución inmediatamente después de su preparación.
Condiciones del equipo. Detector de luz UV; longitud de onda de 254 nm; precolumna de 4.6 mm X 5
cm empacada con Ll; columna de 25 cm X 4.6 mm empacada con Ll y flujo de 2.0 mL/min.
Procedimiento. Inyectar al cromatógrafo repetidas veces, volúmenes iguales (20 ~L) de la solución de
resolución y registrar los picos respuesta. La resolución R entre los picos de cafeína y de ampicilina
no es menor que 2.0. Los tiempos de retención son de alrededor de 0.5 para ampicilina y 1.0 para
cafeína. Inyectar al cromatógrafo repetidas veces, volúmenes iguales (20 ~LL) de la preparación de
referencia y registrar los picos respuesta, el factor de capacidad K' no es mayor que 2.5, el factor de
coleo no es mayor que 1.4 y el coeficiente de variación no es mayor del 2.0 %. Una vez ajustados los
panimetros de operación, inyectar al cromatógrafo, por separado, volúmenes iguales (20 ~L) de la
preparación de referencia y de la preparación de la muestra.
Obtener sus correspondientes cromatogramas y calcular las áreas bajo los picos. Calcular la cantidad
de C16H19N304S en la porción de muestra, por medio de la siguiente formula:

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CÁLCULOS
MATERIAL
 Celda de vidrio.
 Barra magnética.
 Aparato de Karl Fisher semi automático.

METODO PROPUESTO.
a. Neutralizar el metanol.
1. Se colocan de 12 a 15 ml de metanol en la celda de titulación.
2. Se llena la bureta con el reactivo de Karl Fischer y se ajusta a cero la escala de la bureta.
3. Se enciende el aparato.
4. Se adiciona suficiente reactivo hasta llegar al punto final de la titulación (el cual estará indicado
porque el flujo de corriente se incrementara entre 50 y 100 uA por 30 segundo o más).

b. Estandarización del reactivo de Karl Fischer. (esta procedimiento se realiza por triplicado).
1. El instrumento tiene una espátula de vertido, la cual se procede a pesar.
2. Se pesan x g de patrón primario de tartrato de sodio dihidratado en la espátula de vertido.
3. Se agregan en la celda de titulación que contiene el metanol (ya neutralizado), se debe invertir
la espátula de vertido dentro de la celda de titulación.

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4. Por diferencia de pesos se registra el peso exacto del patrón primerio.


5. Se ajusta nuevamente la bureta a cero.
6. Se adiciona reactivo de Karl Fisher hasta llegar al punto final de la titulación (que es indicado
cuando e flujo de corriente elctrica se incrementa entre 50 y 100 uA por 30 segundo o más).
7. Se registra el volumen gastado de reactivo de Karl Fischer.

c. Determinación de humedad por el método de Karl Fischer de la ampisilina en polvo inectable.


1. Pesar la espátula de vertido.
2. Pesar x gramos de polvo de ampisilina en la espátula de vertido.
3. En la misma celda de titulación que se utlizo en los pasos anteriores se vierte el polvo de
ampisilina, invirtiendo la espátula de vertido dentro de la celda de titulación.
4. Se pesa nuevamente la espátula de vertido y por diferenciade pesos se determina exactamente
el peso de polvo.
5. Se aguta otra vez la bureta a cero.
6. Se adiciona el reactivo de Karl Fisher hasta llegar al punto final de la titulación (que es indicado
de la misma manera que se explico anteriomente).
7. Se registra el volumen gastado de reactivo de Karl Fischer.

PROPIEDADES FISICAS, QUIMICAS Y PELIGROS

Fórmula C16H18N3O4S
Peso mol. 349.406 g/mol

DIAGRAMA DE FLUJO

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BIBLIOGRAFIA
1. Secretaria de salud. Farmacopea de los estados unidos mexicanos. Comisión permanente de
la farmacopea de los estados unidos mexicanos.5° ed. México D.F, 1988.

2. Knevel AM. DiGangi FE. Jenkins’ quantitaive pharmaceutical chemistry. 7° edicion. Mc Graw-
hill Book company. United States of America, 1977

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