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FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA
PRACTICAS DE LABORATORIO
IDENTIFICACION BACTERIANA
Maye Bernal Rivera
Introduccin
Para establecer el Diagnstico Etiolgico de la Enfermedad Infecciosa, se debe partir
de una muestra clnica procedente del paciente en estudio, para ser procesada en el
laboratorio clnico, dependiendo del diagnstico presuntivo consignado en la orden de
solicitud expedida por el mdico tratante.
Para realizar la identificacin bacteriana la muestra del paciente se siembra en
diferentes medios de cultivo, en condiciones ambientales especficas, dependiendo
del microorganismo que se pretenda aislar.
Esta primera parte del mdulo de Bacteriologa corresponde a la identificacin del
microorganismo (gnero y especie) la cual conlleva a establecer el diagnstico
etiolgico.
Medios de Cultivo
Definicin:
Medio de Cultivo es el conjunto de nutrientes y sustratos que permiten el crecimiento
la multiplicacin y el aislamiento de las diferentes especies bacterianas para llegar a
su identificacin y otros estudios complementarios, tales como su comportamiento
frente a los antimicrobianos. Un medio de cultivo mnimo debe tener: agua, una
fuente de carbono, una fuente de nitrgeno y una sal para mantener estable la
concentracin de iones.
Clasificacin
Los medios de cultivo se clasifican de acuerdo a:
-
Origen
- Naturales
- Sintticos
Consistencia
- Lquidos
- Slidos
- Semi-slidos
Composicin
- Nutritivos
- Enriquecidos
- Selectivos
Diferenciales
Medios de Transporte
Son aquellos que aseguran la viabilidad de la bacteria desde el momento de la toma
de la muestra hasta su llegada y procesamiento en el Laboratorio. Carecen de un
nutriente mnimo indispensable, evitando as el crecimiento de las bacterias. Como
ejemplo tenemos el medio de Stuart, Ames, Slica gel, Cary Blair, etc.
Medios de Conservacin
Son medios que permiten mantener la viabilidad de las bacterias, conservando sus
caractersticas fisiolgicas, morfolgicas, tintoriales, etc. Los hay para tiempos cortos
y tiempos ms prolongados, aunque para mantener y garantizar todas las
caractersticas bacterianas se deben conservar liofilizadas o congeladas a -70C o en
nitrgeno a -120C. . Ejemplos de este tipo de medios son: medio de Dorset, medio
de leche descremada triptona glucosa glicerol (LDTGG), solucin de Greaves, etc.
Para el cultivo de bacterias, adems de suministrarles sus requerimientos
nutricionales (medios de cultivo ptimos), se les debe proporcionar las condiciones
ambientales necesarias para permitirles su crecimiento y multiplicacin.
Condiciones ambientales
-
Temperatura
Concentracin atmosfrica
- Presencia de de O2 (Aerobiosis)
- Disminucin de O2 (Microaerofilia)
- Presencia de CO2 (Capnofilia)
- Atmsfera de Nitrgeno (Anaerobiosis)
Porcentaje de humedad
Presencia de Luz
Seleccin de Medios
Para la recuperacin de los microorganismos a partir de las muestras clnicas, es
indispensable hacer la seleccin adecuada de los medios primarios de cultivo para
obtener resultados ptimos. Es importante para el medico conocer los diferentes
medios utilizados en el Laboratorio Clnico para en un momento dado poder
interpretar adecuadamente los resultados y detectar posibles falsos negativos. En el
siguiente cuadro se pude ver, dependiendo del agente etiolgico en determinada
entidad, el medio de cultivo adecuado.
Agente Etiolgico
Medio de Cultivo
Faringitis estreptoccica
Streptococcus pyogenes
Agar Sangre
Uretritis gonoccica
Neisseria gonorrhoeae
Thayer Martin *
Tuberculosis pulmonar
Mycobacterium tuberculosis
Ogawa Kudoh
Tos ferina
Bordetella pertussis
Bordet Gengou
modificado
Tcnicas de Inoculacin
Las tcnicas para inocular las muestras en los diferentes medios de cultivo varan,
dependiendo del objetivo.
Esterilizacin del Asa Bacteriolgica
Las asas bacteriolgicas bsicamente son alambres unidos a un mango
que permite manipularlas. El alambre puede ser de diferente material,
(ferro nquel, nicromo, platino, etc.) y la forma (recta, curva, etc.,)
dependiendo de la necesidad.
Para su esterilizacin se utiliza calor seco (llama), y se procede
as:
-
Prender el mechero
Tomar el asa bacteriolgica por el mango y colocarla en
posicin vertical, sobre la llama del mechero, hasta que el
alambre quede al rojo vivo.
Dejar enfriar o enfriar dentro del medio de cultivo, antes de
tomar las colonias.
2
1
Siembra en cuadrcula:
El objetivo de esta tcnica es hacer recuento de unidades formadoras de colonias
(UFC)
1. Obtener la muestra con asa calibrada o pipeta automtica que dispense
una cantidad exacta y distribuirla con el asa en lnea recta por todo el centro
2. Hacer estras de extremo a extremo en sentido contrario a la lnea de
inculo
3. Girar la placa y hacer estras de extremo a extremo, en sentido contrario a
las anteriores
PRACTICA DE LABORATORIO
Objetivo
Proporcionar al estudiante el conocimiento cientfico y las habilidades prcticas de los
mtodos y tcnicas utilizados en Microbiologa Mdica para el aislamiento e
identificacin de los principales agentes patgenos para el hombre a partir de
muestras clnicas, lo que le permitir actuar correctamente en su prctica mdica en
el campo de las enfermedades infecciosas.
PARTE I. SIEMBRA
Objetivos especficos
-
Materiales
-
Procedimiento
Pedro Lpez
170305001
FF