TALLER PRÁCTICO N°1 y 2

TÉCNICAS BÁSICAS DE LABORATORIO PARA AISLAMIENTO, CULTIVO,

TINCIONES Y CARACTERIZACIÓN DE MICROORGANISMOS
INTEGRANTES:
JESSICA ALEJANDRA CELY CASTILLO- 10501916318
LAURA ALEJANDRA DAZA MARÍN - 10501918354
JADER GARCIA ARTEAGA - 10501918064
YASIRI HERRERA ALVAREZ - 10501911270

Leer el manual Práctica de Microbiología Adjunto. El Tema 1.1 Manejo de muestra y toma
de Inóculo, 1.2 Tinción de bacterias y 1.4 Obtención y mantenimiento de Cultivos Puros y
responda las siguientes preguntas. Puede utilizar otras referencias complementarias incluir
la Bibliografía en el taller, y responda:

1.- Para la toma de un inóculo de un muestra a examinar bien sea procedente de una
placa de Petri, o un tubo en slant (medio sólido) o de un tubo con caldo (medio
líquido). Cuales pasos se deben seguir. Mencione y explique en estricto orden de
realización.
R/
1. Realizar todo en la proximidad de una llama para evitar contaminación.
2. esterilizar el asa con la que se tomará el inóculo, la cual se realiza por calentamiento con un
mechero Bunsen, hasta que el asa se ponga al rojo vivo.
3. Esperar que el asa se enfríe.
4. Retirar el tapón del tubo o la tapa de la caja de petri (si es tubo se debe flamear ligeramente
la boca del tubo).
5. Introducir el asa ya fría (se puede tocar otra parte limpia del medio, para no comprobar que
ya está fría y que no mate el microorganismo) luego tomar la porción de cultivo tocando
delicadamente el cultivo.
 6. Si es un tubo flamear la boca del tubo ligeramente.
7. Tapar el medio.
8. Esterilizar el asa al rojo vivo, antes de ponerlo en el sitio de trabajo.

2.- Explique los pasos a seguir para preparar un frotis bacteriano para tinción.Ç
R/
1. Realizar todo en la proximidad de una llama para evitar contaminación.
2. Esterilizar el asa con la que se tomará el inóculo, la cual se realiza por
calentamiento con un mechero Bunsen, hasta que el asa se ponga al rojo vivo.
3. Esperar que el asa se enfríe.
4. Retirar el tapón del tubo o la tapa de la caja de petri (si es tubo se debe flamear
ligeramente la boca del tubo)
5. Introducir el asa ya fría (se puede tocar otra parte limpia del medio, para no
comprobar q ya esta fria y q no mate el microorganismo) luego tomar la porción de
cultivo tocando delicadamente el cultivo.
6. Si es un tubo flamear la boca del tubo ligeramente.
7. Tapar el medio.
8. Colocar en una lámina portaobjetos limpia, el inóculo de manera proporcional a lo
largo de la lámina sin llegar a los bordes o extremos de esta.
9. Esterilizar el asa al rojo vivo, antes de ponerlo en el sitio de trabajo.
10. Flamear la lámina al lado opuesto de donde esta el inóculo.
11. Dejar reposar.
12. Proseguir con la respectiva coloración.

3.- Porque debe colocar frente a usted el mechero, la preparación o muestra que va a
examinar así como el resto de los materiales necesarios. Explique.
R/ Debemos estar a menos de medio metro de distancia del mechero, esto debido a que así
se evita que se contamine la muestra y los materiales usados con algún otro tipo de
microorganismo distinto al que se está estudiando.

4.-Describa el fundamento de la Coloración de Gram

R/ La tinción de Gram permite diferenciar las bacterias Gram negativas y bacterias Gram
positivas gracias a su fundamento que se basa en las características de la pared celular de
estas, la pared celular de las bacterias Gram negativas posee una delgada capa de
peptidoglicano y está rodeada de lipopolisacáridos, estas características permiten que no se
mantenga la coloración de forma permanente, en cambio la pared celular de las bacterias
Gram positivas mantiene la coloración violeta debido a que está compuesta por varias capas
de peptidoglicano, ácido teicoico y ácido lipoteicoico que impiden la salida del colorante.

5.- ¿Cuál es el objetivo de una coloración simple?

R/ Las coloraciones simples son en las que se usa solo un colorante para el proceso,
entonces el objetivo en esta es que al poner en contacto la célula con el colorante ocurre un
intercambio de iones entre el colorante y los sitios activos de las superficies o el interior de
la célula; posterior tendremos que los iones teñidos del colorante reemplazan a los iones de
los componentes celulares dándose así el color diferencial y a su vez la posibilidad de
observar la pared de esta bacteria (su morfología y agrupación).
6.- Describa la técnica de la Coloración de Gram.
R/ 1) Se hace un extendido y se fija con calor para preservar la morfología de las bacterias
e inactivar a la bacteria.
2) Se agrega cristal violeta, este se une al peptidoglicano
3) Yodo gram - Este aumenta la afinidad del cristal violeta al peptidoglicano
4) Alcohol- acetona - Hidroliza y elimina los péptidos de la pared permitiendo el paso
del cristal violeta. Dejando el gram (-) incoloro
5) Por último se agrega safranina, que va a colorear el gram (-)
7.- Explique el fundamento y describa el procedimiento de la técnica de aislamiento
por agotamiento por estría.
R/ Esta técnica consiste en sembrar en un medio de cultivo sólido y de esta manera ​los
microorganismos generan colonias separadas obteniendo un cultivo puro. El objetivo de la
técnica es obtener, a partir de un elevado número de bacterias, un número reducido de ellas
distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al incubar ésta, cada una de las
bacterias se originará una colonia
Procedimiento:
1. Esterilizar el asa o aguja flameándola en el mechero hasta conseguir un rojo
incandescente
2. Enfriar el asa o aguja en la proximidad de la llama. Tomar un inóculo de la muestra
3. Transferir el inóculo a un área pequeña de la superficie de la placa, próxima al borde.
Extender el inóculo formando estrías muy juntas sobre la superficie de una porción
pequeña de la placa
4. Flamear de nuevo el asa y dejarla enfriar. Tomando como inóculo el obtenido mediante
el rozamiento del asa de siembra con las estrías sembradas la primera vez, realizar sobre
una porción virgen de la placa una segunda tanda de estrías que no toque la primera
5. Flamear y enfriar el asa. Repetir el procedimiento #4 pero utilizando como inóculo la
segunda tanda de estrías
6. Flamear y enfriar el asa. Repetir de nuevo el procedimiento #4, pero utilizando como
inóculo la tercera tanda de estrías. Las nuevas series de estrías NO deben tocar ninguna de
las series anteriores
7. Flamear el asa y tapar la placa de Petri. Esta se va a incubar a una temperatura adecuada
en posición invertida ya que de otra manera, el agua de condensación que se va depositando
sobre la superficie del agar impediría la obtención de colonias aisladas. (2)

8.- ¿Qué ventajas tiene un medio líquido frente a un medio sólido?

R/ ​El medio líquido permite preservar una cepa, además permite que las bacterias crezcan
por turbidez en gran cantidad , no se observan colonias.
9.- Explique la composición y utilidad de los medios de transporte.
R/ Es un medio de cultivo que contiene nutrientes capaces de mantener viva una muestra de
microorganismos y permitir el desarrollo de estos y según su composición pueden ser:

a) Comunes o universales: crecen en cualquier medio. Ej: agar tripticasa soya.

b) Enriquecidos: bacterias exigentes para sitio de crecimiento. Ej agar chocolate, agar

sangre (hemólisis ​α​, β, ​γ).

c) Selectivos: solo crecen Gram (-). Inhiben Gran (+). Ej EMB (eosina azul de metileno)

d) Diferenciales: fermentadores de lactosa, la bacteria cambia de color. Ej agar

MacConkey.

10.- ¿Cuál es la tinción que se utiliza para la tinción de BAAR (Bacterias ácido alcohol
resistentes)? ¿Cuál es el fundamento de la Tinción?

R/ La tinción de ​Ziehl-Neelsen es una tecnica de coloracion que sirve para identificar las
bacterias ácido alcohol resistentes, el fundamento de esta técnica se basa en la composición
de la pared celular de estas bacterias que está formada ácidos grasos micólicos que
interactúan con los compuestos de la tinción y permite que al calentar la muestra el
colorante se adhiera.

11.- En las muestras clínicas ¿Qué tipo de medios según su composición se utilizan en
el diagnósticos microbiológico inicial?
Rta: La muestra primero se debe inocular en un medio común o universal para tratar de
aislar la mayor cantidad de bacterias.

Con respecto a las normas de Bioseguridad contempladas en el Manual de Microbiología

general. Responda:
9.- ¿Qué es la bioseguridad, de cuántos niveles consta y qué características posee cada
uno de estos niveles?
R/
Bioseguridad: ​Conjunto de normas y medidas preventivas encargadas mantener el control
de factores de riesgos laborales que proceden de biológicos, químicos y físicos, buscando la
prevención de impactos nocivos, y asegurando que no se atente contra la salud, pacientes y
medio ambiente.
Consta de 4 niveles.

Niveles
Nivel de bioseguridad 1 (BSL-1): ​Agentes poco probables de provocar enfermedad. Está
diseñado para contener muestras con poco riesgos biológicos para humanos o animales.
- Estos laboratorios no requieren medidas especiales ni aislamiento.
- Usar en todo momento bata, guantes, gafas, tapabocas.
- Lavarse frecuentemente las manos.
- No fumar, comer, beber o almacenar alimentos en el laboratorio.
Nivel de bioseguridad 2 (BSL-2):​ Agentes que pueden producir enfermedad pero existen
medidas para limitar o prevenir el daño. Los laboratorios del nivel 2 son similares a los del
nivel 1, con excepción de que contienen agentes patógenos que pueden transmitirse al
personal que los maneja.
- Usar en todo momento bata, guantes, gafas, tapabocas.
- Lavarse frecuentemente las manos.
- Ventanas herméticas cerradas.
- El acceso al laboratorio está restringido.
- El personal del laboratorio tiene entrenamiento específico en el manejo de
patógenos.
- Se toman precauciones extremas con instrumentos contaminados.
- el personal debe usar ropa específica para el laboratorio.
Nivel de bioseguridad 3 (BSL-3):​ Agentes patógenos que provocan enfermedades graves
con opción a tratamiento. Son laboratorios clínicos, de diagnóstico e investigación.
- El laboratorio cuenta con un diseño y características especiales.
- El personal de laboratorio tiene una formación específica en el manejo de patógenos y
agentes potencialmente letales.
- Todo procedimiento que impliquen la manipulación de materiales infecciosos se llevan a
cabo en especial otros dispositivos de contención física.
- Ventilar el aire del laboratorio al exterior una vez filtrado, la ventilación del laboratorio se
tiene que hacer con un flujo de direccional controlado.
- El acceso al laboratorio está restringido.
 - seguir el estándar de prácticas biológicas y equipamiento de seguridad impuesto para el
nivel de bioseguridad 2.
- El mayor y más frecuente de peligro es la infección adquirida a través de aerosoles y
fluidos biológicos.
Nivel de bioseguridad 4 (BSL-4): ​Agentes patógenos de fácil transmisión que provocan
enfermedad y normalmente no existen medidas preventivas o curativas.

- El acceso al laboratorio es controlado estrictamente.

- El laboratorio está aislado de otras áreas.
- Todas las actividades se realizan en cabina de seguridad biológica.
- Han de ser herméticos con espacios accesibles y fáciles de limpiar.
- los trabajadores utilizan trajes especiales que cubren la totalidad de sus cuerpos y que
además tienen una leve sobrepresión para evitar que entren partículas infecciosas y reciben
duchas antes de quitarse el traje.
- Los laboratorios de nivel 4 los trabajadores de acceder a las instalaciones a través de
vestíbulo de independencia, cambiándose de ropa al entrar y ducharse al salir.

10.- Mencione las diferencias entre un laboratorio de microbiología y un laboratorio

convencional.

Laboratorio microbiología Laboratorio convencional

● Estudia microorganismos ● Estudia parámetros de la salud en general.

● Se encuentran en instituciones universitarias,
centros de investigación, hospitales.
● Se tiene en cuenta la protección del personal de
laboratorio, así como también del personal en
áreas cercanas, la comunidad y el medio
ambiente.
● Se debe hacer uso del “traje espacial“, el área
debe tener buena ventilación.
● Cambio de ropa al salir del laboratorio.
● Se pueden encontrar en varios lugares ya sean
relacionados con la educación básica,
universitaria o centros de salud.
● Lavado de manos antes de salir del
laboratorio.
● Uso de batas de laboratorio, guantes y
protección para la cara.
 Bibliografía

1. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G,

Franco-Cendejas R. [Internet]. Medigraphic.com. 2013 [cited 27 August 2020]. Available from:
https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf

2.Susana A. Sanz Cervera . (2011). Practicas de microbiologia . 26/08/2020, de Universidad de la

Rioja Sitio web: file:///D:/Users/Usuario/Downloads/Dialnet-PracticasDeMicrobiologia-100835.pdf