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Recuento de Bacterias
Recuento de Bacterias
T. de la Rubia y J. Martnez
OBJETIVOS
El alumno aprender a:
1. Utilizar correctamente pipetas y micropipetas
decimales seriadas de una suspensin de bacterias
preparando
diluciones
Contenido:
I
INTRODUCCIN
II MTODOS
III RESULTADOS
IV AUTOEVALUACIN
I.
INTRODUCCIN
En diversos estudios microbiolgicos (como anlisis de alimentos, de agua de
bebida, de productos farmacuticos o del medioambiente entre otros), se requiere
conocer el nmero de microorganismos presentes en un material con objeto de
determinar su calidad. El procedimiento es esencialmente el mismo que para la
medida del crecimiento de las poblaciones de bacterias
El crecimiento de poblaciones microbianas puede determinarse mediante mtodos
de medida de la masa total celular, que generalmente es directamente
proporcional al nmero de clulas, (mtodos de determinacin del peso, de la
actividad del cultivo o mtodos turbidimtricos) o por la determinacin del nmero
de clulas.
Encontrar informacin ms completa sobre medidas del crecimiento de bacterias
en los apuntes on line del Profesor D. E. Iaez
1. Principales
mtodos de
El nmero de bacterias de una muestra puede
recuento del
determinarse directamente por recuento del nmero total
nmero bacterias
de clulas o indirectamente por la estimacin del nmero
en una muestra
ms probable, por filtracin o por el recuento de viables
en placa (Clulas capaces de dividirse sobre o dentro de
un medio slido, tambin se refieren como unidades
formadoras de colonias UFC).
1.1.Recuento
directo de bacterias
al microscopio
1.2.Recuento
directo con
contadores
electrnicos
1.3. Recuento en
filtros de
membrana
2. Mtodos de
recuento de
bacterias viables en
placa
2.1. Recuento en
placa por siembra
en profundidad.
2.2.Recuento en
placa por siembra
en superficie
II. MTODOS
RECUENTO
DEL
NMERO
DE
BACTERIAS VIABLES MEDIANTE EL
MTODO DE DILUCIN Y SIEMBRA
EN PLACA
1.Material necesario
6 placas de TSA
6 tubos de ensayo con 4.5
ml de solucin salina 0.9% estriles.
Esptula de Driglasky de
acero
Mezclar la suspensin
durante unos segundos
con
un
vortex
RESULTADOS
2.4. Resultados
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
IV. AUTOEVALUACIN:
1. Si transferimos 0.1 ml de una muestra a 99.9 ml de solucin salina estril.
Cul es la dilucin obtenida?
a. 10-1
b. 10-2
c. 10-3
2. De un cultivo de Escherichia coli se hacen diluciones seriadas aadiendo 10
ml en 90 ml de solucin salina estril. Se siembran 0.1 ml de cada dilucin
en placas de agar nutritivo que se incuban a 37C durante 24 horas. Tras la
incubacin, los resultados del recuento de colonias fue el siguiente:
Dilucin
10-4
> 1000
10-5
660
10-6
250
10-7
a.
480 x 10 5
b.
6.3 x 10
c. 63 x 10