Pruebas del IMViC

Fundamento: Indol, Rojo de Metilo, Voges-Proskauer y Citratos

Son cuatro pruebas bioqumicas. Se emplean fundamentalmente para la
identificacin de las Enterobacterias (bacilos Gram negativos, anaerobios
facultativos con metabolismo fermentador). Dependiendo de las condiciones,
las enterobacterias, pueden realizar un metabolismo aerobio (si disponen de
oxgeno), realizar una respiracin anaerobia (si hay nitratos u otro aceptor de
electrones) y distintas fermentaciones.

Ej; las cuatro pruebas de IMViC para E. coli dan los siguientes resultados
Escherichia coli : Indol + ;Rojo de metilo +; Voges-Proskauer ;Citratos -
5.1. Produccin de Indol (I)
a-Fundamento: Se determina si la bacteria posee una enzima (triptofanasa).
La triptofanasa hidroliza el triptfano en indol y alanina. El indol se detecta
empleando un reactivo especfico (Reactivo de Kovacs). El triptfano forma
parte de las peptonas del medio.
b- Materiales y reactivos: Agua de peptona y Reactivo de Kovacs
c- Mtodo: Inocular el medio de cultivo (agua de peptona). Incubar a 37
o
C
durante 48 horas

Aadir unas gotas de reactivo de Kovacs. Agitar y dejar reposar el cultivo. El
HCl proporciona el pH cido que requiere la reaccin. El alcohol amlico es,
insoluble en agua y menos denso

d-Resultado: Produccin de Indol
Un anillo rosa-rojizo en la superficie indica que se ha formado un complejo
coloreado entre el indol y el p-dimetilamino benzaldehdo.El alcohol amlico
concentra el complejo coloreado en la superficie

Arriba se observa un cultivo de E. coli (+) y abajo otro de Salmonella spp (-)

5.2. Rojo de metilo (M)
a. Fundamento: Detecta la fermentacin cido-mixta. Se acumulan cidos
(actico, frmico, etc.), relativamente fuertes y bajan el pH del medio hasta 4-5.
Dicho cambio de pH se detecta aadiendo un indicador (rojo de metilo) al
cultivo
b. Materiales y reactivos: Medio de Clark-Lubs e indicador de rojo de
metilo
c. Mtodo: Inocular el medio de Clark-Lubs. Incubar a 37
o
C durante 48 horas.

Aadir unas gotas de rojo de metilo (rojo a pH 4-5; amarillo a pH>6)
5.2.d. Resultado. Rojo de Metilo


Arriba un cultivo de E. coli (+) y abajo otro de Serratia(-)

5.3. Voges-Proskauer (V)
a-Fundamento: Detecta la fermentacin butanodilica. En esta fermentacin
se producen menor cantidad de cidos que en la fermentacin cido-mixta, y
una gran cantidad de butanodiol. Mediante un reactivo, (alfa-naftol y KOH al
40%), se detecta la presencia de un precursor del butanodiol
(acetilmetilcarbinol o acetona). La acetoina en presencia de oxgeno se oxida a
diacetilo. El diacetilo origina una coloracin roja al reaccionar con los restos
guanidnicos de algunos aminocidos de la peptona del medio (Ej. Arginina).
b. Materiales y reactivos: El medio de cultivo, es el mismo que en la prueba
del rojo de metilo. Reactivos :alfa-naftol
c. Mtodo: Inocular el medio de Clark-Lubs. Incubar a 37
o
C durante 48 hora

Aadir unas gotas alfa-naftol (0.6 ml). Agitar y aadir KOH (0.2 ml).Agitar.
Iincubar 1-2 horas a 37
o
C
d.Resultado: Voges-Proskauer
La acetona en contacto con el oxgeno y la potasa origina diacetilo. El alfa
naftol incrementa la sensibilidad de la reaccin. El diacetilo origina un
compuesto de color rosado.La prueba ser positiva si en 20 minutos aparece
una coloracin roja. Los cultivos negativos se incuban 1-2 horas a 37
o
C en
posicin inclinada efectundose de nuevo la lectura. (El contacto con el
oxgeno y la elevada temperatura favorecen la reaccin).

Arriba cultivo de Serratia spp (+). Y abajo de E. coli (-)

5.4. Consumo de citratos (C)
a.Fundamento: Se determina la utilizacin del citrato como nica fuente
de carbono y energa. La prueba emplea un medio definido (Koser) con citrato
como nica fuente carbonada (se detecta turbidez). Alternativamente se utiliza
el medio de Simmons: utiliza un medio slido con citrato sdico y un indi cador
cido-base (azul de bromotimol). En este caso se detecta la alcalinizacin del
medio por el consumo del citrato.

b. Materiales y reactivos: Medio de Koser o Medio de Simmons
c. Mtodo: Inocular uno de los medios: El medio de Simmons es slido, y se
siembra por estra con asa de platino. Incubar a 37
o
C durante 48 horas
d. Resultado: Crecimiento sobre citrato como nica fuente de carbono
Detectar el crecimiento en el medio de Koser por turbidez. En el medio de
Simmons por alcalinizacin del cultivo (el indicador toma color azul)

Crecimiento en el medio de Simmons: arriba cultivo de Salmonella spp (+) y
abajo de E. coli (-). *Dado que la lectura del medio de Koser se hace
detectando la turbidez del medio, es necesario inocular con una pequea
cantidad de bacterias y comprobar que el tubo permanece casi transparente
tras la inoculacin.