81

Rev Biomed 1997; 8:81-88.

Implantes de Fibroquel MR
aceleran la formacin de hueso
nuevo en defectos seos
inducidos experimentalmente en
crneos de rata: un estudio
histolgico.

Jess Chimal-Monroy, Teresa Bravo-Ruiz, Fernando E. Krtzsch-Gmez, Lino Diaz de Len.

Departamento de Biologa Celular, Instituto de Investigaciones Biomdicas, UNAM. Mxico D.F.

Mxico.

RESUMEN.
Introduccin. Los transplantes de hueso usualmente se aplican en defectos seos. Sin embargo,
debido a problemas ticos, clnicos o
inmunolgicos, es necesario el desarrollo apropiado de teraputicas para inducir la reparacin sea.
En este estudio evaluamos el efecto del FibroquelMR
sobre la regeneracin de hueso en defectos seos
en crneos de ratas adultas y se compar con
colgena liofilizada como control. El FibroquelMR
es un biomaterial compuesto de colgena tipo I y
polivinilpirrolidona (PVP).
Resultados. Los mostraron que la formacin de
hueso nuevo se llev a cabo de una manera ms
rpida con los implantes de FibroquelMR, que con
los de colgena. A los 5 das post operacin, los
implantes de FibroquelMR presentaron trabculas

seas bien definidas, mientras que con los implantes de colgena, este proceso slo se iniciaba. A
los 15 das post operacin, los implantes de
FibroquelMR mostraron mejor osificacin que los
implantes de colgena. Finalmente, a los 45 das
post operacin la formacin de hueso nuevo que
se llevo a cabo con FibroquelMR y colgena fue casi
idntica.
Discusin. Se conoce bien la capacidad de
osteoconduccin de las matrices colagnicas sobre
la regeneracin sea. Sin embargo, el FibroquelMR
estimula la regeneracin sea a niveles superiores
que los obtenidos con colgena. Esto sugiere que
el PVP puede modificar las propiedades
fisicoqumicas y biolgicas de la colgena, lo que
favorecera la formacin de una matriz con mejor
capacidad para la invasividad y migracin de clulas

Solicitud de sobretiros: Dr. Lino Daz de Len Hernndez. Departamento de Biologa Celular. Instituto de Investigaciones Biomdicas, UNAM. Ciudad
Universitaria, Apartado postal 70228 . C.P. 04510 Mxico D.F. Mxico. Tel. 622-3819. Fax 622-3897
Recibido el 18/Octubre/1996. Aceptado para publicacin el 7/Febrero/1997.

Vol. 8/No. 2/Abril-Junio, 1997

82
J Chimal-Monroy, T Bravo-Ruiz, FE Krtzsch-Gmez, L Daz de Len.
osteoprogenitoras. Con base en estos resultados,
sugerimos la aplicacin teraputica de los implantes
de FibroquelMR en la resolucin de defectos seos.
Palabras Clave: Regeneracin sea, defectos
seos, biomateriales, colgena, matriz extracelular.

SUMMARY.
FibroquelMR implants accelerate new bone
formation of experimentally induced bone
defects in rat skull: a histological study.
Introduction. Bone grafts are usually applied to
bone defects. However, due to ethical, clinical, or
immunological problems suitable alternatives to
induce bone repair are required. The aim of this
work was to compare the effect of lyophilized
collagen and Fibroquel MR on bone defects
surgically created in the skull of adult male rats.
Results. Results showed that ossification
stimulated with FibroquelMR implants ocurred more
rapidly than with collagen implants. At 5 days
postsurgery, FibroquelMR implants presented wellformed bone trabeculae, while with collagen
implants, this process had just begun. At 15 days
postsurgery FibroquelMR implants showed better
ossification than collagen implants. Finally, by 45
days postsurgery new bone formation with collagen
and FibroquelMR implants was almost identical.
Discussion. The osteoconduction capacity of
collagenous matrices for bone regeneration is well
known, however, FibroquelMR enhances bone
regeneration to higher levels than collagen alone,
suggesting that PVP can modify the
physicochemical and biological properties of
collagen, allowing the formation of a better matrix
for the invasion and migration of osteoprogenitor
cells. On the basis of these results, we recommend
the therapeutical application of Fibroquel MR
implants on bone defects.
Key words: Bone regeneration, bone defects,
collagen, extracellular matrix, biomaterials.
Revista Biomdica

INTRODUCION.
Los transplantes seos usualmente se aplican en defectos seos, independientemente de que
sean autlogos, homlogos o heterlogos. Sin
embargo, debido a problemas ticos, clnicos o
inmunolgicos, es necesario el desarrollo apropiado de teraputicas para inducir la reparacin sea.
Urist (1) demostr que las biomatrices de huesos
desmineralizados tienen la capacidad de inducir la
formacin de hueso nuevo en sitios ectpicos. El
aislamiento, la identificacin y la clonacin de los
componentes de la matriz sea con potencial
osteoinductivo, han mostrado que pertenecen a la
superfamilia del TGF-b. Estos componentes llamados protenas morfogneticas de hueso (BMP),
implantados en sitios ectpicos inducen la formacin de hueso, a travs de los procesos que ocurren durante la osificacin endocondral (2).
La capacidad de induccin de cartlago y
hueso en sitios ectpicos ha sugerido la aplicacin
teraputica de las BMP en la regeneracin de hueso
en defectos seos y en la reparacin de fracturas.
Sin embargo, no obstante la aplicacin teraputica
de las BMP en ortopedia, se han desarrollado otras
alternativas teraputicas. La hidroxiapatita es uno
de los biomateriales de mayor uso como material
de implantacin en defectos seos (3, 4). Aunque
debido a diferencias con las apatitas seas su
aplicacin en ortopedia se ha reducido en aos
recientes. La coralina, obtenida de calcita de coral,
es otra hidroxiapatita que sirve para el tratamiento
de defectos seos (5, 6). De igual forma la
hidroxiapatita se ha usado como un substrato
acarreador de la BMP-3 en la induccin del
fenotipo ostegnico en clulas mesenquimticas (7,
8) o en la regeneracin de defectos seos en
calvaria (9) o en defectos en huesos de la mandbula
(10). Por otro lado, la implantacin de colchones
de colgena en defectos de huesos de mandbula
de conejo mostraron una osificacin ms rpida
comparada con los controles (11), lo que sugiere
que los implantes a base de colgena permiten la
reparacin de defectos seos. Por otro lado,
Constantz y col (12) obtuvieron un biomaterial

83
FibroquelMR en la formacin de hueso nuevo.
compuesto a base de fosfatos y calcio inorgnico
y una solucin de fosfato de sodio. Este biomaterial
se prepara como una pasta y se inyecta
quirrgicamente en sitios de fracturas, se endurece
en pocos minutos permitiendo que los osteoblastos
crezcan e invadan esa pasta y la reemplacen por
hueso nuevo. Sin embargo, no se ha reportado su
uso en defectos seos.
Recientemente, en nuestro laboratorio hemos
trabajado con un biomaterial llamado FibroquelMR
que consiste de colgena tipo I de cerdo y
polivinilpirrolidona (PVP). Este biomaterial se ha
usado para el tratamiento de cicatrices queloides e
hipertrficas, en donde acta como un fibroltico
al inhibir la expresin de molculas de ELAM-1,
VCAM-1, TGF- y PDGF-AB (13; 14; KrtzschGmez et al., sometido a publicacin in Wound
Repair and Regeneration). De igual manera el tratamiento de fracturas con FibroquelMR acelera el
proceso de la reparacin de fracturas, al promover
el reemplazamiento del callo fibroso, por callo
cartilaginoso y ste por callo seo en menos tiempo que los controles. Asimismo, este fenmeno se
ve asociado a un incremento en la produccin de
la osteopontina y la osteonectina, molculas de la
matriz sea relacionadas con la formacin y
mineralizacin del hueso (15, 16, Chimal-Monroy
y cols, manuscrito en preparacin).
El objetivo del presente trabajo fue comparar el efecto de implantes de FibroquelMR y de
colgena en la regeneracin sea en defectos seos
creados quirrgicamente en los huesos parietales
de ratas adultas. Este modelo experimental se us
porque los defectos seos no se resuelven espontneamente, por lo tanto, se podra evaluar la
funcionalidad de implantes de FibroquelMR y de
colgena en la regeneracin sea. Los resultados
demuestran que tanto los implantes del Fibroquel
MR
como de la colgena son capaces de permitir la
regeneracin de los defectos seos. Sin embargo,
la formacin de hueso nuevo fue ms rpida durante los primeros das de implantacin del
FibroquelMR. Con base en los resultados obtenidos
en el presente estudio sugerimos que el FibroquelMR

participa como un substrato que favorece la migracin de clulas que participan en la reparacin
sea, tales como las clulas de tejido de granulacin y las clulas precursoras del linaje
osteognico.

METODOLOGIA.
El FibroquelMR y la colgena fueron suministrados por spid S.A. de C.V. El FibroquelMR
es una esponja compuesta de colgena tipo I de
cerdo y polivinilpirrolidona (PVP) de bajo peso
molecular, esterilizado por radiacin gamma.
Un total de 54 ratas Wistar de 200 g de peso
se usaron en el presente estudio. Despus de
anestesiar a las ratas se crearon defectos circulares
de 5 mm de dimetro en ambos huesos parietales
con un taladro dental y solucin salina fra. Los
defectos se hicieron sin afectar las meninges. En
el experimento A, 18 ratas fueron implantadas con
FibroquelMR en los defectos de los huesos derechos,
al tiempo que la colgena se implant en el lado
derecho de otros 18 animales. Los defectos del lado
izquierdo sirvieron como controles y no fueron
llenados artificialmente. En el experimento B, otras
18 ratas fueron implantadas en los huesos
izquierdos con colgena liofilizada y con
FibroquelMR en los huesos derechos. Los animales
de ambos experimentos se sacrificaron por
duplicado a los das 1, 3, 5, 7, 10, 15, 30, 45 y 60
post implantacin de la colgena y el FibroquelMR.
Las muestras de tejidos de las ratas del experimento
A se fijaron en 2.5% de paraformaldehido y
procesados para cortes en parafina. Los cortes se
tieron de acuerdo la tincin tricrmica de Masson.
Los huesos de las ratas del experimento B se
procesaron para microscopa de alta resolucin,
los tejidos se incluyeron en resina epxica y se
obtuvieron cortes semifinos para su tincin con
azul de Toluidina. La formacin de hueso nuevo
se evalu por invasin hacia el defecto de clulas
formadoras de hueso y por la formacin de
trabculas seas.
Vol. 8/No. 2/Abril-Junio, 1997

84
J Chimal-Monroy, T Bravo-Ruiz, FE Krtzsch-Gmez, L Daz de Len.
Para la electroforesis de la colgena, la
colgena ms PVP y el FibroquelMR se cargaron
iguales cantidades de protena en un gel de
poliacrilamida-SDS al 7.5% (17).

RESULTADOS.
La colgena y el FibroquelMR presentaron
diferentes geometras en la matriz que se form
despus de ser liofilizados, donde la colgena
present una geometra ms regular que el
FibroquelMR (fig. 1). El anlisis electrofortico
mostr un ligero cambio en las movilidades
relativas de los componentes colagnicos del
Fibroquel MR, ya que las cadenas a1 (I) y a2 (I)
migraron ligeramente ms arriba que las mismas
cadenas de la colgena tipo I de cerdo (comparar
en la fig. 2 el carril 1 con el carril 3). Por otro
lado, la cantidad de protena del FibroquelMR que
se resuelve en la electroforesis es distinta a la que
se resuelve con la colgena tipo I, ya que la misma
cantidad de protena se carg en el gel. Asimismo,
al mezclarse la colgena y el PVP sin ningn
tratamiento con radiacin gama, no se observaron
cambios en las movilidades relativas y en la
cantidad de protena resuelta en la electroforesis
en comparacin con la colgena (comparar en la
fig. 2 el carril 1 con el carril 2).

Figura 2.- Electroforesis de protenas al 7.5% de

poliacrilamida. En el carril 1 colgena, carril 2 colgena
ms PVP y carril 3 FibroquelMR.

Las observaciones macroscpicas de los

defectos seos, en las ratas controles, desde el da
1 al da 60 post operacin, no revelaron evidencia
de regeneracin sea espontnea. Esto confirma
la validez del modelo para evaluar la regeneracin
sea como consecuencia de la accin de diferentes
biomateriales (fig. 3). De igual manera, observamos
que el proceso de regeneracin sea en los grupos
de experimentacin A y B es idntica en ambos
casos. La presencia del FibroquelMR en el hueso

Figura 1.- Observacin microscpica de las esponjas de colgena y FibroquelMR. Amplificacin 30X.

Revista Biomdica

85
FibroquelMR en la formacin de hueso nuevo.

Figura 3.- Representacin esquemtica del modelo experimental (A). Se hicieron defectos seos de 5 mm en ambos
huesos parietales. Los defectos fueron llenados con Fibroquel MR en los huesos derechos y con colgena en los hueso
izquierdos (B) representa 1 da postoperacin y (C) 15 das postoperacin. La barra representa 5 mm.

derecho no afect el desarrollo del hueso izquierdo

implantado con colgena del experimento B, o bien
con los controles en el experimento A. Se
observaron los mismos resultados con los implantes
de la colgena.Por lo que se describirn
indistintamente los resultados de los experimentos
A y B.
Todos los animales de los experimentos A y
B llevaron a cabo una regeneracin sea completa.
Sin embargo, basados en las observaciones
histolgicas, encontramos diferencias significativas
en la velocidad de regeneracin del hueso en ambos
tratamientos. En los animales de los experimentos
A y B se observ que desde los 5 hasta los 15 das
post operacin el 100% de las ratas con defectos
seos implantados con FibroquelMR presentaron
mejor grado de regeneracin sea que los animales
implantados con colgena (p 0.05). Asimismo, a
los 45 das post operacin, en todos los defectos
seos analizados por histologa, encontramos que
el 100% de ambos tratamientos, en los dos
experimentos, presentan regeneracin sea

completa sin encontrar diferencias significativas

entre los tratamientos.
En los huesos parietales implantados con
colgena se observ la presencia de clulas
mesenquimticas en la zona del defecto seo, al
da 1 post operacin (fig 4A). A los 5 das post
operacin las primeras clulas osteoprogenitoras

Figura 4.- Regeneracin sea despus de la implantacin

de colgena a los das 1 (A), 5 (B), 15 (C) y 45 (D) post
operacin. Cortes semifinos de 1 m de grosor teidos con
azul de Toluidina.

Vol. 8/No. 2/Abril-Junio, 1997

86
J Chimal-Monroy, T Bravo-Ruiz, FE Krtzsch-Gmez, L Daz de Len.
se agregaron para formar las incipientes trabculas
seas y los vasos sanguneos fueron evidentes (fig.
4B). A los 10 das post operacin la presencia
de osteoblastos alrededor de las trabculas
seas fue ms pronunciada y a los 15 das el
arreglo trabecular del hueso fue evidente y, los
espacios entre las trabculas fueron llenados
por tejido conjuntivo y vasos sanguneos (fig.
4C). Finalmente, a los 45 das post operacin
la osificacin se complet (fig. 4D).
Las ratas implantadas con el FibroquelMR
liofilizado mostraron, al da 1 post operacin,
la presencia de clulas mesenquimticas en
todas las zonas del defecto seo (fig. 5A). A
los 5 das post operacin (fig. 5B) la formacin
de las trabculas seas fue mayor cuando se
compar con los implantes de colgena (fig.
4B), ya que estos ltimos mostraron una
formacin incipiente de las trabculas seas.
Al da 15 post operacin las trabculas seas
mostraron menor tejido conjuntivo entre ellas
(fig. 5C). Al finalizar el perodo experimental
las histologa del hueso en los implantes de
Fibroquel MR (fig. 5D) fue muy similar a la que
se obtuvo con los implantes de colgena
(comparar fig. 4D y D).

Figura 5.- Regeneracin sea despus de la implantacin

de FibroquelMR a los das 1 (A), 5 (B), 15 (C) y 45 (D) post
operacin. Cortes semifinos de 1 m de grosor teidos con
azul de Toluidina.

Revista Biomdica

DISCUSION.
La regeneracin es un proceso biolgico
durante el cual ocurren una serie de procesos en
secuencia que dan lugar a la formacin completa
de estructuras complejas (18). El trmino induccin
se refiere al proceso por el cual la ruta de desarrollo
de una poblacin celular cambia en su direccin de
diferenciacin por seales emitidas de otra poblacin
(19, 20). Por consiguiente, la induccin de la
regeneracin significa que diferentes seales
inductoras son capaces de organizar a una poblacin
celular para formar estructuras complejas de manera
muy semejante a la estructura original como ocurre
durante el desarrollo embrionario. En el caso del
hueso, las seales particulares que participan en su
regeneracin son las BMP, ya que estas molculas
cuando son implantadas intramuscularmente dan
lugar a una secuencia de procesos biolgicos, en
forma similar a como ocurre durante el desarrollo
embrionario, que culmina con la formacin local de
hueso (1, 21).
Esos trminos son importantes debido a que
la colgena y el FibroquelMR no son inductores de
la regeneracin sea, pues su implantacin ectpica
no promueve la formacin de hueso. Por lo tanto,
en este estudio la colgena y el FibroquelMR son
considerados como biomateriales con capacidad
osteoconductiva, esto es, son biomateriales que
permiten el establecimiento de todas las condiciones ambientales para la regeneracin sea, tales
como la presencia de una matriz extracelular adecuada que favorezca la invasin y migracin de
clulas osteoprogenitoras que surgen de los mrgenes de los defectos seos.
En este estudio no se observaron diferencias significativas en el resultado final entre los
implantes de colgena y FibroquelMR, pues hubo
formacin total de hueso con ambos tratamientos.
Sin embargo, en los primeros 15 das de la regeneracin sea , el FibroquelMR aceler la formacin de hueso en comparacin con lo obtenido con
colgena (p 0.05). Estos resultados apoyan los
obtenidos con el FibroquelMR en la reparacin de
fracturas, donde el biomaterial fue capaz de acele-

87
FibroquelMR en la formacin de hueso nuevo.
rar la consolidacin sea, al estimular la expresin
de molculas que favorecen la osificacin (15, 16,
Chimal-Monroy y col, manuscrito en preparacin).
Es interesante hacer notar que la mezcla de
la colgena con un qumico como el PVP provoca
una aceleracin en la osificacin en comparacin
con la obtenida con la colgena sola. Lo que sugiere que los implantes de FibroquelMR podran formar una matriz ms adecuada que favorezca la invasin y migracin de las clulas osteoprogenitoras,
que la obtenida con los implantes de colgena. Esta
diferencia podra deberse al entrecruzamiento de
la colgena con el PVP despus de ser esterilizados con radiacin gama. Aunque no tenemos evidencia de que los componentes del FibroquelMR se
entrecruzan entre ellos, hemos observado que algunas propiedades fisicoqumicas se modifican. Por
ejemplo, se sabe que la colgena forma un gel a
37C. En cambio, el FibroquelMR en estado lquido, no es capaz de formar un gel a la misma temperatura. Por electroforesis de protenas, observamos que las movilidades relativas y la cantidad de
protena que entra al gel cambia en el FibroquelMR
y no en la mezcla de colgena con PVP sin irradiar. Esto sugiere que la presencia de PVP modifica las propiedades fisicoqumicas y biolgicas de
la colgena, lo que poda generar que la geometra
de la matriz entre los implantes de colgena y
Fibroquel MR sea diferente, como se observa
macroscpicamente en los liofilizados de ambos
biomateriales. Esta sugerencia que se hace para el
FibroquelMR podra ser apoyada por Anselme y cols
(22), quienes demostraron que el entrecruzamiento entre la colgena y los glicosaminoglicanos 4sulfato de condroitina y sulfato de heparn muestra diferentes tendencias para calcificar en lugares
subcutneos dependiendo del mtodo de entrecruzamiento. Un pretratamiento de las esponjas de
colgena-glicosaminoglicanos con glutaraldehido
genera calcificacin distrfica, mientras que el
mtodo de acil azida incrementa la persistencia de
las esponjas in vivo hasta por 90 das sin generar
calcificacin distrfica. De igual manera Ripamonti
y Reddi (9), reportaron que la geometra del

substrato tiene un efecto importante sobre la induccin sea por las BMP. Ellos demostraron que
las BMP implantadas con hidroxiapatita con una
configuracin discoidal permiten la expresin del
fenotipo osteognico, mientras que no son capaces de hacerlo cuando se implantan con un
substrato de hidroxiapataita con igual tamao en
los poros.
Con base en los resultados obtenidos de este
estudio y que la geometra de la matriz es un factor importante, sugerimos la aplicacin teraputica del FibroquelMR para el tratamiento de defectos
seos.

AGRADECIMIENTOS.
Los autores agradecen a los Drs. Len Cintra
McGlone y Agustn Galvn por su ayuda en el
establecimiento del modelo experimental; la asistencia
tcnica a la Dra. Margarita Garca Garduo y a Isabel PrezMonfort por su asistencia editorial. Este estudio fue
financiado parcialmente por spid. S.A. de C.V.

REFERENCIAS.
1.-Urist MR. Bone formation by autoinduction. Science
1965; 150:893-896.
2.- Wozney J. M, Rosen V, Celeste A. J, et al. Novel
regulators of bone formation: molecular clones and
activities. Science 1988; 242, 1528-1531.
3.- Hoogendoorn HA, Renooij W, Akkermans LMA, Visser
W, Wittebol P. Long-term study of large ceramic implants
(porous hydroxyapatite) in dog femora. Clin Orthop Rel
Res 1984; 187:281-286.
4.- Zambonin G y Grano M. Biomaterials in orthopaedic
surgery: effects of different hydroxyapatites and
demineralized bone matrix on proliferation rate and bone
matrix synthesis by human osteoblasts. Biomaterials 1995;
16, 397-402.
5.- Holmes RE. Bone regeneration within a coralline
hydroxyapatite implant. Plast Reconstr Surg 1979; 63:626630.

Vol. 8/No. 2/Abril-Junio, 1997

88
J Chimal-Monroy, T Bravo-Ruiz, FE Krtzsch-Gmez, L Daz de Len.
6.- Holmes RE, Mooney V, Bucholz R, Tencer A. A coraline
hydroxyapatite bone graft substitute. Clin Orthop Rel Res
1984; 188:252-262.
7.- Ripamonti U, Ma S, Cunningham NS, Reddi AH.
Initiation of bone regeneration in adult baboons by
osteogenin, a bone morphogenetic protein. Matrix 1992;
12:369-380.
8.- Ripamonti U, Van der Heever B, Van Wyk B. Expression
of the osteogenic phenotype in porous hydroxyapatite
implanted extraskeletally in baboons. Matrix 1993; 13: 491502.
9.- Ripaminti U, Reddi AH. The critical role of geometry
of porous hydroxyapatite delivery system in induction of
bone by osteogenin, a bone morphogenetic protein. Matrix
1992; 12: 202-211.
10.- Redondo L.M, Garca Cantera J.M, Verrier Hernndez
L.M, Vaquero C. Effect of particulate porous hydroxyapatite
on osteoinduction of demineralized bone autografts in experimental reconstruction of the rat mandible. Int J Oral
Maxillofac. Surg. 1995; 24: 445-448.
11.- Joos U, Vogel D, Ries P. Collagen fleece as a biomaterial
for mandibular defects. In Hastings GW, Williams DF, Eds.
Mechanical Properties of Biomaterials. John Wiley and Son
Ltd. 1980: 515-1521.
12.- Constanz BR, Ison IC, Fulmer MT, et al. Skeletal repair
by in situ formation of the mineral phase of bone. Science
1995; 267: 1796-1799.
13.- Furuzawa-Carballeda J, Krtzsch-Gmez FE, ReyesMrquez R, Daz de Len L. Inhibition of the expression of
adhesion molecules ELAM-1 and VCAM-1 in human skin
biopsies from hypertrophic and keloid scars treated with
Fibroquel. Wound Repair and Regeneration 1996; 4 (1):
A137.
14.- Krtzsch-Gmez FE, Reyes-Mrquez R, Daz de Len
L. TGF- and PDGF-AB expression in fibroblasts derived
from normal skin, hypertrophic/keloid scar and
hypertrophic/keloid scar treated with Fibroquel. Wound
Repair and Regeneration 1996; 4 (1): A160.
15.- Chimal-Monroy J, Lira RJM, de la Cruz GJC, et al.
Healing of fractures in rat femoral bones enhanced by
Fibroquel: A radiological, histological and histochemistry
study. Wound Repair and Regeneration 1996; 4 (1): A147.

Revista Biomdica

16.- Almazn DA, de la Cruz GJC, Lira RJM, et al. Investigacin experimental de la regeneracin sea en fmures
de rata despus de la aplicacin de colgena tipo Y
polimerizada: estudio radiolgico, histolgico e
histoqumico. Rev Mex Ortop Traum 1996; 103: 142-152.
17.- Laemmli, U.K. Cleavage of structural proteins during
the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 1970;
227: 680-685.
18.- Wolpert L. The triumph of the embryo. Oxford
University Press, 1991: 211.
19.- Gurdon JB. Embryonic induction-molecular prospects.
Development 1987; 99: 285-306.
20.- Slack JMW Embryonic Induction. Mech Dev 1993;
41: 91-102.
21.- Reddi, A.H. Bone and cartilage differentiation. Curr
Opin Gent Dev 1994; 4:737-744.
22.- Anselme K, Petite H, Herbage D. Inhibition of
calcification in vivo by acyl azide cross-linking of a collagenglycosaminoglycan sponge. Matrix 1992; 12:264-270.