PRCTICA No.

3
ENSAYO INMUNOENZIMTICO (ELISA) PARA LA DETECCIN DE ANTICUERPOS CONTRA EL VIRUS
DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA TIPO 1 Y 2
INTRODUCCIN
VIH es la abreviatura de virus de la inmunodeficiencia humana, el virus que causa el sndrome de
inmunodeficiencia adquirida (SIDA). La infeccin !or el VIH conduce a una destruccin "radual del
sistema inmunitario # a un aumento de la sensibilidad a las infecciones o!ortunistas. $l %& ' de los
!acientes infectados !or el VIH mueren debido a una infeccin diferente a la !roducida !or este virus.
$l virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) es un retrovirus identificado en ()%* como a"ente
etiol"ico del sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). $l virus de VIH consiste en una mol+cula
de ,-A "enmica asociada con transcri!tasa reversa (.,), !rote"ida con una c/!side # una envoltura.
Los 0 ti!os de VIH1( # VIH10 e2hiben diferentes !ronsticos # "rados de transmisin que los distin"uen.
VIH
$l VIH es un lentivirus, un ti!o de retrovirus que !ertenece a la cate"ora de los virus asociados con
enfermedades inmunosu!resoras en mamferos que afectan a los sistemas hemato!o#+tico # nervioso
central.
$l VIH1( es el res!onsable del ti!o de infeccin m/s frecuente. $l VIH10 se identific en 3frica occidental
en ()%4 # se ha aislado !osteriormente en $uro!a, Suram+rica, 5anad/ # $stados 6nidos.
M!o"o# "$ !%&'#()#)*' "$+ VIH
$l VIH se ha encontrado en semen, san"re, liquido amnitico, !eric/rdico, !eritoneal, !leural, sinovial,
te7ido del sistema nervioso, leche materna # secreciones va"inales.
$l VIH !uede conta"iarse !or8
5ontacto se2ual (!. e7., relacin se2ual oral, va"inal o anal)
5ontacto con san"re (es decir, a trav+s de transfusiones de san"re, uso com!artido de a"u7as # 7erin"as
!ara administracin intravenosa de dro"as, heridas # 9lceras abiertas) o !or trans!lante de r"anos o
te7idos infectados.
De las mu7eres a sus hi7os, durante el embara:o, el !arto o la lactancia natural
I',$--)*'
$l VIH busca c+lulas del sistema inmunitario que ten"an rece!tores de su!erficie
5D;, !orque este rece!tor es!ecial !ermite al virus unirse a la c+lula< es a los
!rimeros que ataca. Aunque el VIH infecta a varias c+lulas del sistema inmunitario,
tiene !referencia !or el linfocito ., un leucocito que !osee numerosos rece!tores
5D;.
$l decremento !ro"resivo de 5D; durante el desarrollo de la enfermedad facilita
las infecciones o!ortunistas con fatales consecuencias.
R$.+)-&-)*'
Des!u+s de unirse a la c+lula 5D;=, el VIH transfiere su material "en+tico # en:imas vitales al interior de
la c+lula, donde se inte"ra con el material "en+tico de la c+lula hu+s!ed, !roduci+ndose una nueva
"eneracin de VIH.
E' $+ )'!$%)o% "$+ /)%0#
$l VIH es una estructura mu# sim!le constituida !or material "en+tico # en:imas esenciales rodeados !or
una cubierta !roteica contenida en una envoltura viral.
C1.#)"$ 1 5ubierta !roteica que !rote"e al material "en+tico
(A,-) # las en:imas clave del virus.
I'!$2%&#& 1 $n:ima que a#uda a inte"rar el material "en+tico
del VIH en el AD- de la c+lula hu+s!ed durante la re!licacin
viral.
1
ARN 1 $l A,- contiene el cdi"o "en+tico necesario !ara crear nuevos virus A,- (VIH). $l VIH contiene
dos cadenas id+nticas de A,-.
P%o!$3'& 2. 124 1 Las !rotenas "! (0& son !eque>as !rotuberancias en la su!erficie del virus (VIH).
A#udan a +ste a unirse a las c+lulas que tienen rece!tores 5D;.
T%&'#-%).!&#& %$/$%#& 1 $sta en:ima es necesaria !ara convertir el material "en+tico del VIH (es decir, el
A,-) en AD- viral, lo que !ermite al virus inte"rar su material "en+tico en el AD- de la c+lula hu+s!ed.
E'/o+!0%& 1 5a!a e2terna del virus en la que est/n incrustadas las !rotenas "! (0&.
P%o!$&#& 1 $n:ima que corta las cadenas de !rotenas !ara !re!ararlas !ara el ensambla7e en !artculas
virales.
P%0$5& "$+ VIH
$l VIH es el virus que debilita el sistema inmunitario # !roduce el sndrome de
inmunodeficiencia adquirida (SIDA).
$2isten dos !ruebas que se utili:an !ara dia"nosticar la infeccin causada !or
el VIH8 una detecta la !resencia de anticuer!os es!ecficos frente al VIH, que
el or"anismo !roduce como res!uesta al virus, # la otra identifica la !resencia
del virus !ro!iamente dicho.
La relacin de ?aco!lamiento? (?llave1cerradura?) entre los anticuer!os (@) # el
virus es la base del $LISA.
$s fundamental que los individuos infectados !or el VIH cono:can # entiendan
su enfermedad # sus im!licaciones, de modo que !uedan reducir el ries"o de transmisin del virus a otros
e iniciar el tratamiento m+dico adecuado. Lamentablemente, muchas !ersonas infectadas !or el VIH no
saben que !adecen la enfermedad hasta que e2!erimentan sntomas fsicos evidentes.
Si usted o su m+dico tienen ra:ones !ara sos!echar que est/ infectado !or el VIH, se le recomendar/ la
reali:acin de una !rueba llamada $LISA (ensa#o inmunoabsorbente li"ado a en:imas) que detecta la
!resencia de anticuer!os contra el VIH en la san"re (v+ase la ilustracin anterior).
Los anticuer!os son !rotenas que combaten la enfermedad, creadas !or el sistema inmunitario en
res!uesta a la infeccin. 6n resultado !ositivo si"nifica que el sistema inmunitario ha !roducido
anticuer!os en res!uesta a la infeccin !or el VIH. $ste resultado debe confirmarse con otra !rueba
llamada Aestern Blot.
S3'!o(&# ,3#)-o#
VIHCuchas !ersonas no !resentan sntomas evidentes inmediatamente des!u+s de infectarse !or el VIH.
Sin embar"o, al cabo de tres a seis semanas, a!ro2imadamente el D&1E& ' de las !ersonas desarrollan
un sndrome a"udo !or VIH, cu#os sntomas duran alrededor de una semana # consisten en fiebre, dolor
de "ar"anta, cansancio, !+rdida de a!etito, n/usea, vmito # diarrea. Las !ersonas !ueden desconocer
que est/n infectados !or el VIH, #a que estos sntomas acom!a>an habitualmente al resfriado com9n.
L& 6)#!o%)& )'!$%'&
Durante la eta!a de infeccin !rimaria, la car"a viral aumenta al m/2imo a medida que el virus (VIH) se
e2tiende !or el or"anismo, es!ecialmente al te7ido linfoide. Des!u+s, la car"a viral comien:a a descender
a medida que el sistema inmunitario res!onde a la infeccin. La cuenta de c+lulas 5D; desciende
bruscamente durante la infeccin !rimaria !orque el VIH destru#e indirectamente la !oblacin de c+lulas
durante el !roceso de re!licacin viral.
Posible causas de resultados falsos, positivos y negativos, de las pruebas EIA que se recogen en la
siguiente tabla.
FALSOS POSITIVOS DE LOS EIA FALSOS NE7ATIVOS DE LOS EIA
2
Interferencia de
Anticuer!os como los que se diri"en frente
ant"enos de m9sculo liso, c+lulas
!arietales, mitocondriales, nucleares,
leucocitarios # de c+lulas ..
Fresencia de anticuer!os I"C frente al
core del virus B de la he!atitis # frente al
virus A de la he!atitis
Anticuer!os frente a ant"enos
leucocitarios de clase II de c+lulas H) que
!ueden estar !resentes en mu7eres
embara:adas mult!aras # su7etos
!olitransfundidos.
Feriodo de incubacin de la infeccin o enfermedad
a"uda antes de la seroconversin (!eriodo ventana)
$nfermedades del h"ado como he!ato!atia
alcohlica "rave, cirrosis biliar !rimaria o colan"itis
esclerosante
.ratamientos inmunosu!resores intensivos o
!rolon"ados
Inactivacin del suero !or calor o !ositividad a ,F,
(rea"nas !lasm/ticas)
Frocesos mali"nos
Frocesos hematol"icos mali"nos, como linfomas .ransfusin de re!osicin
Infeccin !or VIH10 u otros retrovirus .rans!lante de m+dula sea
Infecciones a"udas !or virus AD- Disfunciones de las c+lulas B
Vacunacin contra la "ri!e Interferencia de factores reumatoideos
Insuficiencia renal crnica # trans!lante renal $qui!os que detectan !rinci!almente anti1!0;
Sndrome de Steve1Gohnson F+rdida de estabilidad de los com!onentes del
equi!o de reactivos
Anticuer!os anti1VIH1( adquiridos de forma !asiva,
!or e7em!lo mediante inmuno"lobulinas.
Sntomas "enerales del sndrome a"udo !or VIH8
Hiebre
Infeccin de "ar"anta
Ian"lios linf/ticos inflamados
5efalea
Dolor articular o muscular
Hati"a o !+rdida de ener"a
Anore2ia o !+rdida de !eso
-/usea, vmito, diarrea
.rastornos cut/neos, como eru!cin # ulceracin, # del sistema nervioso, como menin"itis # encefalitis.
INSERTO
Ienie II HIV1(JHIV10 V0, es un ensa#o inmunoen:imatico ($IA) de reconocimiento dual, basado en la
deteccin es!ecifica de anticuer!os anti VIH1( # anti VIH10 !or anf"enos con inmunoreactividad me7orada
que se unen a ambos sitios de unin de los anticuer!os. La !rueba incor!ora una combinacin de
inmunocromato"rafia e inmunoconcentracin.
$l cartucho de reaccin contiene 0 com!artimentos uno circular A, !ara la
adicin de la muestra8 # uno m/s "rande, el!tico de ,eaccin B.
3
Los ant"enos derivados de VIH1( # VIH10 son inmovili:ados en dos !untos se!arados en la :ona de
reaccin del com!artimento B.
Al comen:ar la !rueba, una muestra diluida es introducida en el com!artimento A. Si est/n !resentes
anticuer!os anti VIH en la muestra, se unen es!ecficamente a los ant"enos VIH en un !aso de
reconocimiento dual. $l com!le7o resultante reacciona con el con7u"ado estre!tavidinaJfosfatasa alcalina
(AF). La visuali:acin de los resultados como manchas "ris a:ul es acom!a>ada !or la reaccin de
sustrato crom"eno. La solucin de !aro es adicional al final de la reaccin.
La a!aricin de 0 o * manchas "ris a:ul de reaccin en el com!artimento B, indica la !resencia de
anticuer!os contra VIH. $n un resultado ne"ativo solo el control interno ser/ visible.
Contenido del equipo:
$qui!o8
0& !ruebas ;& !ruebas (&& !ruebas
0& cartuchos de reaccin Ienie
II HIV1(JHIV10 V0
;& cartuchos de reaccin Ienie
II HIV1(JHIV10 V0
(&& cartuchos de reaccin Ienie
II HIV1(JHIV10 V0
00 microtubos !ara dilucin de la
muestra
00 microtubos !ara dilucin de la
muestra
00 microtubos !ara dilucin de la
muestra
Componentes.
Ant"enos8
HIV1(8 !rotena recombinante "!;(
F+!tido "!;(
HIV108 !rotena recombinante !0;
F+!tido "!*4
Reactivos:
-umero de
reactivo
-ombre de reactivo 5ontenido frascos Volumen
0& # ;& !bas (&& !bas 0& # ;& !bas (&& !bas
( Dilu#ente de
muestras
( fco "otero
etiqueta blanca
* fcos "oteros
etiqueta blanca
E ml *KE ml
0 5on7u"ado
estre!tavidinaJAF
( fco "otero
etiqueta amarilla
* fcos "oteros
etiqueta amarilla
E ml *KE ml
* Solucin de lavado ( botella
dis!ensadora
etiqueta naran7a
* botellas
dis!ensadoras
etiqueta naran7a
D& ml *KD& ml
; Sustrato crom"eno ( fco "otero
etiqueta a:ul
* fcos "oteros
etiqueta a:ul
D& ml *KD& ml
D Solucin de !aro ( botella
dis!ensadora
etiqueta blanca
* botellas
dis!ensadoras
etiqueta blanca
D ml *KD ml
1 5ontrol !ositivo ( vial etiqueta
ro7a
* viales etiqueta
ro7a
&.D ml *K&.D ml
1 5ontrol ne"ativo ( vial etiqueta
verde
* viales etiqueta
ro7a
&.D ml *K&.D ml
Controles:
Co'!%o+ .o#)!)/o8 ( vial, con &.D ml de !lasma humano diluido, !ositivo !ara VIH1( # !ara VIH10,
inactivado !or adicin de B1!ro!iolactona # !or tratamiento con calor. $l control !ositivo ha sido !robado #
encontrado no reactivo !ara ant"eno de su!erficie de he!atitis B # anticuer!os contra virus de la he!atitis
5.
Co'!%o+ N$2&!)/o. ( vial con &.D ml de !lasma humano, diluido inactivado !or calor. $l control ne"ativo ha
sido encontrado no reactivo !ara ant"eno de su!erficie de he!atitis # anticuer!os contra virus de la
he!atitis 5, # anticuer!os contra virus de inmunodeficiencia humana.
Datos:
Ienie HIV1(JHIV10 Lote 0&&%&E(4&&&(< 5aducidad8 &4J&)J&)
5ontrol !ositivo Lote 0&&)&E&%&(DE< 5aducidad8 00J&)J&)
4
5ontrol ne"ativo Lote 0&&)&E&%&(D4< 5aducidad8 00J&)J&)
Dilu#ente Lote 0&&%&D(4&&&04< 5aducidad8 &4J&)J&)
Sol. Lavado Lote 0&&%D(4&&&;< 5aducidad &4J&)J&)
Sol. Sto! Lote 0&&%D(4&&&4< 5aducidad8 0)J&DJ&)
Stre!tarvidina Lote 0&&)&)&)(&;)< 5aducidad8 &%J&0J&)
5rom"eno Lote 0&&)&)&)(&D(< 5aducidad8 &%J&0J&)
Flaca (cartucho) Lote 0&&)&E(&(%((< 5aducidad8 &)J&(J&)
Seguridad y precauciones
$ste equi!o es !ara uso dia"nstico in vitro solamente
Cane7e el control !ositivo # ne"ativo como !otencialmente infecciosos, a9n si han sido inactivados
Dado que nin"9n m+todo de !rueba !uede ofrecer com!leta se"uridad que los a"entes infecciosos est/n
ausentes, mane7ar los reactivos # muestras de !acientes como ca!aces de transmitir enfermedades
infecciosas.
6sar "uantes desechables # ro!a de laboratorio. Se"uir los !rocedimientos de laboratorios ace!tados
!ara traba7ar con suero o !lasma.
-o !i!etear con la boca
Desechar todas las muestras, cartuchos de reaccin usados con el equi!o, como material de desecho
bio!eli"roso
-o me:clar reactivos de diferentes lotes
-o tocar las !untas de los "oteros
-o usar des!u+s de la fecha de caducidad
Almacenamiento del equipo
Almacenar el equi!o de 0L a %L 5. -o con"elar.
ane!o de muestras
Fueden ensa#arse muestras de suero o !lasma. Las muestras !ueden almacenarse !or E das de 0L a %L
5, antes de !robarse. Fara conservarlas mas de E das con"elar la muestra a 10&L5 o tem!eratura m/s
ba7a. Des!u+s de que las muestras han sido descon"eladas, centrifu"ar !ara su clarificacin. Frobar el
sobrenadante. $vitar el re!etido con"elamiento # descon"elamiento.
PROCEDIMIENTO
Fre!aracin de la !rueba8
Leer cuidadosamente todas la instrucciones antes de comen:ar la !rueba
Llevar los reactivos, cartuchos de reaccin # muestras a tem!eratura ambiente
5orrer los controles !ositivo # ne"ativo !rovisto con el Mit cada da que realice la !rueba, # o cuando un
nuevo num. de lote se use.
.omar el n9mero requerido de cartuchos de reaccin Ienie II HIV1(JHIV10 V0 de las bolsas de aluminio
,eali:ar la !rueba a tem!eratura ambiente
Instrucciones de la !rueba
(. 6nin de los anticuer!os es!ecficos
A"re"ar * "otas ((D& Nl) de reactivo O ( al microtubo, (solucin dilu#ente).
Adicionar D&Nl de muestra o control. Ce:clar el contenido del tubo volviendo a llenar #
dis!ensando re!etidamente con el !i!etor.
.ransferir inmediatamente el total del contenido del microtubo al com!artimento A del
cartucho de reaccin.
Descartar la !unta de la !i!eta # el microtubo como des!erdicio bio!eli"roso. $s!erar
hasta que la solucin ha#a sido absorbida (a!ro2imadamente * minutos).
Los si"uientes !asos se reali:an solamente en el com!artimento B de reaccin
0. 6nin del con7u"ado
Adicionar * "otas del reactivo O 0 (con7u"ado estre!tavidinaJAF) al com!artimento B.
$s!erar hasta que la solucin ha#a sido absorbida (a!ro2imadamente * minutos).
*. Lavado
Llenar el com!artimiento B hasta arriba con reactivo O* (solucin de lavado). $s!erar
hasta que la solucin ha#a sido absorbida (a!ro2imadamente ( minuto)
5
;. ,eaccin de color
Adicionar 0 "otas de reactivo O; (solucin de sustrato crom"eno) al com!artimiento B.
$s!erar hasta que la solucin ha#a sido absorbida (a!ro2imadamente * minutos).
D. ,eaccin de !aro
Llenar el com!artimiento B con reactivo OD (solucin de !aro). $s!erar hasta que la
solucin ha sido absorbida< entonces e2aminar el com!artimiento B # anotar los
resultados.
I-.$,F,$.A5IP- D$ ,$S6L.ADQS
Validacin
$2aminar el so!orte del com!artimiento de reaccin B. !ara confirmar el correcto
funcionamiento de la !rueba # demostrar que los resultados son v/lidos, la mancha del
control interno debe a!arecer en cada cartucho.
La ausencia de la mancha del control interno debe ser considerado resultado inv/lido. La
!rueba debe re!etirse.
,esultados
VIH1( Fositivo. La !resencia del !unto i:quierdo VIH1( 7unto con la del control interno, indica la
!resencia de anticuer!os contra VIH1(.
VIH10 Fositivo. La !resencia del !unto medio, VIH10 7unto con la de control interno indica la !resencia
de anticuer!os anti VIH10.
VIH Fositivo. La !resencia de las * !untos, indican la !resencia de anticuer!os anti VIH1( #Jo VIH10. $n
este caso, la muestra debe !robarse !or m+todos adicionales, los cuales !ermitan ma#or diferenciacin
entre VIH1( # VIH10.
,esultado ne"ativo. La !resencia del !unto de control interno solo indica la ausencia de anticuer!os
VIH.
5ualquier !unto d+bil debe ser sos!echa de reaccin # debe continuarse su investi"acin.
Limitaciones
La !rueba Ienie II HIV1(JHIV10 V0 es una !rueba de escrutinio. Dado que la !roduccin de anticuer!os
contra VIH !uede retrasarse des!u+s de la e2!osicin inicial, las !ruebas de escrutinio !ueden fallar !ara
detectar estadios tem!ranos de la infeccin de VIH. Si no ha# reactividad con esta !rueba, no debe
considerarse evidencia conclu#ente de que el !aciente no ha sido e2!uesto o infectado !or VIH.
La !resencia de anticuer!os contra VIH1( #Jo VIH10 en la muestra !robada debe confirmarse !or un
ensa#o confirmatorio.
Desem!e>o.
Sensibilidad.
Se reali:aron estudios de sensibilidad con un !anel de (D( muestras !ositivas, que incluan %E muestras
VIH1( !ositivas (con (( del "ru!o Q), 4; VIH10 !ositivas # !aneles de seroconversin.
$l !roducto Ienie II HIV1(JHIV10 V0 !resent un (&&' de sensibilidad en !ositivos verdaderos # los
!aneles de seroconversin.
$s!ecificidad.
La es!ecificidad fue determinada en muestras !rovenientes de donadores de san"re ((&0 muestras
estudiadas), en mu7eres embara:adas (0&0 muestras) # en !acientes hos!itali:ados (0E& muestras).
La es!ecificidad calculada fue de )).%', (&&' # (&&' res!ectivamente. $studios adicionales de D*
muestras !rovenientes de !ersonas con enfermedades que !uedan interferir !otencialmente con esta
!rueba (artritis reumatoide, enfermedades auntoinmunes o virales) no !resentaron reaccin cru:ada.
,esumen del !rocedimiento de la !rueba
Las instrucciones abreviadas que se !resentan a continuacin, son de usuarios con e2!eriencia con el
equi!o Ienie II HIV1(JHIV10 V0
Llevar los reactivos, cartuchos de reaccin # muestras a tem!eratura ambiente (00104R5) # reali:ar la
!rueba
6
P&#o8 R$&-!)/o A")-)o'&%8 A8 T)$(.o8
(. 6nin de
anticuer!os
(8muestra * "otas ((D& Nl)
D& Nl
Ce:clar
Cicrotubo
.rasferir al
com!artimiento A
$s!erar hasta que la solucin ha#a
sido absorbida (1* minutos)
0. 6nin del
con7u"ado
08 * "otas 5om!artimiento B $s!erar hasta que la solucin ha#a
sido absorbida (1 * minuto)
*. Lavado *8 Llenar al to!e
((ml)
5om!artimiento B $s!erar hasta que la solucin ha#a
sido absorbida (1 ( minuto)
;. ,eaccin
de color
;8 0 "otas 5om!artimiento B $s!erar hasta que la solucin ha#a
absorbida (1 * minuto)
D. Faro de
reaccin
D8 Llenar al to!e
((ml)
5om!artimiento B $s!erar hasta su absorcin8 Leer los
resultados
RESULTADOS
Se reali: la !rueba a ; su7etos del equi!o # todos salieron ne"ativos.
Fre!aracin de las muestras

5ontrol Fositivo (se observan * !untos) lo cual indica VIH1Fositivo
Su7etos ( # 0 (Braulio # 5laudia)8 -e"ativos 6n solo !unto (el 9ltimo)
Su7etos * # ; (Irisell # Diana)8 -e"ativos 6n solo !unto (el 9ltimo)
7
DISCUSIN DE RESULTADOS
Al comen:ar la !rueba, la muestra diluida (en este caso !lasma) es introducida en el com!artimento A. Si
est/n !resentes anticuer!os anti VIH en la muestra, se unen es!ecficamente a los ant"enos VIH en un
!aso de reconocimiento dual, es decir, !ara HIV1( # HIV10. $l com!le7o resultante reacciona con el
con7u"ado estre!tavidinaJfosfatasa alcalina (AF) el cual diferencia la !resencia de Ant"enos al unirse el
com!le7o formado anteriormente en caso !ositivo con el con7u"ado estre!tovidinaJfosfatasa alcalina
donde el sustrato es la !aranitrofenilfosfato< des!u+s se reali:an los lavados !ara eliminar los anticuer!os
que no son es!ecficos !ara el ant"eno # al ser absorbida la solucin del crom"eno, la visuali:acin de
los resultados se observa como manchas "ris a:ul es acom!a>ada !or la reaccin de sustrato
crom"eno< la solucin de !aro es adicional al final de la reaccin !ara deternerla # de esta manera
observar los resultados< de esta forma se !ude decir que la !rueba incor!ora una combinacin de
inmunocromato"rafia e inmunoconcentracin, lo cual es observado en los com!artimientos del Mit de la
!rueba.
Las !ruebas reali:adas !ara los ; su7etos de !rueba se observaron con resultados ne"ativos debido a
que todos los individuos son sanos. $sto se observo en la !rueba de $lisa Ienie II HIV1(JHIV10 V0 de la
marca Bio1,ad al observarse que en el com!artimiento B (el!tico) un solo !unto en su e2tremo inferior
(control interno) lo cual indica ne"atividad.
CONCLUSIONES
La t+cnica !ara el Ienie II HIV1(JHIV10 V0, el cual es un ensa#o inmunoen:imatico ($IA) de
reconocimiento dual esta basado en la deteccin es!ecifica de anticuer!os anti VIH1( # anti VIH10 !or
anf"enos con inmunoreactividad me7orada que se unen a ambos sitios de unin de los
anticuer!os( donde so inmovili:ados) los cuales est/n i"ualmente situados en el com!artimiento B # si
hubiese !resencia de estos en la muestra se hubiesen observado 0 !untos m/s (uno es!ecfico !ara cada
ti!o de ant"eno), uno en medio # otro en el e2tremo su!erior del com!artimiento B lo que indica la unin
del con7u"ado a los ant"enos es!ecficos !or visuali:acin del crom"eno.
La !rueba de $LISA es la !rimera que se hace !orque resulta barata, sencilla # da resultados confiables.
Si la !rueba de $LISA sale ne"ativa, no se hacen m/s !ruebas. 5uando sale !ositiva, es !reciso !racticar
la IHA o la Aestern Blot , que son !ruebas m/s es!ecficas !ara confirmar los resultados.
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