ENZIMOLOGIA CLINICA

QFB Natividad Garca Escamilla

Antoine Laurent Lavoisier

Pasteur Buchner Richard Kune ( 1900-1967)

1743
1860 1897 (ENZIMA)

ENZIMAS
SON PROTEINAS QUE SON PRODUCIDAS

DE MANERA NATURAL POR TODOS LOS SERES VIVOS

ACELERAN LAS REACCIONES QUMICAS

EN EL ORGANISMO

ENZIMOLOGIA
Definicin.

Las enzimas son agentes qumicos que ayuda a que los procesos bioqumicos del organismo, se lleven a una velocidad compatible con la vida.

Cofactor: Compuestos inorgnicos, Iones metlicos: activadores de las enzima Coenzima: cofactor que es un compuesto orgnico
Grupo prosttico: Coenzimas enlazadas Apoenzima + Cofactor(o coenzima)=Holoenzima

Sustrato

Enzima Producto

 Catalizadores biolgicos por lo tanto

hacen que la Ea disminuya permitiendo que las reacciones se efecten a la temperatura corporal y a una velocidad compatible con la vida. E+S ES P+E Especificidad para ciertos sustratos Absoluta:la mayoria Especificidad de grupo Estereoespecificas

ENZIMOLOGIA
Todas las reacciones bioqumicas son

catalizadas por enzimas. En ausencia de estas, las reacciones seran tan lentas que no podran aportar la energa que se requiere para cubrir las necesidades metablicas del cuerpo. Son determinantes del estado de salud y enfermedad.

Enzimologa
Cuando

se producen lesiones celulares (afecciones del suministro sanguneo, inflamacin o necrosis de los tejidos), ciertas enzimas pasan al plasma y sus niveles en l, aumentan.

 1.- A. L. Lavoisier (1743-1794) 2.- -Berzelius (1779-1848) Catalizan

sin der destruidos y sin aparecer en los productos finales 3.- Anselmo Payen (1833)Diastasa/Esterasa 4.- Luis Pasteur (1860) (Levaduras) 5.- Eduard Buchner (1897)(Obtiene) 6.- Richard Kuhne(1900-1967) ENZIMA 7.- Michaelis y Menten(1949)

Desarrollo de la Enzimologia
1.- Descubrimiento e identificacin 2.- Mecanismos de accin en fase

homogenea 3.- Localizacin celular y subcelular 4. Cintica Enzimtica (1949) 4.- Regulacin (60) 5.- Sntesis qumica (70)

Enzimologa Clnica

 Medicina

Bioqumica

Citologa

Enzimologa Clnica

Enzimologa Clnica Objetivos

1.- mejora de los mtodos de prueba 2.- correlacin de la actividad y las cantidades

reales 3.- Perfiles enzimticos y mapas metablicos 4.- Inmovilizacin de enzimas 5.- Cito-enzimo-qumica y mapas metablicos

Definicin
Las enzimas son molculas de naturaleza proteica, que catalizan reacciones qumicas. Se conocen mas de 60 enzimas circulares

Aceleran las reacciones qumicas, disminuyendo la energa de activacin. Actan en molculas llamadas sustratos, las cuales se convierten en producto

Propiedades de la Enzimas
No se alteran ni se consumen Slo se requieren pequeas cantidades Aumentan la velocidad a la cual la reaccin qumica alcanza el equilibrio ,pero no alteran la

constante de equilibrio (la cantidad de Producto que se forma a partir del sustrato) Todas son protenas (AA) Tienen estructuras 1, 2, 3, tridimensional Estructura cuaternaria (cuando estn formadas por 2 cadenas de poli pptidos

ENZIMOLOGIA CLINICA
Las enzimas son muy selectivas con sus sustratos y velocidad.

Clasificaciones de la enzimas
Por su composicin: - Simples - Conjugadas: apoenzimas + cofactor Cofactores: Inorgnicos: -Metales: Zn2+, Cu2+, Mg2+, Mn2+ , - No metales: Se, Si Orgnicos: - Coenzimas: NAD,NADH, NADP+ , NADPH, vitaminas - Grupos prostticos: Coenzimas enlazadas: vitaminas(fosfato de piridoxal, pirofosfato de tiamina

Clasificaciones de la enzimas
Por su funcin: 1. Oxidorreductasas:

LDH: Lactato deshidrogenas GLDH: Glutamatodeshidrognesa 2. Transferasas: AST,ALT,CK,GGT 3. Hidrolasas: ALP, ACP, 5Nucleotidasa, AML, LIP, CHE (colinestarasa) 4. Liasas: ALS (Aldolasas) 5. Isomerasas: PHI (Isomerasa de fosfohexosa) 6. Ligasas: Sintetasa de carbamoil-fosfato, carboxilasa de acetil-CoA

CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS

* OXIDO-REDUCTASAS: cataliza las oxido- reducciones biologicas (transferencia de electrones acompaadas del cambio compensatorio de la cantidad de hidrgeno y oxgeno de la molcula). Ej: deshidrogensa alcohlica, reductasa, oxigenasa, oxidasas y peroxidasas. *

TRANSFERASAS: catalizan reacciones de transferencia de C, N o P contenidos en grupos como amino, acilo, fosfato, glucosilo, fosforilo.carboxilo y monocarbonado. * HIDROLASAS: Catalizan reacciones donde hay ruptura de enlaces como C-O, C-N y O-P, por adicin de agua. Ej: esterasas, fosfatasas, peptidasas. * LIASAS: catalizan reacciones en las que se adicionan o eliminan los elementos del H2O, NH3 o CO2 a dobles enlaces. Ej: descarboxilasas, hidratasas, deshidratasas.

* LIGASAS: catalizan formacin de enlaces entre dos molculas de sustrato. Ej: la ligasa de DNA une entre s fragmentos de la cadena de DNA, sintetasa, carboxilasa.

* ISOMERASAS: catalizan reacciones de varios tipos de reordenamientos intramoleculares: + epimerasas: catalizan la inversin de tomos de carbono asimtricos. + mutasas: catalizan transferencia intramolecular de grupos funcionales.

Lipasa

48,000

Amilasa
CK GOT PAC LDH

50,000
80,000 90,000 100,000 140,000

E l
p e s o

PAL
GPT 5UN y GT y GT

140,000
180,000 200,000 82,000 300,000

y GT

1,000,000

m o l e c u l a r

Clasificacin: Ubicacin intracelular.

Uniloculares: Estn en un solo sitio dentro de la

clula. (LDH, PAC)

Biloculares: En dos sitios diferentes de una

clula: AST, ALT (Citoplasma y mitocondrias)

LOCALIZACION

Por su localizacin A- Plasma-especificas: CHE, Fact. Coagulacin, plasminogeno, ceruloplasmina, lipoproten lipasa B- Celulares - Membranales : ALP, GGT, 5n - Mitocondriales: CK, AST - Citoplasmaticas: LDH, CK, AST, ALT - Lisosomas: AcP C- De secrecin: AML y LIP, PEPSINGENO, F. CIDA PROSTTICA D- Inducidas: Se incrementan en una patologa o por Factor externo: GGT, FA (0bstruccin biliar, A) rgano especificas:Hgado: E. de la urogenesis (arginasa,ornitintranscarbamilasa :OTC), glucosa 6 fosfatasa Hueso: ALP

Clasificaciones de la enzimas

 E. Plasma especificas: despliegan su funcin en el plasma. Y son secretadas por determinados rganos. E. No plasma especificas: ( E. Secretadas y E. celulares): No son necesarias para las funciones del plasma. El grupo de E. celulares (muchas de ellas

presentes en todos los tejidos del organismo) Incluye las enzimas del metabolismo de los tejidos, son inactivas en el plasma o en el suero porque sus coenzimas y la mayora de sus sustratos estn ausentes.

Enzimologa clnica
Actualmente:

La bsqueda permanente

encontrar la mayora de las enzimas rganoespecificas, lo que permitir efectuar con gran seguridad diagnsticos de lesin por medios bioqumicos

Mapas

enzimticos

De acuerdo con Schmidt y Schmidt (1972)

Estan constituidos por la cantidad de cada

una de las enzimas que contienen todas las clulas de un rgano determinado. A mayor cantidad de Enzimas que se determinen , ms completo es el mapa. Su determinacin constituye el intento de lograr la especificidad bioqumica de los rganos

Distribucin de enzimas de acuerdo a su funcin o actividad fisiolgica

Aplicaciones clnicas de Enzimas para los diferentes rganos

Diagnstico Pronstico Hgado Msculo Corazn

La actividad enzimtica tiene gran importancia para el diagnstico, pronstico y gua teraputica.

Muerte celular Enzimas en sangre CPK-MB Individuo sano Individuo -IM

E. CLINICA:
Factores que afectan los niveles enzimticos:

In vitro: pH, T, Hemolisis, ictericia, lipemia.

-inhibidores enzimticos: - Frmacos - [E] y [S] In vivo: Entrada de E a la circulacin: Dao celular, dficit de aporte energtico, enf. Congnitas, ambiente. Salida de E de la circulacin: Tienen un tiempo de vida media (6-48 H)

Vida media (promedio) de las Enzimas Promedio Enzima Horas

Transaminasa glutmico-pirvico (GPT o ALAT. Alanin aminotransferasa 4710 horas

Transaminasa glutmico-oxalactico 175 horas (GOT o ASAT). Aspartato aminotransferasa Glutamato deshidrogenasa (GLDH) Lactato deshidrogenada (LDH) Creatn quinasa (CK) Fosfatasa alcalina -glutamiltranspeptidasa (-GT), Colinesterasa (CHE) Amilasa Lipasa 181 horas 11360 horas 15 horas aproximadamente 3-7 dias 3-4 das 10 das aproximadamente 3-6 horas 3a6h

Uso de los enzimas en el diagnstico clnico

Determinacin de la actividad enzimtica en
sangre

Anlisis clnico

Actividad enzimtica: Velocidad a la cual las enzimas catalizan las reacciones (U/L)

Significado. Aumento:
Dao tisular. Por necrosis del tejido o aumento de la permeabilidad
- Induccin enzimtica

-Descenso del catabolismo

Disminucin
Deficiencia en el tejido. Descenso de sntesis o aumento de degradacin
- Falta de cofactores o de coenzimas

(vitaminas) - Inactivacin enzimtica

Actividad y Cantidad de una enzima en una muestra

Medida de la cantidad de enzima presente en una muestra

Actividad enzimatica: UI: Cantidad de E necesaria para actuar sobre 1 mol de sustrato en 1 min. (U/L) Katal: Cantidad de E necesaria para actuar sobre 1 mol de sustrato (nKatal/L)

1 U = 16.67 nKatal 1 nKatal =0.06UI

Anlisis

Los mtodos analticos para determinar la actividad enzimtica pueden ser:

Mtodos a punto final

Mtodos cinticos

Mtodos

Para determinar la actividad enzimtica srica: U/L = (abs/min) Factor El Factor procede de la Ley de Lambert Beer: A=lC C=A l = Coef. De Ext. Molar l = 1 cm C= Conc.
UI/L = abs/min * Vol tot (Mu+react)(mL) * 1000

* 1 * Vol Mu(mL)
UI= 0.017 *3.075mL *1000 = 109.4 6.22*1cm* 0.075 mL

Fases del proceso analtico

Recomendaciones

Evitar el choque trmico No utilizar muestras congeladas y descongeladas

varias veces.
El transporte de las muestras debe realizarse en fro sin congelar, salvo que se vaya a prolongar mucho tiempo.

Separar lo antes posible el cogulo del suero

Evitar: trabajar con muestras hemolizadas Estasis venosa durante la extraccin

Envejecimiento de las muestras

Enzimas
Urea :

como reactivos:
Ureasa Uricasa Colesteroloxidasa

Glucosa: Glucosa oxidasa, GDH Creatinina (nuevo) Ac. rico: Colesterol:

E + S ES P +E
Reactivo + Muestra

Enzimas como reactivos:

Reactivos lquidos Reactivos Secos- Enzimas inmovilizadas unidas a

adsorbentes dbiles (agarosa, carboximetil celulosa): (tiras reactivas, membranas). Ej. Destroxtix
EGO

Los enzimas como marcadores de lesin tisular Caractersticas de enzimas utilizados como marcadores:

Las enzimas como marcadores de lesin tisular por qu aumenta su nivel en plasma o en suero...?:
Necrosis de los tejidos Aumento del catabolismo celular (reparacin tisular, cncer) Aumento concentracin intracelular (induccin) Obstruccin en la salida exocrina

Enzimas clnico

en el diagnstico

Alanina aminotransferasa (ALT) (TGO) Aspartato aminotransferasa (AST) (TGP) Creatina kinasa (CK) Fosfatasa alcalina (AP, ALP, ) g-glutamil transpeptidasa (GGT) Amilasas Lipasas

Deshidrogenasa lctica (DHL)

Alanina aminotransferasa (ALT) o GPT (Transaminasa glutmico-pirvica)

Funcin: cataliza la transferencia de alanina al cido acetoglutrico, formando cido pirvico y glutmico)
Localizacin: citoplasma

Valores de referencia: < 50 U/mL ver los de cada laboratorio Aumento importante: Shock, hepatitis Aumento moderado: cirrosis, mononucleosis infecciosa, (enfermedad del beso) Ictericia.Hepatitis,hemlisis

Correlacin con patologias

Aspartato aminotransferasa (AST) TGO(Transaminasaglutmico-oxalactico)

-Funcin: cataliza la transferencia del grupo a-amino del cido asprtico

al cido a-cetoglutrico, formando cido oxaloactico y glutmico)

Localizacin: citoplasma y mitocondria

Valores de referencia: < 40U/mL Aumento importante: Infarto del miocardio, hepatitis, traumatismos,lesiones musculares Aumento moderado: cirrosis, mononucleosis, ictericia, hemlisis.

Creatina quinasa (CK CPK)

Funcin: importante para la contraccin muscular. Transfiere el fosfato de la fosfocreatina al ADP, formando ATP Localizacin: citoplasma y mitocondria de miocitos Isoenzimas: CK-1: isoenzima BB, cerebro CK-2: isoenzima MB, msculo cardaco y esqueltico CK-3: isoenzima MM, msculo esqueltico y cardaco CK-Mt: membranas mitocondriales. Msculo cardaco Valores de referencia: < 160U/mL en varones y <130U/mL en mujeres Aumento importante: Infarto de miocardio CK-MB

Aumento moderado: miopatas, distrofia

muscular, accidente cerebro-vascular

Elevaciones de CPK total

Distrofia muscular, miositis, polimiositis, rabdomiolisis(a expensas de CPK3 o MM). Elevado en hipertermia maligna, shock, convulsiones recientes, electro miografa

Ligero aumento en: Inyecciones IM (normal 48 horas post). Espasmos musculares. 3er Trimestre embarazo

CPK: Relacin con patologas

Fosfatasa alcalina (AP, ALP, SAP)FAS

Funcin: metaloenzima que cataliza la hidrlisis de diferentes steres de fosfato. Requiere pH alcalino y cofactores ( Zn2+, Mg 2+) Localizacin: asociada a membrana celular Valores de referencia: 85-190U/ml en el adulto. Hasta 500U/mL en nios en desarrollo Aumento importante: ictericia obstructiva, colelitiasis, neoplasia de vas biliares, cirrosis, hepatomas Aumento moderado: neoplasias seas osteognicas, osteomalacia, hiperparatiroidismo, embarazo, Metstasis.

Fosfatasa acida:
Es una hidrolasa: cataliza mismas

reacciones que FA pero en medio cido.

Fuentes tisulares: Prstata, rion, pncreas Osteoclastos, monocitos, plaquetas, GR,

granulocitos.

FOSFATASA CIDA

Niveles elevados en prstata Prostatitis Tacto rectal Por relaciones sexuales Dx y estadio de Ca prstata?? Monitoreo Tx Niveles elevados en pacientes con MTS Tratamiento quirrgico: disminuye Tx con estrgenos regresa a niveles normales en semanas Elevacin posterior: mal Prnostico

g-glutamil transpeptidasa (GGT)

Funcin: Cataliza la transferencia de grupos glutamil C-terminales de unos pptidos a otros o a aminocidos. Es importante en el metabolismo del glutatin, la absorcin de

aminocidos y en la antioxidacin

Localizacin: membrana y citoplasma (5%)

Valores de referencia: < 35U/mL en varones y <25U/mL en mujeres Aumento importante: Hepatitis vrica, obstruccin biliar, metstasis hepticas, alcoholismo. Colestasis. Aumento moderado: infecciones que afectan al hgado (citomegalovirus, mononucleosis infecciosa)

Gamma glutamiltranspeptidasa
Predomina hgado y vas biliares. Aumenta: Colestasis intra y extra heptica Indicador sensible de abuso del alcohol

Cirrosis :ALCOHOLISMO(75% pacientes con ingesta crnica presentan elevacin de GGT) Consumo de drogas: fenobarbital

Amilasas (a-amilasa)
Funcin: Catabolismo de carbohidratos a azucares simples Localizacin: Se produce en pncreas, hgado e intestino delgado. (Secretada por clulas acinares pancreticas al duodeno) Se filtra y reabsorbe a travs del rin. Valores de referencia: <50U/mL

Aumento importante: pancreatitis aguda y crnica,

cncer de pncreas. Aumento moderado: parotiditis, algunos carcinomas, procesos parapancreticos (gastritis, lcera duodenal, peritonitis, obstruccin intestinal).

amilasa
Otros tejidos la secretan: Glndulas salivales Presente en suero y orina Utilidad: Dx. de enfermedades pancreticas Pancreatitis (aguda, crnica, complicaciones),

trauma pancretico, cncer de pncreas Pancreatitis: Aumento 2-12 h de iniciado el cuadro Pico mximo 12-72 h. Normal 3-4 das

amilasa
Otros: Aumenta en perforacin intestinal (intra luminal a peritoneo y a sangre) Infarto mesentrico Ulcera pptica penetrada

Amilasa urinaria
Aumenta post. al incremento srico Permanece elevados una vez normalizados en suero

Uso principal: Dx. tardo de pancreatitis

Lipasas
Localizacin: Se sintetiza en el pncreas y en la mucosa

gstrica. Funcin: Hidroliza triglicridos de la dieta. Los degrada en cidos grasos + glicerol.

Enzima secretada por el pncreas al duodeno Se elimina a travs del rin

Causas del incremento de lipasa: Pancreatitis Gastrointestinales

Lipasa
Utilidad: Dx de Pancreatitis aguda

Aumento 4-8 h Pico mximo: 24 h Normal: 8-14 das No incrementa de manera importante en perforacin u obstruccin intestinal.

LACTATO DESHIDROGENASA DHL/LDH

Enzima citoplasmtica presente en casi todas las

clulas del organismo. realizansu funcin dentro de la clula eritrocitos.

Hgado, miocardio, msculo esqueltico y Los Tejidos muestran diferentes composiciones isoenzimtica: LD5, LD4, LD3, LD2, LD1. Tejidos con metabolismo anaerobio: LD5 Corazn LD1

LACTATO DESHIDROGENASA
Enfermedades malignas Ca heptico (70% pacientes con MTS

hepticas) Ca de pulmn Leucemias MONITOREO...............NO DIAGNOSTICO LDH en LCR: Meningitis bacteriana Infarto cerebral

DHL/LDH
Corazn: IAM Elevacin: 12-16 h posterior al inicio de los

sntomas Pico mximo:30-40 h. til para el diagnstico tardo

ERITROCITOS : Hemlisis HGADO: Hepatitis toxica con ictericia, Cirrosis RION: Necrosis tubular Rechazo transplante

Aldolasa:
Enzima glicoltica Presente en muchos tejidos Mas importante: Msculo esqueltico Utilidad: Marcador Dao muscular Distrofias, dermatomiositis, polimiositis Trauma Muscular, gangrena, infecciones en

msculo (triquinosis)

Colinesterasa
Hidrlisis acetilcolina (para despolarizacin

neuronal)
Utilidad: Disminuye en:

Exposicin a organofosforados Hepatitis crnica, cirrosis o Carcinoma heptico.

Resumen
ENZIMA TEJIDO APLICACIN

Fosfatasa Acida

Prstata, GR

Ca prstata

ALT
AST Fosfatasa Alcalina

Hgado, msculo, corazn

Hgado, msculo, corazn, rin, GR Hgado, hueso, intestino, placenta, rin Hgado, rin Hgado

Enfermedades. parenquimatosa heptica

IAM, enfermedades Hepticas y Musculares Enfermedades Oseas y hepatobiliares

GGT Colinesterasa

Enfermedad Hepatobiliar, alcoholismo Intoxicacin por organoclorados y organofosforados IAM, enfermedaes.musculares IAM, hemolisis, enf.ermedades hepticas Enfermedades Pancreticas Enfermedades musculares

CPK DHL Amilasa Aldolasa

Msculo, corazn, cerebro Corazn, hgado, msculo, GR, , tejido linfoide Pncreas, gland. Salivares, ovarios Msculo, corazn

Enzima
Fosfatasa cida Fosfatasa alcalina Amilasa Transaminasa glutmico-pirvico (GPT o ALAT) Lactato deshidrogenada (LDH) Creatn quinasa (CK) 5nucleotidasa y aldolasa (ALS) -glutamiltranspeptidasa (-GT

rgano
Carcinoma de prstata Enfermedades hepticas y seas Enfermedades pancreticas Enfermedades hepticas -Cardiopatas Hgado, corazn y eritrocito Corazn, musculo y cerebro Hepatopatas Hepatopatas

Aldolasa
Arginasa Elastasa Seudocolinesterasa

Musculo, corazn
Hepatopatas Enfermedades del colgeno Hgado (intoxicaciones)

Plasmina
Lipasa Glucosa -6- fosfato deshidrogenada Glutamato deshidrogenada (GLDH) Hidroxibutiratodeshidrogeneasa (HBDH)

Coagulopatas
Pncreas Deficiencias enzimticas

CONCLUSIONES
Las enzimas son tiles para el diagnstico clnico

y siempre deber realizarse la interpretacin con base en el cuadro clnico.

La alteracin de la actividad enzimtica se refleja en los valores de referencia y puede estar asociada a un estado patolgico o estar relacionada a diversas condiciones fisiolgicas.