PRÁCTICA NÚMERO 3

PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO HEPÁTICO

DETERMINACIONES INCLUÍDAS:
1. PROTEÍNAS TOTALES.
2. ALBÚMINA.
3. ALANINA TRANSAMINASA.
4. ASPARTATO TRANSAMINASA.
5. BILIRUBINA DIRECTA.
6. BILIRRUBINA TOTAL.

JUSTIFICACIÓN:
1. PROTEÍNAS TOTALES. Entre las causas más frecuentes de una concentración
elevada de proteínas totales figuran la deshidratación o inflamación
crónica. Las causas de una concentración baja de proteínas totales en
suero incluyen el embarazo, la administración excesiva de líquidos
intravenosos, la cirrosis, enfermedades hepáticas, el alcoholismo crónico, la
insuficiencia cardíaca, el síndrome nefrótico, la glomerulonefritis, las
neoplasias, las enteropatías con pérdida de proteínas, la malabsorción y la
desnutrición aguda.
2. ALBÚMINA. Un aumento de albúmina podría indicar deshidratación o
hiperinfusión con albúmina; un descenso está relacionado con hidratación
rápida, sobrehidratación, malnutrición y malabsorción grave, necrosis
hepática difusa grave, hepatitis activa crónica y neoplasia. La albúmina
suele estar reducida en el alcoholismo crónico, el embarazo, en los casos de
pérdida de proteínas renales, disfunción tiroidea, úlcera péptica,
quemaduras y en los procesos inflamatorios crónicos.
3. ALANINA AMINOTRANSFERASA. La ALT presenta una elevada actividad en
hígado, músculo esquelético, corazón y riñón. La ALT sérica aumenta
rápidamente en la necrosis celular hepática, la cirrosis hepática, los tumores
hepáticos, la ictericia obstructiva, el traumatismo generalizado del músculo
esquelético, la miositis, la miocarditis y el infarto de miocardio.
4. ASPARTATO AMINOTRANSFERASA. La AST presenta una elevada actividad en
el corazón, el músculo esquelético y el hígado. Los aumentos de la actividad
de la AST se observan habitualmente después de un infarto de miocardio,
embolia pulmonar, traumatismo del músculo esquelético, cirrosis alcohólica,
hepatitis vírica y hepatitis inducida por fármacos.
5. BILIRRUBINA TOTAL Y BILIRRUBINA DIRECTA. La bilirrubina total es la suma de la
bilirrubina no conjugada y la bilirrubina conjugada. Las causas de la ictericia
son prehepáticas, como resultado de diversas enfermedades hemolíticas;
hepáticas, las que están causadas por lesiones hepatocelulares; y
posthepáticas, a consecuencia de una obstrucción de los conductos
hepáticos o los conductos biliares comunes.
 PROTEÍNAS TOTALES

INTRODUCCIÓN:

La concentración de proteínas en el plasma humano es alrededor de 6 - 8 g/dL.

Las proteínas del plasma son una mezcla muy compleja que incluye no sólo
proteínas simples, sino también proteínas conjugadas (p. ej., glucoproteínas,
lipoproteínas. Las proteínas se encuentran presentes en todos los líquidos del
organismo, aunque son las proteínas del plasma sanguíneo son las que se estudian
más frecuentemente con fines diagnósticos. En general, las proteínas plasmáticas
pueden clasificarse en dos grupos: las que son sintetizadas en el hígado y las
producidas por las células plasmáticas de la médula ósea. La mayor parte de las
proteínas plasmáticas (albúmina, globulinas y fibrinógeno) se sintetizan en el
hígado. La mayor parte de las globulina  y las globulinas  son también de origen
hepático, pero las -globulinas se originan en las células plasmáticas y en las células
del tejido linfático. Algunas apolipoproteínas se forman en las células de la mucosa
intestinal. Las proteínas de la dieta sirven como una fuente de los aminoácidos
utilizados para la síntesis de proteínas plasmáticas. Hay una relación directa entre
la cantidad y especialmente la calidad de una proteína ingerida y la formación de
proteínas plasmáticas, incluyendo los anticuerpos. La concentración de proteínas
totales puede utilizarse en la evaluación del estado nutricional.

Las proteínas plasmáticas se sintetizan en polirribosomas unidos a membranas,

luego recorren la vía secretoria principal de la célula (membrana rugosa
endoplásmica  membrana endoplásmica lisa  aparato de Golgi  vesículas
secretorias) antes de pasar al plasma. Por lo tanto, la mayor parte de las proteínas
plasmáticas se sintetizan como preproteínas. Las preproteínas están sujetas a varias
modificaciones (p. ej., proteólisis, glucosilación, fosforilación) conforme viaja a
través de la célula. Los tiempos de tránsito por el hepatocito desde su sitio de síntesis
hasta el plasma, varían de 30 minutos a varias horas o más. La concentración de
las proteínas plasmáticas en un momento determinado es la resultante de tres
procesos: el ritmo de síntesis, el volumen de líquido en que se distribuyen y el ritmo
de degradación. Durante procesos inflamatorios se produce un aumento de la
síntesis de diversas proteínas hepáticas, denominadas proteínas de fase aguda. El
hígado es el principal sitio de degradación de proteínas. En el riñón se produce la
degradación de las proteínas de pequeña masa molar, como las cadenas ligeras
de las inmunoglobulinas, la lisozima, la 2-microglobulina y la 1-microglobulina
entre otras.

Las proteínas plasmáticas humanas que muestran polimorfismo (múltiples formas o

polimórficas) incluyen haptoglobinas, transferrina, ceruloplasmina e
inmunoglobulinas. Un gran número de las proteínas del plasma sanguíneo son
glucoproteínas, con un elevado contenido de carbohidrato que va desde 1 % en
la albúmina hasta cerca del 40 % en la 1 -glucoproteína ácida. Así mismo muchas
de las proteínas que se encuentran en el plasma sanguíneo contienen enlaces
disulfuro. Esta característica parece ser importante para impedir la
desnaturalización de las proteínas del plasma, que podría producirse por la
elevada presión parcial de oxígeno en la sangre.
 DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES

OBJETIVOS:
1. Cuantificar la concentración de proteínas totales.
2. Explicar su importancia en el diagnóstico clínico.

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO:

En el slide se deposita una gota de muestra del paciente, que se distribuye
uniformemente desde la capa difusora a las capas reactivas. El método de análisis
de proteínas totales está basado en la reacción de Biuret. La reacción de Biuret se
basa en reaccionar un reactivo alcalino de cobre con una sustancia que contiene
dos o más enlaces peptídicos, se produce un color azul-violeta debido al complejo
que se forma entre el ion cúprico y dos enlaces peptídicos adyacentes. La
intensidad del color es directamente proporcional al número de enlaces
peptídicos.

MATERIAL:
Tubo Vacutainer (tapón oro con activador de coagulación).
Tubo eppenford 1.5 mL.
Pipeta de transferencia.

MATERIAL BIOLÓGICO:
Suero (no hemolizado, no lipémico).

REACTIVOS:
Kit VITROS PROTEÍNAS TOTALES DT.

APARATOS:
Vitros DT60 II
Centrífuga clínica.

MÉTODO:
1. En condiciones antisépticas extraer la muestra de sangre con el tubo
vacutainer (tapón oro con activador de coagulación) y homogeneice por
inversión de 8 a 10 veces. Posteriormente centrifugar a 2500 r.p.m. durante
10 minutos.
2. Separar el suero cuidadosamente con una pipeta transferencia al tubo
eppendorf.
3. Analice la muestra en el Analizador VITROS DT60 II.
 ALBÚMINA
INTRODUCCIÓN:

La concentración de albúmina en el plasma es alrededor de 3.5 - 5.0 g/dL. Es la

principal proteína del plasma humano y comprende cerca del 60 % de la proteína
plasmática total. El hígado produce alrededor de 12 g/día de albúmina y depende
en gran medida del estado nutricional. Su vida media en el plasma sanguíneo es
de unos 20 días. Se considera que la albúmina es responsable del 75 al 80% de la
presión osmótica del plasma humano. Otra función importante de la albúmina es
su capacidad para unirse a varios ligandos. Estos incluyen ácidos grasos libres,
calcio, cinc, hormonas esteroideas, bilirrubina y parte del triptófano plasmático.
Además la albúmina fija alrededor del 10% del cobre en el plasma. Varios
medicamentos, incluyendo sulfonamidas, penicilina G, barbitúricos, dicumarol y
salicilatos (aspirina), se unen a la albúmina.

Las preparaciones de albúmina humana se usan en el tratamiento de choque

hemorrágico y de quemaduras, ya que en ambos estados, se produce un descenso
de la concentración de albúmina. Cada gramo de albúmina de la sangre retiene
de 17 - 18 mL de agua, lo cual ayuda a mantener el volumen normal de la sangre
circulante. Si la volemia se reduce, la administración de soluciones salinas
fisiológicas es de escaso valor, ya que el líquido abandona la circulación, forma
edema o es excretado muy rápidamente. Es preciso introducir un material (sangre
o plasma) que retenga una cantidad de agua igual a la perdida y así mantener
una volemia normal. Clínicamente se emplean en forma amplia para estos fines
geles que poseen esta propiedad llamados sustitutos del plasma o extensores. El
catabolismo de la albúmina está incrementado en los traumatismos, las infecciones
y las operaciones quirúrgicas. Diversas enfermedades producen un descenso de la
síntesis de albúmina, como la malnutrición y los procesos hepáticos. En los estados
hipoalbuminémicos, el descenso de la presión oncótica trastorna el equilibrio entre
el plasma y el líquido intersticial, produciéndose un menor movimiento de líquido
intersticial hacia la sangre en el extremo venular de los capilares, dando origen a
la formación de edema. Las pérdidas proteicas aumentadas pueden producirse
por vía urinaria como en el síndrome nefrótico y la glomerulonefritis; o por la piel
como en las quemaduras.

DETERMINACIÓN DE ALBÚMINA

OBJETIVOS:
1. Cuantificar la concentración de albúmina.
2. Explicar su importancia en el diagnóstico clínico.

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO:

En el slide se deposita una gota de muestra del paciente, que se distribuye
uniformemente desde la capa difusora a las capas reactivas. Al difundir la muestra
a la capa reactiva, el verde de bromocresol (BCG) se une a la albúmina. Esta unión
da lugar a una coloración verde que es proporcional a la concentración de la
albúmina.
MATERIAL:
Tubo Vacutainer (tapón oro con activador de coagulación).
Tubo eppenford 1.5 mL.
Pipeta de transferencia.

MATERIAL BIOLÓGICO:
Suero (no hemolizado, no lipémico).

REACTIVOS:
Kit VITROS PROTEÍNAS TOTALES DT.

APARATOS:
Vitros DT60 II
Centrífuga clínica.

MÉTODO:
1. En condiciones antisépticas extraer la muestra de sangre con el tubo
vacutainer (tapón oro con activador de coagulación) y homogeneice por
inversión de 8 a 10 veces. Posteriormente centrifugar a 2500 r.p.m. durante
10 minutos.
2. Separar el suero cuidadosamente con una pipeta transferencia al tubo
eppendorf.
3. Analice la muestra en el Analizador VITROS DT60 II.

ALANINA TRANSAMINASA Y ASPARTATO TRANSAMINASA

INTRODUCCIÓN:

La transaminación consiste en la transferencia de los grupos amino de los -a.a. a

los -c.a.. La transaminación es catalizada por enzimas llamadas transaminasas o
aminotransferasas e implica la interconversión de un par de -aminoácidos y un
par de -cetoácidos. El fosfato de piridoxal (B6-P) forma parte esencial del sitio
activo de las transaminasas (aminotransferasas). Dado que las transaminaciones
son libremente reversibles, las transaminasas (aminotransferasas) pueden funcionar
tanto en el catabolismo de aminoácidos con en la biosíntesis de aminoácidos.

B6-P
-aminoácido1 + -cetoácido2 -cetoácido1 + -aminoácido2

La nomenclatura para las transaminasas puede basarse en el -a.a. y en el -c.a.,

o sólo en un aminoácido bajo el sobreentendido de que el otro aminoácido es el
ácido glutámico. Ejemplos:

B6-P
alanina + -cetoglutarato piruvato + glutamato
  alanina aminotransferasa (ALT)
 alanina : piruvato transaminasa
 glutamato : piruvato aminotransferasa (GPT)

B6-P
aspartato + -cetoglutarato oxalacetato + glutamato

 aspartato aminotransferasa (AST)

 aspartato : oxalacetato trasaminasa
 glutamato : oxalacetato aminotransferasa (GOT)

La ALT se identifica en todo proceso inflamatorio necrótico del hígado, es una

enzima citoplasmática del hepatocito, que se libera muy fácilmente cuando existe
alteración celular o daño celular hepático. Es muy útil para seguir la evolución de
las hepatitis virales, por su aumento al iniciarse y regresión paulatina en la mejoría.
Su aumento es muy manifiesto en la ictericia de origen viral y se eleva muy poco
en la de origen obstructivo. Se eleva ligeramente en el infarto de miocardio e
intensamente si predomina la estasis hepática por insuficiencia cardíaca.

La AST es una enzima que se encuentra tanto en el citoplasma del hepatocito

como en las mitocondrias por lo que es bilocular. Está presente en corazón, músculo
esquelético, páncreas y riñones. En el infarto del miocardo aun en los inaparentes
clínicamente o electrocardiográficamente, sus niveles se elevan entre las 6 y 12
horas después del infarto, alcanzan su máxima intensidad entre las 20 y 40 horas y
retorna a la normalidad a los 4 o 5 días. Se eleva en obstrucción hepatocelular,
cirrosis, metástasis hepática, pancreatitis aguda, anemia hemolítica e infección
renal. La AST es muy empleada para valorar el estado de inflamación y necrosis del
hígado. El etanol induce necrosis en las mitocondrias celulares y libera la AST. El
cociente AST/ALT > 1 debe sugerir en primer lugar una enfermedad hepática de
origen alcohólico (esteatosis, hepatitis alcohólica o cirrosis).

Las determinaciones de estas actividades enzimáticas en el plasma sanguíneo

pueden utilizarse tanto para el diagnóstico como para el seguimiento de la
evolución de un paciente durante el tratamiento. Las cantidades de estas enzimas
que pasan a la sangre son tan pequeñas, que no permiten la determinación
cuantitativa en miligramos o miliequivalentes, por lo que se expresan en unidades
internacionales.

DETERMINACIÓN DE ALANINA AMINOTRANSFERASA (ALT)

OBJETIVOS:
1. Cuantificar la concentración de alanina aminotransferasa (ALT).
2. Explicar su importancia en el diagnóstico clínico.

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO:

En el slide se deposita una gota de muestra del paciente, que se distribuye
uniformemente desde la capa difusora a las capas reactivas. La capa reactiva
contiene los sustratos de la ALT, alanina y -cetoglutarato. En la determinación de
la alanina aminotransferasa, el grupo amino de la L-alanina se transfiere al -
cetoglutarato en presencia del fosfato de piridoxal para producir glutamato y
piruvato. A continuación, la enzima lactato deshidrogenasa cataliza la conversión
de piruvato y NADH en lactato y NAD+. El consumo de NADH es proporcional a la
actividad enzimática en la muestra.

ALT - B6-P
alanina + -cetoglutarato piruvato + glutamato

lactato deshidrogenasa
piruvato + NADH + H+ alanina + NAD+

MATERIAL:
Tubo Vacutainer (tapón oro con activador de coagulación).
Tubo eppenford 1.5 mL.
Pipeta de transferencia.

MATERIAL BIOLÓGICO:
Suero (no hemolizado, no lipémico).

REACTIVOS:
Kit VITROS ALT DT.

APARATOS:
Vitros DT60 II
Centrífuga clínica.

MÉTODO:
1. En condiciones antisépticas extraer la muestra de sangre con el tubo
vacutainer (tapón oro con activador de coagulación) y homogeneice por
inversión de 8 a 10 veces. Posteriormente centrifugar a 2500 r.p.m. durante
10 minutos.
2. Separar el suero cuidadosamente con una pipeta transferencia al tubo
eppendorf.
3. Analice la muestra en el Analizador VITROS DT60 II.

DETERMINACIÓN DE ASPARTATO TRANSAMINASA (AST)

OBJETIVOS:
1. Cuantificar la concentración de aspartato aminotransferasa (AST).
2. Explicar su importancia en el diagnóstico clínico.
PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO:
En el slide se deposita una gota de muestra del paciente, que se distribuye
uniformemente desde la capa difusora a las capas reactivas. La capa reactiva
contiene los sustratos de la AST, aspartato y -cetoglutarato. En la determinación
de la aspartato aminotransferasa, el grupo amino de L-aspartato se transfiere al -
cetoglutarato en presencia del fosfato de piridoxal para producir glutamato y
oxalacetato. Seguidamente, la malato deshidrogenasa cataliza la conversión del
oxalacetato y NADH en malato y NAD+. El consumo de NADH es proporcional a la
actividad enzimática en la muestra.

AST - B6-P
aspartato + -cetoglutarato oxalacetato + glutamato

malato deshidrogenasa
oxalacetato + NADH + H+ malato + NAD+

MATERIAL:
Tubo Vacutainer (tapón oro con activador de coagulación).
Tubo eppenford 1.5 mL.
Pipeta de transferencia.

MATERIAL BIOLÓGICO:
Suero (no hemolizado, no lipémico).

REACTIVOS:
Kit VITROS AST DT.

APARATOS:
Vitros DT60 II
Centrífuga clínica.

MÉTODO:
1. En condiciones antisépticas extraer la muestra de sangre con el tubo
vacutainer (tapón oro con activador de coagulación) y homogeneice por
inversión de 8 a 10 veces. Posteriormente centrifugar a 2500 r.p.m. durante
10 minutos.
2. Separar el suero cuidadosamente con una pipeta transferencia al tubo
eppendorf.
3. Analice la muestra en el Analizador VITROS DT60 II.
 BILIRRUBINA DIRECTA Y BILIRRUBINA TOTAL.

INTRODUCCIÓN:

Los eritrocitos humanos tienen una vida aproximada de 120 días. Al final de este
período los eritrocitos son destruidos en el sistema reticuloendotelial de la médula
ósea, bazo e hígado (células de Kupffer). En condiciones funcionales, en el adulto
humano se destruye 1 - 2 x 108 eritrocitos cada hora. Por lo tanto, en un día, un
humano de 70 Kg de peso recambia aproximadamente 6 g de hemoglobina.
Cuando la hemoglobina es destruida en el cuerpo, la porción proteínica globina
puede ser usada de nuevo como tal o bajo la forma de sus aminoácidos
constituyentes, y el hierro del hem entra a la fuente común de hierro para ser
reutilizado también. Sin embargo la porción porfirínica libre de hierro del hem es
degradada, principalmente en las células reticuloendoteliales del hígado, bazo y
médula ósea. Sólo el hem, grupo prostético de la hemoglobina, es excretado por
el organismo, en forma de biliverdina y bilirrubina (pigmentos biliares).

El primer paso en la producción de los pigmentos biliares, implica la

desconjugación de la proteína hemoglobina, en la porción proteíca, la globina y
la porción no proteica, el hemo que contiene hierro. La conversión del hemo a
biliverdina se realiza por un sistema complejo de enzimas llamado hem oxigenasa,
al parecer se lleva a cabo en las fracciones microsómicas de las células
reticuloendoteliales. La biliverdina (C33 H34N4O6) se reduce mediante el NADPH y la
enzima biliverdina reductasa a bilirrubina (C33 H36N4O6). La bilirrubina se forma en
cualquier parte del organismo en donde exista destrucción de eritrocitos. Se
pueden encontrar diferentes tipos de bilirrubina, de las cuales predominan:
bilirrubina libre (intracelular), bilirrubina ligada a la albúmina (plasmática),
monoglucurónido de bilirrubina y diglucurónido de bilirrubina (hepáticas). Se
calcula que 1 gramo de hemoglobina rinde 35 mg de bilirrubina. La formación
diaria de bilirrubina en el hombre adulto es aproximadamente de 250-350 mg. La
conversión química de hemo a bilirrubina por las células del sistema
reticuloendotelial puede observarse in vivo como el color rojo púrpura del hemo en
un hematoma que lentamente va convirtiéndose al pigmento amarillo de la
bilirrubina.

El metabolismo posterior de la bilirrubina ocurre primordialmente en el hígado y

puede dividirse en 3 procesos:
1. Captación de la bilirrubina por las células del parénquima hepático. La
bilirrubina un producto tóxico desacoplante de la cadena respiratoria, es
poco soluble en el plasma, se transporta al hígado formando un complejo
con la albúmina. En 100 mL de plasma, aproximadamente 25 mg de
bilirrubina pueden estar enlazados estrechamente a la albúmina. En el
hígado, la bilirrubina al parecer es eliminada de la albúmina y es captada
en la superficie por sinusoides de los hepatocitos por un sistema saturable
mediado por un portador.
2. Conjugación de la bilirrubina en el retículo endoplásmico liso. Al añadir
grupos polares a la bilirrubina, el hígado convierte ésta a una forma
hidrosoluble que puede posteriormente ser secretada en la bilis. Este proceso
 de aumentar la solubilidad se logra mediante la conjugación de la
bilirrubina con el UDP-glucuronato para producir el diglucurónido de
bilirrubina, biológicamente inactivo e hidrosoluble, que se excreta en la bilis.
3. Secreción de la bilirrubina conjugada en el interior de la bilis. Una vez
conjugada, la bilirrubina es concentrada en forma activa cerca de la
superficie canalicular de las células hepáticas, para ser transportada, a
través de la membrana, al canalículo biliar. El proceso es activo y
unidireccional. Los canalículos biliares desembocan en los conductos biliares
intrahepáticos, estos en los extrahepáticos, y así llega la bilirrubina
conjugada integrante de la bilis, al intestino.

La molécula de bilirrubina conjugada, debido a su tamaño y polaridad, no puede

ser absorbida por la mucosa del intestino, transita pues sin modificación alguna,
hasta que llega al íleon terminal y colon, los glucurónidos son separados por
enzimas bacterianas específicas (β-glucuronidasas) y el pigmento es reducido
posteriormente por la flora fecal a un grupo de compuestos tetrapirrólicos incoloros
llamados urobilinógenos. En el íleon terminal y en el colon, una pequeña porción se
resorbe (10 – 20 %) y regresa al hígado y lo vuelve a excretar por la bilis para
constituir el ciclo intrahepático del urobilinógeno. Una porción aún más pequeña
escapa de la circulación a los riñones y se elimina el pigmento en la orina como
urobilinógeno urinario de 0-4 mg/día. La mayor porción continua por el intestino y
se excreta con las heces como urobilinógeno fecal de 40-280 mg/día.

DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA TOTAL

OBJETIVOS:
1. Determinar la concentración de bilirrubina total (BT).
2. Conocer la utilidad clínica de los diferentes tipos de bilirrubina en el
diagnóstico de ictericias.

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO:

En el slide se deposita una gota de muestra del paciente, que se distribuye
uniformemente desde la capa difusora a las capas reactivas. Las capas reactivas
proporcionan un medio para medir los productos diazo de la bilirrubina y le
permiten determinar la concentración de la bilirrubina total.

MATERIAL:
Tubo Vacutainer (tapón oro con activador de coagulación).
Tubos eppenford 1.5 mL.
Pipeta de transferencia.

MATERIAL BIOLÓGICO:
Suero (no hemolizado, no lipémico).

REACTIVOS:
Kit VITROS TBIL DT.
APARATOS:
Vitros DT 60 II.
Centrífuga clínica.

MÉTODO:
1. En condiciones antiséptica extraer la muestra de sangre con el tubo
vacutainer (tapón oro con activador de coagulación) y homogeneice por
inversión de 8 a 10 veces. Posteriormente centrifugar a 2500 r.p.m. durante
10 minutos.
2. Separar el suero cuidadosamente con una pipeta transferencia al tubo
eppendorf.
3. Analice la muestra en el Analizador VITROS DT60 II.
DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA DIRECTA

OBJETIVOS:
1. Determinar la concentración de bilirrubina directa (BD).
2. Conocer la utilidad clínica de los diferentes tipos de bilirribina en el
diagnóstico de ictericias.

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO:

La BD presente en la muestra reacciona con el ácido sulfanílico, originando un
complejo coloreado que puede determinarse espectrofotocolorimetricamente.

MATERIAL:
Tubo Vacutainer (tapón oro con activador de coagulación).
Tubos de ensaye de 12  75 mm.
Pipetas de 1mL y pipeta de transferencia.

MATERIAL BIOLÓGICO:
Suero (no hemolizado, no lipémico).

REACTIVOS:
Equipo Biosystems para determinación de bilirrubina directa.

APARATOS:
Espectrofotocolorímetro.
Centrífuga clínica.

MÉTODO:
1. En condiciones antisépticas extraer la muestra de sangre con el tubo
vacutainer (tapón oro con activador de coagulación) y homogeneice por
inversión de 8 a 10 veces. Posteriormente centrifugar a 2500 r.p.m. durante
10 minutos.
2. Separar el suero cuidadosamente con una pipeta transferencia al tubo de
ensaye de 12 x 75 mm.
3. Rotular tres tubos como blanco, estándar y muestra.
4. Agregar los reactivos de la siguiente manera:
REACTIVOS Blanco reactivo Blanco muestra Muestra

Agua destilada 100 μL --- ---

Muestra --- 100 μL 100 μL

Reactivo (AD) --- 1.0 mL ---

Reactivo de trabajo 1.0 mL --- 1.0 mL

5. Mezclar y dejar reaccionar durante 5 minutos a 37 °C.

6. Leer la absorbancia de los blancos de muestra a 540 nm frente a agua
destilada.
7. Leer la absorbancia de las muestras a 540 nm frente al blanco de reactivos.

BILILRRUBINA INDIRECTA. Realice el cálculo para determinar de los niveles de

bilirrubina indirecta mediante la siguiente fórmula, utilizando los resultados
obtenidos en la determinación de bilirrubina total y la determinación de bilirrubina
directa.

Bilirrubina Indirecta (BI) = bilirrubina total (BT) – bilirrubina directa (BD) =

BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE MEDICINA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO HEPÁTICO

FECHA: NÚMERO DE MATRÍCULA:

FUNCIONAMIENTO HEPÁTICO RESULTADO VALORES DE REFERENCIA

PROTEÍNAS TOTALES, g/dL 6.3 – 8.2

ALBÚMINA, g/dL 3.5 – 5.0

ALT (GPT), UI/L 21 – 72 (hombre)

9 – 52 (mujer)

AST (GOT), U/L 17 – 59 (hombre)

14 – 36 (mujer)

BILIRRUBINA TOTAL, mg/dL hasta 1.0

BILIRRUBINA DIRECTA, mg/dL hasta 0.25

BILIRRUBINA INDIRECTA, mg/dL hasta 0.75

ANÁLSIS DE RESULTADOS:

RESPONSABLE:

CUESTIONARIO:

1. ¿Por qué un paciente con cirrosis hepática muestra disminución en la

concentración de albúmina y presenta ascitis?

2. ¿En un proceso necrótico hepático o miocárdico, por qué hay elevación de

ALT o AST?

3. En el diagnóstico de ictericia obstructiva ¿Cuáles son los resultados y signos

que ayudan a establecer dicho diagnóstico?
4. En el diagnóstico de ictericia hepática ¿Cuáles son los resultados y signos que
ayudan a establecer dicho diagnóstico?

5. En el diagnóstico de ictericia hemolítica ¿Cuáles son los resultados y signos

que ayudan a establecer dicho diagnóstico?